Name: Fare Pankreas Endotel Hücrelerinin İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-21T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Öğrenin fare pankreas endotel hücrelerinin izolasyonunu, manyetik hücre ayırma ve nazik doku parçalama teknikleriyle. Bu yöntem, pankreas vasküler biyolojisini ve hastalık mekanizmalarını araştıran bilim insanları için yüksek canlılıkta hücre sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Hastalık Çalışmaları için Fare Pankreas Endotel Hücre Ekstraksiyonunun Kolaylaştırılması

<table><tbody><tr><td>1,5 mL eppendorf</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>10 cm çanak</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>25G iğneler</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>2X Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q712-03-AA</td><td></td></tr><tr><td>5 mL eppendorf</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td></td><td></td>14282300</tr><tr><td>6 kuyulu plaka</td><td>Greiner Bio-One</td><td>07-000-208</td><td></td></tr><tr><td>70 & m süzgeç</td><td>Fisher</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31-biotin</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>REA784</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini ısı şoku ile tedavi edilmiş</td><td>Fisher</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher</td><td>BP510</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kollajen Tip 1, baldır derisinden</td><td>Sigma Aldrich & nbsp;</td><td>C9791</td><td>Protokoldeki ek reaktif</td></tr><tr><td>Kollajenaz Tip 1&nbsp;</td><td>Worthington Bio</td><td>LS004197</td><td></td></tr><tr><td>Kontes Otomatik Hücre Sayacı</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Termo Balıkçı&nbsp;</td><td>D1306</td><td>immünofloresan</td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Güvenlik Neşterleri</td><td>Myco Enstrümantasyon</td><td>6008TR-10</td><td></td></tr><tr><td>DNAse I &nbsp;</td><td>Roche</td><td>260913&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (Ca2+,Mg2+)</td><td>Termo Balıkçı&nbsp;</td><td></td><td></td>14080055</tr><tr><td>Etanol Fisher</td><td></td><td>BP2818-4</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Fisher</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>İnkübatörü</td><td></td><td></td><td>37 ° C'de Tutuldu; C %5 CO2</sub</td></tr><tr><td>>LS Sütunları</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>M199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand ile QuadroMACS Ayırıcı&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Orta 199</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>M2520-10X</td><td></td></tr><tr><td>Mikroboncuk anti-biyotin</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-485</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td>Hücre morfolojisini değerlendirmek için</td></tr><tr><td>Moleküler Sınıf Su</td><td>Corning</td><td>46-000-CM</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S271-1</td><td></td></tr><tr><td>New Brunswick Innova 44/44R Orbital çalkalayıcı&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PECAM1 (CD31) Antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab56299</td><td>immünofloresan</td></tr><tr><td>PECAM1 (CD31) Antikor</td><td>R& D Systems</td><td>AF3628</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (10X) (Ca2 + yok, Mg2 + yok)</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-507-XB</td><td></td></tr><tr><td>Primer 36B4 İleri fare</td><td>IDT</td><td></td><td>AGATTCGGGATATGCTGTTGGC</td></tr><tr><td>Primer 36B4 Revese fare&nbsp;</td><td>IDT</td><td></td><td>TCGGGTCCTAGACCAGTGTTC</td></tr><tr><td>Primer Kdr İleri fare&nbsp;</td><td>IDT</td><td></td><td>TCCAGAATCCTTCCATGC</td></tr><tr><td>Astar Kdr Ters fare</td><td>IDT</td><td></td><td>AAACCTCCTGCAAGCAAATG</td></tr><tr><td>Astar Nkx6.1 Ters fare&nbsp;</td><td>IDT</td><td></td><td>CACGGCGGACTCTGCATCACTC</td></tr><tr><td>Astar Nxk6.1 İleri fare</td><td>IDT</td><td></td><td>CTCTACTTTAGCCCCAGCG</td></tr><tr><td>Astar PECAM1 İleri fare</td><td>IDT</td><td></td><td>ACGCTGGTGCTCTATGCAAG</td></tr><tr><td>Astar PECAM1 Ters fare</td><td>IDT</td><td></td><td>TCAGTTGCTGCCCATTCATCA</td></tr><tr><td>RNase ZAP</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>RNaz içermeyen su</td><td>Takara</td><td>RR036B</td><td></td></tr><tr><td>Steril 12" uzun forseps</td><td>FST</td><td>91100-16</td><td></td></tr><tr><td>Steril ince forseps</td><td>FST</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Steril ince makas</td><td>FST</td><td>14061-11</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü Kapları 2cm</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-260</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol reaktifi</td><td>Fisher</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td></td><td></td> İnhibitörü MT25900CI <td></td></tr><tr><td>Tripsin Mavi</td> Corning &<td>Roche</td><td>10109886001</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VE-Cadherin Antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab33168</td><td>immünofloresan</td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare pankreas endotel hücrelerinin İzolasyonu

Isolation of Mouse Pancreatic Endothelial Cells

Bu protokolü takiben, 3 fare pankreasını bir araya getirirken yaklaşık 2 x 106 canlı hücre ve tek bir fare pankreasından 750.000 hücre elde edilebilir. EC'nin zenginleştirilmesini doğrulamak için aşağıdaki analizleri gerçekleştirdik: 1) kantitatif PCR: akış (FT) örnekleriyle karşılaştırıldığında (yani, CD31 olmayan antikora bağlı fraksiyonlar), EC fraksiyonları önemli ölçüde daha yüksek Pecam1 seviyelerine sahipti (CD31'i kodlayan) ve Kdr (VEGFR2'yi kodlayan), iki EC işaretleyici geni33 ve pankreas endokrin hücrelerinde bir transkripsiyon faktörü olan NK6 homeobox 1'in (Nkx6.1) daha düşük seviyeleri (Şekil 4A)); 2) batı lekeleme: Üç preparattan (pEC-1-3) EC ile zenginleştirilmiş numuneler, beklenen boyutta (~ 130 kDa) güçlü CD31 sinyalleri gösterdi. Karşılaştırıldığında, giriş ve FT örnekleri minimum CD31 sinyali gösterdi. Pozitif bir kontrol olarak, bir pEC hücre hattı olan MS1 hücrelerinin lizatları da güçlü CD31 sinyali gösterdi (Şekil 4B); 3) tripan mavisi boyama: izole hücrelerin canlılığının yaklaşık% 50 olduğunu bulduk (Şekil 4C); 4) yayınlanmış bir protokolü takip eden akış sitometrisi15 : canlı hücre popülasyonu üzerinde geçit oluşturarak (Şekil 4D<img alt="Vasküler yapı çalışması ve hücresel etkileşim analizi için adacık içi EC'leri gösteren pankreas diyagramı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66690/66690fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66690/66690fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Tek hücreli pankreas hazırlama diyagramı; santrifüjleme, CD31-biyotin etiketleme, akış analizi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66690/66690fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66690/66690fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Biyolojik araştırmalarda pankreas hasadı, izolasyonu ve kesilme sürecini gösteren doku diseksiyonu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66690/66690fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66690/66690fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Gen ekspresyonu, CD31 analizi, DAPI, hücre sıralama, floresan ve akım sitometrisi sonuçları." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66690/66690fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> &lt;<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66690/66690fig04large.jpg" target="_blank"></a><img alt="İmmünofloresan mikroskobu CD31 / CD144 / DAPI, Cdh5, Pecam1'in UMAP gen ekspresyon analizi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66690/66690fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66690/66690fig05large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Fare Pankreas Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

The pancreas is a vital organ for maintaining metabolic balance within the body, in part due to its production of metabolic hormones such as insulin and ...

isolation-of-mouse-pancreatic-endothelial-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Langerhans Adacıkları olarak da adlandırılan pankreas adacıkları, glikoz regülasyonu ve diğer önemli biyolojik işlevler için hormonlar üreten bir endokrin hücre kümesidir. Bu protokol, ekzokrin pankreas dokusunu sindirmek için önce Ampulla of Vater yoluyla kollajenaz perfüze ederek pankreas adacıklarını izole etmek için bir yöntemi ve adacıkları farelerden saflaştırmak için basitleştirilmiş bir yoğunluk gradyan santrifüjünü açıklar.

Kollajenaz Perfüzyonu ile Pankreas Adacıkları İzolasyonu: Pankreas Adacığı Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzimatik Bir Yöntem

Bu yayında, böylece yalıtma ve sıçangil pankreas kültür birincil pankreatik acinar hücreleri için bir hızlı ve uygun bir prosedürü açıklar. Bu yöntem taze birincil dönüştürülmemiş / Normal ekzokrin pankreas hücrelerinin fizyolojisi incelemek için değerli bir yaklaşım oluşturmaktadır.

Fare Primer Pankreas Asiner Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Burada, tip 2 diyabetin fare modelinden adacıkların izolasyonu için bir protokol, Leprdb ve 2 foton mikroskobu kullanan sağlam adacıklardan insülin sekresyonunun ölçümü için bir canlı hücre testinin ayrıntılarını sunuyoruz.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Tip 2 Diyabet Fare Modeli: Bozulmamış Islets Of Pankreas Adacık İzolasyonu ve Canlı hücre 2-Foton Görüntüleme

Bu protokol, fare koroner endotel hücrelerini görüntüleme veya moleküler biyolojik deneyler yapmak amacıyla izole etme yöntemimizi paylaşmak için hazırlanmıştır.

Fare Koroner Endotel Hücreleri İzolasyon

Neonatal farelerden sağlam adacıklar izole edilmesi için bu tarifnamede, bir protokol açıklar. Pancreata kısmen yıkama ve elle toplama ile, ardından kollajenaz ile sindirilir. 20-80 adacık kümeleri birkaç adacık çalışmalar için uygun yeni doğan farelerin, gelen pankreas başına elde edilebilir.

Yenidoğan Fare Pankreas gelen Fonksiyonel Adacık etkili İzolasyonu

Bu adacık izolasyon protokolü ekroz dokuyu sindirmek için kollajenaz enjeksiyonunun yeni bir rotasını ve adacıkları farelerden arındırmak için basitleştirilmiş bir degrade prosedürünü tanımlamıştır. Enzimatik sindirim, degrade ayırma/arıtma ve adacık el toplama içerir. Başarılı yalıtım fare başına 250-350 yüksek kaliteli ve tam işlevsel adacıklar verebilir.

Farelerden Pankreas Adacık İzolasyon için Basit Bir Yüksek Verimlilik Protokolü

Burada potansiyel diyabetojenik xenobiotic kimyasallar tanımlamak için xenobiotics tarafından ROS indüksiyon süzmek için fare pankreas adacık hücreleri izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Bir fare pankreas adacık hücre tabanlı tarama diyabetojenik çevresel kimyasallar için

Burada, pankreas adacık hücreleri gibi heterojen hücre popülasyonlarında kalsiyum dinamiğinin görüntülenmesi ve ölçülmesi için bir protokol saklıyız. Floresan muhabirler adacık içindeki hücrelerin periferik tabakasına teslim edilir, daha sonra hareketsiz hale getirilir ve görüntülenir ve floresan yoğunluğunun dinamiğinin hücre başına analizi yapılır.

Fare Pankreas Adacık Hücrelerinin Alt Popülasyonlarında Görüntüleme Kalsiyum Dinamiği

Burada primer fare karaciğeri sinüzoidal endotel hücresi (LSEC) izolasyonu için bir protokol özetlenmekte ve gösterilmektedir. Protokol, karaciğer kollajenaz perfüzyonu, düşük hızlı santrifüjleme ile parankimal olmayan hücre saflaştırılması ve CD146 manyetik boncuk seçimine dayanmaktadır. Ayrıca bu izole LSEC'leri akış sitometrisi ve taramalı elektron mikroskobu kullanarak fenotipler ve karakterize ediyoruz.

Fare primer karaciğer sinüzoidal endotel hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu

Bu makalede, primer akciğer endotel hücreleri yenidoğan farelerden izole edilmiş ve kültürlenmiştir.

Primer Fare Akciğer Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

Bu çalışma, fare pankreasındaki fonksiyonel birincil adacıqları ve asinar hücreleri verimli bir şekilde çıkaran basitleştirilmiş bir yöntem geliştirdi ve Akut Pankreatit Kaynaklı Diyabetin patogenezinde hücrelerarası iletişimi incelemek için değerli bir araç sağladı.

Farelerden Birincil Adaçik Ve Birincil Pankreas Asinar Hücrelerinin Eşzamanlı İzolasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Öğrenin fare pankreas endotel hücrelerinin izolasyonunu, manyetik hücre ayırma ve nazik doku parçalama teknikleriyle. Bu yöntem, pankreas vasküler biyolojisini ve hastalık mekanizmalarını araştıran bilim insanları için yüksek canlılıkta hücre sağlar.

Fare Pankreas Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

Daha fazla video keşfet