Name: Akut LCMV ile Enfekte Farelerde Virüse Özgü Foliküler Yardımcı CD4+ T Hücresinin Erken Farklılaşmasına Erişim (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Keşfedin akut LCMV enfeksiyonlu farelerde virüse özgü foliküler yardımcı CD4+ T hücrelerinin erken farklılaşmasını akış sitometrisi ve retroviral gen manipülasyonu ile. Bu yöntemler aşı tasarımı için bağışıklık mekanizmalarını anlamaya katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 32300785 - X.C.), Çin Ulusal Yenilikçi Yetenekler Doktora Sonrası Programı (No. BX20230449'den X.C.'ye) ve Ulusal Bilim ve Teknoloji Büyük Projesi (No. 2021YFC2300602'den L.Y.'ye).

Akut LCMV Enfeksiyonunda Erken Foliküler Yardımcı T-Hücre Taahhüdünün Deşifre Edilmesi

<ol><li>O'shea, J. J., Paul, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+lineage+commitment+and+plasticity+of+helper+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying lineage commitment and plasticity of helper CD4+ T cells.</a> Science. 327 (5969), 1098-1102 (2010).</li>
<li>Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+follicular+helper+cell+biology%3A+A+decade+of+discovery+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">T follicular helper cell biology: A decade of discovery and diseases.</a> Immunity. 50 (5), 1132-1148 (2019).</li>
<li>Vinuesa, C. G., Linterman, M. A., Yu, D., Maclennan, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+helper+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Follicular helper t cells.</a> Annu Rev Immunol. 34, 335-368 (2016).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ICOS+receptor+instructs+T+follicular+helper+cell+versus+effector+cell+differentiation+via+induction+of+the+transcriptional+repressor+bcl6%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">ICOS receptor instructs T follicular helper cell versus effector cell differentiation via induction of the transcriptional repressor bcl6.</a> Immunity. 34 (6), 932-946 (2011).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl6+expressing+follicular+helper+CD4+T+cells+are+fate+committed+early+and+have+the+capacity+to+form+memory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Bcl6 expressing follicular helper CD4 T cells are fate committed early and have the capacity to form memory.</a> J Immunol. 190 (8), 4014-4026 (2013).</li>
<li>Johnston, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl6+and+BLIMP-1+are+reciprocal+and+antagonistic+regulators+of+T+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bcl6 and BLIMP-1 are reciprocal and antagonistic regulators of T follicular helper cell differentiation.</a> Science. 325 (5943), 1006-1010 (2009).</li>
<li>Nurieva, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl6+mediates+the+development+of+T+follicular+helper+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bcl6 mediates the development of T follicular helper cells.</a> Science. 325 (5943), 1001-1005 (2009).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcriptional+repressor+bcl-6+directs+T+follicular+helper+cell+lineage+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The transcriptional repressor bcl-6 directs T follicular helper cell lineage commitment.</a> Immunity. 31 (3), 457-468 (2009).</li>
<li>Choi, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LEF1+and+TCF1+orchestrate+T%28FH%29+differentiation+by+regulating+differentiation+circuits+upstream+of+the+transcriptional+repressor+bcl6%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">LEF1 and TCF1 orchestrate T(FH) differentiation by regulating differentiation circuits upstream of the transcriptional repressor bcl6.</a> Nat Immunol. 16 (9), 980-990 (2015).</li>
<li>Wu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TCF1+is+required+for+the+t+follicular+helper+cell+response+to+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">TCF1 is required for the t follicular helper cell response to viral infection.</a> Cell Rep. 12 (12), 2099-2110 (2015).</li>
<li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+TCF-1+initiates+the+differentiation+of+T%28FH%29+cells+during+acute+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The transcription factor TCF-1 initiates the differentiation of T(FH) cells during acute viral infection.</a> Nat Immunol. 16 (9), 991-999 (2015).</li>
<li>Oestreich, K. J., Mohn, S. E., Weinmann, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+that+control+the+expression+and+activity+of+bcl-6+in+th1+cells+to+regulate+flexibility+with+a+TFH-like+gene+profile%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms that control the expression and activity of bcl-6 in th1 cells to regulate flexibility with a TFH-like gene profile.</a> Nat Immunol. 13 (4), 405-411 (2012).</li>
<li>Choi, Y. S., Eto, D., Yang, J. A., Lao, C., Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+STAT1+is+required+for+IL-6-mediated+bcl6+induction+for+early+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: STAT1 is required for IL-6-mediated bcl6 induction for early follicular helper cell differentiation.</a> J Immunol. 190 (7), 3049-3053 (2013).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histone+methyltransferase+ezh2+primes+the+early+differentiation+of+follicular+helper+T+cells+during+acute+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The histone methyltransferase ezh2 primes the early differentiation of follicular helper T cells during acute viral infection.</a> Cell Mol Immunol. 17 (3), 247-260 (2020).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ezh2+programs+T%28FH%29+differentiation+by+integrating+phosphorylation-dependent+activation+of+bcl6+and+polycomb-dependent+repression+of+p19ARF%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Ezh2 programs T(FH) differentiation by integrating phosphorylation-dependent activation of bcl6 and polycomb-dependent repression of p19ARF.</a> Nat Commun. 9 (1), 5452(2018).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((METTL3-dependent+m%286%29A+modification+programs+T+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">METTL3-dependent m(6)A modification programs T follicular helper cell differentiation.</a> Nat Commun. 12 (1), 1333(2021).</li>
<li>Johnston, R. J., Choi, Y. S., Diamond, J., Yang, J. A., Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT5+is+a+potent+negative+regulator+of+TFH+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">STAT5 is a potent negative regulator of TFH cell differentiation.</a> J Exp Med. 209 (2), 243-250 (2012).</li>
<li>Lee, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+KLF2+restrains+CD4%2B+T+follicular+helper+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The transcription factor KLF2 restrains CD4+ T follicular helper cell differentiation.</a> Immunity. 42 (2), 252-264 (2015).</li>
<li>Xiao, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+e3+ubiquitin+ligase+itch+is+required+for+the+differentiation+of+follicular+helper+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The e3 ubiquitin ligase itch is required for the differentiation of follicular helper t cells.</a> Nat Immunol. 15 (7), 657-666 (2014).</li>
<li>Baumjohann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microRNA+cluster+mir-17%7E92+promotes+TFH+cell+differentiation+and+represses+subset-inappropriate+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The microRNA cluster mir-17~92 promotes TFH cell differentiation and represses subset-inappropriate gene expression.</a> Nat Immunol. 14 (8), 840-848 (2013).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinase+complex+mTORC2+promotes+the+longevity+of+virus-specific+memory+CD4%28%2B%29+T+cells+by+preventing+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The kinase complex mTORC2 promotes the longevity of virus-specific memory CD4(+) T cells by preventing ferroptosis.</a> Nat Immunol. 23 (2), 303-317 (2022).</li>
<li>Hale, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+memory+CD4%2B+T+cells+with+commitment+to+T+follicular+helper-+and+T+helper+1-cell+lineages+are+generated+after+acute+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Distinct memory CD4+ T cells with commitment to T follicular helper- and T helper 1-cell lineages are generated after acute viral infection.</a> Immunity. 38 (4), 805-817 (2013).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selenium-GPX4+axis+protects+follicular+helper+t+cells+from+ferroptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selenium-GPX4 axis protects follicular helper t cells from ferroptosis.</a> Nat Immunol. 22 (9), 1127-1139 (2021).</li>
<li>Oxenius, A., Bachmann, M. F., Zinkernagel, R. M., Hengartner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus-specific+MHC-class+II-restricted+TCR-transgenic+mice%3A+Effects+on+humoral+and+cellular+immune+responses+after+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Virus-specific MHC-class II-restricted TCR-transgenic mice: Effects on humoral and cellular immune responses after viral infection.</a> Eur J Immunol. 28 (1), 390-400 (1998).</li>
<li>Grosjean, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+enrichment+of+mouse+splenic+t+cells+for+ex+vivo+and+in+vivo+T+cell+receptor+stimulation+assays%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and enrichment of mouse splenic t cells for ex vivo and in vivo T cell receptor stimulation assays.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100961(2021).</li>
<li>Dowling, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+bottom-up+proteomic+analysis+of+mouse+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for the bottom-up proteomic analysis of mouse spleen.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100196(2020).</li>
<li>Choi, Y. S., Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+vector+expression+in+TCR+transgenic+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Retroviral vector expression in TCR transgenic CD4+ T cells.</a> Methods Mol Biol. 1291, 49-61 (2015).</li>
<li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+expansion+and+retroviral+transduction+of+mouse+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for expansion and retroviral transduction of mouse regulatory T cells.</a> J Immunol Methods. 488, 112931(2021).</li>
<li>He, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+CXCR5-+expressing+CD8%28%2B%29+T+cells+curtail+chronic+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Follicular CXCR5- expressing CD8(+) T cells curtail chronic viral infection.</a> Nature. 537 (7620), 412-428 (2016).</li>
<li>Crotty, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+helper+CD4+T+cells+%28TFH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Follicular helper CD4 T cells (TFH).</a> Annu Rev Immunol. 29, 621-663 (2011).</li>
<li>Breitfeld, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+B+helper+T+cells+express+CXC+chemokine+receptor+5%2C+localize+to+B+cell+follicles%2C+and+support+immunoglobulin+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Follicular B helper T cells express CXC chemokine receptor 5, localize to B cell follicles, and support immunoglobulin production.</a> J Exp Med. 192 (11), 1545-1552 (2000).</li>
<li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinase+mTORC1+promotes+the+generation+and+suppressive+function+of+follicular+regulatory+t+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The kinase mTORC1 promotes the generation and suppressive function of follicular regulatory t cells.</a> Immunity. 47 (3), 538-551 (2017).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phosphatase+pten+links+platelets+with+immune+regulatory+functions+of+mouse+T+follicular+helper+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The phosphatase pten links platelets with immune regulatory functions of mouse T follicular helper cells.</a> Nat Commun. 13 (1), 2762(2022).</li>
<li>Chen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+identification+of+T%28fh%2913+cells+in+mouse+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric identification of T(fh)13 cells in mouse and human.</a> J Allergy Clin Immunol. 147 (2), 470-483 (2021).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rekabet çıkarı beyan etmezler.

TFH hücreleri alanındaki araştırmalar, TFH hücrelerinin B hücrelerine yardımcı olmada özel işlevinin keşfedilmesinden bu yana vurgulanmıştır. Biriken çalışmalar, TFH hücre farklılaşmasının çok aşamalı ve çok faktörlü bir süreçolduğunu göstermiştir 30, burada TFH hücre kaderi taahhüdü erken evre5'te belirlenir. Bu nedenle, erken diferansiye TFH hücrelerinin altında yatan mekanizmaların daha iyi anlaşılması, TFH hücre biyolojisi ve akılcı aşı tasarımı için çok önemlidir. Burada, virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader taahhüdüne erişmek ve LCMV Armstrong viral enfeksiyon modeli, TCR-transgenik SM faresi ve retrovirüs aracılı transdüksiyondan yararlanarak erken farklılaşmış TFH hücrelerinde gen ekspresyonunu manipüle etmek için yöntemler sağladık.
Kemokin reseptörü CXCR5, TFH hücrelerini diğer CD4+ TH hücre alt kümelerinden6,7,8,31 ayıran önemli bir yüzey belirtecidir, bu nedenle TFH hücre araştırmalarında yüksek özgüllük ve duyarlılığa sahip CXCR5 boyama yöntemini gerektirir. Çalışmada, TFH hücre alt kümesinin tanımlanmasında üç aşamalı bir streptavidin-biotin CXCR5 boyama yöntemi sergilenmiştir (Şekil 1C). Özgüllük kaybı, yüksek duyarlılıktaki iki veya üç streptokok antikor boyama yaklaşımları için yapışkan bir sorun olmasına rağmen, üç aşamalı CXCR5 antikor boyaması ile floresan sinyalinin, CXCR5-GFP29 raportörü SM CD4 + T hücrelerinde GFP sinyali ile neredeyse tamamen örtüştüğü bulundu.), üç aşamalı CXCR5 antikor boyama yöntemi ile hem özgüllük hem de duyarlılık elde edildiğini düşündürmektedir. Gerçekten de, bu üç streptokok CXCR5 boyama stratejisi denenmiş ve güvenilirdir ve araştırmacıların TFH hücre biyolojisi 11,14,15,21'in yanı sıra diğer CXCR5 eksprese eden T hücre tiplerini 29,32 daha iyi araştırmalarına yardımcı olmuştur.
Enfeksiyon ve bağışıklamadan sonra, TFH hücrelerinin kader taahhüdü genellikle naif CD4+ T hücrelerinin TFH hücrelerine veya TFH efektör olmayan TH hücrelerineçatallı bir farklılaşması ile modellenir 2,3,30. Bu çalışma, transfer edilen SMCD4+ T hücrelerinde T, FH ve TH1 hücrelerinin dengeli bifurkasyonunu göstermiştir. Ayrıca, transfer edilen bu SM CD4 + T hücreleri, erken enfeksiyon aşamasında yeterli hücre miktarına sahiptir, bu nedenle TFH hücre farklılaşmasını incelemek için uygun bir model görevi görür. Kuşkusuz, transfer edilen SM CD4 + T hücrelerinde retrovirüs aracılı ektopik Bcl-6 ekspresyonu, kontrol SM CD4 + T hücrelerindekine kıyasla (% 86.6'ya karşı. % 53.8) TFH hücre farklılaşmasına karşı güçlü bir şekilde önyargılıydı (Şekil 3C), bu da önceki rapor6 ile uyumludur ve çalışmada açıklanan protokollerin doğruluğunu daha da kanıtlar. Alternatif olarak, yukarıda belirtilen protokoller, erken aktive edilmiş SM CD4 + T hücrelerinde(veriler gösterilmemiştir) ilgili genlerin (örneğin, bcl6, Tcf7) retrovirüs aracılı yıkımına da uygulanabilir.
Protokoldeki bir sınırlama, zamanlama sorunu (toplamda 2 saatten fazla) ve üç aşamalı CXCR5 boyama yönteminin çok adımlı sürecidir. Alternatif olarak, TFH hücre araştırmalarında tek aşamalı18,33 veya iki aşamalı 4,9,34 CXCR5 boyama yöntemleri de uygulanmıştır. Bu CXCR5 boyama yöntemlerinin özgüllüğünün / duyarlılığının karşılaştırılması garanti edilir.
Özetle, mevcut çalışma, erken farklılaşmış virüse özgü TFH hücrelerine erişmek ve TFH hücre farklılaşmasını potansiyel olarak düzenleyen ilgili genleri araştırmak için protokoller sağlamıştır. Bu protokoller, erken TFH hücre kaderi taahhüdünün araştırılmasını hızlandıracaktır.

Farklı patojenler veya tehditlerle karşılaşan saf CD4 + T hücreleri, özel işlevlere sahip çeşitli yardımcı T (TH ) hücre alt kümelerine farklılaşarak bağışıklık tepkilerini uyarlar1. Akut viral enfeksiyon senaryosunda, naif CD4+ T hücrelerinin büyük bir kısmı, B hücrelerine yardım sağlayan foliküler yardımcı T (TFH) hücrelerine farklılaşır 2,3. Diğer CD4 + T H hücre alt kümelerinden farklı olarak (örneğin, TH1, TH2, TH9 ve TH17 hücreleri), TFH hücreleri, B hücresi homing kemokin CXCL13 için kemokin reseptörü olan önemli bir CXCR5 seviyesini eksprese eder ve TFH hücrelerinin B hücresi foliküllerine göç etmesini sağlar. B hücre foliküllerinde, TFH hücreleri, germinal merkez reaksiyonlarını başlatmada ve sürdürmede aynı kökenli B hücrelerine yardımcı olur, böylece hızlı yüksek afiniteli antikor üretimi ve uzun süreli humoral hafızasağlar 2,3.
Akut viral enfeksiyon üzerine, virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader taahhüdü 72 saat 4,5 içinde gerçekleşir ve TFH hücresi kader kararlarını yöneten "ana düzenleyici" olarak görev yapan transkripsiyonel baskılayıcı B hücreli lenfoma-6 (Bcl-6)5,6,7,8 tarafından kontrol edilir. Bcl-6 eksikliği, TFH hücre farklılaşmasını ciddi şekilde köreltirken, ektopik Bcl-6 ekspresyonu, TFH hücre kaderi bağlılığını önemli ölçüde arttırır. Bcl-6'ya ek olarak, erken TFH hücre kaderi taahhüdünün talimatında birden fazla molekül yer alır. Transkripsiyon faktörleri TCF-1 ve LEF-1, Bcl-6 9,10,11'in indüksiyonu yoluyla TFH hücre farklılaşmasını başlatır. Blimp1'in hem Bcl-6 hem de TCF-1 tarafından inhibisyonu, erken TFH hücre kader taahhüdü11,12 için gereklidir. Erken TFH hücre farklılaşması için STAT1 ve STAT3 de gereklidir13. Ayrıca, histon metiltransferaz EZH214,15 ve m6A metiltransferaz METTL316 ile yapılan epigenetik modifikasyonlar, TFH hücre transkripsiyonel programlarını (özellikle Bcl6 ve Tcf7) stabilize etmeye ve böylece erken TFH hücre kader bağlılığını artırmaya yardımcı olur. Yukarıda bahsedilen moleküller ve diğerleri de dahil olmak üzere, başka bir yerdeözetlenen ilerlemeler kaydedilmiş olsa da, erken TFH hücre kaderi bağlılığının transkripsiyonel ve epigenetik düzenlemelerini anlamada ilerlemeler kaydedilmiş olsa da, daha önce bilinmeyen moleküller öğrenilmeyi beklemektedir.
Akut lenfositik koryomenenjit virüsü (LCMV) enfeksiyonunun fare modelinde, LCMV glikoprotein epitopu I-AbGP66-77'yi spesifik olarak tanıyan evlat edinilmiş konjenik TCR-transgenik SMARTA (SM) CD4 + T hücreleri, viral enfeksiyon sırasında TFH veya TH1 hücre farklılaşmasına uğrar. Bu TFH / TH1 çatallanma farklılaşma modeli, virüse özgü TFH hücrelerinin biyolojisini incelemede SM / akut LCMV enfeksiyon modelinin ilerlemesini destekler. Gerçekten de, SM / akut LCMV enfeksiyon modeli, TFH hücre araştırma alanında yaygın olarak kullanılmaktadır ve TFH hücre biyolojisindeki kilometre taşı keşiflerinde çok önemli bir rol oynamıştır. Bu, yukarıda bahsedilen Bcl-6'nın TFH hücrelerinin 5,6 soy tanımlayıcı transkripsiyon faktörü olarak tanımlanmasını ve ayrıca diğer önemli transkripsiyonel faktörleri (örneğin, Blimp-16, TCF-1 / LEF 9,10,11, STAT1 / STAT313, STAT517, KLF218 ve Itch19) TFH hücre farklılaşmasına, transkripsiyon sonrası düzenlemelere ( örneğin, METTL316 ve miR-17 ~ 9220) TFH hücre farklılaşması, TFH hücre hafızası ve plastisite21,22 ve TFH hücrelerini hedefleyen rasyonel aşılama stratejileri (örneğin, selenyum23).
Mevcut çalışma, (1) erken farklılaşmış TFH hücrelerine erişmek için uygun akut LCMV ile enfekte SM kimera fare modelinin oluşturulması, (2) erken farklılaşmış TFH hücrelerine ilişkin moleküllerin akış sitometrisi boyamalarının yürütülmesi ve (3) SM CD4 + 'da retroviral vektör tabanlı gen manipülasyonu gerçekleştirme dahil olmak üzere, virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader taahhüdüne erişmek için tekrarlanabilir yöntemleri açıklamaktadır T hücreleri. Bu yöntemler, virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader bağlılığını araştıran çalışmalar için faydalı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>% 0.25 Tripsin-EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr>% <tr><td>4 Paraformaldehit Fiks Çözeltisi,% 4 PFA</td><td>Beyotime</td><td>P0099-500mL</td><td></td></tr><tr><td>70 & mu; m hücre süzgeci</td><td>Merck</td><td>CLS431751</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-fare TCR V & alpha; 2 (klon B20.1)</td><td>Biolegend</td><td>127812</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 700 anti-fare CD45.1 (klon A20)</td><td>Biolegend</td><td>110724</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>APC anti-fare CD25 (klon PC61)</td><td>Biolegend</td><td>101910</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>B6 CD45.1 (B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ) fare</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>002014</td><td></td></tr><tr><td>Kunduz Boncukları Streptavidin</td><td>Kunduz</td><td>22321-10</td><td></td></tr><tr><td>Biotin anti-fare F4/80 Antikor (klon BM8)Biolegend</td><td></td> <td>123106</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Biotin Sıçan anti-fare CD11c (klon N418)</td><td>Biolegend</td><td>117304</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Biotin Sıçan anti-Fare CD19 (klon 6D5)</td><td>Biolegend</td><td>115504</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Biotin Sıçan anti-Fare CD8a (klon 53-6.7)</td><td>Biolegend</td><td>100704</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Biotin Sıçan anti-fare NK-1.1 (klon PK136)</td><td>Biolegend</td><td>108704</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Biotin Sıçan anti-fare TER-119 / Eritroid Hücreleri (klon TER-119)</td><td>Biolegend</td><td>116204</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>sığır serum albümini, BSA</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-T-bet (klon 4B10)</td><td>Biolegend</td><td>644816</td><td>1:100 seyreltme</td></tr><tr><td>Brilliant Violet 605 anti-fare CD279 (PD-1) (klon 29F.1A12)</td><td>Biolegend</td><td>135220</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>C57BL/6J (B6) fare</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-GFP knock-in muhabir fare</td><td></td><td></td><td>Kurum içerisinde; CXCR5-GFP knock-in fare hattı, Cxcr5'in açık okuma çerçevesinden sonra bir IRES-GFP yapısının eklenmesiyle oluşturuldu.</td></tr><tr><td>DMEM %10 orta</td><td></td><td></td><td>DMEM ortamı %10 FBS</td></tr><tr><td>DMEM ortamı</td><td>Gibco</td><td>11885092</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>FACSFortesa</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu, FBS</td><td>Sigma</td><td>F8318</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo (sürüm 10.4.0)</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foxp3/Transkripsiyon Faktörü Boyama Tampon Seti</td><td>Invitrogen</td><td>00-5523-00</td><td>Kit üç reaktif içerir: a. Fiksasyon/Geçirgenleştirme Konsantresi (4X); b. Fiksasyon / Geçirgenleştirme Seyrelticisi; c. Geçirgenleştirme Tamponu.</td></tr><tr><td>Keçi Anti-Sıçan IgG Antikoru (H + L), Biyotinile</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>BA-9400-1.5</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>Invitrogen EVOS FL Otomatik Hücre Görüntüleme Sistemi</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzolasyon tamponu</td><td></td><td></td><td>%0,5 BSA ve 2mM EDTA</td></tr><tr><td>LCMV GP61-77 peptit içeren FACS tamponu (GLKGPDIYKGVYQFKSV)</td><td>Chinese Peptide Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ Sabitlenebilir Yakın IR Ölü Hücre Leke Kiti, 633 veya 635 nm uyarma için</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>L10199</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>MigR1</td><td>addgene</td> <td># 27490</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM ortamı</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>pCL-Eco</td><td>addgene</td> <td># 12371</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-fare CD69 (klon H1.2F3)</td> <td>Biolegend</td><td>104508</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>PE Fare anti-Bcl-6 (klon K112-91)</td><td>BD Biosciences</td><td>561522</td><td>1:50 seyreltme</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su, PBS</td><td>Gibco</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Solarbio</td><td>H8761</td><td></td></tr><tr><td>Saflaştırılmış Sıçan Anti-Fare CXCR5 (klon 2G8)</td><td>BD Biosciences</td><td>551961</td><td>1:50 seyreltme</td></tr><tr><td>Sıçan monoklonal PerCP anti-fare CD4 (klon RM4-5)</td><td>Biolegend</td><td>100538</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>rekombinant murin IL-2</td><td>Gibco</td><td>212-12-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tamponu</td><td>Beyotime</td><td>C3702-500mL</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 orta</td><td>Sigma</td><td>R8758</td><td></td></tr><tr><td>RPMI %2</td><td></td><td></td> <td>RPMI 1640 %2 FBS</td></tr><tr><td>SMARTA (SM) TCR transgenik fare</td> içeren ortam<td></td><td></td><td>Laboratuvarımızdaki SM TCR transgenik hattı, Dr. Rafi Ahmed'in (Emory Üniversitesi) bir hediyesidir. Ek olarak, bu fare hattı Jackson Laboratuvarı'ndan da temin edilebilir (leke #: 030450).</td></tr><tr><td>%2 FBS ve %0.01 NaN3 içeren</td> <td>boyama tamponu</td><td></td><td></td> PBS</tr>, <tr><td>Streptavidin PE-Siyanin7</td><td>eBioscience</td><td>25-4317-82</td><td>1:200 seyreltme</td></tr><tr><td>TCF1 / TCF7 (C63D9) Tavşan mAb (Alexa Fluor 488 Konjugat)&nbsp;</td><td>Hücre sinyalizasyon teknolojisi</td><td>6444S</td><td>1:400 seyreltme</td></tr><tr><td>TFH hücre boyama tamponu</td><td></td><td></td><td>%1 BSA ve %2 fare serumu içeren FACS tamponu</td></tr><tr><td>TransIT-293 reaktifi</td><td>Mirus Bio</td><td>MIRUMIR2700</td><td></td></tr></tbody></table>

akut lcmv ile enfekte farelerde virüse Özgü foliküler yardımcı cd4+ t hücresinin erken farklılaşmasına erişim

Accessing Early Differentiation of Virus-Specific Follicular Helper CD4+ T Cell in Acute LCMV-Infected Mice

Foliküler Yardımcı T (TFH) hücreleri, aynı kökenli B hücrelerinin yüksek afiniteli antikorlar üretmesine yardımcı olan ve böylece uzun süreli humoral bağışıklık sağlayan bağımsız bir CD4+ T hücre soyu olarak algılanır. Akut viral enfeksiyon sırasında, virüse özgü TFH hücrelerinin kader taahhüdü erken enfeksiyon fazında belirlenir ve erken diferansiye TFH hücrelerinin araştırılması, T hücresine bağımlı humoral bağışıklığın anlaşılmasında ve aşı tasarımının optimize edilmesinde çok önemlidir. Çalışmada, akut lenfositik koriomenenjit virüsü (LCMV) enfeksiyonunun bir fare modeli ve LCMV glikoprotein epitopu I-AbGP66-77'yi spesifik olarak tanıyan CD4 + T hücrelerine sahip TCR-transgenik SMARTA (SM) faresi kullanılarak, akış sitometrisi boyamalarına dayalı olarak virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader taahhüdüne erişmek için prosedürleri tanımladık. Ayrıca, SM CD4 + T hücrelerinin retroviral transdüksiyonundan yararlanılarak, erken farklılaşmış virüse özgü TFH hücrelerinde gen ekspresyonunu manipüle etmek için yöntemler de sağlanmaktadır. Bu nedenle, bu yöntemler, virüse özgü TFH hücrelerinin erken bağlılığının altında yatan mekanizma(lar)ı araştıran çalışmalara yardımcı olacaktır.

Akut LCMV enfeksiyonu sırasında erken diferansiye virüse özgü TFH hücrelerinin özellikleri Virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader bağlılığını araştırmak için, LCMV GP epitopu IAbGP66-77'yi spesifik olarak tanıyan naif konjenik SM CD4+ T hücreleri, CD45.2+ C57BL / 6 alıcılarına evlat edinerek aktarıldı. Ertesi gün, bu alıcılara intravenöz olarak yüksek dozda akut rezolüsyonlu LCMV Armstrong enjekte edildi (Şekil 1A). Enfeksiyondan sonraki 3. günde, C57BL / 6 alıcılarının splenositleri akış sitometrisi ile analiz edildi ve sonuçlar, büyük miktarda transfer edilen CD45.1 + SM CD4 + T hücresi (toplam CD4 + T hücrelerinin ~% 10'u) gösterdi (Şekil 1B), bu da daha fazla araştırma için yeterli sayıda virüse özgü CD4 + T hücresi sağladı. Aktarılan SM CD4 + T hücrelerinin daha ileri analizleri, CXCR5 ve Bcl-6 / TCF-1'in birlikte ekspresyonunu ve CXCR5 ve CD25 / T-bet'in karşılıklı ekspresyonunu gösterdi, böylece TFH (CXCR5 + Bcl-6 + veya CXCR5 + TCF-1 +) ve TH1 (CXCR5-CD25 + veya CXCR5-T-bet +) soylarını tanımladı (Şekil 1C). Çalışmada sunulan CXCR5 antikor boyamanın özgüllüğünü ve duyarlılığını değerlendirmek için, yukarıda bahsedilen CD45.1+ SM fare hattını, Cxcr529'un açık okuma çerçevesinden sonra bir IRES-GFP yapısının eklenmesiyle oluşturulan CXCR5-GFP knock-in fare hattı ile daha da çaprazladık. Daha sonra, CD45.1+ CXCR5-GFP raportör SM hücreleri C57BL/6 alıcılarına aktarıldı. Bu alıcılar LCMV Armstrong ile enfekte edildi ve splenositleri enfeksiyondan sonraki 3. günde analiz edildi. Gerçekten de, çalışmadaki CXCR5 antikor boyama yöntemiyle yapılan floresan sinyali, enfeksiyondan sonraki 3. günde transfer edilen CXCR5-GFP raportörü29 SM CD4+ T hücrelerindeki GFP sinyali ile ince bir şekilde örtüştü (Şekil 1D), bu da üç aşamalı CXCR5 antikor boyama yönteminin yüksek özgüllüğünü gösterir.
SM CD4+ T hücrelerinde retrovirüs tabanlı Bcl-6 aşırı ekspresyonu Bcl-6, TFH hücre farklılaşmasını teşvik eden en önemli moleküllerden biridir 6,7,8. Erken farklılaşmış TFH hücrelerine erişimde mevcut protokolün güvenilirliğini belirlemek için, CD45.1+ SM CD4+ T hücreleri in vivo olarak aktive edildi ve MigR1 plazmid veya MigR1-Bcl6 aşırı ekspresyon plazmid transfekte edilmiş 293T hücrelerinden retrovirüs süpernatanı ile transdüksiyon yapıldı (Şekil 2 ve Şekil 3A). Retrovirüs ile transdüksiyonlu SM CD4 + T hücreleri daha sonra C57BL / 6 alıcılarına evlat edinerek aktarıldı ve daha sonra LCMV Armstrong ile enfekte edildi (Şekil 3B). Enfeksiyondan sonraki 3. günde, MigR1-SM CD4+ T hücrelerinde TFH ve TH1 hücrelerinin dengeli bir çatallanmasını, MigR1-Bcl6-SM CD4+ T hücrelerinde ise baskın bir TFH hücresine yönelik farklılaşma bulduk (Şekil 3C). Tutarlı bir şekilde, Bcl-6 ekspresyon seviyesi, MigR1-SM CD4 + T hücrelerinde, MigR1-SM CD4 + T hücrelerindekine kıyasla arttırılmıştır (Şekil 3D). Bu nedenle, ektopik Bcl-6 ekspresyon güdümlü TFH hücre farklılaşması6 fenotipi, mevcut protokole uygun olarak ince bir şekilde yeniden üretildi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66752/66752fig01.jpg"> Şekil 1: LCMV Armstrong enfeksiyonu sırasında SM TFH hücrelerinin erken kader bağlılığının akış sitometrisi analizleri. (A) Deney tasarımı. Splenik CD4 + T hücreleri, CD45.1 + SM farelerinden toplandı ve daha sonra evlat edinerek C57BL / 6 alıcılarına (CD45.2 +) aktarıldı. Ertesi gün, bu alıcılara LCMV Armstrong bulaştı. Enfeksiyondan sonraki 3. günde, alıcıların dalaklarından transfer edilen CD45.1+ SM hücreleri akış sitometrisi ile analiz edildi. (B) LCMV Armstrong enfeksiyonundan 3. gün sonra alıcıların dalaklarından transfer edilen CD45.1+ SM CD4+ T hücrelerinin geçit stratejisini gösteren temsili akış sitometrisi verileri. (C) CXCR5 ve diğer TFH hücresi ile ilişkili moleküllerin (Bcl-6, TCF-1, CD25 ve T-bet) transfer edilen CD45.1+ SM hücrelerinde 3. gün LCMV Armstrong enfeksiyonundan sonraki alıcıların dalaklarından birlikte boyanmasını gösteren temsili akış sitometrisi verileri. (D) LCMV Armstrong enfeksiyonundan 3. gün sonrası alıcıların dalaklarından transfer edilen CD45.1+ CXCR5-GFP raportör SM hücrelerinde CXCR5 ve GFP sinyaline karşı floresan konjuge antikorun birlikte boyanmasını gösteren temsili akış sitometrisi verileri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66752/66752fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66752/66752fig02.jpg"> Şekil 2: SM CD4+ T hücrelerinde retroviral transdüksiyon. (A) SM CD4 + T hücrelerinde retrovirüs üretimi ve retroviral transdüksiyonun şematik diyagramı. Retrovirüs üretimi için, 6 oyuklu bir plakaya ekilen 293T hücreleri, hücre yoğunluğu %≥80 birleşmeye ulaştığında hedef DNA plazmitleri ile transfekte edildi. Daha sonra, retrovirüs içeren hücre kültürü süpernatanı, transfeksiyondan 72 saat sonra toplandı ve hemen -80 ° C'de kullanıldı veya saklandı. SM CD4 + T hücrelerinde retroviral transdüksiyon için, bir CD45.1 + SM faresine intravenöz olarak 200 μg LCMV GP61-77 peptidi enjekte edildi. Daha sonra peptid enjeksiyonundan 16-18 saat sonra SM fareden dalak diseke edildi ve splenik CD4+ T hücrelerinin aktivasyon durumu tespit edildi. Aktive edilmiş SM CD4 + T hücreleri, retrovirüsler içeren kültür süpernatanı ile transdüksiyon edildi ve transdüksiyon verimliliğine erişmeden önce 48 saat boyunca in vitro olarak kültürlendi. (B) Plazmid DNA ile transfekte edilmiş 293T hücrelerinde GFP'nin floresan mikroskobu görüntülemesi. Ölçek çubuğu: 400 μm. (C) Naif fareden (naif, solda) veya LCMV GP61-77 peptit enjeksiyonlu SM fareden (aktif, sağda) splenik SM CD4+ T hücrelerinde splenik naif CD4+ T hücrelerinde CD25 ve CD69 ekspresyon seviyelerinin akış sitometrisi analizi. (D) Retrovirüs ile transdüksiyonlu SM CD4 + T hücrelerinde (transdüksiyon, sol) veya retrovirüs transdüksiyonsuz SM CD4 + T hücrelerinde (transdüksiyonsuz, sol) GFP ekspresyonunun akış sitometrisi analizi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66752/66752fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66752/66752fig03.jpg"> Şekil 3: SM, T,FH hücre kader taahhüdünde Bcl-6 aşırı ekspresyonunun etkileri. (A) IRES-GFP'nin (MigR1-Bcl6) yukarı akışında (alt panel) retroviral MigR1 omurgalarının (üst panel) ve Bcl6 CDS bölgesi ile modifiye edilmiş MigR1 vektörünün doğrusal haritaları. (B) Deney tasarımı. MigR1 ile transdüksiyon veya MigR1-Bcl6 ile transdüksiyon SM CD4 + T hücreleri, LCMV Armstrong'dan bir gün önce C57BL / 6 alıcılarına (CD45.2 +) evlat edinerek transfer edildi. Enfeksiyondan sonraki 3. günde, alıcıların dalaklarından transfer edilen CD45.1+ SM CD4+ T hücreleri akış sitometrisi ile analiz edildi. (C) MigR1 ile transdüksiyonlu veya MigR1-Bcl6 ile transdüksiyonlu GFP + SM CD4 + T hücrelerinde CXCR5 ve CD25'in akış sitometrisi analizi. Kapıya bitişik sayılar, SMCD4+ T hücrelerindeki T FH hücrelerinin frekanslarını gösterir. (D) MigR1 ile transdüksiyon veya MigR1-Bcl6 ile transdüksiyon SM CD4 + T hücrelerinde Bcl-6 ekspresyon seviyesinin akış sitometrisi analizi. MFI, ortalama floresan yoğunluğu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66752/66752fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Mevcut çalışma, virüse özgü TFH hücrelerinin erken kader bağlılığını değerlendirmek ve bu hücrelerde gen ekspresyonunu manipüle etmek için protokoller göstermektedir.

Akut LCMV ile Enfekte Farelerde Virüse Özgü Foliküler Yardımcı CD4+ T Hücresinin Erken Farklılaşmasına Erişim

Follicular Helper T (TFH) cells are perceived as an independent CD4+ T cell lineage that assists cognate B cells in producing high-affinity antibodies, ...

accessing-early-differentiation-virus-specific-follicular-helper-cd4

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Yerinde tetramer boyama in situ hibridizasyon (ISTH) birleştirerek bir tekniği görselleştirme, haritalama ve analiz, virüs bulaşmış hedefleri virüs spesifik CD8 + T hücreleri mekansal yakınlığı ve bu bağışıklık etkileyiciler ve hedefleri arasındaki nicel ilişkilerin belirlenmesi sağlar enfeksiyon sonuçlarını.

Aynı zamanda Virüs CD8 + T Hücreleri ve virüsle enfekte olan hücreleri görselleştirin için bir Tekniği In situ</em

γ-herpesvirüslerinin (γ-HVS) ev sahibi ömür boyu kalıcılığı kurmak. Enfeksiyon γ-HV68 ile farelerin genetik çözülebilir...

Farelerde γHV68 Enfeksiyon ölçümü

Burada, naif ve kronik lenfositik koryomenenjit virüsü ile enfekte farelerden izole edilen düzenleyici T (Treg) hücrelerinin fenotipini analiz etmek için bir protokol açıklıyoruz. Ek olarak, Treg hücrelerinin baskılayıcı aktivitesini değerlendirmek için bir süreç sunuyoruz.

Fenotipik ve Kronik Lenfositik koryomenenjit Virüs ile enfekte Fare İzole Aktif Düzenleyici T hücrelerinin Fonksiyonel Analiz

Bu iletişim kuralı radyasyon şartına yenidoğan NSG fareler içine insan hematopoetik kök hücre intrahepatic enjeksiyon yoluyla insanlaşmış fareler (hu-NSG) kurmak için bir yöntem sağlar. Hu-NSG fare duyarlı HIV enfeksiyonu ve kombinatorik antiretroviral tedavi (sepet) ve HIV çoğaltma ve gecikme süresi incelemeler için uygun bir patofizyolojik model olarak hizmet vermektedir.

İnsanlaşmış NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) fare modeli HIV çoğaltma ve gecikme süresi çalışmaları için

Burada, eski için bir iletişim kuralı mevcut antijen spesifik CD8 vivo nitel tespiti+ T hücreleri. Analiz tek hücre süspansiyonlar organları veya küçük miktarda kan ile mümkündür. Çok çeşitli çalışmalar sitotoksik T hücre yanıt (aşı ve kanser immünoterapi çalışmaları) analizini gerektirir.

Anti-vektör ve Anti transgene özel CD8 eşzamanlı miktar+ T hücreleri MHC ile ben Tetramer sonrasi hipererjik bir Viral vektör ile boyama

Biz faktörler ana bilgisayar kodlama faaliyetlerini analiz için kullanılan her iki tüp bebek ve içinde vivo enfeksiyonu deneyleri tarif.

Bakteriyel Pathogen sonda için hücresel ve Organismic düzeyi ana bilgisayar yanıt için kullanma

Burada insanlaşmış farelerde HIV enfeksiyonu dinamikleri incelenmesi için üç deneysel yaklaşımlar açıklanmıştır. İlk ivedi kronik enfeksiyon olaylarının incelenmesine izin vererken, ikincisi primer enfeksiyon veya viral reaktivasyon sonrası akut olayların incelenmesine izin verir.

Humanized Immunoficient Mouse Modellerinde Kronik, Akut ve Yeniden Aktive HIV Enfeksiyonu

Bu makalede, influenza virüs enfeksiyonunun fare modelinde Tfh ve GC B yanıtını değerlendirme protokolleri açıklanmaktadır.

Farelerde grip A Virüs Enfeksiyonu Sırasında T Foliküler Yardımcı Hücrelerin ve Germinal Merkez Yanıtının Değerlendirilmesi

Biz nesil ve insanlaşmış ve insan immün yetmezlik virüs enfekte NOG fare modeli kök hücre nakli, intravajinal insan immün yetmezlik virüsü maruz kalma ve damlacık dijital PCR RNA dayalı değerlendirilmesi için bir protokol geliştirdik Miktar.

Intravajinal HIV Maruziyeti ve HIV Enfeksiyonu Tedavisi için İnsanize NOG Fareler

CD8 T hücresinin farklılaşmasını ve işlevini in vitro incelemek için, CD8 T hücreleri fareden izole edilip önceden oluşturulmuş enfekte fare vajinal epitelyal organoidleriyle uzun süreli birlikte kültürlenebilir. Burada, bu süreci tanımlıyoruz ve ortak kültür sırasında yerleşik hafıza T hücresi belirteçlerinin edinilişini değerlendiriyoruz.

In Vitro Epitelyal organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanılarak yerleşik bellek CD8 T hücresi farklılaşması

Keşfedin akut LCMV enfeksiyonlu farelerde virüse özgü foliküler yardımcı CD4+ T hücrelerinin erken farklılaşmasını akış sitometrisi ve retroviral gen manipülasyonu ile. Bu yöntemler aşı tasarımı için bağışıklık mekanizmalarını anlamaya katkı sağlar.

Akut LCMV ile Enfekte Farelerde Virüse Özgü Foliküler Yardımcı CD4⁺ T Hücresinin Erken Farklılaşmasına Erişim

Daha fazla video keşfet