Name: Eksikliklerin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelemek için maternal diyet folik asit veya kolin seviyelerinin değiştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-28T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 19 s
Description: Keşfedin, anne farelerde folik asit veya kolin eksikliğinin yavru sağlığı üzerindeki uzun vadeli etkilerini. Bu yöntem, maternal beslenmenin nesiller boyu sağlık sonuçlarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu protokol onaylandı ve tüm hayvan denekler Midwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerine uygun olarak kullanıldı (Protokol 2983). Bu çalışmada 2 aylık (vücut ağırlığı, ~ 20 g) dişi C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Genel olarak, üreme çağındaki dişi fareler kullanılabilir10. Çöp etkilerinden kaçınılmasını sağlamak için, her diyet için birden fazla dişi kullanılması gerekir11. Çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Deney hazırlığı
<ol><li>Ticari kemirgen gıda üreticilerinden folik asit veya kolin eksikliği olan diyet alın. Eksik diyetlerde ihtiyaç duyulan folik asit veya kolin miktarı da dahil olmak üzere mikro ve makro besinlerin ayrıntılı listesi için Tablo 1'e bakın. NOT: Karşılık gelen bir kontrol diyetinin de sipariş edilmesi gerekir; detaylar Tablo 1'de listelenmiştir. Bu diyetler AIN93G'ye dayanıyordu ve kemirgenler için önerilen besinleriiçeriyordu 10.</li>
	<li>Üretici ile işbirliği içinde, diyetlerin renklendirilmesini belirleyin, çünkü bu, deneysel çalışmalar sırasında doğru diyetlerin dağıtımına yardımcı olabilir. Bu çalışmada folik asit eksikliği olan diyetler için yeşil, kolin için sarı ve kontrol diyeti için beyaz kullanılmıştır. Hepsi kolayca ayırt edilebilir. NOT: Su tüketimi ile ilgili herhangi bir kısıtlama yoktur. Su herhangi bir folik asit, kolin veya diğer 1C metabolitleri içermez.</li>
</ol>2. Folik asit veya kolin diyet eksikliğinin indüklenmesi
<ol><li>Dişileri diyetlere koymadan önce, tüm hayvanları tartın. Bu, temel ağırlık olarak adlandırılır.</li>
	<li>Bireysel laboratuvar kafesi kurulumuna bağlı olarak (havalandırmalı veya havalandırmasız, Malzeme Tablosuna bakınız), her kafes için özel diyet peletlerini haftada birkaç kez değiştirin veya doldurun. Kafes maması çemberlerini özel diyetlerle aşırı doldurmayın, çünkü bu, hayvanlardan gelen tükürüklerle etkileşime girdiklerinde peletlerin bozulmasına ve zamanla bozulmasına neden olabilir. NOT: Diyet stoğunun üretici yönergelerine göre saklandığından ve son kullanma tarihinden önce kullanıldığından emin olun.</li>
	<li>Dişi fareleri çiftleşmeden önce 4-6 hafta boyunca diyetlerde tutun.</li>
	<li>Erkek fareleri çiftleşmek için dişi kafeslere sokun. Dişiler en az 4-6 hafta boyunca özel diyetler uyguladıktan sonra erkeklerin dişi kafeslere sokulduğundan emin olun. Bir erkeği bir ila birkaç gün boyunca bir dişi kafese sokun. NOT: Bu çalışmada, farelerde çiftleşme doğumdan sonra gerçekleşebileceğinden, üretilen yavru sayısını artırmak için erkekler deneyin tüm süresi boyunca (~ 4 ay) dişilerle birlikte tutulmuştur12. 6 aylıktan sonra dişiler herhangi bir çalışma için kullanılmadı.</li>
	<li>Dişi fareleri, üremenin gerçekleştiğini gösteren bir çiftleşme tıkaç için günlük olarak kontrol edin.</li>
	<li>Sağlıklarını ve hamilelik durumlarını takip etmek için her hafta dişi farelerin ağırlık ölçümlerini toplayın. NOT: Kadınların hamilelik (~ 21 gün) ve emzirme (~ 21 gün) için diyette tutulması güvenlidir.</li>
	<li>Yavrular anneden sütten kesildiğinde (doğumdan ~ 21 gün sonra), onları folik asit ve kolin eksikliği olan bir diyete ve ayrıca bir kontrol diyetine yerleştirin. Ayrıntılar için sonuçlar bölümüne bakın. NOT: Anne diyetinin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelerken, yavruların sütten kesildikten sonra bir kontrol diyetine yerleştirilmesi önerilir. Kontrol diyeti hayatta kalmak için yeterli miktarda vitamin ve besin içermelidir.</li>
	<li>Çalışmanın sonunda (folik asit veya kolin eksikliği olan diyetlerde tutulan kadınların genel sağlığını izlemek için haftalık ağırlıkların belirlenmesi), anneleri aşırı dozda CO2 kullanarak ötenazi yapın (dozaj, dakikada %10-30 hacim yer değiştirmesi, kurumsal olarak onaylanmış protokolleri takiben) ve diyet eksikliklerini doğrulamak için dokuları toplayın (adım 3).</li>
</ol>3. 1C ve ilgili metabolitlerin ölçümleri için doku toplanması
NOT: Hayvanlara ötenazi yaparken, hayvanların ayak parmağını çimdiklemeye tepki vermediğinden emin olmak önemlidir. Hayvanlar yanıt vermediğinde, dokuların diseksiyonu başlayabilir. Diseke edilecek dokunun önceden belirlenmesigerekir 13,14 ve materyallerin hazırlanması gerekir. Bu malzemeler, depolama için tüpleri, uygun diseksiyon aletlerini ve kuru buz veya sıvı nitrojeni içerir.
<ol><li>Daha önce yayınlanmış protokollere göre kan ve karaciğer dokularını toplayın15,16.<ol><li>Aşağıdaki adımları izleyerek kardiyak ponksiyon kullanarak ~ 500-1000 μL kan toplayın. Ayrıntılar için Parasuraman ve ark.17'ye bakın:<ol><li>Deriden ve karın duvarından V şeklinde bir kesi yapın. Karın organlarını bir kenara çekin ve kan örneğini almak için diyaframdan kalbe bir iğne sokun.</li>
			<li>Kan örneklerini EDTA kaplı tüplere yerleştirin. Tüp, tüm numuneler toplanana kadar oda sıcaklığında bırakılabilir.</li>
		</ol></li>
		<li>Kan plazmasını izole etmek için kan örneklerini 1000-2000 x g'da 4 ° C'de 7 dakika boyunca bir santrifüjde döndürün. Plazmayı 1,5 mL'lik bir mikrofüj tüpüne toplayın ve analize kadar -80 ° C'de saklayın.</li>
		<li>Karaciğeri çıkarmak için karnı açın ve daha önce yayınlanmış protokol15'i izleyerek tüm karaciğeri inceleyin.<ol><li>Karaciğeri vücut boşluğundan çıkardıktan sonra, dokuyu küçük bir makasla daha küçük parçalara ayırın ve kuru buz veya sıvı nitrojen kullanarak dondurun. NOT: Donmuş doku parçaları 1.5 mL'lik bir kriyojenik mikrosantrifüj tüpüne yerleştirilebilir ve analize kadar -80 ° C'de tutulabilir.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>

Maternal Folik Asit ve Kolin Eksikliklerinin Yavru Sağlığına Etkisi

<ol><li>Van Gool, J. D., Hirche, H., Lax, H., De Schaepdrijver, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folic+acid+and+primary+prevention+of+neural+tube+defects%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Folic acid and primary prevention of neural tube defects: A review.</a> Reprod Toxicol. 80, 73-84 (2018).</li>
<li>Ali, S. A., Economides, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folic+acid+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Folic acid supplementation.</a> Curr Opin Obstet Gynecol. 12 (6), 507-512 (2000).</li>
<li>Osterhues, A., Ali, N. S., Michels, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+folic+acid+fortification+in+neural+tube+defects%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Food+Sci+Nutr%22%5BJournal%5D)">The role of folic acid fortification in neural tube defects: a review.</a> Crit Rev Food Sci Nutr. 53 (11), 575966(2013).</li>
<li>Hurley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+dietary+deficiencies+in+folic+acid+and+choline+result+in+larger+damage+volume%2C+reduced+neuro-degeneration+and+-inflammation+and+changes+in+choline+metabolites+after+ischemic+stroke+in+middle-aged+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Maternal dietary deficiencies in folic acid and choline result in larger damage volume, reduced neuro-degeneration and -inflammation and changes in choline metabolites after ischemic stroke in middle-aged offspring.</a> Nutrients. 15 (7), 1556(2023).</li>
<li>Clementson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+dietary+deficiencies+in+folic+acid+or+choline+worsen+stroke+outcomes+in+adult+male+and+female+mouse+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal dietary deficiencies in folic acid or choline worsen stroke outcomes in adult male and female mouse offspring.</a> Neural Regen Res. 18 (11), 2443-2448 (2023).</li>
<li>Pull, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+maternal+dietary+folic+acid+or+choline+dietary+deficiencies+on+vascular+function+in+young+and+middle-aged+female+mouse+offspring+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Impact of maternal dietary folic acid or choline dietary deficiencies on vascular function in young and middle-aged female mouse offspring after ischemic stroke.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 325 (6), H1354-H1359 (2023).</li>
<li>Virdi, S., Jadavji, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+maternal+folates+on+brain+development+and+function+after+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolites%22%5BJournal%5D)">The impact of maternal folates on brain development and function after birth.</a> Metabolites. 12 (9), 8766(2022).</li>
<li>Barker, D. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+nutrition+and+cardiovascular+disease+in+later+life%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Fetal nutrition and cardiovascular disease in later life.</a> Br Med Bull. 53 (1), 96-108 (1997).</li>
<li>Barker, D. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+nutrition%2C+fetal+nutrition%2C+and+disease+in+later+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">Maternal nutrition, fetal nutrition, and disease in later life.</a> Nutrition. 13 (9), 807-813 (1997).</li>
<li>Jackson, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+age+matter%3F+The+impact+of+rodent+age+on+study+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Does age matter? The impact of rodent age on study outcomes.</a> Lab Anim. 51 (2), 160-169 (2017).</li>
<li>Jiménez, J. A., Zylka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+litter+effects+to+enhance+rigor+and+reproducibility+with+rodent+models+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurodev+Disords%22%5BJournal%5D)">Controlling litter effects to enhance rigor and reproducibility with rodent models of neurodevelopmental disorders.</a> J Neurodev Disords. 13 (1), 2(2021).</li>
<li>Breeding and Reproduction of Mice - All Other Pets. Merck Veterinary Manual. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.merckvetmanual.com/all-other-pets/mice/breeding-and-reproduction-of-mice">https://www.merckvetmanual.com/all-other-pets/mice/breeding-and-reproduction-of-mice</a> 159-185 (2024).</li>
<li>Jena, S., Chawla, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy+of+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Essentials+of+Laboratory+Animal+Science%3A+Principles+and+Practices%22%5BJournal%5D)">The anatomy of the laboratory mouse.</a> Essentials of Laboratory Animal Science: Principles and Practices. , 159-185 (2021).</li>
<li>The anatomy of the laboratory mouse. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.informatics.jax.org/cookbook/imageindex.shtml">https://www.informatics.jax.org/cookbook/imageindex.shtml</a> (2024).</li>
<li>Mortimer, T., Welz, P. S., Benitah, S. A., Sassone-Corsi, P., Koronowski, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting+mouse+livers+for+transcriptome+analysis+of+daily+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Collecting mouse livers for transcriptome analysis of daily rhythms.</a> STAR Protoc. 2 (2), 100539(2021).</li>
<li>Aboghazleh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+brain+extraction+and+dissection%3A+A+comprehensive+approach%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rodent brain extraction and dissection: A comprehensive approach.</a> MethodsX. 12, 102516(2024).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Parmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Jadavji, N. M., Deng, L., Malysheva, O. V., Caudill, M. A., Rozen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MTHFR+deficiency+or+reduced+intake+of+folate+or+choline+in+pregnant+mice+results+in+impaired+short-term+memory+and+increased+apoptosis+in+the+hippocampus+of+wild-type+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">MTHFR deficiency or reduced intake of folate or choline in pregnant mice results in impaired short-term memory and increased apoptosis in the hippocampus of wild-type offspring.</a> Neuroscience. 300, 1-9 (2015).</li>
<li>Pickell, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+intake+of+folic+acid+disrupts+embryonic+development+in+mice.+Birth+defects+research%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+A+Clin+Mol+Teratol%22%5BJournal%5D)">High intake of folic acid disrupts embryonic development in mice. Birth defects research.</a> Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 91 (1), 8-19 (2011).</li>
<li>Mikael, L. G., Deng, L., Paul, L., Selhub, J., Rozen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderately+high+intake+of+folic+acid+has+a+negative+impact+on+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+A+Clin+Mol+Teratol%22%5BJournal%5D)">Moderately high intake of folic acid has a negative impact on mouse embryonic development.</a> Birth Defects Res A Clin Mol Teratol. 97 (1), 47-52 (2013).</li>
<li>Mikael, L. G., Pancer, J., Wu, Q., Rozen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+one-carbon+metabolism+causing+adverse+reproductive+outcomes+in+mice+is+associated+with+altered+expression+of+apolipoprotein+ai+and+inflammatory+mediators%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Disturbed one-carbon metabolism causing adverse reproductive outcomes in mice is associated with altered expression of apolipoprotein ai and inflammatory mediators.</a> J Nutr. 142 (3), 411-418 (2012).</li>
</ol>

Bu protokolün araştırma laboratuvarlarında uygulanması sırasında, araştırmacıların deneylere başlamadan önce göz önünde bulundurmaları gereken birkaç önemli not vardır. İlk olarak, diyet üretiminde, deneysel çalışmanın başlamasından önce diyetin üretilmesi için yeterli teslim süresinin verilmesi gerekir. Teslim süreleri şirketten şirkete değişebilir ve diyet sevkiyatının da hesaba katılması gerekir. Üreme çağındaki (~ 2-2.5 aylık) dişi fareler çiftleşmeden 4-6 hafta önce diyete alınabilir 4,6,14. Önceki çalışmalarda sadece C57Bl / 6J fareleri 4,5,6,18 kullanılmıştır, ancak diğer gruplar benzer çalışmalarda BALB / c farelerini kullanmıştır 19,20,21.
Bu çalışmada kullanılan üretilmiş diyet, bağırsak florası tarafından folat sentezini azaltmaya yardımcı olmak için% 1 süksinil sülfatiyazol içerir; Bu, eksik diyetlerde bulunan aynı antibiyotikleri içerdiği için kontrol diyetinin kullanılması gerektiğinin bir başka nedenidir. Diyet üretildikten ve sevk edildikten sonra, depolanması hayati önem taşır. Diyetin deneysel çalışma süresince devam edebilmesi için üreticinin talimatlarına uymak önemlidir. Standart fare yeminin, hamileliği ve fare kolonilerinin genel sağlığını desteklemek için yüksek seviyelerde folik asit ve kolin ile formüle edildiğine dikkat etmek önemlidir. Bu nedenle, öncelikle folik asit ve / veya kolin eksikliğinin etkilerini araştırmayı amaçlayan çalışmalarda bir kontrol diyetinin kullanılması gerekir. Bu tür deneysel çalışmalar için, önerilen minimum miktarda folik asit (2.0 mg / kg) veya kolin bit hızı (1150 mg / kg) 10 olan üreticilerden kontrol diyetleri alınması önerilmektedir (Tablo 1).
Ayrıca, kadınlarda hem diyet folik asit hem de kolin eksikliğini birleştirmek henüz denenmemiştir. Hem folik asit hem de kolin önemli metil donörleridir ve hamilelik sırasında yavru geliştirmek için onlara yüksek talep vardır. Önceki çalışmalar, folat ve kolin metabolizmasının normal beyin fonksiyonuyla sıkı bir şekilde bağlantılı olduğunu göstermiştir 16,17. Bu aynı zamanda diğer dokularda başkaları tarafından da gösterilmiştir 18,19. Folik asit ve kolin eksikliği olan bir diyetin canlı yavrular verip vermeyeceği bilinmemektedir.
Deneysel tasarım göz önüne alındığında, erkeklerde 1C'deki diyet eksikliklerinin yavru sağlığı sonuçlarını olumsuz yönde etkilediği bildirilmiştir11. Bu, erkekleri folik asit veya kolin eksikliği olan bir diyetle beslenen dişilerle kafeslere yerleştirirken göz önünde bulundurulması gereken önemli bir noktadır. Bu noktada, erkeklerde kısa süreli diyet eksikliğinin etkisi bilinmemektedir.
Başarılı fare yetiştiriciliği, deneysel ilerlemede zorluklar ortaya çıkarabilir. Fareleri başarılı bir şekilde yetiştiren satıcılar da dahil olmak üzere kurumdaki veya literatürdeki hayvan bakım personeline danışılması önerilir. Kadınları haftalık olarak tartmak, hamilelik ilerlemesinin izlenmesine yardımcı oldu.
Hamilelik sırasında 1C'deki anne eksikliklerinin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki uzun vadeli etkisi daha fazla araştırma gerektirir 4,14. Bu protokol, bir fare modelinde maternal folik asit veya kolin diyet eksikliklerinin nasıl indükleneceğini ve bunun nasıl doğrulanacağını açıklamıştır. Folik asit veya kolindeki diyet eksikliklerinin diğer potansiyel belirteçlerini belirlemek için, Şekil 2'ye danışıldığından emin olun18. Bu deneysel model, hamilelik ve emzirme sırasında folik asit veya kolindeki maternal diyet eksikliklerinin uzun vadeli yavru sağlığı sonuçları üzerinde incelenmesini kolaylaştırır.

Hamilelik ve emzirme döneminde annenin beslenmesi, yavru gelişiminde hayati bir rol oynar. Tek karbonlu (1C) metabolizma, beslenme sinyallerini biyosentez, redoks homeostazı ve epigenetik ile bütünleştiren önemli bir metabolik ağdır. Folik asit ve kolin, nöral tüpün kapanmasında önemli bir rol oynayan 1C'nin merkezi bileşenleridir. Kadınların doğurganlık yıllarında folik asit ve kolin takviyesi yapmaları yaygın olarak tavsiye edilir1. Folik asidin fetal gelişimdeki kritik rolü açıkça belirlenmiş olsa da, ilgili altta yatan mekanizmalar belirsizliğini korumaktadır. Çocuk doğuran kadınların hamile kalmadan önce folik asit almaları önerilir, çünkü nöral tüpün kapanması ilk trimester2 içinde gerçekleşir. Folik asit veya kolin gibi 1C'nin diğer bileşenlerinde eksik olan hamile anneler, nükleotid sentezi ve erken gebelik döneminin gerektirdiği diğer süreçlere olan yüksek talep nedeniyle nöral tüp defektli yavruların doğum insidansı daha yüksektir3.
1C metabolizması alımında yetersiz olan anne diyetlerinin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki uzun vadeli etkisi tam olarak anlaşılamamıştır. Laboratuvarlarımızdan ve diğerlerinden yapılan araştırmalar, folik asit veya kolin eksikliği olan anne diyetlerinin, klinik öncesi modeller 4,5,6 kullanılarak iskemik inme sonrası yavru sağlığı sonuçlarını gerçekten etkilediğini göstermiştir. Maternal diyetin etkisi, daha küçük beyin hacimlerinin ve değişmiş metilasyon seviyelerinin tanımlandığı klinik çalışmalarda da gösterilmiştir7. Sağlık ve Hastalığın Gelişimsel Kökenleri (DOHaD) teorisi, prospektif kronik hastalıkların utero 8,9'da programlandığını ve anne diyetinin önemli bir rol oynadığını göstermektedir.
Bu protokol, anne beslenmesinin yavruların sağlık sonuçları üzerindeki etkilerini incelemek amacıyla, hamilelikten önce dişi farelerde 1C diyet tüketimini değiştirme yöntemini ana hatlarıyla belirtmek için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>1,5 mL tüpler</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6 Dişi Fareler</td><td>Charles River</td><td>27</td><td>Fareler evde de yetiştirilebilir.</td></tr><tr><td>Kolin Eksikliği Diyeti</td><td>Envigo</td><td>TD.06119</td><td></td></tr><tr><td>Kontrol Diyeti</td><td>Envigo</td><td>TD.190790</td><td></td></tr><tr><td>EDTA tüpleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Folik Asit Eksikliği Diyeti</td><td>Envigo</td><td>TD.01546</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad prizma</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>https://www.graphpad.com/features Kemirgenler için Muhafaza</td><td>Lab Products, LLC</td><td>One Kafes Havalandırmalı Raflar & Kafesler</td><td></td></tr><tr><td>Sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS)</td><td>SCIEX, Framingham, MA</td><td>5500 QTrap</td><td></td></tr><tr><td>Ultra performanslı sıvı kromatografisi (UPLC)</td><td>Shimadzu, Columbia, MD,</td><td>ABD Nexera</td><td></td></tr></tbody></table>

eksikliklerin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelemek için maternal diyet folik asit veya kolin seviyelerinin değiştirilmesi

Modifying Levels of Maternal Dietary Folic Acid or Choline to Study the Impact of Deficiencies on Offspring Health Outcomes

Hamilelik ve emzirme döneminde annenin beslenmesi, yavruların nörogelişiminde önemli bir rol oynar. Folik asit ve kolinin yanı sıra diğer B vitaminlerini merkeze alan tek karbonlu (1C) metabolizma, gelişmekte olan fetüsün nöral tüpünün kapanması sırasında anahtar bir rol oynar. Bununla birlikte, hamilelik sırasındaki bu maternal beslenme yetersizliklerinin doğumdan sonra yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisi nispeten tanımlanmamıştır. Ayrıca, folik asit veya kolindeki maternal diyet eksiklikleri, yavrulardaki diğer sağlık sonuçlarını etkileyebilir - bu da bunu değerli bir model haline getirir. Bu protokol, diyet değişiklikleri yoluyla dişi farelerde 1C metabolizmasında bir eksikliğe neden olma prosedürünü ana hatlarıyla belirtmeyi amaçlamaktadır. Dişiler sütten kesimde, 2 aylık olana kadar, çiftleşmeden 4-6 hafta önce diyetlere yerleştirilir ve hamilelik ve emzirme boyunca diyette kalırlar. Bu dişilerden elde edilen yavrular sağlık sonuçları açısından değerlendirilebilir. Dişiler yavru üretmek için birden çok kez kullanılabilir ve 1C metabolit ölçümlerini ölçmek için dişilerden dokular toplanabilir. Bu protokol, yavru sağlığı sonuçlarını incelemek için folik asit veya kolindeki maternal diyet eksikliklerinin nasıl indükleneceğine dair bir genel bakış sağlar.

Bu çalışmanın odak noktası, maternal diyet eksikliklerinin folik asit veya kolin üzerindeki yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini araştırmaktı. Folik asit veya kolin eksikliği olan diyetlerde tutulan kadınların genel sağlığını izlemek için haftalık ağırlıklar belirlendi. Önceki çalışmamızda, anne diyet grupları arasında vücut ağırlığında herhangi bir değişiklik gözlenmemiştir4. Şekil 1 , çiftleşmeden önceki dört hafta boyunca kontrol, kolin veya folik asit eksikliği olan diyetlerde tutulan dişiler için başlangıç ve haftalık ağırlıkları göstermektedir (F (1.144,4.577) = 11.96, p = 0.196). Yapılan genel bir gözlem, bu özel diyetlerdeki yavru sayısının, standart fare yemine kıyasla yavru sayısında daha az olduğudur. Bunun istatistiksel olarak anlamlı olduğu tespit edilmemiştir.
Dişi fareler, folik asit veya kolin gibi 1C'de eksik diyetlerle beslendiğinde, 1C'yi işleyen vücut dokularındaki metabolitlerde değişiklikler olur. 1C ve ilgili metabolitlerin ölçümleri çeşitli teknikler kullanılarak alınabilir. Bu çalışmada, daha önce tarif edildiği gibi, ultra performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) ile sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi kullanılmıştır12. Total homosistein, S-adenosilmetiyonin (SAM), S-adenosilhomosistein (SAK), metiyonin, sistatiyonin, betain ve kolin için hem karaciğer (Tablo 2) hem de plazma (Tablo 3) 1C ölçümleri sunulmuştur. Bu metabolitleri ölçmenin farklı yolları vardır; LC-MS sadece bir yoldur.
Tablo 2 ve Tablo 3'te sunulan veriler metabolit seviyelerinde bazı küçük değişiklikler göstermektedir. Mevcut ölçümler, dişiler 6 ay boyunca diyetlerle çiftleşirken alındı. Metabolitleri 4 hafta sonra veya bir ila iki tur gebelikten sonra ölçmek daha iyi olabilir. Karaciğer ve plazmadan elde edilen veriler tek yönlü varyans analizi ve istatistiksel ve grafik yazılımları kullanılarak analiz edildi. Herhangi bir önemli ANOVA diyeti, Tukey'in ikili karşılaştırmalarının yanı sıra kontrol diyeti ile folik asit veya kolin eksikliği olan diyetler arasındaki ikili karşılaştırmaları ile etkiler.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66827/66827fig01.jpg"> Şekil 1: Tek karbonlu yeterli ve eksik diyetlerde tutulan dişi farelerin vücut ağırlığı. Özel olarak formüle edilmiş diyetlere başlamadan önce dişi farelerin vücut ağırlıkları (başlangıç) ve daha sonra kontrol (CD) ve ayrıca folik asit (FADD) ve kolin (ChDD) eksikliği diyetlerinde 4 hafta boyunca haftalık ağırlıklar. Veriler, ortalamanın ortalama + standart hatası olarak sunulur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66827/66827fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66827/66827fig02.jpg"> Şekil 2: Tek karbon metabolizması ve ilgili biyolojik roller (metilasyon ve nükleotid sentezi). Enzimler siyah dairelerle belirtilmiştir. Kısaltmalar: BHMT, betain homosistein metiltransferaz; CHDH, kolin dehidrojenaz; COMT, katekol-O-metiltransferaz; DHFR, dihidrofolat redüktaz; dTMP, deoksitimidin monofosfat; dTTP, deoksitimidin trifosfat; dUMP, deoksiüridin monofosfat; dUTP, deoksiüridin trifosfat; FR, folat reseptörü; MTHFR, metilentetrahidrofolat redüktaz; MTR, metiyonin sentaz; MTRR, metiyonin sentaz redüktaz; RFC, azaltılmış folat taşıyıcısı; SAM, S-adenosilmetiyonin; SAH S-adenosilmehomosistein; ve TS, timidilat sentaz. Bu rakam Jadavjive ark.18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66827/66827fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 1: Tek karbonlu metabolizma kontrolü, folik asit, kolin eksikliği olan diyetlerdeki mikro ve makro besin içeriklerinin listesi. Folik asit eksikliği olan diyet 0.3 mg / kg folik asit içerir. Kolin eksikliği olan diyet 300 mg / kg kolin bit hızı içerir. Değerler tabloda parantez içinde kırmızı vurgularla listelenir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66827/Table%201.xlsx" target="_blank">Bu tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 2: İzole karaciğer dokusunda maternal tek karbonlu metabolit konsantrasyonları. Bu veriler Hurley ve ark.4'ten uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66827/Table%202.xlsx" target="_blank">Bu tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 3: İzole plazmada maternal tek karbonlu metabolit konsantrasyonları. Bu veriler Hurley ve ark.4'ten uyarlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66827/Table%203.xlsx" target="_blank">Bu tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bu protokol, anne diyetinin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini araştırmak amacıyla hamilelikten önce dişi farelerde diyetle folik asit veya kolin alımını azaltma yöntemini açıklar.

Eksikliklerin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelemek için maternal diyet folik asit veya kolin seviyelerinin değiştirilmesi

Maternal nutrition during pregnancy and lactation plays an important role in the neurodevelopment of offspring. One-carbon (1C) metabolism, which centers ...

modifying-levels-maternal-dietary-folic-acid-or-choline-to-study

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Etanol bağlı gelişimsel hasar moleküler mekanizmalarını anlayabilmek için, biz etanol maruz kalma zebrabalıkları modeli geliştirdik ve etanol maruz kaldıktan sonra meydana gelen fiziksel, hücresel ve genetik değişimler...

Fetal Alkol Pozlama bir Zebra balığı Modelinde teratojenik değişiklikler değerlendirilmesi

Biz aynı anda 6 fare kafesleri ev hazır malzemeler kullanılarak alkol buhar odaları inşaatı göstermektedir. Biz ayrıca, insan gebelik 3 üç aylık denk fetal alkol maruz kalmanın bir fare modelinde bunların kullanımını tarif eder. Bu paradigma, gebelik ve doğum sonrası günlerde 1-12 sırasında hayvanlar ortaya koyar.

İnsani Gelişim her üç trimesterde Eşdeğeri sırasında Alkol Fare Expose Kullanılan Buhar Odaları İnşaatı

Burada sunulan protokolün amacı, doğum öncesi beyin gelişimi sırasında fareleri orta düzeyde alkole maruz bırakma prosedürlerini tanımlamak ve yetişkinlik döneminde sosyal davranışta ortaya çıkan değişiklikleri ölçmektir.

Orta Prenatal Alkol Pozlama ve Yetişkin Sıçanlarda Sosyal Davranış Kantitasyonu

Maternal immün aktivasyon (MIA), otizm ve şizofreninin çevresel risk faktörü için bir modeldir. Bu makalenin amacı, bu modelin tekrarlanabilirliğini arttırmak için hamile farelerde MIA'nın nasıl indükleneceğine dair adım adım bir prosedür sağlamaktır.

(C I) Viral Mimik Poli ile Orta gebelik Sahnesi&#39;nde Farelerde Anne Bağışıklık aktivasyonu indüksiyon

Değerlendirmek için kullanılan izleme eyeblink Klasik koşullanma (ECC) bağımlı Hipokampal ilişkisel öğrenme edildi yetişkin Sıçanlarda yönetilen yüksek yoğunlukta (% 11,9 v/v) alkol erken neonatal beyin gelişimi sırasında. Genel olarak beyin işlev bozukluğu birçok psikolojik ve Biyomedikal ayarlarını algılamak için ses tanılama araçları ECC işlemlerdir.

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı

Bu çalışma, uygun maruzkalma yöntemlerinden embriyo işleme ve etanol analizine kadar kafa uzayı gaz kromatografisi kullanarak zebra balığı embriyosundaki etanol düzeylerini ölçmek için bir protokol tanımlamaktadır.

Kafa Uzayı Gaz Kromatografisi Kullanan ZebraBalığı Embriyolarında Etanol Düzeylerinin Ölçülmesi

FEMI'nin yavruların bağırsak sisteminin gelişimi üzerindeki etkilerini incelemek için canlı organizmaların komplikasyonları olmadan anne iltihabına (FEMI) fetal maruziyeti simüle etmek için bir chorioamnionitis modeli geliştirdik. Bu, chorioamnionitis'i takiben bağırsak hasarı gelişimi için mekanistik nedenlerin incelenmesine izin verir.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Tavuk embriyoları, klasik bir gelişim modeli olarak, laboratuvarımızda çeşitli çevresel kirleticilere maruz kalmanın ardından gelişimsel kardiyotoksioksiklikleri değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda maruz kalma yöntemleri ve kurulan morfolojik/fonksiyonel değerlendirme yöntemleri açıklanmıştır.

Gelişimsel Kardiyotoksikliklerin Değerlendirilmesinde Tavuk Embriyosunun Güçlü Bir Araç Olarak Kullanılması

Bu protokolde, aynı fare embriyosundan fetal beyin dokusunun yanı sıra yüksek kaliteli, hemolize edilmemiş serumun aynı anda toplanması için bir yöntem tarif ediyoruz. Bu tekniği, maternal diyet maruziyetinin Nf1 (Nörofibromatozis Tip 1) için heterozigot farelerde makro besin profillerini ve fetal nörogelişimi nasıl etkilediğini sorgulamak için kullandık.

Nörofibromatozis Tip 1'de Maternal Diyetin Beslenme ve Nörogelişim Üzerindeki Etkilerini Değerlendirmek için Fetal Murin Beyin ve Serumunun Eş Zamanlı Toplanması

Bu prosedür, 2H2O veya U13C Glukoz ile stabil izotop etiketleme ve ardından metabolomik analiz kullanılarak döllenme sırasında spermden oositlere aktarılan metabolitleri tanımlamayı amaçlar. Döteryum etiketli sirler, etiketlenmemiş barajlarla eşleştirilir. Toplanan implantasyon öncesi embriyolar, maternal (döteratlanmamış) metabolitlerden paternal (döteratlanmış) metabolitleri ayırmak için kütle spektrometresi ile analiz edilir.

Döllenme Sırasında Spermden Oosit'e Aktarılan Baba Metabolitlerinin Kütle Spektrometresi Tanımlaması için Kararlı İzotop In-Vivo Etiketleme

Makale, erken gebeliksel iltihabın nörogelişim üzerindeki etkilerini incelemek için kapsamlı bir protokol sunar; bu model, güvenilirlik ve tekrarlanabilirliği sağlamak için temel metrikleri içerir.

Nörogelişim üzerindeki prenatal iltihabı değerlendirmek için erken gebeliksel anne immün aktivasyon fare modelinin oluşturulması

Keşfedin, anne farelerde folik asit veya kolin eksikliğinin yavru sağlığı üzerindeki uzun vadeli etkilerini. Bu yöntem, maternal beslenmenin nesiller boyu sağlık sonuçlarını anlamaya yardımcı olur.

Eksikliklerin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelemek için maternal diyet folik asit veya kolin seviyelerinin değiştirilmesi (Video) | JoVE Journal

Eksikliklerin yavru sağlığı sonuçları üzerindeki etkisini incelemek için maternal diyet folik asit veya kolin seviyelerinin değiştirilmesi

Daha fazla video keşfet