Retrobulbar Sinüs Enjeksiyonu ile Doğum Sonrası, Juvenil ve Runted Yetişkin Fareler için Sistemik Tedavi

Araştırmamız, özellikle organik asidemiler olarak bilinen bir grup metabolik bozukluğa odaklanarak, nadir görülen genetik bozukluklar için gen terapilerinin geliştirilmesini içermektedir. Araştırmamızın amacı, insan klinik araştırmalarına ilerlemek için hangi yaklaşımların en uygun olabileceğini belirlemektir. Çoklu gen terapileri, on yıl önce durum böyle olmayan çeşitli genetik hastalıkları tedavi etmek için onaylanmıştır.

Aslında, organik asidemi için çeşitli gen tedavisi klinik çalışmaları tamamlanmış, devam eden veya planlanmaktadır. Fareler yetişkin boyutuna ulaşamayabileceğinden, ciddi genetik hastalıkların aynalama modellerine sistemik teslimat zor olabilir. Bu retrobulbar enjeksiyon protokolü, ciddi fenotiplere sahip aynalama modellerinde gen terapilerinin test edilmesine izin verecek ve umarım hastalar için yeni tedavilerin geliştirilmesini sağlayacaktır.

Başlamak için, AAV'yi her enjeksiyon için steril 1.5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpünde steril PBS ile istenen enjeksiyon hacmine ve konsantrasyonuna seyreltin. Tek kullanımlık steril şırıngayı doldurmadan önce, pistona düzgün bir şekilde basılabilmesini sağlamak için pistonu birkaç kez yukarı ve aşağı hareket ettirin. Ardından, hava kabarcığı olmadığından emin olmak için şırıngayı istenen hacme kadar doldurun.

Sağ elini kullanıyorsanız, sağ gözü enjekte etmek için anestezi uygulanmış fareyi burnu sağ ele bakacak şekilde sol tarafına yerleştirin. Daha sonra enjekte edilecek göz küresine bir veya iki damla oftalmik anestezik uygulayın. Steril emici bir gazlı bez kullanarak, fazla oftalmik anestezik solüsyonu çıkarın.

Farenin göz küresini yuvadan kısmen çıkarmak için parmak uçlarınızla cilde, sırta ve ventrale göze hafif bir baskı uygulayın. Şimdi, iğne eğimini 30 derecelik bir açıyla medial kantusa yerleştirin. Enjeksiyonu iletmek için şırınga pistonuna yavaş ve yumuşak bir şekilde basınç uygulayın.

Son olarak, anesteziden kurtulmaya izin vermek için yüz maskesini fareden çıkarın. Hepatositlerde metilmalonil koenzim CoA mutaz RNA'sının ekspresyonu gözlendi, bu da başarılı retrobulbar enjeksiyonunu gösterdi.