Name: Frengi Spiroketi Treponema pallidumun İn Vitro Yetiştiriciliği için Prosedürler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T12:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Öğrenin Treponema pallidum'un in vitro yetiştiriciliği için Sf1Ep hücreleriyle ko-kültür yöntemini. Bu ölçeklenebilir teknik, frengi patojeninin genetik manipülasyonu ve antibiyotik taraması için yeni olanaklar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>T. pallidum'un Memeli Hücre Ko-Kültürü Kullanılarak Ölçeklenebilir İn Vitro Yetiştiriciliği

<ol><li>Implementing the global health sector strategies on HIV, viral hepatitis and sexually transmitted infections, 2022-2030: Report on progress and gaps. World Health Organization. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925">https://www.who.int/publications/i/item/9789240094925</a> 2022-2030 (2024).</li>
<li>Antal, G. M., Lukehart, S. A., Meheus, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endemic+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">The endemic treponematoses.</a> Microbes Infect. 4 (1), 83-94 (2002).</li>
<li>Norris, S. J., Paster, B. J., Smibert, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNorris%2C+SJ+%22Bergey%27s+Manual+of+Systematic+Bacteriology%22">Bergey's Manual of Systematic Bacteriology</a>. 4, Springer. New York, NY. (2010).</li>
<li>Lumeij, J. T., Mikalová, L., Šmajs, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+difference+between+hare+syphilis+and+rabbit+syphilis%3F+Cross+infection+experiments+between+rabbits+and+hares%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Is there a difference between hare syphilis and rabbit syphilis? Cross infection experiments between rabbits and hares.</a> Vet Microbiol. 164 (1-2), 190-194 (2013).</li>
<li>Knauf, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+prevalence+and+genetic+diversity+of+Treponema+paraluisleporidarum+isolates+in+European+lagomorphs%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">High prevalence and genetic diversity of Treponema paraluisleporidarum isolates in European lagomorphs.</a> Microbiol Spectr. 12 (1), e0177423(2024).</li>
<li>Šmajs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+genome+sequence+of+Treponema+paraluiscuniculi%2C+strain+Cuniculi+A%3A+the+loss+of+infectivity+to+humans+is+associated+with+genome+decay%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Complete genome sequence of Treponema paraluiscuniculi, strain Cuniculi A: the loss of infectivity to humans is associated with genome decay.</a> PLoS One. 6 (5), e20415(2011).</li>
<li>Šmajs, D., Norris, S. J., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+diversity+in+Treponema+pallidum%3A+implications+for+pathogenesis%2C+evolution+and+molecular+diagnostics+of+syphilis+and+yaws%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetic diversity in Treponema pallidum: implications for pathogenesis, evolution and molecular diagnostics of syphilis and yaws.</a> Infect Genet Evol. 12 (2), 191-202 (2012).</li>
<li>Šmajs, D., Strouhal, M., Knauf, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+and+animal+uncultivable+treponemal+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Genetics of human and animal uncultivable treponemal pathogens.</a> Infect Genet Evol. 61, 92-107 (2018).</li>
<li>Norris, S. J., Cox, D. L., Weinstock, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+Treponema+pallidum%3A+correlation+of+functional+activities+with+genome+sequence+data%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biology of Treponema pallidum: correlation of functional activities with genome sequence data.</a> J Mol Microbiol Biotechnol. 3 (1), 37-62 (2001).</li>
<li>Radolf, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%3A+making+a+living+as+a+stealth+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum, the syphilis spirochete: making a living as a stealth pathogen.</a> Nat Rev Microbiol. 14 (12), 744-759 (2016).</li>
<li>Schaudinn, F. R., Hoffman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vorl%C3%A4ufiger+bericht+%C3%BCber+das+Vorkommen+f%C3%BCr+Spirochaeten+in+syphilitischen+Krankheitsprodukten+und+bei+Papillomen%5BTitle%5D)+AND+%22Arb+Gesundh+Amt+Berlin%22%5BJournal%5D)">Vorläufiger bericht über das Vorkommen für Spirochaeten in syphilitischen Krankheitsprodukten und bei Papillomen.</a> Arb Gesundh Amt Berlin. 22, 528-534 (1905).</li>
<li>Schaudinn, F., Hoffmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%C3%9Cber+Spirochaetenbefunde+im+Lymphdr%C3%BCsensaft+Syphilitischer%5BTitle%5D)+AND+%22Deut+Med+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Über Spirochaetenbefunde im Lymphdrüsensaft Syphilitischer.</a> Deut Med Wochenschr. 31 (18), 711-714 (1905).</li>
<li>Turner, T. B., Hollander, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+the+treponematoses%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">Biology of the treponematoses.</a> World Health Organization. , (1957).</li>
<li>Lukehart, S. A., Marra, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+laboratory+maintenance+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Isolation and laboratory maintenance of Treponema pallidum.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 12, Unit 12A.1 (2007).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Cox, D. L., Moeckli, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+virulent+Treponema+pallidum+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Cultivation of virulent Treponema pallidum in tissue culture.</a> Infect Immun. 32, 908-915 (1981).</li>
<li>Cox, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Culture of Treponema pallidum.</a> Meth Enzymol. 236, 390-405 (1994).</li>
<li>Edmondson, D. G., Hu, B., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vitro+culture+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Long-term in vitro culture of the syphilis spirochete Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> mBio. 9 (3), e01153-e01218 (2018).</li>
<li>Edmondson, D. G., DeLay, B. D., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+affecting+continuous+in+vitro+culture+of+Treponema+pallidum+strains%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Parameters affecting continuous in vitro culture of Treponema pallidum strains.</a> mBio. 12 (1), e03536-e03620 (2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+cultivation+of+the+syphilis+spirochete+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro cultivation of the syphilis spirochete Treponema pallidum.</a> Curr Protoc. 1 (2), e44(2021).</li>
<li>Edmondson, D. G., Wormser, G. P., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+to+doxycycline%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro susceptibility of Treponema pallidum subsp. pallidum to doxycycline.</a> Antimicrob Agents Chemother. 64 (10), e00979-e01020 (2020).</li>
<li>Leimer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+antibiotic+for+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A selective antibiotic for Lyme disease.</a> Cell. 184 (21), 5405-5418 (2021).</li>
<li>Haynes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+linezolid+on+Treponema+pallidum%2C+the+syphilis+agent%3A+A+preclinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of linezolid on Treponema pallidum, the syphilis agent: A preclinical study.</a> EBioMedicine. 65, 103281(2021).</li>
<li>Houston, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functional+characterization+of+peptides+with+antimicrobial+activity+From+the+syphilis+spirochete%2C+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification and functional characterization of peptides with antimicrobial activity From the syphilis spirochete, Treponema pallidum.</a> Front Microbiol. 13, 888525(2022).</li>
<li>Tantalo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+of+Treponema+pallidum+subspecies+pallidum%3A+an+in-vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility of Treponema pallidum subspecies pallidum: an in-vitro study.</a> Lancet Microbe. 4 (12), e994-e1004 (2023).</li>
<li>Hayes, K. A., Dressler, J. M., Norris, S. J., Edmondson, D. G., Jutras, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large+screen+identifies+beta-lactam+antibiotics+which+can+be+repurposed+to+target+the+syphilis+agent%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Antimicrob+Resist%22%5BJournal%5D)">A large screen identifies beta-lactam antibiotics which can be repurposed to target the syphilis agent.</a> NPJ Antimicrob Resist. 1 (1), 4(2023).</li>
<li>Tantalo, L. C., Molini, B. J., Bose, M., Klausner, J. D., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+isolation+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+from+fresh+and+frozen+needle+aspirates+of+primary+experimental+syphilis+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">In vitro isolation of Treponema pallidum subsp. pallidum from fresh and frozen needle aspirates of primary experimental syphilis lesions.</a> Sex Transm Dis. 50 (3), 180-183 (2023).</li>
<li>Edmondson, D. G., De Lay, B. D., Hanson, B. M., Kowis, L. E., Norris, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolates+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+Nichols+provide+evidence+for+the+occurrence+of+microevolution+during+experimental+rabbit+infection+and+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Clonal isolates of Treponema pallidum subsp. pallidum Nichols provide evidence for the occurrence of microevolution during experimental rabbit infection and in vitro culture.</a> PLoS One. 18 (3), e0281187(2023).</li>
<li>Lin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+TprK+profiling+of+in+vivo+and+in+vitro-propagated+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+reveals+accumulation+of+antigenic+variants+in+absence+of+immune+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal TprK profiling of in vivo and in vitro-propagated Treponema pallidum subsp. pallidum reveals accumulation of antigenic variants in absence of immune pressure.</a> PLoS Negl Trop Dis. 15 (9), e0009753(2021).</li>
<li>De Lay, B. D., Cameron, T. A., De Lay, N. R., Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transcriptional+profiles+of+Treponema+pallidum+during+experimental+infection+of+rabbits+and+in+vitro+culture%3A+Highly+similar%2C+yet+different%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Comparison of transcriptional profiles of Treponema pallidum during experimental infection of rabbits and in vitro culture: Highly similar, yet different.</a> PLoS Pathog. 17 (9), e1009949(2021).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%2C+the+syphilis+spirochete%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of Treponema pallidum subsp. pallidum, the syphilis spirochete.</a> PLoS Pathog. 17 (7), e1009612(2021).</li>
<li>Phan, A., Romeis, E., Tantalo, L., Giacani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+transformation+and+selection+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro transformation and selection of Treponema pallidum subsp. pallidum.</a> Curr Protoc. 2 (8), e507(2022).</li>
<li>Romeis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+with+an+artificially+impaired+TprK+antigenic+variation+system+is+attenuated+in+the+rabbit+model+of+syphilis%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Treponema pallidum subsp. pallidum with an artificially impaired TprK antigenic variation system is attenuated in the rabbit model of syphilis.</a> bioRxiv. , 524629(2023).</li>
<li>Fieldsteel, A. H., Becker, F. A., Stout, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+survival+of+virulent+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+cell-free+and+tissue+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Prolonged survival of virulent Treponema pallidum (Nichols strain) in cell-free and tissue culture systems.</a> Infect Immun. 18, 173-182 (1977).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 6th Edition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22U.S.+Department+of+Health+and+Human+Services%2C+Centers+for+Disease+Control+and+Prevention%2C+National+Institutes+of+Health%22">U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health</a>. , (2020).</li>
<li>Norris, S. J., Miller, J. N., Sykes, J. A., Fitzgerald, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+oxygen+tension%2C+sulfhydryl+compounds%2C+and+serum+on+the+motility+and+virulence+of+Treponema+pallidum+%28Nichols+strain%29+in+a+cell-+free+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Influence of oxygen tension, sulfhydryl compounds, and serum on the motility and virulence of Treponema pallidum (Nichols strain) in a cell- free system.</a> Infect Immun. 22 (3), 689-697 (1978).</li>
<li>Cox, C. D., Barber, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+uptake+by+Treponema+pallidum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Oxygen uptake by Treponema pallidum.</a> Infect Immun. 10 (1), 123-127 (1974).</li>
<li>Magnuson, H. J., Eagle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minimal+infectious+inoculum+of+Spirochaeta+pallida+%28Nichols+strain%29%2C+and+a+consideration+of+its+rate+of+multiplication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The minimal infectious inoculum of Spirochaeta pallida (Nichols strain), and a consideration of its rate of multiplication in vivo.</a> Am J Syph. 32, 1-18 (1948).</li>
<li>Cumberland, M. C., Turner, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rate+of+multiplication+of+Treponema+pallidum+in+normal+and+immune+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Syph%22%5BJournal%5D)">The rate of multiplication of Treponema pallidum in normal and immune rabbits.</a> Am J Syph. 33, 201-211 (1949).</li>
<li>Norris, S. J., Edmondson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+multiplication+and+subculture+of+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+in+a+tissue+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the multiplication and subculture of Treponema pallidum subsp. pallidum in a tissue culture system.</a> Infect Immun. 53, 534-539 (1987).</li>
<li>Baseman, J. B., Nichols, J. C., Rumpp, O., Hayes, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum+from+infected+rabbit+tissue%3A+resolution+into+two+treponemal+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum from infected rabbit tissue: resolution into two treponemal populations.</a> Infect Immun. 10, 1062-1067 (1974).</li>
<li>Hanff, P. A., Norris, S. J., Lovett, M. A., Miller, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Treponema+pallidum%2C+Nichols+strain%2C+by+Percoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sex+Transm+Dis%22%5BJournal%5D)">Purification of Treponema pallidum, Nichols strain, by Percoll density gradient centrifugation.</a> Sex Transm Dis. 11, 275-286 (1984).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>10x Earle' s Dengeli Tuzlar, Mg2+, Ca2+</td><td>Gibco</td><td>14155063</td><td></td></tr><tr><td>15 ve 50 mL konik steril tek kullanımlık santrifüj tüpleri&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2 mL kriyojenik şişeler&nbsp;</td><td>Corning</td><td>430659</td><td></td></tr><tr><td>T. pallidum yetiştirme için 6 oyuklu hücre kültürü plakaları&</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td>Plakaların düşük buharlaşma kapaklarına sahip olması gerekir.</td></tr><tr><td>%70 etanol</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>75 cm2 havalandırmalı kapaklı doku kültürü şişeleri</td><td>Corning</td><td>43061U</td><td></td></tr><tr><td>%93,5 nitrojen, %5 CO2 ve %1,5 oksijen ön dengeleme ortamı ve kültürleri için</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr> %<tr><td>95 nitrojen ve %5 CO<>sub2 ortam ve kültürler için</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu düşük buharlaşma berrak, düz tabanlı doku kültürü ile tedavi edilmiş mikroplakalar</td><td>Corning Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>200 ul kapasiteli ayarlanabilir çok kanallı pipet&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>İsteğe bağlı, ancak klonlama için çok yararlı</td></tr><tr><td>Hücre kültürü sınıfı su</td><td>Sigma</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>CMRL 1066, L-Glutamin veya Fenol Kırmızısı olmadan</td><td>ABD Biyolojik</td><td>C5900-03A</td><td></td></tr><tr><td>CO2 tri-gaz ve doku kültürü inkübatörleri için&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kriyojenik sıvı nitrojen hücre kültürü depolama tankı</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>D-glukoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık filtre üniteleri, 0.2 & m, > 100 mL kapasiteli</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık pipetler: 25 mL, 10 mL, 5 mL, aspirasyonlu</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DL-Ditiyotreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td></td></tr><tr><td>DMSO (steril hücre kültürü sınıfı)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Eagle ' s MEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4655</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu, ısı inaktive edilmiş&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135</td><td>Bu ürünü şiddetle tavsiye ediyoruz. Farklı bir marka veya katalog numarası kullanılıyorsa T. pallidum kültür uyumluluğu için ön tarama yapılmalıdır.</td></tr><tr><td>-70 ° C'yi muhafaza edebilen dondurucu; C veya -80 & derece; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>T. pallidum depolamak için bunun yerine sıvı nitrojen deposu kullanılabilir</td></tr><tr><td>Dondurma ortamı (Sf1Ep ortamı + %10 [h/v] DMSO)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Uygun bağlantı parçalarına sahip gaz tüpleri</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>GasPak 150 bacalı anaerobik kavanoz (Brewer Jar)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-816</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>N/A N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thoma kararlarına sahip helber sayma odaları</td><td>Hawksley Tıbbi ve Laboratuvar Ekipmanları</td><td></td><td>T. pallidum</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A&nbsp; Sf1Ep hücre kantitasyonu</td></tr><tr><td>için İnkübatör tank anahtarı</td><td>NuAire&nbsp;</td><td>NU-1550 TankGuard Otomatik CO2 İnkübatör Tank Anahtarı</td><td>İsteğe bağlı, ancak uygun O2 koşullarının korunmasında çok yardımcı.</td></tr><tr><td>Faz kontrast optikli ters mikroskop</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Sf1Ep hücre kültürlerini görüntülemek için</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>L-Histidin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Karanlık alan kondansatörlü mikroskop</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Mikroskop 40x objektife ve 15x göz merceğine sahip olmalıdır.</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3183</td><td></td></tr><tr><td>Aspiratör için çok kanallı adaptör&nbsp;</td><td>Integra</td><td>155520</td><td>İsteğe bağlı, ancak</td></tr><tr><td>NaHCO3 (% 7.5)</td> klonlamak için kullanışlıdır <td>Sigma-Aldrich</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Tri-gaz inkübatörü için nitrojen</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7017</td><td></td></tr><tr><td>Sf1Ep (NBL-11) hücreleri</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu</td><td>CCL-68</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>Steril PBS (kalsiyum klorür ve magnezyum klorür olmadan)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Steril reaktif rezervuarları, 50 veya 100 mL boyutunda</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>T. pallidum numune, dondurulmuş veya taze&nbsp;</td><td></td><td></td><td>bir tavşan enfeksiyonundan veya in vitro kültürden</td></tr><tr><td>Doku kültürü inkübatörü 37 ° C'de tutulur; C, %5 CO2</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tri-gaz doku kültürü inkübatörü 34 ° C'de tutulur; C, %5 CO2, %1.5 O2</td><td>Thermofisher</td><td>Heracell & trade; VIOS 160i Tri-Gaz CO2 İnkübatörü</td><td>İsteğe bağlı; bunun yerine anaerobik kavanozlar kullanılabilir (bkz. Ref. 17)</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA çözeltisi&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>Vakum kaynağı (örn. ev vakumu), vakum tüpü, vakum göstergesi ve konektörler</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Su, hücre kültürü için uygun, filtreyle sterilize edilmiş, saflaştırılmış</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W3500</td><td>Orta hazırlık için önerilir; kültür değişkenliğini azaltır</td></tr></tbody></table>

frengi spiroketi treponema pallidum'un İn vitro yetiştiriciliği için prosedürler

Procedures for In Vitro Cultivation of Treponema pallidum, the Syphilis Spirochete

Açıklanan koşulları kullanarak, T. pallidum tipik olarak %&gt;90 motiliteyi korur ve durağan faza girmeden önce yaklaşık 7 gün boyunca 33 saat ila 45 saatlik bir ikiye katlama süresi ile logaritmik olarak çoğalır (Şekil 3). 1 hafta boyunca, spiroketler yaklaşık 4-5 ikiye katlanırlar (Şekil 4). ). Ek olarak, farklı T. pallidum suşları farklı oranlarda büyüyebilir. SS14 grubu T. pallidum'un suşları, Nichols grubu 17'ninkinden daha yavaş ikiye katlanma sürelerine sahip olma eğilimindedir.
Kültürlerin beslenmesi kültür süresini birkaç gün uzatabilir, ancak Sf1Ep hücre tabakası genellikle bir haftalık kültürden sonra başarısız olur. Ayrıca, treponemler yaklaşık 5 x 107 / mL'lik bir organizma üst sınırına ulaşır. 7 günlük aralıklarla aktarılan kültürler tipik olarak çok az gecikme fazı ile veya hiç gecikme fazı olmadan logaritmik çarpmaya devam eder. Durağan fazdaki organizmaların geçmesi genellikle zorlaşır.
Çoğu T. pallidum , Sf1Ep hücrelerine bağlanır. Bununla birlikte, süpernatantta, canlılığı ve çoğalmayı kontrol etmek için orta numunelerin periyodik olarak çıkarılabileceği kadar T. pallidum kalır. Dikkatli bir miktar tayini gerekiyorsa, çıkarılan besiyerinin hacmi ölçülmeli, T. pallidum sayısı ölçülmeli ve çıkarılan toplam organizma sayısı hasattaki son sayımlara eklenmelidir.
Önceki çalışmalarda, klonlama etkinliği (aşılanan organizma başına pozitif kültür sayısı) oyuk başına aşılanan 2 T. pallidum için .5 ve oyuk başına aşılanan 0.5 T. pallidum için %6.7 idi27. Bu nedenle, herhangi bir pozitif kuyunun, bu aşılardan herhangi birinde tek bir organizmanın büyümesini temsil etmesi muhtemeldir. Bununla birlikte, ortaya çıkan popülasyonların klonalitesi, ana kültürde heterojen olan bölgelerde homojenlik için kültürün incelenmesiyle doğrulanmalıdır. Kültürün izojenik olduğunu göstermenin en kesin yolu, tüm genom dizilemesidir27.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig01.jpg"> Şekil 1: T. pallidumin vitro kültivasyon prosedürünün akış şeması. Bu rakam Edmondson ve Norris'in (2021)19 izniyle yeniden basılmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig02.jpg"> Şekil 2: T. pallidum kültür reaktiflerini düşük oksijenli bir ortama dengelemek için sistemin şeması. Bir Brewer kavanoz havalandırması, bir T-eklemi aracılığıyla bir vakum kaynağına (ev vakumu gibi) ve özel gaz karışımları içeren gaz silindirlerine (%5 CO2, denge nitrojeni ve% 1,5 O2,% 5 CO2, denge azotu) bağlanır. Sıralı bir vakum ölçer, kavanozda çekilen vakumu ölçer. Vakum, kavanozda yaklaşık -58 kPa'ya kadar çekilir. Boşaltılan kavanoz daha sonra yavaşça gaz karışımları ile yeniden doldurulur. Brewer kavanozu üç kez %5 CO2<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66880/66880fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/66880fig04large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%201.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66880/Table%202.xlsx" target="_blank"></a>

Frengi Spiroketi Treponema pallidum'un İn Vitro Yetiştiriciliği için Prosedürler

For over a century, Treponema pallidum subsp. pallidum, the spiral-shaped bacterium that causes syphilis, could only be propagated by inoculation and ...

procedures-for-vitro-cultivation-treponema-pallidum-syphilis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Eggers, C. H. Lyme hastalığı spiroketi Borrelia burgdorferi'nin faj aracılı genetik manipülasyonu. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, bir antibiyotik direnç geni taşıyan uyuyan bakteriyofaj DNA'sı ile tasarlanmış genetiği değiştirilmiş bir Borrelia burgdorferi kültürünün hazırlanmasını göstermektedir. Antibiyotik seçimi ve inkübasyonunu takiben, kimyasal bir indükleyici DNA hasarını tetikleyerek direnç genini içeren yeni viryonların eksizyonuna, replikasyonuna ve montajına yol açar. İkinci...

Viral Partikül Üretimi için Borrelia burgdorferi Kültürlerinin Hazırlanması ve İndüksiyonu

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

Hücre içi M. tuberculosis büyümesinin hızlı ve etkili bir şekilde ölçülmesi, tüberküloza (TB) karşı gelişmiş tedavilerin sürdürülmesi için çok önemlidir. Bu protokol, aday konakçı tarafından yönlendirilen tedavilerle tedavi edilen makrofajlarda Mtb büyümesini ölçmek için otomatik bir sıvı kültür sistemi kullanan et suyu bazlı bir kolorimetrik tespit testini tanımlar.

Tüberküloz için Ev Sahibi Tarafından Yönlendirilen Tedavilerin Preklinik Testlerinde Kullanılmak Üzere Otomatik Bir Kültür Sistemi

Toprağın opaklığı nedeniyle, kurucu mikroplar arasındaki etkileşimler hücresel çözünürlükle kolayca görselleştirilemez. Burada, mantar-mikrobiyal etkileşimleri araştırmak için yeni fırsatlar sunan iki mikroakışkan araç sunulmaktadır. Cihazlar çok yönlü ve kullanımı kolaydır, bu da hücresel düzeyde yüksek mekansal zamansal kontrol ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar.

Hücresel Düzeyde Mantar-Mikrobiyal Etkileşimleri Probalamak için Mikroakışkan Araçlar

Bakteriyofajın DNA'yı bakteri hücreleri arasında hareket ettirme yeteneği, onları bakteriyel konakçılarının genetik manipülasyonu için etkili araçlar haline getirir. Burada, Borrelia burgdorferi'nin bir bakteriyofajı olan φBB-1'i, Lyme hastalığı spiroketinin farklı suşları arasında heterolog DNA'yı dönüştürmek için indüklemek, iyileştirmek ve kullanmak için bir metodoloji sunulmaktadır.

Lyme Hastalığının Faj Aracılı Genetik Manipülasyonu Spiroket Borrelia burgdorferi

İn vitro kültür, canlı bakterilerin varlığı için doğrudan bir tespit yöntemidir. Bu protokol, Borrelia burgdorferi sensu lato kompleksi, tekrarlayan ateş Borrelia türleri ve Borrelia miyamotoi dahil olmak üzere çeşitli Borrelia spiroketlerinin kültürü için yöntemleri açıklamaktadır. Bu türler titiz ve yavaş büyür, ancak kültürlenebilir.

Borrelia burgdorferi Sensu Lato Kompleksi ve Tekrarlayan Ateş Borrelia'dan Spiroketlerin Yetiştirme Yöntemleri

Elektroporasyon, eksojen DNA'yı Rickettsia cinsine sokmak için hızlı, geniş çapta benimsenmiş bir yöntemdir. Bu protokol, Rickettsia cinsindeki zorunlu hücre içi bakterilerin dönüşümü için yararlı bir elektroporasyon yöntemi sağlar.

Kene Hücre Hatlarında Floresan Protein İfade Eden Mekik Vektörü ile Rickettsia spp.'yi Dönüştürmek için Bir Elektroporasyon Yöntemi

Bu çalışma, Chagas hastalığından sorumlu patojen olan Trypanosoma cruzi'nin üç in vitro yaşam döngüsü aşamasında ultrayapı genişletme mikroskobunu gerçekleştirmek için ayrıntılı bir protokol göstermektedir. Hücre iskeleti proteinleri ve pan-proteom etiketleme için optimize edilmiş tekniği dahil ediyoruz.

Ultrastrüktürel Genleşme Mikroskobu in Üç İn Vitro Yaşam Döngüsü Aşamaları Trypanosoma cruzi

Bu makalede, 8 kuyu odasına slayt içinde yetişen bir bakteriyel biyofilm oluşumu ve görselleştirme için prosedürü anlatılmaktadır.

8-iyi Odası Slayt in vitro Biyofilm Oluşumu

Cercarial Dönüşüm ve In vitro Yetiştiriciliği Schistosoma mansoni Schistosomules

Öğrenin Treponema pallidum'un in vitro yetiştiriciliği için Sf1Ep hücreleriyle ko-kültür yöntemini. Bu ölçeklenebilir teknik, frengi patojeninin genetik manipülasyonu ve antibiyotik taraması için yeni olanaklar sunar.

Frengi Spiroketi Treponema pallidum'un İn Vitro Yetiştiriciliği için Prosedürler

Daha fazla video keşfet