Culex tarsalis sivrisineklerinin insan ellerinde sondalama ve yutma davranışlarının incelenmesi için AC-DC elektropenetrografi

Grubumuz, arbovirüslerin ve diğer faktörlerin kan besleme sırasında meydana gelen sondalama ve yutma davranışlarını nasıl etkilediğini incelemek için EPG'yi kullanıyor, çünkü birçok patojen iletimi artırmak için vektör davranışını manipüle edecek. Temel olarak, bir sivrisinek ısırığı sırasında neler olduğunu ve bu davranışların patojen bulaşmasını ve hastalık patolojisini nasıl etkilediğini inceliyoruz. Tarihsel olarak, EPG ağırlıklı olarak bitki besleyen böcekleri incelemek için kullanılmıştır.

Kan besleyen eklembacaklılar için AC-DC EPG prosedürlerinin yakın zamanda geliştirilmesi, kan besleme sırasında meydana gelen sondalama ve yutma davranışlarını invaziv prosedürlere ihtiyaç duymadan benzeri görülmemiş ayrıntılarla incelememize olanak tanır ve muhtemelen yeni yönetim stratejilerinin geliştirilmesine olanak tanır. EPG'yi kanla beslenen eklembacaklılarda kullanmanın en büyük zorluğu, dalga formlarını tükürük salgısı ve patojen iletimi gibi biyolojik aktivitelerle ilişkilendirmektir. Dalga formlarının elektriksel kökenlerine ve literatüre dayanan güçlü hipotezlerimiz var, ancak yine de ampirik kanıtlara ihtiyacımız var.

Başlamak için, bir cam mera pipetinin ucunu bir alevden geçirin ve pipeti hafifçe döndürün. Çapı inceleyin ve pipeti istenen boyuta getirmek için işlemi tekrarlayın. Bir böcek aspiratörü yapmak için, modifiye edilmiş mera pipetinin büyük ucunu cibinlik ile örtün ve bağlantıyı elektrik bandı ile sabitleyen bir laboratuvar aspiratörüne bağlı silikon boruya yerleştirin.

Kayıt elektrotları için, hazırlanan böcek saplarını ve kablolu sivrisinekleri tutmak için taze plastik sargı ile bir köpük blok sarın. Bakır telin üst bir santimetresini her tarafı parlak olana kadar bir tıraş bıçağıyla kazıyın. Daha sonra 0.025 milimetre çapındaki altın teli dört ila beş santimetre uzunluğunda parçalar halinde kesin.

Telin çökmesini önlemek için teli bantla maskelenmiş kendiliğinden kapanan forsepslerde tutun, altın teli, bakır telin temiz ucu boyunca başlayarak böcek sapının bakır telinin etrafına üç kez nazikçe sarın. Altın teli yerinde tutmak için gümüş yapıştırıcı uygulamak için bir diseksiyon probu kullanın. Gevşek uç olmadığından emin olduktan sonra, yapıştırıcı kuruyana kadar böcek saplamasını köpüğün içine yerleştirin.

Ardından, uzun, yumuşak bir yay şeklinde şekillendirmek için böcek sapına bağlı altın teli nazikçe vurun ve teli yaklaşık 2,5 ila 3 santimetre uzunluğunda kesin. Bir diseksiyon mikroskobu altında çalışarak, altın tel diseksiyon mikroskobu aşamasına dokunurken, böcek saplamasını baskın olmayan elinizle pirinç çividen tutun ve baskın eli kullanarak ince uçlu forseps ile altın telin en ucunu kavrayın, altın telin ucunu yapıştırılmış alanın yakınındaki böcek saplamasının bakır telinin üzerinden geçmek için ince uçlu forsepsleri kullanın. Ardından, altın tel ince uçlu forsepslerin etrafında küçük bir altın halka oluşturana kadar böcek sapını yavaşça çekin.

Altın teli serbest bırakın ve forsepsleri dikkatlice çıkarın. Böcek saplamasını baskın olmayan elinde tutarken, altın halkayı ince uçlu forseps ile kavrayın. İlmek telin boynuna 90 derecelik bir açıyla bükülene kadar forsepsleri saplamadan hafifçe döndürürken böcek saplamasını çekin.

Böcek saplamasını köpük bloğa geri koymadan önce altın halkanın tamamen kapalı olduğundan emin olun. Başlamak için, böcek aspiratörünü ve kayıt elektrotlarını sivrisineklerin kablolaması için hazırlayın. Anestezi pedine anestezi pedi üzerinde sırt üstü yatırılan sivrisinekleri, karınları araştırmacıya bakacak şekilde yerleştirin.

Bir laboratuvar bandı yerleştirdikten sonra, bandın üzerine 0,5 santimetre damla taze karıştırılmış gümüş yapıştırıcı sürün. Daha sonra anestezi uygulanmış bir sivrisineğin karnını aspiratöre aspire edin. Emmeyi sadece karnı yerine oturtacak ve sivrisineği aspiratörü kullanarak gümüş yapıştırıcının üzerindeki diseksiyon dürbünü altında tutacak kadar uzun süre kullanmak.

Gümüş tutkalın içine bir minuchin pimi batırdıktan sonra, sivrisinek pronotumuna ince bir tabaka uygulayın. Kayıt elektrodunun ucundaki altın halkayı hızlı bir şekilde gümüş yapıştırıcıya batırın. Sivrisineğin pronotumundaki gümüş tutkal noktasına yerleştirin ve aynı hizada oturduğundan emin olmak için halkayı ileri geri sallayın.

Ardından, köpükteki böcek saplamasını, kablolu sivrisineğin uyandığında rahatça durmasını sağlayacak bir açıyla değiştirin. İstenilen sayıda sivrisinek kablolandıktan sonra, köpük bloğu bir saklama kutusuna yerleştirin ve bakımını yapın. Başlamak için, kayıt elektrotlarını elektropenetografi veya EPG deney gününde sivrisineklere takın.

Ana bilgisayar yerine oturduğunda, kafayı çevirin amplifier yana doğru. Kablolu bir sivrisineği çıkardıktan sonra, böcek saplamasının pirinç pimini kafa amplifikatöründeki bağlantı noktasına takın. Donanım yönetim yazılımını kullanarak kaydı başlatın.

Sivrisineğin rahatça ayakta durabilmesi ve sondalayabilmesi için kafa amplifikatörünü elin üzerine yerleştirin. Kafayı açın amplifier topraklıyken açın. Problama başarısına yardımcı olmak için ana el konumunu gerektiği gibi ayarlayın.

Kayıt sırasında ana bilgisayar yanıtları, sivrisinek davranışları, kazanç değişiklikleri ve diğer ilgili olaylarla ilgili zaman damgalı gözlemler yapmak için donanım yönetim yazılımını kullanın. Her iki sinyali de net bir şekilde görünür tutmak için donanım yönetim yazılımını kullanarak sinyallerin ekrandaki konumunu ve yazılım kazancını ayarlayın. Donanım kazancını ayarlamak için kanalı bir aralık çevirin ve çarpan anahtarlarını açın.

Bu ayar yeterli değilse, zirve yapmasını veya belirsiz tepeleri önlemek için kazancı sırasıyla yükseltmek veya alçaltmak için birinci kanalın kazanç kadranını sağa veya sola çevirin. Ofseti ayarlamak için, kontrol kutusundaki kanal bir ofset anahtarını olumsuzlamak için çevirin. Ardından, ön ve son sinyallerdeki tepe noktaları bilgisayar ekranında aynı yönde oluşana kadar kanal bir ofset kadranını çevirin.

Sivrisinek bir sondanın ortasındaysa, bitmesine izin verin. 10 dakika içinde problanmazsa, kafayı kapatın. Ev sahibinin elini dikkatlice kaldırmasını sağlayın, ardından sivrisinekleri ekli böcek sapıyla çıkarın.

Son olarak, saklama kutusundaki sivrisinekleri değiştirin. İnsan eliyle beslenen Culex tarsalis sivrisineklerinin AC-DC EPG kayıtları, ailelere, türlere ve alt tiplere göre sınıflandırmaya uygun yorumlanabilir dalga formları oluşturdu.