Name: İğne açıklığı hakkında geri bildirim için sabit hava basıncı kullanan mikroenjeksiyon iğnelerinin ıslak eğimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: Öğrenin, genetik olarak modifiye edilmiş böcekler için mikroenjeksiyon iğnelerinin sabit hava basıncı kullanan ıslak eğim yöntemiyle keskinleştirilmesini. Bu protokol, iğne açıklığı hakkında geri bildirim sağlayarak tutarlı kalite ve hassasiyet sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Mikroenjeksiyon iğnelerinin sabit hava basıncı altında ıslak pahlanması için protokol

<ol><li>Rubin, G. M., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+transformation+of+Drosophila+with+transposable+Element+Vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genetic transformation of Drosophila with transposable Element Vectors.</a> Science. 218 (4570), 348-353 (1982).</li>
<li>O'Brochta, D. A., Atkinson, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+systems+in+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Transformation systems in insects.</a> Methods Mol Biol. 260, 227-254 (2004).</li>
<li>Handler, A. M., James, A. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHandler%2C+AM+%22Insect+Transgenesis%3A+Methods+and+Applications%22">Insect Transgenesis: Methods and Applications</a>. , CRC Press. Boca Rato. (2000).</li>
<li>Harrell, R. A. Mosquito embryo microinjection. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrell%2C+RA+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. , 10.1101/pdb.prot107686 (2023).</li>
<li>Allen, M. L., O'Brochta, D. A., Atkinson, P. W., Levesque, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable%2C+germ-line+transformation+of+Culex+Quinquefasciatus+%28Diptera%3A+Culicidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Stable, germ-line transformation of Culex Quinquefasciatus (Diptera: Culicidae).</a> J Med Entomol. 38 (5), 701-710 (2001).</li>
<li>Grossman, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+transformation+of+the+malaria+vector%2C+Anopheles+gambiae%2C+with+the+piggyBac+transposable+element%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Germline transformation of the malaria vector, Anopheles gambiae, with the piggyBac transposable element.</a> Insect Mol Biol. 10 (6), 597-604 (2001).</li>
<li>Adelman, Z. N., Jasinskiene, N., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+transgenesis+in+the+yellow+fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biochem+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Development and applications of transgenesis in the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Mol Biochem Parasitol. 121 (1), 1-10 (2002).</li>
<li>Perera, O. P., Harrell, R. A., Handler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ-line+transformation+of+the+South+American+malaria+vector%2C+Anopheles+albimanus%2C+with+a+piggyBac%2FEGFP+transposon+vector+is+routine+and+highly+efficient%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Germ-line transformation of the South American malaria vector, Anopheles albimanus, with a piggyBac/EGFP transposon vector is routine and highly efficient.</a> Insect Mol Biol. 11 (4), 291-297 (2002).</li>
<li>Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+embryo+microinjection+under+halocarbon+oil+or+in+aqueous+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Mosquito embryo microinjection under halocarbon oil or in aqueous solution.</a> Cold Spring Harb Protoc. , 10.1101/pdb.prot108203 (2023).</li>
<li>Louradour, I., Ghosh, K., Inbar, E., Sacks, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9+mutagenesis+in+Phlebotomus+papatasi%3A+The+immune+deficiency+pathway+impacts+vector+competence+for+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9 mutagenesis in Phlebotomus papatasi: The immune deficiency pathway impacts vector competence for Leishmania major.</a> mBio. 10 (4), e01941(2019).</li>
<li>Tamura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+transformation+of+the+silkworm+Bombyx+mori+L.+using+a+piggyBac+transposon-derived+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Germline transformation of the silkworm Bombyx mori L. using a piggyBac transposon-derived vector.</a> Nat Biotechnol. 18 (1), 81-84 (2000).</li>
<li>BV-10 Micropipette Beveler Operation Manual Rev. 3.00. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.manualslib.com/manual/2073788/Sutter-Instrument-Bv-10.html">https://www.manualslib.com/manual/2073788/Sutter-Instrument-Bv-10.html</a> (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.0 mm OD mikro kılcal damarlar</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beveler kaide yağı</td><td>Sutter Instruments</td><td>008</td><td></td></tr><tr><td>Bisiklet çamurluk klipsi</td><td>VeloOrange</td><td>R-clip 4'lü paket</td><td>https://velo-orange.com/products/vo-r-clip-4-pack</td></tr><tr><td>Bom Standı Mikroskobu</td><td>AmScope</td><td></td><td>AMScope 3.5X-90X Trinoküler LED Bom Standı Stereo Mikroskop veya eşdeğer</td></tr><tr><td>BV-10 Beveler</td><td>Sutter Instruments</td><td>BV-10</td><td></td></tr><tr><td>Elmas aşındırıcı plaka&nbsp;</td><td>Sutter Instruments</td><td>104F</td><td>Elmas aşındırıcı plaka - ekstra ince (0,2 & mikro; ila 1,0 & mikro uç boyutları)</td></tr><tr><td>Conta, Buna-N</td><td>Clippard Instrument Laboratory, Inc.</td><td>11761-2-pkg</td><td>T & nbsp; veya L konektörlerindeki bağlantıyı kapatmak için kullanılır, bu parçalarla birlikte verilmemişse</td></tr><tr><td>Hortum</td><td>Kelepçesi Clippard Instrument Laboratory, Inc.</td><td>5000-2-pkg</td><td></td></tr><tr><td>Hortum bağlantısı</td><td>Clippard Enstrüman Laboratuvarı, Inc.</td><td>CT4-pkg</td><td>5 hortum konektörüne ihtiyacınız var</td></tr><tr><td>Mikroenjeksiyon İğne Tutucu</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>MPH3-10</td><td>1 mm dış çaplı mikro kılcal damarlar için iğne tutucu</td></tr><tr><td>P-2000</td><td>Sutter Instruments</td><td></td><td>Herhangi bir iğne çektirmesi</td></tr><tr><td>Photo-Flo 200 Solution</td><td>B& H Fotoğraf, Video ve Ses</td><td>BH #KOPF200P&nbsp; MFR # 1464510</td><td>ıslatıcı</td></tr><tr><td>ajan Basınç Göstergesi</td><td>Clippard Instrument Laboratory, Inc.</td><td>PG-100</td><td>0-100 psi ölçer</td></tr><tr><td>Referans fitili</td><td>Sutter Instruments</td><td>X050300</td><td></td></tr><tr><td>Referans fitili tutucusu</td><td>Sutter Instruments</td><td>M100019</td><td></td></tr><tr><td>Regülatörü</td><td>Clippard Instrument Laboratory, Inc.</td><td>01-Mar</td><td>Bağlantılar için # 10-32 bağlantı noktasına ihtiyacınız</td></tr><tr><td>var Kauçuk Ambalaj Levhası 6 inç 6 Danco</td><td></td><td>Model # 59849</td><td></td></tr><tr><td>T montajı</td><td>Clippard Instrument Laboratory, Inc.</td><td>15002-2-pkg</td><td></td></tr><tr><td>Dişli Çubuk</td><td></td><td></td><td>Ya dişli bir çubuk ya da dişli uçlu çubuk. İş parçacığı 10-32 olmalıdır.</td></tr><tr><td>Üretan boru</td><td>Clippard Enstrüman Laboratuvarı, Inc.</td><td>URH1-0804-BLT-050</td><td></td></tr></tbody></table>

İğne açıklığı hakkında geri bildirim için sabit hava basıncı kullanan mikroenjeksiyon iğnelerinin ıslak eğimi

Wet Beveling of Microinjection Needles Utilizing Constant Air Pressure for Feedback on Needle Opening

Yukarıda açıklanan prosedür, tutarlı bir şekilde keskin mikroenjeksiyon iğneleri üretir. Keskin iğneler, sivrisinek embriyoları gibi yumuşak koryon böcek embriyolarına, embriyo zarından çok az dirençle veya hiç direnç göstermeden yerleştirilebilmesi ile karakterize edilir. Sivrisinek embriyoları genetik modifikasyon için mikroenjekte edildiğinde, embriyo zarı nispeten elastiktir. Kör bir iğneyi embriyo zarına doğru itmek, embriyonun girintili olmasına neden olur (Şekil 4B). İğne geri çekildiğinde zar şeklini geri kazanır. Yeterli basınçla, kör iğne sonunda zarı yırtacak ve embriyoplazma muhtemelen dışarı sızacaktır. İğne ne kadar keskin olursa, iğne embriyo zarına bastırılırken o kadar az girinti oluşur (Şekil 4E). Zarı yırtmak yerine, keskin bir iğne zardan kayacak ve embriyoya çok az zarar verecek veya hiç zarar vermeyecektir. İdeal bir iğne ile, iğne embriyonun içine kayarken embriyo zarında neredeyse hiç girinti olmayacaktır.
Maryland Üniversitesi Böcek Dönüşüm Tesisi (UM-ITF), akademi ve endüstrideki müşteriler için genetiği değiştirilmiş böcekler yaratan bir hizmet tesisidir. Tesis, sivrisinek embriyolarının mikroenjeksiyonu için eğimli iğneler kullanıyor. Ocak 2023 ile Aralık 2023 arasındaki dönemde UM-ITF, 56 müşteri projesine 12.795 Aedes embriyosu enjekte etti (Tablo 1). Eğimli iğnelerin kullanılması, UM-ITF'nin projeler genelinde enjeksiyon sonrası ortalama 1'lik bir tarama elde etmesine yardımcı oldu (Tablo 2<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66767/66767fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66767/66767fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66767/66767fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66767/66767fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66767/66767fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66767/66767fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66767/66767fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66767/66767fig04large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66767/Table%201_RE.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66767/table%202_RE.xlsx" target="_blank"></a>

Microinjection needles are a critical tool in the delivery of genome modification reagents, CRISPR components (guide RNAs, Cas9 protein, and donor ...

wet-beveling-microinjection-needles-utilizing-constant-air-pressure

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kaynak: Poland, R. et al. Motive edilmiş davranışın moleküler substratlarını incelemek için kemirgen beyin mikroenjeksiyonu. J. Vis. Uzm. (2015)Bu videoda, hassas ilaç iletimi için bir şırınga ve mikroenjektör hortumundan oluşan su dolu bir mikroenjeksiyon kurulumu kullanılmıştır. Önceden implante edilmiş bir kılavuz kanülü olan bir sıçan, hedefe yönelik beyin mikroenjeksiyonuna tabi tutulur ve bu da uyanık hayvanlarda minimum doku hasarı ile terapötik ajanların doğru bir şekilde uygulanmasını...

Terapötik Bir Ajanın Uyanık Bir Kemirgen Beynine Mikroenjeksiyon Tabanlı Verilmesi

Kaynak: Vanegas, M. I., et al. Kombine İlaç İnfüzyonu ve Elektrofizyolojisi için Mikroinjectrode Sistemi. J. Vis. Uzm. (2019)Bu videoda, hassas hacim takibi için yağ bazlı bir işaretleyici solüsyon kullanan ve eş zamanlı nöral kayıt ve ilaç infüzyonu sağlayan bir kılcal tüp aracılığıyla ilaç solüsyonu sağlayan mikroelektrot tabanlı bir mikroakışkan cihaz gösterilmektedir.

Kombine İlaç İnfüzyonu ve Elektrofizyolojisi için Mikroakışkan Tabanlı Mikroinjectrode Sistemi

Kaynak: Paolone, G., et al. Kemirgen beynine mikroenjeksiyonlar için kişiselleştirilmiş iğneler. J. Vis. Uzm. (2018).Bu video, delikli bir kuvars mikroiğne kullanılarak yapılan bir kemirgen beyin mikroiğne enjeksiyonunu göstermektedir. Mikroiğne, teslimat hızını kontrol etmek için bir şırıngaya ve mikro pompaya bağlanır. Enjeksiyon solüsyonu ile iğne, iletim hızı düşük olarak ayarlanmış olarak beyne yerleştirilir. Konumlandırıldıktan sonra teslimat hızı artırılır. Kısa bir duraklamadan sonra...

Kuvars mikroiğne kullanılarak kemirgen beyin mikroenjeksiyonu

Kemirgenler, davranışın moleküler alt tabakalarını ve karmaşık psikiyatrik bozuklukları araştırmak için uygun bir modeldir. Uyanık kemirgenlerde beyin mikroenjeksiyonu, hastalık substratlarını aydınlatmak için kullanılabilir. Verimli ve özelleştirilebilir bir beyin mikroenjeksiyon yönteminin yanı sıra motivasyonu ölçen edimsel bir paradigmanın yürütülmesi sunulmaktadır.

Kemirgen Beyin Mikroenjeksiyon Moleküler Alt Tabakalar Motive Davranış Eğitim için

Biz burada mikroenjeksiyon kuvars iğneleri kullanan kemirgen beyin için bir iletişim kuralı tanımlamak. Bu iğneler değil algılanabilir doku hasarı üretmek ve derin bölgelerde bile güvenilir teslim edilmesini sağlamak. Ayrıca, araştırma ihtiyaçlarına tarafından kişiselleştirilmiş tasarımlar adapte edilebilir ve yeniden kullanılabilir.

Microinjections kemirgen beyin için kişiselleştirilmiş iğneler

Biz nasıl sıkı BAĞLAMAK ve photoactivation gibi mikro - ve photomanipulation teknikleri hareketliliği parametreleri belirlenmesi etkinleştirmek ve proteinler geçiş içinde kronolojik zamanmekansal dinamikleri hücreleri tanımlamak. Deneysel veriler hücre altı dinamikleri ve ciro hareketliliği düzenleyiciler veya temel aktin sitoiskeleti içerir.

Morfogenetik dinamiklerini analiz ve hücre iskeleti düzenleyiciler ciro sağlayan Embriyolardan teknikleri

Zebra balığı optik netlik, hızlı harici diller, dahil olmak üzere birçok değerli özellikleri ve işitme ve denge için belirli önemini, dışarıdan duyu saç hücreleri bulunan bir modeli sistemidir. Bu makalede nasıl transgenik zebra balığı özetlenmektedir saç hücreli mechanosensation ve presynaptic fonksiyonu toto tahlil için kullanılabilir.

Larva zebra balığı sonradan içini kaplamak saç hücrelerinin vivo kalsiyum görüntüleme

Elektrofizyoloji ve deneysel probların (yani nanosensörler, mikroelektrotlar) isteğe bağlı ilaç infüzyonu için tasarlanmış bir mikroenjekrode sistemi salıyoruz. Yaygın olarak bulunan mikroakışkan bileşenler, sondayı içeren bir kanülle birleştiğinde. Makak korteksindeki mussimol infüzyonu sırasında elde edilen sonuçlarla birlikte mikroenjekrode konstrüksiyonu için adım adım protokol dahildir.

Kombine İlaç İnfüzyonu ve Elektrofizyolojisi için Mikroenjekrode Sistemi

CRISPR/Cas9, model olmayan organizmalarda gen fonksiyonunu karakterize etmek için giderek daha fazla kullanılmaktadır. Bu protokol, enjeksiyon karışımlarının hazırlanmasından sivrisinek embriyolarının elde ve enjektesine kadar Culex pipiens'innakavt hatlarının nasıl oluşturulacağını ve enjekte edilen sivrisineklerin ve bunların istenen mutasyonlar için soylarının nasıl arka, çapraz ve taramadan geçeceğini açıklar.

CRISPR/Cas9 Kullanarak Boş Mutasyonlar Oluşturmak için Culex Sivrisineklerinin Embriyolarının Hazırlanması ve EnjekteSi

İşte biz sitoplazmik mikroenjeksiyon...

Xenopus laevis Oosit, Mikroenjeksiyon

Öğrenin, genetik olarak modifiye edilmiş böcekler için mikroenjeksiyon iğnelerinin sabit hava basıncı kullanan ıslak eğim yöntemiyle keskinleştirilmesini. Bu protokol, iğne açıklığı hakkında geri bildirim sağlayarak tutarlı kalite ve hassasiyet sunar.

İğne açıklığı hakkında geri bildirim için sabit hava basıncı kullanan mikroenjeksiyon iğnelerinin ıslak eğimi

Daha fazla video keşfet