Kök Hücre Dağıtımı Kullanılarak Omurilik Yaralanması için Kombinatoryal Terapötiklerin Geliştirilmesi

Bu çalışmada, decellularize doku kaynaklı hidrojeller kullanılarak omurilik yaralanması için kombinatoryal bir hücre dağıtım platformu geliştirilmiştir. Kompozit hidrojellerde decellularizasyonun etkinliği ve hücre canlılığı analiz edilerek 3D kültür platformu olarak potansiyelleri belirlenmiştir. Sonuçlar, omurilik yaralanması için terapötik potansiyellerin daha fazla araştırılmasına olanak sağlayacaktır.

Son zamanlarda, omurilik yaralanması onarımı alanında, hidrojeller bağlamında decellularizasyon yaygın olarak kullanılmıştır. Bu süreç, dokulardan veya organlardan tüm hücresel ve nükleer kalıntıları çıkararak negatif bağışıklık yanıtını önlerken, hücre dışı matriks bileşenlerini korur. Artık kompozit sinir hidrojelleri optimize edildikten sonra, platformun karakterizasyonu omurilik onarımı için ASC'lerin nöro-rejeneratif davranışını maksimize etmek amacıyla devam edecektir.

Bu çalışma, omurilik yaralanması onarımı için kombinatoryal terapötik gelişime katkıda bulunacak ve özellikle potansiyel klinik translasyon için kök hücre tedavisinin geliştirilmesine katkı sağlayacaktır. Başlamak için, donmuş omuriliği soğudolabında dört derece Celsius'ta 18 ila 24 saat eritin ve ardından decellularizasyon yapıldı. Steril makas kullanarak dura mater'ı dikkatlice çıkarın.

Omuriliği yaklaşık bir santimetre uzunluğunda küçük parçalara böl. Üç parçayı 50 mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Omuriliği deiyonize suyla dört derece Celsius'ta 18 ila 24 saat boyunca 60 RPM'de durulayın.

Sonrasında omuriliği %0,025 tripsin EDTA ile durulayın, ardından PBS ile iki kez 15 dakika sürebilirsiniz. Sonra, omuriliği aşağıdaki çözgütlerle durulayın. Son olarak, omuriliği iki kez bir saat boyunca deionize su ile durulayın, ardından PBS ile bir saat boyunca durulayın.

Sonra, omuriliği 0.01 milibar ve 56 derece Celsius sıcaklıklarında üç gün boyunca liyofilize edin ve kullanıma kadar saklanın. Daha önce donmuş domuz siyatik sinirini buzdolabında dört derece Celsius'ta 18 ila 24 saat eritin, ardından decellularizasyon. Şimdi, siyatik siniri yaklaşık bir santimetre uzunluğunda küçük parçalara böl.

Üç parçayı 50 mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Siyatik siniri yedi saat boyunca deyonize suyla durulayın. Sonra, siyatik siniri aşağıdaki desellülerizasyon çözeltileriyle durulayın.

Sonra, 0.01 milibar ve 56 derece Celsius'ta üç gün boyunca liyofilize edilip sonra kullanıma kadar saklanın. Önce daha önce decellularize edilmiş domuz omuriliği ve siyatik siniri toz haline getirmek için otoklav makas kullanarak doğrayın. Dokuları ayrı ayrı 0.01 normal hidroklorik asit çözeltisinde sindirin; bu çözelti, mililitrede 15 miligram konsantrasyonda bir miligram pepsin içerir.

Çözeltiye manyetik bir bar yerleştirin ve en az dört gün boyunca dört derece Celsius'ta 500 RPM'de karıştırarak pregel çözeltileri oluşturulur. Siyatik sinir ve omurilik pregelini karıştırın. Sonra, hidrojeli M199 ortamı ve PBS kullanarak istenen konsantrasyona kadar seyreltirin.

PH'ı 7.4'e ayarlamak için bir normal sodyum hidroksit ve hidroklorik asit kullanın. pH ayarlandıktan sonra, pregelde insan yağ kaynaklı kök hücreleri mililitrede 1 milyon hücre yoğunluğunda yeniden askıya alın. Prejeli PBS ile mililitrede 12 miligrama kadar seyreltin.

Kuyruklara yerleştirin, ardından PDMS kapağını prejelin üzerine yerleştirin. Tabağı 37 derece Celsius'ta 30 dakika kuluçka altına alın. Sonra, kuyulara PBS ekleyin.

PDMS kapağını ve çözeltiyi çıkarın. ASC büyüme ortamı ekleyerek ASC ile yüklü hidrojellere ekleyin ve kültür için 37 derece Celsius'ta kuluçka yapın.