Name: Otolog Kan Pıhtıları Kullanılarak Pulmoner Embolide Minimal İnvaziv Bir Sıçan Modelinin Oluşturulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-25T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Öğrenin, otolog kan pıhtıları kullanarak sıçanlarda minimal invaziv pulmoner emboli modeli oluşturmayı. Bu yöntem, akciğer infarkt alanlarını nicelendirmek ve pulmoner arter ağacını görselleştirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tüm hayvan deneyleri, Çin Tıp Bilimleri Akademisi ve Pekin Birliği Tıp Koleji Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin onayı ile gerçekleştirilmiştir (onay numarası: IRM/2-1ACUC-2311-015). Bu çalışmada 6 haftalık ve yaklaşık 250 g ağırlığındaki erkek Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı. Hayvanlar, dengeli bir yemek diyetine ve suya ad libitum erişimi olan belirli bir patojen içermeyen ortamda barındırıldı. 22 °C ± 2 °C oda sıcaklığında 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü altında tutuldular. Hayvanların herhangi bir cerrahi işlem geçirmeden önce 1 hafta boyunca çevreye uyum sağlamalarına izin verildi. Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Ekipman ve malzemeler
<ol>
	<li>Anestezi ekipmanı: Küçük hayvanlar ve izofluran için bir gaz anestezi makinesi kullanın.</li>
	<li>Cerrahi malzemeler: Pamuklu çubuklar, iyodofor dezenfektan, stereo mikroskop, tıraş makinesi, tıbbi bant, 27 G iğneli 1 mL şırınga, 5 mL şırınga, 10 mL şırınga, normal salin, gazlı bez, 8-0 hazırlayın naylon iplikler, dikiş iğneli 6-0 naylon iplik, mikro hemostatik kelepçeler, mikro cımbız ve ince makaslar.</li>
	<li>Diğer malzemeler: Tıbbi şırıngalarla uyumlu 19 G ve 18 G dağıtım iğneleri, iç çapı 1,2 mm ve uzunluğu 10 cm olan bir silikon tüp, iç çapı 3,0 mm ve uzunluğu 20 cm olan bir infüzyon tüpü, 1,5 mL santrifüj tüpü, bir pipet ve pipet uçları edinin.</li>
	<li>Kendi kendine yapılan trombüs jeneratörü ve kan pıhtısı enjektörü (Şekil 1): Trombüs jeneratörünü oluşturmak için silikon tüpü 1 mL'lik bir şırıngaya bağlı 19 G dağıtım iğnesine bağlayın. Pıhtı enjektörünü oluşturmak için infüzyon tüpünün bir ucunu 18 G dağıtım iğnesine bağlayın ve diğer ucunu 5 mL'lik bir şırıngaya takın.</li>
</ol>
2. Otolog kan pıhtısı hazırlığı
<ol>
	<li>Anestezi<ol>
		<li>Hayvanı anestezi indüksiyon odasına yerleştirin ve 2-3 dakika boyunca 2 L/dk akış hızında oda havası ile %4 izofluran karışımı uygulayın (kurumsal olarak onaylanmış protokollere göre).</li>
		<li>Hayvanı operasyon platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin. 0,4 L / dak'lık bir akış hızında% 2,5 izofluran uygulayarak anesteziyi koruyun. Yeterli anestezinin sağlandığından emin olmak için pedal refleksini test edin.</li>
		<li>Her iki ön ayağı da vücuttan yatay olarak uzatın ve kasık bölgesini yeterince açığa çıkarmak için arka ayakları uzatın. Hayvanı tıbbi bant kullanarak bu pozisyonda sabitleyin (Şekil 2A).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kraniyal vena kava (CVC) yoluyla kan örneklemesi<ol>
		<li>Bir tıraş makinesi ve tüy dökücü krem kullanarak manubrium çevresindeki tüyleri alın. Cildi iyodofor ile dezenfekte edin.</li>
		<li>Şekil 27A'da gösterildiği gibi sol veya sağ CVC'yi delmek için 1 mL şırıngaya bağlı 8 G iğneyi dikey olarak 2 mm derinliğe sokun. NOT: CVC'nin gövde yüzeyi çıkıntısı, manubriumun 5 mm yanaldır. Her iki taraf da kullanılabilir ve seçim aşağıdaki adımları etkilemez.</li>
		<li>Şırıngayı tutun ve namlu içinde negatif basınç oluşturmak için pistonu yavaşça geri çekin. Kan akana kadar iğneyi yavaş yavaş geri çekin, ardından 0.3 mL kan toplanana kadar bu pozisyonu koruyun (Şekil 2B).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kan pıhtısı hazırlığı<ol>
		<li>Toplanan kanı 1,5 mL'lik bir santrifüj tüpüne itin ve kabarcık oluşturmamaya dikkat edin.</li>
		<li>Kanı, kan sütunu 10 cm uzunluğunda olana kadar kendi kendine yapılan trombüs jeneratörünün silikon tüpüne çekin. NOT: Bu iki adımı hızlı bir şekilde gerçekleştirin, çünkü pıhtılaşma santrifüj tüpünde başlayacak ve yayılacak ve alınan kan pıhtılarının kalitesini düşürecektir.</li>
		<li>Kan tamamen tromboze olana kadar 30 dakika bekleyin. Bu süre zarfında, diğer hayvanlar için de aynı şekilde kan sütunları hazırlayın.</li>
		<li>Tromboze kan kolonunu normal salin içeren bir Petri kabına yıkayın ve trombüs kolonunu normal salin ile üç kez yıkayın (Şekil 2C).</li>
		<li>Trombüs kolonunu her biri 4 mm uzunluğunda tek tip kan pıhtıları halinde kesmek için ince makas kullanın (Şekil 2D). 2 mL normal salin ile önceden doldurulmuş kendi kendine yapılan enjektöre 10-20 pıhtı çekin. NOT: Kan pıhtılarının uzunluğu 1 cm'yi geçmemelidir, aksi takdirde sağ ventrikülde sıkışırlar.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Damar erişim hazırlığı
<ol>
	<li>Yüzeysel epigastrik damarların açığa çıkarılması<ol>
		<li>Hayvanı adım 2.1'de anlatıldığı gibi uyuşturun ve sabitleyin.</li>
		<li>Sol kasık bölgesini çevreleyen kılları tıraş edin. Bu bölgelere tüy dökücü krem sürün, 1 dakika bekleyin ve ardından kremi gazlı bezle silin. Cildi iyodofor ile dezenfekte edin.</li>
		<li>Kasık bölgesindeki yüzeysel epigastrik damarların orijininin üzerinde 5 mm'lik bir cilt kesisi yapın. Genellikle, yüzeysel epigastrik damarların kökeni, kasık bölgesinde küçük bir nabız atışı gözlemlenerek izlenebilir.</li>
		<li>10x büyütmeli stereo mikroskop kullanarak, yüzeysel epigastrik damarları ortaya çıkarmak için ince bir deri altı yağ tabakasını ayırın (Şekil 3A).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Yüzeysel epigastrik venin izole edilmesi<ol>
		<li>Yüzeysel epigastrik veni arter, sinir ve yağ dokusundan dikkatlice izole edin. Bunu hem proksimal olarak, femoral ven'e boşaldığı noktaya kadar hem de distal olarak ilk ven bifurkasyonuna kadar gerçekleştirin.</li>
		<li>Distal tarafı 8-0 ile bağlayın İpliği bir mikro kelepçe ile geçirin ve sıkıştırın. Proksimal tarafı 8-0 ile kontrol edin başka bir mikro kelepçeye bağlı iplik halkası (Şekil 3B).</li>
		<li>İzole edilmiş venin distal tarafında küçük bir enine kesi yapın. Kanamayı önlemek için proksimal tarafı kontrol edin. Damar lümeninde kalan kanı normal tuzlu su ile yıkayın. Damar temizlendikten sonra, venöz insizyonu büyütmek için mikro cımbız kullanın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Embolizasyon
<ol>
	<li>Damar kanülasyonu<ol>
		<li>Kendi kendine yapılan enjektörün iğnesini damar kesisinden damar içine yavaşça sokun. Damardan kaymasını önlemek için iğneyi üçüncü bir kelepçe ile sabitleyin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Embolizasyon prosedürü<ol>
		<li>Az miktarda normal salin uygulamak için pistonu yavaşça itin. Damarın dirençsiz dolgunluğu, tıkasız damar girişini gösterir (Şekil 3D).</li>
		<li>Yüzeysel epigastrik ven erişimi yoluyla femoral ven içine pıhtıları uygulamak için pistonu itmeye devam edin. Embolizasyon hızını dakikada 5 embolide kontrol edin. Hayvanın solunumunu izleyin; Ortaya çıkan ve alevlenen nefes darlığı başarılı bir embolizasyonu gösterir.</li>
		<li>Önceden tanımlanmış miktarda kan pıhtısını enjekte ettikten sonra, iğneyi geri çekin ve yüzeysel epigastrik venin proksimal tarafını bağlayın.</li>
		<li>Kesiği dikin ve hayvanı ılık bir kutuya koyun. Uyandıktan sonra hayvanı kafesine aktarın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. Enfarktüslü alanın ölçülmesi
<ol>
	<li>Ötenazi ve kardiyak perfüzyon<ol>
		<li>250 mL normal saline 25.000 U heparin sodyum ekleyin ve iyice karıştırın. Şişeyi bir infüzyon cihazına bağlayın ve şişeyi 80 cm yükseklikte baş aşağı asın. İnfüzyon cihazının valfini kapatın.</li>
		<li>Hayvanları aşırı dozda izofluran ile ötenazi yapın (kurumsal olarak onaylanmış protokolleri izleyerek).</li>
		<li>Kaburgaları büyük bir makasla kesin ve göğsü açın, akciğerlere ve büyük damarlara zarar vermekten kaçının.</li>
		<li>İnfüzyon cihazının iğnesini sol ventriküle yerleştirin. Heparinize tuzlu su infüzyonuna izin vermek için infüzyon cihazının valfini açın. Drenaja izin vermek için inferior vena kava'yı ve sol uzantıyı kesmek için makas kullanın. Perfüzyon hızını 50 mL / dk'da kontrol edin. NOT: Bu işlem sırasında normal akciğer dokusu beyaza dönerken embolize bölge paslı kalır.</li>
		<li>Heparinize salin ile perfüzyonu tamamladıktan sonra,% 4 paraformaldehit çözeltisi ile doldurulmuş 10 mL'lik bir şırınga kullanarak pulmoner arter gövdesini sağ ventrikülden delin. Toplam 30 mL hacim boyunca akciğerlerden %4 paraformaldehit perfüzyonu yaparak akciğer dokusunu sabitleyin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Enfarktüs Oranı adı verilen bir indeksin tanıtılması<ol>
		<li>Fiksasyondan sonra akciğerleri, kalbi, soluk borusunu, yemek borusunu, timüsü ve büyük damarları bir bütün olarak omurga ve diyaframdançıkarın 11.</li>
		<li>Yemek borusu, timus ve yağ dokusunu ilk kütleden dikkatlice çıkarın, geriye sadece kalp, akciğerler ve büyük damarlar kalır.</li>
		<li>Kalan kısmı en az 48 saat boyunca yeterli hacimde% 4 paraformaldehit çözeltisine batırın.</li>
		<li>Tüm akciğerleri tartmak için analitik bir terazi kullanın. Akciğerlerin enfarktüslü kısmını ayırmak için ince makas kullanın ve enfarktüslü dokuyu aynı terazi ile tartın. Aşağıdaki denklemi kullanarak Enfarktüs Oranını hesaplayın: 
		<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66776/66776eq01.jpg" style="margin: auto;"> 
		i enfarktüslü dokunun ağırlığıdır, w tüm akciğerlerin ağırlığıdır, i Enfarktüs Oranını temsil eder.</li>
		<li>Enfarktüslü alanı ölçtükten sonra, parafin gömme11 için paraformaldehitle sabitlenmiş akciğer dokusunu kesin.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. Pulmoner arteriyel ağacın görselleştirilmesi
<ol>
	<li>Pulmoner arter dökümü<ol>
		<li>Hayvana ötenazi yapın ve adım 5.1'de anlatıldığı gibi kardiyak perfüzyon gerçekleştirin.</li>
		<li>Silikon döküm bileşiğine eşit miktarda (ağırlıkça) seyreltici ekleyin, karışımı karıştırın ve ardından kürleme maddesinin %5'ini (ağırlıkça veya hacimce) ekleyin. Karışımı tekrar karıştırın.</li>
		<li>Karışımın 1 mL'sini 1 mL'lik bir şırıngaya çekin, havayı boşaltın ve iğneyi sağ ventrikülden pulmoner arter gövdesine yerleştirin. Kaymayı ve geri akışı önlemek için iğneyi pulmoner artere sabitleyin.</li>
		<li>Silikon döküm karışımının pulmoner arter ağacını doldurmasına izin vermek için pistona hafifçe bastırın. Normal akciğer alanları döküm karışımı ile boyanırken, enfarktüslü alanlar paslı kırmızı kalır. NOT: Pulmoner arter alçısı sadece sağlam akciğer dokusuna uygulanmalıdır. Tipik olarak, döküm karışımının 0.6-0.8 mL'si pulmoner arteriyel ağacı doldurmak için yeterlidir. Döküm karışımının aşırı enjeksiyonu, pulmoner arter ağacının görselleştirilmesini etkileyen pulmoner ven dökümüne yol açabilir. Döküm karışımı, kürleme maddesi eklendikten sonra 20 dakika içinde kullanılmalıdır, çünkü bu sürenin ötesinde kristalleşecektir.</li>
		<li>Perfüzyon döküldükten sonra şırıngayı geri çekin, pulmoner arter gövdesini bağlayın ve adım 5.2'de açıklandığı gibi akciğerleri, kalbi ve büyük damarları çıkarın. Tüm kütleyi bir Petri kabına koyun ve döküm karışımının kristalleşmesini sağlamak için gece boyunca 4 °C'lik bir buzdolabında saklayın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Temizleme ve görselleştirme<ol>
		<li>Kalbi ve büyük damarları akciğerlerden makasla çıkarın, ardından akciğer yüzeyindeki kürleme karışımı kalıntılarını temizleyin.</li>
		<li><li></li></ol></li></ol>

<ol><li>Götzinger, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+therapies+for+pulmonary+embolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Interventional therapies for pulmonary embolism.</a> Nat Rev Cardiol. 20 (10), 670-684 (2023).</li>
<li>Falster, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+international+guideline+recommendations+for+the+diagnosis+of+pulmonary+embolism%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Haematol%22%5BJournal%5D)">Comparison of international guideline recommendations for the diagnosis of pulmonary embolism.</a> Lancet Haematol. 10 (11), e922-e935 (2023).</li>
<li>Konstantinides, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESC+guidelines+for+the+diagnosis+and+management+of+acute+pulmonary+embolism+developed+in+collaboration+with+the+European+Respiratory+Society+%28ERS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">ESC guidelines for the diagnosis and management of acute pulmonary embolism developed in collaboration with the European Respiratory Society (ERS).</a> Eur Heart J. 41 (4), 543-603 (2020).</li>
<li>Domínguez-Oliva, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+animal+models+in+biomedical+research%3A+Current+insights+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Animals+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">The importance of animal models in biomedical research: Current insights and applications.</a> Animals (Basel). 13 (7), 1223(2023).</li>
<li>Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+animal+models+in+biomedical+research%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Res%22%5BJournal%5D)">Role of animal models in biomedical research: A review.</a> Lab Anim Res. 38 (1), 18(2022).</li>
<li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+of+pulmonary+artery+in+a+rabbit+model+of+pulmonary+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling of pulmonary artery in a rabbit model of pulmonary thromboembolism.</a> PLoS One. 11 (10), e0164530(2016).</li>
<li>Deng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tissue+factor+and+forkhead+box+transcription+factor+o-1+in+a+rat+model+for+chronic+thromboembolic+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">Expression of tissue factor and forkhead box transcription factor o-1 in a rat model for chronic thromboembolic pulmonary hypertension.</a> J Thromb Thrombolysis. 42 (4), 520-528 (2016).</li>
<li>Runyon, M. S., Gellar, M. A., Sanapareddy, N., Kline, J. A., Watts, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+comparison+of+a+minimally-invasive+model+of+autologous+clot+pulmonary+embolism+in+Sprague-Dawley+and+Copenhagen+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+J%22%5BJournal%5D)">Development and comparison of a minimally-invasive model of autologous clot pulmonary embolism in Sprague-Dawley and Copenhagen rats.</a> Thromb J. 8, 3(2010).</li>
<li>Li, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteomic+study+of+acute+pulmonary+embolism+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Comparative proteomic study of acute pulmonary embolism in a rat model.</a> Proteomics. 7 (13), 2287-2299 (2007).</li>
<li>Deng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+FOXO1+and+apoptosis+in+pulmonary+vascular+remolding+in+a+rat+model+of+chronic+thromboembolic+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Role of FOXO1 and apoptosis in pulmonary vascular remolding in a rat model of chronic thromboembolic pulmonary hypertension.</a> Sci Rep. 7 (1), 2270(2017).</li>
<li>Morton, J., Snider, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+collection+and+processing+of+lungs+from+aged+mice+for+histological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathobiol+Aging+Age+Relat+Dis%22%5BJournal%5D)">Guidelines for collection and processing of lungs from aged mice for histological studies.</a> Pathobiol Aging Age Relat Dis. 7 (1), 1313676(2017).</li>
<li>Karpov, A. A., Vaulina, D. D., Smirnov, S. S., Moiseeva, O. M., Galagudza, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+pulmonary+embolism+and+chronic+thromboembolic+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Rodent models of pulmonary embolism and chronic thromboembolic pulmonary hypertension.</a> Heliyon. 8 (3), e09014(2022).</li>
<li>Picazo, M. G., Benito, P. J., García-Olmo, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficiency+and+safety+of+a+technique+for+drawing+blood+from+the+hamster+cranial+vena+cava%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Efficiency and safety of a technique for drawing blood from the hamster cranial vena cava.</a> Lab Anim (NY). 38 (6), 211-216 (2009).</li>
<li>Szabó, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cranial+venous+system+in+the+rat%3A+Anatomical+pattern+and+ontogenetic+development.+Ii.+Dorsal+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">The cranial venous system in the rat: Anatomical pattern and ontogenetic development. Ii. Dorsal drainage.</a> Ann Anat. 177 (4), 313-322 (1995).</li>
<li>Li, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+and+mechanism+of+ginsenoside+rg1+on+myocardial+remodeling+in+an+animal+model+of+chronic+thromboembolic+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">The effects and mechanism of ginsenoside rg1 on myocardial remodeling in an animal model of chronic thromboembolic pulmonary hypertension.</a> Eur J Med Res. 18 (1), 16(2013).</li>
<li>Sullivan, D. M., Watts, J. A., Kline, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biventricular+cardiac+dysfunction+after+acute+massive+pulmonary+embolism+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Biventricular cardiac dysfunction after acute massive pulmonary embolism in the rat.</a> J Appl Physiol (1985). 90 (5), 1648-1656 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Analitik terazi</td><td>METTLER TOLEDO</td><td>MA55/A</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Dağıtım iğnesi</td><td>Jinrong elektroniği</td><td>Yok</td><td>19 G ve 18 G</td></tr><tr><td>İnce makas</td><td>Daha güçlü</td><td>XGJ1300</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Heparin sodyum tuzu</td><td>Solarbio</td><td>01-08-9041</td><td>140U/mg</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>RWD</td><td>R510-22-10</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Metil salisilat</td><td>Macklin</td><td>M813577</td><td>AR,% 99</td></tr> <tr><td>Mikro kelepçe</td><td>JZ&nbsp;</td><td>W40160</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Mikro cımbız</td><td>Daha güçlü</td><td>XGN1310</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Silikon döküm bileşiği</td><td>Flow Tech</td><td>MV-130</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Sprague-Dawley sıçanları</td><td>Vital River</td><td>SD-IGS</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Stereo mikroskop</td><td>Murzider</td><td>MSD204</td><td>Yok</td></tr></tbody></table>

otolog kan pıhtıları kullanılarak pulmoner embolide minimal İnvaziv bir sıçan modelinin oluşturulması

Establishment of a Minimally Invasive Rat Model of Pulmonary Embolism Using Autologous Blood Clots

PE modelinin semptomları ve patolojisi Embolizasyon sırasında, sıçanlar nefes darlığı yaşadı ve toraks genişlemiş dalgalanmalar gösterdi. Neredeyse tüm hayvanlar, 10 cm'den daha az kan pıhtılaşması uygulandığında pulmoner emboli atağından kurtuldu (modellenen 15 hayvandan 14'ü). Kafeslerine geri döndükten sonra, hayvanlar köşelere kıvrıldı ve yiyecek ve suya olan ilginin azaldığını gösterdi. Bununla birlikte, bu semptomlar hızlı bir şekilde düzeldi ve birkaç saat içinde hayvanlar normal şekilde davrandı. Embolizasyondan sonra başlangıç ve 24 saat arasında ağırlık açısından anlamlı bir fark yoktu (341.8 ± 10.4'e karşı. 343.3 ± 8.5, p = 0.25).
Brüt patoloji, embolize (enfarktüs) alanların kama şeklinde, çoğunlukla akciğerlerin alt kısmında yer alan ve net sınırları olan olduğunu ortaya koydu. Emboli, enfarktüslü alanların tepesinde, pulmoner arterin birinci ve ikincil dallarını tıkayarak bulundu. Hematoksilen-eozin boyaması kullanılarak yapılan mikroskobik patoloji, bir pulmoner arter dalının embolizasyonunu doğruladı (Şekil 4F).
Kan pıhtısı yükü ve enfarktüslü alan Kan pıhtı yükünün akciğer enfarktüsü üzerindeki etkisinin ön araştırmasında, hem düşük kan pıhtı yükü (6 cm trombüs kolonu, 15 pıhtı) hem de yüksek kan pıhtı yükü (10 cm trombüs kolonu, 25 pıhtı) test edildi. Beklendiği gibi, daha yüksek bir emboli yükü, daha geniş bir akciğer enfarktüsü alanı ile sonuçlanmıştır (Şekil 5A-C).
24 saat içinde içsel fibrinoliz Embolizasyondan hemen sonra alınan akciğer örnekleriyle karşılaştırıldığında, embolizasyondan 24 saat sonra toplanan akciğer örnekleri, sıçanlarda güçlü bir intrinsik fibrinoliz potansiyeline işaret eden, belirgin şekilde azalmış enfarktüslü alanlar gösterdi (Şekil 5D).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66776/66776fig01.jpg"> 
Şekil 1: Trombüs jeneratörü ve kan pıhtısı enjektörü yapımı. (A) Trombüs jeneratörü, 18 G'lik bir dağıtım iğnesine (12 mm dış çap) ve 0.5 mL normal salin ile önceden doldurulmuş 1 mL'lik bir şırıngaya bir silikon tüp bağlanarak monte edildi. (B) Kan pıhtısı enjektörü, 19 G'lik bir dağıtım iğnesine (0.84 mm iç çap, 1.08 mm dış çap) bir infüzyon tüpüne (pıhtı kabı) ve 2 mL normal salin ile önceden doldurulmuş 5 mL'lik bir şırıngaya bağlanarak yapılmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66776/66776fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66776/66776fig02.jpg"> 
Şekil 2: Kan örneklemesi ve pıhtı hazırlığı. (A) Sıçan uyuşturuldu ve sırtüstü pozisyonda sabitlendi. Noktalı çizgili beyaz daire, vücut yüzeyi işaretleyicisi olarak hizmet eden manubriumu gösterir. Beyaz dairenin yanındaki kırmızı noktalar, bilateral kraniyal vena kavalarına (CVC'ler) erişim için delinme bölgelerini gösterir. Şeklin alt kısmı, manubriumun, CVC'lerin ve delinme bölgelerinin göreceli konumlarının bir otopsi çizimini göstermektedir. (B) Sağ CVC ile başarılı kan örneklemesi. (C) Tromboze kan sütununun kendi kendine yapılan trombüs jeneratöründen dışarı atılması. (D) Tromboze kan kolonundan türetilen kan pıhtıları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66776/66776fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66776/66776fig03.jpg"> 
Şekil 3: Damar erişimi ve embolizasyon. (A) Yüzeysel epigastrik damarların 5 mm'lik bir cilt kesisinden maruz kalması, mavi ok yüzeysel epigastrik veni ve kırmızı ok yüzeysel epigastrik arteri gösterir. (B) Yüzeyel epigastrik venin çevre dokudan izolasyonu ve damarın naylon ipliklerle kontrol edilmesi. (C) Kan pıhtıları içeren kendi kendine yapılan enjektör. (D) Kendi kendine yapılan enjektörün dağıtım iğnesi ile damarın kanülasyonu ve damar erişimi yoluyla kan pıhtılarının uygulanması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66776/66776fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66776/66776fig04.jpg"> 
Şekil 4: Pulmoner emboli patolojisi. (A) Kardiyak salin perfüzyonu ve% 4 paraformaldehit fiksasyonu sonrası normal akciğerler. (B) Silikon döküm karışımı ve metil salisilat temizleme ile görüntülenen normal akciğerler, patentli bir pulmoner arter ağacı ve mikrovaskülatür gösterir. (C) Otolog kan pıhtıları ile embolizasyondan hemen sonra akciğerler, embolizasyona bağlı akciğer enfarktüsünü gösteren belirgin alanlar. (D) Silikon karışımı dökümü ve metil salisilat temizliği ile görüntülenen hastalıklı akciğerler, emboliyi tıkayan pulmoner arter dallarını gösteren siyah oklar ve etkilenen bölgelerini gösteren beyaz kesikli daireler enfarktüstür. (E) Pulmoner arter dallarında emboli (kırmızı oklar) gösteren sol akciğer lobunun diseksiyonu. (F) Hematoksilen ve eozin boyaması kullanılarak bir pulmoner arter dalında kan pıhtısı embolizasyonunun mikroskobik görüntüleri. Ölçek çubuğu: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66776/66776fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66776/66776fig05.jpg"> 
Şekil 5: Akciğer Enfarktüs Oranının Ölçülmesi. (A) 10 cm kan pıhtılaşması (toplam uzunluk) ile embolizasyondan hemen sonra bir sıçandan alınan akciğerler. (B) 6 cm trombüs ile embolizasyondan hemen sonra bir sıçandan alınan akciğerler. (C) 8 cm kan pıhtılaşması ile embolizasyondan hemen sonra bir sıçandan alınan akciğerler. (D) 8 cm kan pıhtılaşması ile embolizasyondan 24 saat sonra bir sıçandan alınan akciğerler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66776/66776fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Otolog Kan Pıhtıları Kullanılarak Pulmoner Embolide Minimal İnvaziv Bir Sıçan Modelinin Oluşturulması

Pulmonary embolism (PE) is one of the leading causes of cardiovascular death, resulting in a significant socioeconomic burden. Although current treatments ...

establishment-minimally-invasive-rat-model-pulmonary-embolism-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir subaraknoid kanama sıçan modeli oluşturma prosedürünü göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir sıçan, intrakraniyal basıncı ve serebral kan akışını ölçmek için problarla implante edilir. Hedef bölge belirlenir ve iğne ön kiazmatik bir pozisyonda yerleştirilir. Otolog kan daha sonra subaraknoid boşluğa enjekte edilir, kafa içi basıncı arttırır ve serebral kan akışını azaltır ve model oluşturulur.

Otolog Kan Enjeksiyonu ile İndüklenen Subaraknoid Kanama Sıçan Modelinin Kurulması

Akciğer sistemik bronşiyal arter ve pulmoner arterler hem perfüze edilir. Çoğu akciğer patolojilerinde, bu sağlam neovaskülarizasyonu gösterir küçük sistemik damar olduğunu. Pulmoner kan akımının kesilmesi tempolu bronşiyal anjiyogenez teşvik etmektedir. Biz bronşiyal neovaskülarizasyon teşvik sol pulmoner arter iskemi oluşturulmadan cerrahi ayrıntıları.

İskemik Sıçan Akciğer Angiogenezis

Bu yazıda, erişkin sıçanlarda homolog kan pıhtıları (fibrin açısından zengin) ile embolik orta serebral arter tıkanıklığı oluşturmak için standart bir yöntem gösteriliyor. Bu model, insan iskemik inmesini yakından taklit eder ve iskemik inme için trombolitik tedavinin klinik öncesi çalışması için uygundur.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Burada, iplik embolizasyon yöntemiyle üstün sagittal sinüs (SSS) trombozunun Sprague-Dawley (SD) sıçan modeli romanı kurduk ve modelin stabilitesi ve güvenilirliği doğrulandı.<br...

İplik Embolisi Yöntemi ile Üstün Sagittal-Sinüs Oklüzyonunun Sıçan Modelinin Kurulması

Burada, sonuçları iyileştirmeye hizmet eden bir sıçan akciğer nakli modeline optimizasyonlar sunuyoruz. Vücut ağırlığına göre manşetler için bir boyut kılavuzu, 4. interkostal boşluğu belirlemek için bir ölçüm stratejisi ve yara kapatma ve BAL (bronkoalveoler lavaj) sıvı ve doku toplama yöntemleri sunuyoruz.

Sıcak iskemi / reperfüzyon hasarının bir sıçan akciğer transplantasyon modeli: sonuçları iyileştirmek için optimizasyonlar

Protokol, fare modellerinde akciğer iskemi-reperfüzyon hasarını incelemek için kullanılabilecek uygulanabilir, güvenilir ve tekrarlanabilir bir sol pulmoner hiler klempleme yöntemini özetlemektedir.

Akciğer İskemisi Reperfüzyon Hasarının Murin Sol Pulmoner Hiler Klemp Modeli

Bu çalışmada, sıçanlarda laparotomi ile supra-çölyak aort çapraz klemplemesi sırasında viseral iskemi-reperfüzyonu takiben akut akciğer hasarı modeli anlatılmaktadır. Aort klemplemesinin hem klinik hem de biyolojik etkilerinin yanı sıra iskemi-reperfüzyonun altta yatan organlar ve uzak akciğer yaralanmaları üzerindeki etkisinin araştırılmasını sağlar.

Sıçanlarda Supra-Çölyak Aort Çapraz Klemplemesi ile Viseral İskemi-Reperfüzyonu Takiben Akut Akciğer Hasarı Modeli

Bu çalışma, akut orta riskli PE'yi tekrarlayan büyük otolog emboli kullanan bir pulmoner emboli (PE) modeli sunmaktadır. Model, hem patofizyoloji hem de tedavi yanıtlarının değerlendirilmesi için çok uygundur.

Akut Otolog Pulmoner Embolinin Domuz Modeli

Burada, pulmoner fibrozis (PF-PH) sıçan modeli ile ilişkili pulmoner arteriyel hipertansiyonun hava yoluna bleomisin enjeksiyonu ile indüklenmesi yöntemi tanıtılmıştır. Ayrıca bu hayvan modelini doğrulamak için adım adım bir yaklaşım sunuyoruz.

Pulmoner Fibrozis ile İlişkili Pulmoner Arteriyel Hipertansiyonun Bir Sıçan Modelinin Oluşturulması ve Doğrulanması

Bu protokol, sıçanlarda ortotopik sol akciğer nakli için operasyonel zorluğu azaltmaya ve sağkalım oranlarını iyileştirmeye odaklanan gelişmiş bir tekniği tanımlar.

Sıçanlarda Ortotopik Sol Akciğer Nakli

Öğrenin, otolog kan pıhtıları kullanarak sıçanlarda minimal invaziv pulmoner emboli modeli oluşturmayı. Bu yöntem, akciğer infarkt alanlarını nicelendirmek ve pulmoner arter ağacını görselleştirmek için kullanılır.

Otolog Kan Pıhtıları Kullanılarak Pulmoner Embolide Minimal İnvaziv Bir Sıçan Modelinin Oluşturulması

Daha fazla video keşfet