Name: Solunan Çevresel Kirleticilerin Farelerde Koku Alma Fonksiyonu Üzerindeki Etkilerinin İncelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-13T13:40:00.000+00:00
Duration: 4 min
Description: Keşfedin farelerde koku alma fonksiyonunu değerlendirmek için gömülü yiyecek testi ve sosyal koku ayırt etme deneyi kullanarak solunan çevresel kirleticilerin etkilerini. Bu yöntemler toksisite araştırmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82204088, 82273669) ve Çin'in Shandong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (ZR2021QH209) tarafından finansal olarak desteklenmiştir.

Tüm davranış testleri için erkek C57BL / 6J fareler (yaş: 6-8 hafta; ağırlık: 20-22 g) kullandık. Fareler sabit koşullara maruz bırakıldı (yani sıcaklık, 23 ± 1 °C; nem, %55 ± %5 ve ışıklar 7:00'de açıkken 12/12 saat aydınlık-karanlık döngüsü). Tüm davranış testleri 10:00-17:00 saatleri arasında yapıldı. Tüm hayvan deneyleri, Qingdao Üniversitesi Hayvan Deneyleri Profesyonel Komitesi Etik Kurulu tarafından onaylandı. 1 haftalık bir alışma döneminden sonra, tüm fareler solunabilir çevresel kirleticilere maruz bırakıldı.
1. Kirleticilere maruz kalma
<ol><li>Damlatma ile intranazal uygulama<ol><li>Solunabilir çevresel kirleticileri %0,9'luk bir tuzlu su çözeltisinde çözün. Koku alma fonksiyon bozukluğuna neden olduğu gösterilmiş olan %5'lik çinko sülfat solüsyonunu bir kez kullanın17. Kontrol fareleri için,% 0.9 normal tuzlu su çözeltisi uygulayın.</li>
		<li>% 1 sodyum pentobarbital18'in intraperitoneal enjeksiyonu ile fareyi uyuşturun ve ayak parmağını sıkıştırma refleksini kullanarak anestezi derinliğini değerlendirin. Kuruluğu önlemek için farenin gözlerine veteriner merhemi sürün. Fareyi, başı aşağı bakacak şekilde eğimli bir yüzeye sırt üstü yatırın.</li>
		<li>Bir pipetleme tabancası kullanarak, farenin bir burun deliğine 10 μL solüsyon uygulayın ve solüsyonun burun boşluğuna doğal olarak solunmasına izin verin.</li>
		<li>Farenin sağlığını sağlamak ve herhangi bir olası rahatsızlığı önlemek için, 10 dakikalık bir aradan sonra diğer burun deliği için solumayı tekrarlayın.</li>
		<li>Farelerde damlatma yoluyla intranazal uygulamadan 3 gün sonra, gömülü gıda testini yapın.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Gömülü gıda testi
<ol><li>Testten 18-24 saat önce, tüm yem peletlerini ev kafesinin yiyecek hunisinden çıkararak yiyecek yoksunluğunu gerçekleştirin. Fareler için yatak malzemelerini değiştirin. Su şişesini çıkarmayın.</li>
	<li>Ameliyat masasını aşağıda açıklandığı gibi düzenleyin.<ol><li>Testin başlamasından 1 saat önce, fareleri içeren kafesi dinlenmek için ameliyathaneye götürün.</li>
		<li>Bu süre zarfında ameliyathaneyi düzenleyin. Şeffaf PVC standart fare kafeslerini kullanın ve A olarak işaretleyin, çünkü bunlar tanıdık bir ortam oluşturur. Test kafesini şeffaf bir PVC standart sincap kafesi olan B olarak kullanın ve işaretleyin. Deneyden sonra fareleri yerleştirmek için kullanılan ortak kafesi kafes C olarak işaretleyin.</li>
		<li>A ve B kafeslerini 3 cm yatak malzemesi ile örtün ve bir cetvel ile ölçün. Kafesleri, aralarında 0.5 m mesafe olacak şekilde yan yana yerleştirin (Şekil 1).</li>
		<li>Deney alanını, merkezi kafeslerin merkezi olacak şekilde 2 m yarıçaplı bir alan olarak tanımlayın. 2 m aralığının dışındaki alanı gözlem alanı olarak tanımlayın.</li>
		<li>C kafesini ve denenmemiş fareleri içeren kafesleri deney alanından mümkün olduğunca uzak tutun.</li>
	</ol></li>
	<li>Yiyecek bulma süresini aşağıda açıklandığı gibi kaydedin.<ol><li>B kafesinde rastgele bir konum seçin, yiyeceği yatak örtüsünün yüzeyinin 1 cm altına gömün ve yatak takımının yüzeyini düzleştirin.</li>
		<li>Fareyi 4 dakika boyunca A kafesine koyun. Zamanlamanın sonunda fareleri kafes B'ye aktarın, video cihazını açın ve gözlem alanına geri dönün.</li>
		<li>Fare ön pençesiyle yiyecek bloğunu aldığında video kaydını durdurun. Bazı durumlarda, farelerin başları yiyeceğin üzerine eğilmiş halde yemek yedikleri görülebilir. Bu davranış aynı zamanda, fare yiyeceği ön pençesiyle tutmasa bile deneme başarısını gösterir.</li>
		<li>Verileri kaydedin. B kafesinin altındaki matla temastan her fare için yiyecek bulunana kadar geçen süreyi kaydedin. Fareler 4 dakika sonra yiyecek bulamazlarsa, bulma süresini 240 s'lik bir gecikme süresi olarak kaydedin.</li>
		<li>Testten sonra fareyi C kafesine koyun.</li>
		<li>Yemi B kafesinden çıkarın ve kapalı bir torbaya koyun. Kafes B'deki yiyeceği değiştirin ve yatak malzemesini değiştirdikten sonra aşağıda açıklandığı gibi bir sonraki fareyi test edin.<ol><li>Aynı kafeste barındırılan fareler için, kafes B'de aynı yatak malzemeleri seti ile test edin. Farklı kafeslerdeki fareler için kafesi alkolle temizleyin ve yatak malzemelerini değiştirin.</li>
		</ol></li>
		<li>Deneyden sonra farelere yem ve su ekleyin. Sosyal koku ayırt etme deneyini 1 gün sonra gerçekleştirin. NOT: İşlem boyunca maskelerin takılması gerekir ve koku geçişini mümkün olduğunca önlemek için her fare deneyi bitirdikten sonra şeffaf eldivenlerin değiştirilmesi gerekir. Fare stresini önlemek için hareketlerin genliğini mümkün olduğunca küçük tutun.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Sosyal koku ayrımcılığı deneyi
<ol><li>İdrar toplama<ol><li>Eşeyli olarak olgun erkek farelerin ve dişi farelerin idrarını ayrı ayrı toplayın ve eşit hacimlerde tüplere alikot yapın19. Her tüpte 300 μL idrar bulunan 2 mL mikrosantrifüj tüplerine koyun.</li>
		<li>Numuneleri kullanana kadar -80 ° C'de saklayın. Çözüldükten sonra numuneyi eşit şekilde dağıtmak için tüpleri sallayın. Numuneyi tekrar tekrar çözdürmeyin ve dondurmayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Ameliyat masasını aşağıda açıklandığı gibi düzenleyin.<ol><li>Testin başlamasından 1 saat önce, fareleri içeren kafesi dinlenmek için ameliyathaneye götürün.</li>
		<li>Bu süre zarfında ameliyathaneyi adım 2.2.2-2.2.5'te açıklandığı gibi düzenleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>İdrar bulma süresini aşağıda açıklandığı gibi kaydedin.<ol><li>300 μL erkek ve dişi idrar içeren mikrosantrifüj tüpünü tutacak kadar büyük, kafes B'nin iki geniş tarafının her birinin etrafına bantla bir oluk açın. Tüpleri yerleştirin ve iki tüp kapağını şimdilik kapalı tutun.</li>
		<li>Fareyi A kafesine koyun ve 4 dakika boyunca bir geri sayım ayarlayın. Zamanlamanın sonunda B kafesinin iki tüpünü açın.</li>
		<li>Fareyi iki tüpten aynı mesafede bulunan B kafesinin orta konumuna aktarın, ardından video kayıt ekipmanını açın ve nazikçe ve yavaşça gözlem alanına geri çekilin.</li>
		<li>Fare tüp duvarını/ağzını veya hatta tüpün içini kokladığında, tüp başarılı bir şekilde koklanır. Bu sırada, kronometreye basın ve zamanı tüpü koklama zamanı (M s) olarak kaydedin, ardından fare tüpten uzaklaşana kadar kalma süresini (X s) kaydetmeye devam edin.</li>
		<li>Diğer tüpü koklayarak zamanı zamanlamaya devam edin. Fare tüp duvarını/ağzını veya hatta tüpün içini kokladığında, tüp başarılı bir şekilde koklanır. Kronometreye basın ve diğer tüpün kokusunu almak için geçen süreyi (N s) kaydedin, ardından fare tüpten uzaklaşana kadar kalma süresini (Y s) kaydetmeye devam edin.</li>
		<li>Deneyin sonunda fareyi C kafesine aktarın.</li>
		<li>Her fare testinden sonra idrar tüplerini ve kafes B'nin yatak malzemesini değiştirin. Kullanılmış sıçan idrarını cinsiyete göre temiz bir torbaya koyun.</li>
		<li>Eldivenleri değiştirin ve bir sonraki fareyi yukarıda açıklandığı gibi test edin.</li>
	</ol></li>
	<li>Deneyi belirgin bir koku olmadan bir laboratuvarda gerçekleştirin. Güçlü kokular yayan kişisel ürünlerden kaçının. Koku geçişini mümkün olduğunca önlemek için prosedür boyunca eldiven ve maske takın. Fare stresini önlemek için hareketlerin genliğini mümkün olduğunca küçük tutun.</li>
</ol>

Solunan Çevresel Kirleticilere Bağlı Farelerde Koku Alma Bozukluğunun Değerlendirilmesi

<ol><li>Schäfer, L., Schriever, V. A., Croy, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+olfactory+dysfunction%3A+causes+and+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Human olfactory dysfunction: causes and consequences.</a> Cell Tissue Res. 383 (1), 569-579 (2021).</li>
<li>Keller, A., Malaspina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hidden+consequences+of+olfactory+dysfunction%3A+a+patient+report+series%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ear+Nose+Throat+Disord%22%5BJournal%5D)">Hidden consequences of olfactory dysfunction: a patient report series.</a> BMC Ear Nose Throat Disord. 13 (1), 8(2013).</li>
<li>Schroeter, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+physiological+computational+fluid+dynamics+models+to+predict+interspecies+nasal+dosimetry+of+inhaled+acrolein%5BTitle%5D)+AND+%22Inhal+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Application of physiological computational fluid dynamics models to predict interspecies nasal dosimetry of inhaled acrolein.</a> Inhal Toxicol. 20 (3), 227-243 (2008).</li>
<li>Schroeter, J. D., Garcia, G. J., Kimbell, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+computational+fluid+dynamics+approach+to+assess+interhuman+variability+in+hydrogen+sulfide+nasal+dosimetry%5BTitle%5D)+AND+%22Inhal+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A computational fluid dynamics approach to assess interhuman variability in hydrogen sulfide nasal dosimetry.</a> Inhal Toxicol. 22 (4), 277-286 (2010).</li>
<li>Keyhani, K., Scherer, P. W., Mozell, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Numerical+simulation+of+airflow+in+the+human+nasal+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech+Eng%22%5BJournal%5D)">Numerical simulation of airflow in the human nasal cavity.</a> J Biomech Eng. 117 (4), 429-441 (1995).</li>
<li>Hahn, I., Scherer, P. W., Mozell, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Velocity+profiles+measured+for+airflow+through+a+large-scale+model+of+the+human+nasal+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Velocity profiles measured for airflow through a large-scale model of the human nasal cavity.</a> J Appl Physiol. 75 (5), 2273-2287 (1993).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+particulate+matter+air+pollution+and+Anosmia%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Netw+Open%22%5BJournal%5D)">Exposure to particulate matter air pollution and Anosmia.</a> JAMA Netw Open. 4 (5), e2111606(2021).</li>
<li>Ekström, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+air+pollution+and+olfactory+decline+in+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Environmental air pollution and olfactory decline in aging.</a> Environ Health Perspect. 130 (2), 27005(2022).</li>
<li>Adams, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrogen+dioxide+pollution+exposure+is+associated+with+olfactory+dysfunction+in+older+U.S.+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Forum+Allergy+Rhinol%22%5BJournal%5D)">Nitrogen dioxide pollution exposure is associated with olfactory dysfunction in older U.S. adults.</a> Int Forum Allergy Rhinol. 6 (12), 1245-1252 (2016).</li>
<li>Prah, J. D., Benignus, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decrements+in+olfactory+sensitivity+due+to+ozone+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Percept+Mot+Skills%22%5BJournal%5D)">Decrements in olfactory sensitivity due to ozone exposure.</a> Percept Mot Skills. 48 (1), 317-318 (1979).</li>
<li>Shi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+exposure+to+environmental+pollutant+ammonia+causes+damage+to+the+olfactory+system+and+behavioral+abnormalities+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Chronic exposure to environmental pollutant ammonia causes damage to the olfactory system and behavioral abnormalities in mice.</a> Environ Sci Technol. 57 (41), 15412-15421 (2023).</li>
<li>Hernández-Soto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+intermittent+hypoxia+alters+main+olfactory+bulb+activity+and+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic intermittent hypoxia alters main olfactory bulb activity and olfaction.</a> Exp Neurol. 340, 113653(2021).</li>
<li>Islam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+preference+and+olfactory+memory+are+impaired+in+Olfaxin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Odor preference and olfactory memory are impaired in Olfaxin-deficient mice.</a> Brain Res. 1688, 81-90 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+and+conditional+activation+of+ERK5+MAP+kinase+rescues+mice+from+cadmium-induced+olfactory+memory+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Inducible and conditional activation of ERK5 MAP kinase rescues mice from cadmium-induced olfactory memory deficits.</a> Neurotoxicology. 81, 127-136 (2020).</li>
<li>Chamero, P., Leinders-Zufall, T., Zufall, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+genes+to+social+communication%3A+molecular+sensing+by+the+vomeronasal+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">From genes to social communication: molecular sensing by the vomeronasal organ.</a> Trends Neurosci. 35 (10), 597-606 (2012).</li>
<li>Mohrhardt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+detection+and+coding+in+the+accessory+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Signal detection and coding in the accessory olfactory system.</a> Chem Senses. 43 (9), 667-695 (2018).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+3+adenylyl+cyclase+in+the+MOE+is+involved+in+learning+and+memory+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Type 3 adenylyl cyclase in the MOE is involved in learning and memory in mice.</a> Behav Brain Res. 383, 112533(2020).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyhexamethylene+guanidine+aerosol+triggers+pulmonary+fibrosis+concomitant+with+elevated+surface+tension+via+inhibiting+pulmonary+surfactant%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Polyhexamethylene guanidine aerosol triggers pulmonary fibrosis concomitant with elevated surface tension via inhibiting pulmonary surfactant.</a> J Hazard Mater. 420, 126642(2021).</li>
<li>Yang, M., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+behavioral+assessment+of+mouse+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Simple behavioral assessment of mouse olfaction.</a> Curr Protoc Neurosci. , Chapter 8, Unit 8.24 (2009).</li>
<li>Huang, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+oxide+nanoparticles+induce+eosinophilic+airway+inflammation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Zinc oxide nanoparticles induce eosinophilic airway inflammation in mice.</a> J Hazard Mater. 297, 304-312 (2015).</li>
<li>Burd, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+the+effects+of+intranasal+zinc+sulfate+irrigation+on+the+mouse+olfactory+epithelium+and+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Morphological study of the effects of intranasal zinc sulfate irrigation on the mouse olfactory epithelium and olfactory bulb.</a> Microsc Res Tech. 24 (3), 195-213 (1993).</li>
<li>Zou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+measure+olfactory+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Methods to measure olfactory behavior in mice.</a> Curr Protoc Toxicol. 63, 1-21 (2015).</li>
<li>Ryalls, J. M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthropogenic+air+pollutants+reduce+insect-mediated+pollination+services%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Anthropogenic air pollutants reduce insect-mediated pollination services.</a> Environ Pollut. 297, 118847(2022).</li>
<li>Schiffman, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livestock+odors%3A+implications+for+human+health+and+well-being%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Livestock odors: implications for human health and well-being.</a> J Anim Sci. 76 (5), 1343-1355 (1998).</li>
<li>Albrechet-Souza, L., Gilpin, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+predator+odor+avoidance+model+of+post-traumatic+stress+disorder+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">The predator odor avoidance model of post-traumatic stress disorder in rats.</a> Behav Pharmacol. 30, 2 and 3-Spec Issue 105-114 (2019).</li>
<li>Davies, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+medial+prefrontal+cortex+or+acute+stress+impairs+odor+span+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Inactivation of medial prefrontal cortex or acute stress impairs odor span in rats.</a> Learn Mem. 20 (12), 665-669 (2013).</li>
<li>Landers, M. S., Sullivan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+and+neurobiology+of+infant+attachment+and+fear%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The development and neurobiology of infant attachment and fear.</a> Dev Neurosci. 34 (2-3), 101-114 (2012).</li>
<li>Drobyshevsky, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antenatal+insults+modify+newborn+olfactory+function+by+nitric+oxide+produced+from+neuronal+nitric+oxide+synthase%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Antenatal insults modify newborn olfactory function by nitric oxide produced from neuronal nitric oxide synthase.</a> Exp Neurol. 237 (2), 427-434 (2012).</li>
<li>Arbuckle, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+for+odor+discrimination+and+habituation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Testing for odor discrimination and habituation in mice.</a> J Vis Exp. (99), e52615(2015).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Bu makale, farelerde koku alma bozukluğunun hızlı bir şekilde değerlendirilmesi için tasarlanmış iki temel protokolü tanıtmaktadır. Çeşitli solunabilir çevresel kirleticiler, farelerde farklı seviyelerde koku alma işlev bozukluğuna neden olur. Gömülü gıda testi, uçucu kokuları tespit etme yeteneğini değerlendirmek için kullanılırken, sosyal koku ayırt etme deneyi, hayvanın çeşitli sosyal kokuları ayırt etme ve ayırt etme kapasitesini değerlendirir. Buradaki protokol, çevresel kirleticilerin koku alma fonksiyonu üzerindeki toksik etkilerini değerlendirmeye hizmet eder.
Ozon, amonyak ve dizel egzozu dahil olmak üzere solunan çevresel kirleticiler, numune koklama sırasında farelerin koku alma algısını etkileyebilecek kokulara sahiptir23,24. Maruziyetin sona ermesinden hemen sonra farelerde davranışsal deneyler yapmanın potansiyel olarak yanlış negatif sonuçlar verebileceğini not etmek çok önemlidir22. Bu endişeyi gidermek için, deneysel güvenilirliği artırmaya yönelik önlemler aldık. Spesifik olarak, kafesler iyice temizlendi ve maruz kalma süresinin ardından yatak malzemeleri değiştirildi. Daha sonra, maruziyetten24 saat sonra 22 ile davranışsal deneyler yapıldı. Bu prosedür düzenlemesi, doğru ve anlamlı sonuçlar elde etmeyi amaçlamaktadır.
Yiyecek gömme deneyinde, önemli bir parametre, farelerin gizli yiyecekleri bulmak için harcadıkları zamandı. Stresli farelerin test sırasında yüksek aktivite ve daha az odaklanma sergileme eğiliminde olduğunu ve bunun da potansiyel olarak yanlış pozitif sonuçlara yol açabileceğini belirtmekte fayda var 25,26,27,28. Bu nedenle, test aşamasında farelerin sakin kalmasını ve aşırı strese maruz kalmamasını sağlamak zorunludur. Herhangi bir potansiyel paraziti önlemek için, fareler deneyden 1 saat önce yuvalarından test alanına transfer edildi. Bu adım, farelerin alışmasını ve stresi azaltmasını sağlamak için atıldı. Doğru zaman kaydını kolaylaştırmak için, fareler deney kafesi B'ye sokulduğunda video kaydedici etkinleştirildi ve ardından gözlemciler hemen gözlem alanına çekildi. Gözlemciler, kafesten en uygun 2 m mesafeye yerleştirildi ve rahatsızlığa neden olmadan net bir gözlem sağlandı. Başarılı yiyecek keşfini belirleme kriterleri, farelerin ön ayaklarını kullandıkları veya başlarını yiyeceğin üzerine eğdikleri durumları içeriyordu. Her iki davranış da yaygın olarak kabul edilen standartlarla uyumlu olarak yiyecek bulmanın göstergesi olarak kabul edildi19. Aynı doz grubundaki birden fazla farenin teste ihtiyaç duyduğu durumlarda, orijinal yetiştirme kafeslerine geri gönderilmemeleri, ancak geçici olarak normal bir kafes C'ye yerleştirilmeleri sağlandı. Ancak tüm fareler aynı kafeste test edildikten sonra toplu olarak orijinal yuvalarına geri döndüler. Test edilen gıdaların potansiyel kokusu göz önüne alındığında, bunları önceden hava geçirmez torbalarda saklamak ve kullanımdan sonra yeniden kapatmak veya hava geçirmez kaplara koymak için önlemler alınmıştır. Bu önlemler, deney koşullarının bütünlüğünü korumak ve güvenilir sonuçlar elde etmek için uygulanmıştır.
Sosyal koku ayırt etme deneylerinde, cinsel olarak olgun farelerden elde edilen idrar örneklerinin kullanılması esastır19. Cinsel olgunluğun belirlenmesi, farklı fare suşları arasında değişen bir parametre olan farelerin yaşına dayanır. Toplandıktan sonra, erkek ve dişi idrarının ayrı ayrı -80 °C'de buzdolabında saklanması önerilir. Önceki çalışmalarda zamanlama amacıyla kronometreler kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu yöntemin, gözlemcilerin deney kafesinden önemli bir mesafede yer alması gibi sınırlamaları vardı ve bu da belirsiz gözlemler ve yanlış zamanlama gibi potansiyel sorunlara yol açtı 19,22,29. Bu zorlukların üstesinden gelmek için, kronometreler yerine video ekipmanı ekleyerek zamanlama prosedürlerini geliştirdik. Bu değişiklik, yalnızca daha kesin verilerin elde edilmesini kolaylaştırmakla kalmaz, aynı zamanda birden fazla deney grubundan veri toplanmasını da sağlar.
Bu deneylerde, farelerin davranışlarını kaydetmek için video cihazı kullanıldı, bu da videonun kare hızını düşürme ve gözlemcilerin farelerin çeşitli davranış aktivitelerinin zamanını daha doğru bir şekilde kaydetmelerini sağlama avantajına sahipti, bu da gözlemcilerin gözlem alanındaki farelerin davranışlarını gözlemleyememesi eksikliğini giderdi. Ancak video kayıt ekipmanı kullanmanın dezavantajı analiz süresinin artacak olmasıdır. Deneyin sonunda, her farenin çeşitli davranışsal aktivitelerinin zamanını kaydetmek için videoyu tekrar izlememiz gerekiyordu. Fare sayısı fazla olduğunda, her farenin videosunu analiz etmek gerekir, bu da laboratuvarın iş yükünü artıracaktır.
Araştırma bulguları, solunabilen çeşitli çevresel kirleticilerin koku alma fonksiyonunu olumsuz yönde etkileyebileceğini göstermektedir. Bu makale, solunabilir çevresel kirleticilerle ilişkili koku alma toksisitesini değerlendirmek için hızlı, karmaşık olmayan ve makul derecede kesin bir yaklaşım sunmaktadır. Bu yöntem, insan deneklerde çevresel kirleticilere atfedilen koku alma bozukluğu için risk değerlendirmelerinin yapılmasında çok önemlidir.

Koku alma bozukluğu kayda değer bir halk sağlığı sorunu olarak ortaya çıkmıştır ve bağımsız olarak nörodejeneratif hastalık riskinin artmasıyla ilişkilidir. Bu durum genel refahı olumsuz yönde etkileyebilir, depresif belirtilerin gelişmesine katkıda bulunabilir ve yaşam kalitesinin düşmesine neden olabilir. Etkisi, değişen gıda algısı, sosyal iletişimdeki engeller ve artan olumsuz duygularda belirgin bir şekilde gözlenmektedir1. Sinonazal hastalık, üst solunum yolu enfeksiyonu ve travmatik beyin hasarı dahil olmak üzere çeşitli faktörlerin insanlarda koku alma bozukluğuna katkıda bulunduğu düşünülmektedir2. Özellikle, %2 ila %16 arasında değiştiği tahmin edilen PM2.5 gibi solunabilir çevresel kirleticiler, vücuda solunan hava yoluyla girer, burun boşluğunu geçer ve biriktikleri koku almaya adanmış belirli bölgelere ulaşır 3,4,5,6,7. Son bulgular, PM2.5 ve amonyak dahil olmak üzere solunabilir çevresel kirleticilerin koku alma duyu nöronlarına gerçekten zarar verebileceğini göstermektedir 8,9,10. Bununla birlikte, bu tür bir hasarın doğrudan koku alma işlev bozukluğuna yol açıp açmadığını belirlemek için daha fazla doğrulama gereklidir. Bu nedenle, solunabilir çevresel kirleticilerin koku alma fonksiyonu üzerindeki etkilerinin titiz bir şekilde değerlendirilmesi özellikle önemlidir.
Şu anda, çok sayıda araştırma laboratuvarı, koku alma işlevindeki değişiklikleri anlamayı amaçlayan davranışsal deneyler için alternatif bir omurgalı modeli olarak fareleri kullanmaktadır 11,12,13,14. Fareler, omurgalıların kimyasal iletişimini araştırmak için tercih edilen model sistem olarak seçildi ve yiyecek arama ve sosyal iletişim için çok önemli olan dikkate değer bir koku alma hassasiyeti sergiliyor15. Ayrıca, fare davranışını gözlemlemek ve etkilemek için sürekli gelişen araçlar dizisi, bu türü koku alma işlevi üzerine yapılan araştırmalar için son derece çekici hale getirmiştir16.
Bu çalışmada, solunabilir çevresel kirleticilere maruz kalan bir fare modelinde koku alma bozukluğunu değerlendirmek için gömülü gıda testi ve sosyal koku ayırt etme deneyi kullanıldı. Değerlendirmenin hassasiyetini artırmak için, koku alma işlevini değerlendirmek için en temsili yöntemi seçtik. Basitlik ve netlik sağlamak için bu yöntemi sistematik olarak geliştirdik ve solunabilir çevresel kirleticilerin neden olduğu koku alma bozukluğunun derecesini etkili bir şekilde ölçmemize olanak tanıdık.

<table><tbody><tr><td>0.5-10 &amp; mu; L  ayarlanabilir mikropipet</td><td>Eppendorf, Almanya</td><td>3123000225</td><td>İntranazal damlatma</td></tr><tr><td>% 0.9 tuzlu su çözeltisi</td><td>Solarbio</td><td>7647-14-5</td><td>Kirleticileri çözün</td></tr><tr><td>Susuz çinko sülfat</td><td>Macklin</td><td>7733-02-0</td><td>Fareleri açığa çıkarın</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpü (2 mL)</td><td>Biosharp Incorporated</td><td>BS-20-M</td><td>İdrar yerleştirin</td></tr><tr><td>Elektronik denge Changzhou</td><td>Ohaus Co. </td><td>EX125DZH</td><td>Ağırlık anestezikleri ve kirleticiler</td></tr><tr><td>GraphPad Prizma</td><td>GraphPad Yazılımı</td><td>8.0.1</td><td>istatistik analizi</td></tr><tr><td>El Tipi Toz dedektörü</td><td>TSI  Birleştirilmiş</td><td>DuatTrak <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/66818/66818eq01.jpg" style="margin: auto; ">8532</td><td>Solumaya maruz kalan fareler</td></tr><tr><td>Video kayıt ekipmanı</td><td>Apple Inc.</td><td>iPhone 6s Plus</td><td>Farelerin aktivite süresi kaydedildi</td></tr><tr>,<td>Vorteks karıştırıcı</td><td>Haimen Kylin-Bell Lab Instruments Co.</td><td>Girdap-5 </td><td>Karışım çözeltisi</td></tr></tbody></table>

solunan Çevresel kirleticilerin farelerde koku alma fonksiyonu Üzerindeki etkilerinin İncelenmesi

Studying the Effects of Inhaled Environmental Pollutants on Olfactory Function in Mice

Koku alma bozukluğu önemli bir halk sağlığı sorunudur ve nörodejeneratif hastalık riskini bağımsız olarak öngörür. Solunan çevresel kirleticilere maruz kalma koku almayı bozabilir; Bu nedenle, solunan çevresel kirleticilere maruz kalmanın koku alma üzerindeki etkilerini değerlendirmek için yöntemlere acil bir ihtiyaç vardır. Fareler, oldukça gelişmiş koku alma sistemleri ve davranışsal özellikleri nedeniyle koku alma deneyleri için ideal modellerdir. Farelerde solunan çevresel kirleticilere maruz kalmanın koku alma fonksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için, deney hazırlama, deney tesislerinin seçimi ve inşası, test süreci ve zaman indeksleri dahil olmak üzere ayrıntılı bir gömülü gıda testi ve sosyal koku ayrımcılığı deneyi sağlanır. Bu arada, testin başarısını sağlamak için zaman tutma ekipmanı, operasyonel detaylar ve deney ortamı tartışılmaktadır. Deneysel yaklaşımın fizibilitesini göstermek için tedavi olarak çinko sülfat kullanılır. Protokol, solunan çevresel kirleticilerin farelerde koku alma fonksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için basit ve net bir operasyonel süreç sağlar.

Solunabilir çevresel kirleticiler farelerde koku alma fonksiyonunu bozar. Yakma fırınlarından ve motorlu taşıtlardan yayılan atmosferik çinkonun alerjik akciğer iltihabına neden olabilecek solunan bir kirletici olduğu gösterilmiştir20. Çinko sülfat, koku alma bozukluğuna neden olan tipik bileşiklerden biri olarak kabul edilir21. Bu nedenle, gömülü gıda testi ve sosyal koku ayrımcılığı deneyi kullanarak intranazal damlatma ve test yoluyla fareleri maruz bırakmak için tedavi olarak çinko sülfat kullanıyoruz. Yiyecek gömme testinde, çinko sülfata maruz kalan farelerin yiyeceği bulması kontrol grubuna kıyasla 240 saniyeden daha uzun sürdü (Şekil 2). Normal koku alma özelliğine sahip gıdadan yoksun fareler tipik olarak gömülü yiyeceği 1 dakika içinde bulur. Fareler koku alma bozukluğu geliştirdiğinde, yiyecek bulmak daha uzun sürdü ve hatta yiyecek bulamadı. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, maruz kalan gruptaki farelerin yiyecek bulması daha uzun sürdü, bazı durumlarda 240 saniye içinde yiyecek bulamadılar, bu da koku alma fonksiyonu hasarını gösterdi.
Sosyal koku ayrımcılığı deneyinde de benzer sonuçlar gözlenmiştir. Çinko sülfata maruz kalan farelerde, ayarlanan gözlem süresi boyunca ne erkek ne de dişi idrar koklanamadı (Şekil 3A). Ayarlanan sürenin ötesinde, çinko sülfata maruz kalan fareler kısa bir süre dişi ve erkek idrarını kokladılar, ancak koklama süresi kontrol farelerininkinden önemli ölçüde daha azdı (Şekil 3B). Aynı anda eşit hacimde dişi ve erkek idrarı sunulduğunda, erkek fareler genellikle dişi idrarını tercih eder22. Maruz kalan gruptaki fareler, dişi ve erkek idrarını ayırt etmek için daha uzun bir zamana ihtiyaç duydu veya aralarında ayrım bile yapamadı. Spesifik olarak, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, maruz kalan gruptaki fareler idrarı koklamak için daha uzun zaman harcadılar ve idrarın yakınında daha kısa bir süre geçirdiler.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66818/66818fig01.jpg"> Şekil 1: Operasyon masası düzeni. A ve B kafesleri 0,5 m mesafede tutulmuştur. Video kayıt ekipmanı, cep telefonu tutucusu tarafından kafes B'nin üzerinde kontrol edildi ve video alanı, kafesin iç ortamını kaydedecek şekilde ayarlandı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66818/66818fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66818/66818fig02.jpg"> Şekil 2: Gömülü gıda test sonuçları. Yiyecek aramak için çinko sülfata maruz kalan kontrol fareleri ve farelerin istatistiksel analizi. Kontrol grubundaki fareler 30 saniye içinde yiyecek buldu ve çinko sülfata maruz kalan fareler 240 saniyeden fazla yiyecek buldu, bu da 240 saniye olarak hesaplandı. İki grup arasındaki farklılıkları karşılaştırmak için bağımsız örneklem t-testi kullanıldı. Veriler ortalama ± SD olarak sunulur (grup başına n = 3 fare); ** P &lt; 0.01. Herhangi bir hayvan 240 saniye sonra yiyeceği bulamazsa, tedavi edilen tüm hayvanlarda olduğu gibi yiyecek bulma süresi 240 saniye olarak kaydedildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66818/66818fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66818/66818fig03.jpg"> Şekil 3: Sosyal koku ayrımcılığı deneyi. (A) Kontrol farelerinin ve idrar aramak için çinko sülfata maruz kalan farelerin istatistiksel analizi. Kontrol grubundaki fareler 30 saniye içinde idrar buldu ve çinko sülfata maruz kalan fareler, 240 saniye olarak sayılan dişi veya erkek idrarını aramak için 240 saniyeden fazla zaman harcadı. Herhangi bir hayvan 240 saniye sonra idrar şişesini bulamazsa, şişeyi bulma süresi, tedavi edilen tüm hayvanlarda olduğu gibi 240 s olarak kaydedildi. (B) İdrarla temas halinde kalma süresi, kontrol fareleri ve çinko sülfata maruz kalan fareler için istatistiksel olarak analiz edildi. İki grup arasındaki farklılıkları karşılaştırmak için bağımsız örneklem t-testi kullanıldı. Veriler ortalama ± SD (grup başına n = 3 fare) olarak sunulur; ** p &lt; 0.01, * p &lt; 0.5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66818/66818fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bu makale, farelerde solunan çevresel kirleticilere maruz kalmanın koku alma fonksiyonu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için gömülü gıda testinin ve sosyal koku ayrımcılığı deneyinin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır.

Solunan Çevresel Kirleticilerin Farelerde Koku Alma Fonksiyonu Üzerindeki Etkilerinin İncelenmesi

Olfactory impairment is a significant public health problem and independently predicts the risk of neurodegenerative diseases. Inhaled environmental ...

studying-effects-inhaled-environmental-pollutants-on-olfactory

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Kemirgen koku alma sisteminin temel karşın benzersiz özellikleri biyologlar arasında artan çalışmaya yol açmıştır. Işlevi nispeten basit bir değerlendirme daha sonra da ihtiyaç vardır. Burada fare koku alma hassasiyeti ve tercih karakterizasyonu için hassas testler açıklar.

Yetişkin Fare Olfaktör Davranış Testi

SCIREQ Inc, Montreal, Qc; İşbu Protokol solunum sistemi mekaniği ölçümleri yanı sıra zorla salınım tekniği kullanarak farelerde inhale metakoline hava yolu duyarlılığı değerlendirilmesi (flexiVent yürütmek için gerekli prosedürleri ayrıntılı bir adım adım açıklamasını sağlar , Kanada).

Zorla Salınım Tekniği kullanarak Fare Solunum Sistemi Mekanik Değerlendirilmesi

Koku alma fonksiyonundaki bozulma, Parkinson, Alzheimer ve Huntington hastalıkları dahil olmak üzere birçok nörodejeneratif bozuklukta ortak bir özelliktir. Bu makalede, nörodejeneratif hastalıkların fare modellerinde koku alma yeteneklerini ölçmek için kullanılabilecek farelerde koku alma ayrımını ve tespitini değerlendirmek için bir dizi test açıklanmaktadır.

Nörodejeneratif Hastalığının fare modelleri için koku alma Tahliller

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Bu el yazması, kemirgenlerin koku alma sistemini incelemek için bir protokolü açıklar. Koku alma alışkanlığı / alışma testi, araştırmacıların bir farenin tekrar tekrar sunulan bir kokuya alışıp alışmadığını ve farenin yeni bir koku sunulduğunda alışkanlık bozukluğu gösterip göstermediğini belirlemesine olanak tanır.

Fare Koku Ayrımcılık ve alışkanlık için test

Farelerde basit ve tarafsız bir koku alma testi sunuyoruz. Bu protokol ile koku ayrımı, tercih, kaçınma ve suya kıyasla yeni bir kokuya duyarlılık tek davranışsal seanslarda değerlendirilebilir. Bu yöntem tek bir deneyci için endikedir ve analiz bilgisayar destekli video işlemeye dayanmaktadır.

Basit ve Bilgisayar destekli Fareler için Koku Testi

Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Burada, fareler üzerinde koku ayrımcılık test etmek için bir ilişkisel öğrenme görev eğitim. Bu iletişim kuralı öğrenme kaynaklı beyin yapısal değişimler üzerine çalışmalar için de sağlar.

Koku öğrenme ve ayrımcılık farelerde bir objektif ve tekrarlanabilir testi

Çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde solunum işlevin sonucunu önerilen yordamları ayrıntılı bir açıklama sağlamak için mevcut makale hedefidir.

Solunum fonksiyon çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde değerlendirilmesi

Bu protokol, sigara dumanının (CS) patofizyolojik etkilerinin, şirket içinde inşa edilmiş bir tüm vücut soluma (WBI) maruz kalma sistemi (WBIS) ile incelenmesini göstermektedir. Bu sistem, akciğer amfizem ve hematopoez üzerindeki CS aracılı etkilerin araştırılması için kontrollü tekrarlanabilir koşullar altında hayvanları CS'ye maruz bırakabilir.

Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma

Keşfedin farelerde koku alma fonksiyonunu değerlendirmek için gömülü yiyecek testi ve sosyal koku ayırt etme deneyi kullanarak solunan çevresel kirleticilerin etkilerini. Bu yöntemler toksisite araştırmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

Solunan Çevresel Kirleticilerin Farelerde Koku Alma Fonksiyonu Üzerindeki Etkilerinin İncelenmesi

Daha fazla video keşfet