Çok Hücreli Sferoidlerin Üretimi ve Çok Parametreli Canlı Hücre Floresan Ömür Boyu Görüntüleme Mikroskobu (FLIM)
August 9th, 2024
Burada, takip çok parametreli canlı hücre mikroskobu gerçekleştirmek için farklı çok hücreli sferoid oluşturma yöntemlerini açıklıyoruz. Floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu (FLIM), hücresel otofloresan, boyama boyaları ve nanopartiküller kullanılarak, canlı üç boyutlu (3D) kanser ve kök hücre türevli sferoidlerde hücre metabolizması, hipoksi ve hücre ölümünün analizi için yaklaşım gösterilmiştir.
Bu çalışmada, canlı hücre mikroskobu kullanılarak hücre metabolizması ve oksijen dağılımının analizi için kullanılabilecek sferoid oluşturma yöntemlerini sunuyoruz ve karşılaştırıyoruz. Son yıllarda, floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu, canlı hücrelerde NADPH ve FAD gibi metabolik biyobelirteçleri araştırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır ve bu tür ölçümleri hücre ve doku oksijenasyonunun görüntülenmesi ile çoğullamak için birkaç floresan nanopartikül geliştirilmiştir. Çok hücreli sferoidler, organoidler ve çip üzerinde organ, karmaşık, in vivo benzeri bir mikro ortamı çoğaltarak hayvan araştırmalarına olan ihtiyacı en aza indirebilir.
Küresel üretim için, düşük verimden yüksek verime kadar değişebilen farklı oluşum yöntemleri gösteriyoruz. Ayrıca optik erişilebilirliklerini, floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu ile uyumluluklarını ve hücre dışı matris bileşenlerini dahil etme olasılıklarını da vurgularlar. Bu nedenle, 3B in vitro modeller, 2B kültürlere kıyasla daha iyi bağlam sağlasa da, yüksek değişkenlikleri, düşük tekrarlanabilirlikleri ve eksik deneysel raporlamaları bir sorun olmaya devam etmektedir.
Küresel boyut, besin bileşimi, hücre dışı viskozite ve hatta küresel oluşum yöntemleri gibi parametrelerin tümü, hücresel heterojenliğin artmasına neden olabilir. Bu protokolle, sferoid üretim yöntemlerini uyumlu hale getirmeyi ve standartlaştırmayı, FLIM mikroskobu kullanarak sferoidlerin yaşam boyu ve multiparametrik analizi için önemli olan temel hususları vurgulamayı amaçlıyoruz.
Genel Bakış
Bu makale, canlı hücre mikroskobisi kullanılarak hücre metabolizmasını ve oksijen dağılımını analiz etmek için çok hücreli sferoidler oluşturmanın çeşitli yöntemlerini sunar. Çalışma, canlı hücrelerde metabolik biyobelirteçleri araştırmak için floresan ömür görüntüleme mikroskobisi (FLIM) kullanımını vurgulamaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Sinirbilim
- Hücre Biyolojisi
- Canlı Hücre Görüntüleme
Arka Plan
- Çok hücreli sferoidler ve organidler, in-vivo benzeri mikroçevreleri taklit eder.
- Floresan ömür görüntüleme mikroskobisi metabolik biyobelirteçleri incelemek için kullanılır.
- 3D in vitro modellerde yüksek değişkenlik ve düşük tekrarlanabilirlik zorluklardır.
- Farklı uygulamalar için çeşitli sferoid oluşturma yöntemleri kullanılabilir.
Çalışmanın Amacı
- Canlı hücre mikroskobisi için sferoid oluşturma yöntemlerini karşılaştırmak.
- 3D modellerde hücre metabolizmasını, hipoksi ve hücre ölümünü analiz etmek.
- Çok hücreli sistemlerde oksijen dağılımı anlayışını geliştirmek.
Kullanılan Yöntemler
- Floresan ömür görüntüleme mikroskobisi (FLIM)
- Hücresel otofloresan analizi
- Boyama boyaları ve floresan nanopartiküllerin kullanımı
- Farklı sferoid oluşturma teknikleri
Ana Sonuçlar
- 3D sferoidlerde hücre metabolizmasını analiz etmek için yöntemler gösterildi.
- Sferoidlerin metabolik çalışmalar için FLIM ile uyumluluğu gösterildi.
- Sferoid oluşumunda hücre dışı matris bileşenlerinin önemi vurgulandı.
- 3D kültürlerin tekrarlanabilirliği ve değişkenliği ile ilgili zorluklar ele alındı.
Sonuçlar
- Farklı sferoid oluşturma yöntemleri canlı hücre analizinin geliştirilmesine yardımcı olabilir.
- FLIM, 3D modellerde metabolik süreçler hakkında değerli bilgiler sağlar.
- Bu yöntemlerin sürekli geliştirilmesi hayvan modellerine olan bağımlılığı azaltabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:51
High‐Throughput Generation of Multicellular Spheroids from Human Cancer Cell Line for Live 3D Imaging
4:15
Assessing the Impact of Spheroid Formation Methods in 3D Cell Culture Systems Using Live Cell Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM)
