Name: α-Sinüklein Agregatlarının İntranazal Uygulama Tekniği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: Öğrenin, fare modelinde intranazal yöntemle α-sinüklein agregatlarının burun mukozasından koku soğanlarına prion benzeri yayılımını inceleyin. Bu teknik Parkinson hastalığı patolojisinin kökenini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>α-Sinüklein Yayılımı: Parkinson Hastalığında İntranazal Uygulama

<ol><li>Tysnes, O. B., Storstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).</li>
<li>Goedert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+and+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases.</a> Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).</li>
<li>Conway, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+oligomerization%2C+not+fibrillization%2C+is+a+shared+property+of+both+alpha-synuclein+mutations+linked+to+early-onset+Parkinson%27s+disease%3A+implications+for+pathogenesis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).</li>
<li>Braak, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+of+brain+pathology+related+to+sporadic+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease.</a> Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).</li>
<li>Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Parkinson%27s+disease%3A+possible+routes+by+which+vulnerable+neuronal+types+may+be+subject+to+neuroinvasion+by+an+unknown+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen.</a> J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKordower%2C+JH+%22Nat+Med%22">Nat Med</a>. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+%CE%B1-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338, 949-953 (2012).</li>
<li>Desplats, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inclusion+formation+and+neuronal+cell+death+through+neuron-to-neuron+transmission+of+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+disease+primate+model+with+%CE%B1-Synuclein+propagation+from+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb.</a> Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inoculation+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+into+the+mouse+gastrointestinal+tract+induces+Lewy+body-like+aggregates+in+the+brainstem+via+the+vagus+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+transneuronal+propagation+of+alpha-synucleinopathy+triggered+in+olfactory+bulb+mimics+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease.</a> J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).</li>
<li>Rey, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+aggregates+after+olfactory+bulb+injection+of+%CE%B1-synuclein+fibrils+is+associated+with+early+neuronal+loss+and+is+reduced+long+term%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term.</a> Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).</li>
<li>Uemura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+spread+from+olfactory+bulb+causes+hyposmia%2C+anxiety%2C+and+memory+loss+in+BAC-SNCA+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice.</a> Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).</li>
<li>Saito, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+pathology+involves+the+olfactory+cells+in+Parkinson%27s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mov+Disord%22%5BJournal%5D)">Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders.</a> Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).</li>
<li>De Luca, C. M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+RT-QuIC+seeding+activity+for+%CE%B1-synuclein+in+olfactory+mucosa+samples+of+patients+with+Parkinson%27s+disease+and+multiple+system+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy.</a> Transl Neurodegener. 8, 24(2019).</li>
<li>Stefani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-synuclein+seeds+in+olfactory+mucosa+of+patients+with+isolated+REM+sleep+behaviour+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder.</a> Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).</li>
<li>Ucciferri, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+central+nervous+system+inflammation%2C+demyelination%2C+and+axon+injury+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (204), e65738(2024).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+%CE%B1-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Sawamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-dose+intranasal+administration+of+%CE%B1-syn+PFFs+induce+lewy+neurite-like+pathology+in+olfactory+bulbs%5BTitle%5D)+AND+%22Parkinsonism+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs.</a> Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).</li>
<li>Guo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+administration+of+%CE%B1-synuclein+preformed+fibrils+triggers+microglial+iron+deposition+in+the+substantia+nigra+of+Macaca+fascicularis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis.</a> Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).</li>
<li>Macdonald, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembly+of+%CE%B1-synuclein+and+neurodegeneration+in+the+central+nervous+system+of+heterozygous+M83+mice+following+the+peripheral+administration+of+%CE%B1-synuclein+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds.</a> Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).</li>
<li>Abdelmotilib, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B1-Synuclein+fibril-induced+inclusion+spread+in+rats+and+mice+correlates+with+dopaminergic+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).</li>
<li>Tarutani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fragmented+pathogenic+%CE%B1-Synuclein+seeds+on+prion-like+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation.</a> J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).</li>
<li>Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+prodromal+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal model for prodromal Parkinson's disease.</a> Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).</li>
<li>Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+procedure+for+removal+and+inactivation+of+alpha-Synuclein+assemblies+from+laboratory+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials.</a> J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).</li>
<li>Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+efficacy+of+different+procedures+that+remove+and+disassemble+alpha-synuclein%2C+tau+and+A-beta+fibrils+from+laboratory+material+and+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces.</a> Sci Rep. 8, 10788(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Hepsi Bir Arada Floresan Mikroskobu BZ-X710</td><td>KEYENCE</td><td>N/A</td><td>Hepsi Bir Arada mikroskop</td></tr><tr><td>Ampisilin Sodyum Tuzu</td><td>Nacalai tesque</td><td>02739-32</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor II</td><td>Sonicbio</td><td>BR2006A</td><td>Su banyosu tipi sonikatör.</td></tr><tr><td>Butorphanol tartrate</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>WAK-52850</td><td></td></tr><tr><td>Selüloz tüp</td><td>MISUMI</td><td>UC20-32-100</td><td></td></tr><tr><td>DeepWellMaximizer</td><td>TAITEC</td><td>MBR-022UP</td><td>Çalkalayıcı</td></tr><tr><td>DynaYetkin Hücreler Zip BL21 (DE3)</td> <td>BioDynamics Laboratory Inc.</td><td>DS255</td><td>Yetkili hücre</td></tr><tr><td>Entellan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>107961</td><td>Mikroskopi için hızlı montaj ortamı</td></tr><tr><td>Graefe Ekstra İnce Forseps Kavisli Tırtıklı</td><td>FST</td><td>11152-10&nbsp;</td><td>Forseps</td></tr><tr><td>Sertleştirilmiş İnce Makas</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>makas</td></tr><tr><td>Histofine Basit leke faresi MAX-PO (R)</td><td>Nichirei Bioscience</td><td>414341</td><td>Evrensel İmmüno-peroksidaz Polimeri, anti-Tavşan</td></tr><tr><td>ImageJ ver 1.52p</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://imagej.net/</td></tr> <tr><td>innova4200</td><td>New Brunswick bilimsel</td><td>9105085</td><td>İnkübatör çalkalayıcı</td></tr><tr><td>İzopropil-&beta;- D-thiogalactopyranoside</td><td>Nacalai tesque</td><td>19742-94</td><td></td></tr><tr><td>LB et suyu, Lennox</td><td>Nacalai tesque</td><td>20066-24</td><td></td></tr><tr><td>Leica EG 1150 H</td><td>Leica</td><td>14 0388 86 108</td><td>Modüler Doku Gömme Merkezi</td></tr><tr><td>Leica TP 1020</td><td>Leica</td><td>14 0422 85108</td><td>Otomatik Doku İşlemcisi&nbsp;</td></tr><tr><td>Medetomidin</td><td>Fuji Film</td><td>135-17473</td><td></td></tr><tr><td>Mikrom HM325 Döner Mikrotom</td><td>Termo Bilimsel</td><td>902100</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Maruishi Seiyaku</td><td>4987-211-76210-0</td><td></td></tr><tr><td>Yeni hematoksilen Tip G</td><td>Muto</td><td>65-9197-38</td><td>Hematoksilen çözeltisi</td></tr><tr><td>Damar D tipi için normal kanatlı iğne, 25G</td><td>TERUMO</td><td>NN2332R</td><td>25G iğne</td></tr><tr><td>Optima TLX Ultrasantrifüj</td><td>Beckman Couler</td><td>8043-30-1197</td><td>Ultrasantrifüj</td></tr><tr><td>P10 pipet</td><td>Gilson</td><td>FA10002P</td><td></td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Leica</td><td>39601095</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehit</td><td>Nacalai tesque</td><td>30525-89-4</td><td></td></tr><tr><td>Peroksidaz Leke DAB Kiti</td><td>Nacalai tesque</td><td>25985-50</td><td></td></tr><tr><td>Pirece BCA Protein Test Kitleri</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>BCA testi</td></tr><tr><td>pRK172</td><td>Addgene</td> <td># 134504</td><td>Plazmid</td></tr><tr><td>Q-Sefaroz Hızlı Akış.</td><td>cytiva</td><td>17051001</td><td>İyon değiştirici reçine</td></tr></tbody></table>

α-sinüklein agregatlarının İntranazal uygulama tekniği

Technique for Intranasal Administration of &#945;-Synuclein Aggregates

Şekil 3, OB'deki α-Syn agregalarının birkaç örneğini göstermektedir. Bu çalışmada tek taraflı burun deliğine α-Syn agregatları uygulandı. İki burun boşluğu nazal septum ile ayrılır ve her OB, koku alma duyu nöronlarını her bir burun boşluğuna ayrı ayrı yansıtır. Bu nedenle, karşı taraftaki OB bir kontrol olarak kullanılabilir.
1 ve 3 ay sonra tedavi edilen taraftaki OB'de P-α-Syn patolojisi gözlenmedi (Şekil 3A, B). Tedavi edilen taraftaki glomerüllerde 6 ve 12 ay sonra Lewy nörit benzeri p-α-Syn agregatları gözlendi. (Şekil 3C,D,F,G). Bu agregalar, kontrol tarafındaki OB'de gözlenmedi (Şekil 3E).
α-Syn patolojisini, α-Syn agregatlarını sayarak veya ImageJ (Table of Materials) kullanarak boyutu vb. inceleyerek tahmin edebiliriz. Örneğin, daha önce bu model20'deki α-Syn toplamlarının sayısını saydık ve raporladık. Tedavi edilen taraftaki OB'de, OB'deki Lewy nörit benzeri agregalar 12 ay boyunca önemli ölçüde artmıştır (tek yönlü ANOVA, ardından Dunnett testi, p &lt; 0.01; Şekil 3H). Kontrol tarafındaki OB'de birkaç α-Syn agregası vardır.
Önceki bir çalışma, fare beynine enjekte edilen PFF'lerin bir hafta içinde bozulduğunu ve endojen fare α-Syn'nin α-Syn agregatlarınadönüştürüldüğünü gösterdi 19. Bu çalışmada, zaman içinde α-Syn patolojisindeki artış, endojen fare α-Syn'in PFF'lerin tek doz intranazal uygulaması ile α-Syn agregatlarına dönüştürüldüğünü göstermektedir. Bu sonuçlar, α-Syn patolojisinin koku alma mukozasından OB'ye yayılabileceğini gösterdi.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig01.jpg"> 
Şekil 1: Fare burun boşluğu uygulama yöntemi. (A) Fare, başı hafifçe aşağı doğru eğik olacak şekilde sırtüstü pozisyonda konumlandırılmıştır. (B) Farenin burun delikleri sarı ok uçlarıyla gösterilir. (C, D) α-Syn fibril çözeltisi farenin burun deliğine (C, kırmızı ok) damlatılır ve hızlı bir şekilde solunur (D, kırmızı oklar). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig02.jpg"> 
Şekil 2: Bozulmamış koku ampullerini elde etmek için adımların ana hatları. (A) Makas kullanarak kafatası kemiğini sagittal ve lateral olarak kesin (sarı çizgi çizgisi). (B) Koku soğancıkları (OB'ler) üzerindeki kafatası kemiğini tamamen çıkarın. (C) Başınızı ters çevirin ve beyni dikkatlice çıkarın. Beyin sinirlerini kesin. (D) Kafatası kemiğine bağlı koku alma sinirlerini kesin. (E) Sağlam OB'leri olan tüm beyin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66943/66943fig03.jpg"> 
Şekil 3: Koku soğancığının glomerüllerindeki P-α-Syn agregatları. (AG) P -α-Syn (EP1536Y) OB'nin immünohistokimyası (AD) tedavi edilen tarafta intranazal uygulamadan 1, 3, 6 ve 12 ay sonra (sırasıyla 1 m, 3 m, 6 m ve 12 m) ve (E) intranazal uygulamadan 12 ay sonra kontrol tarafında. (C, D) Glomerüllerin etrafında Lewy nörit benzeri iplik benzeri α-Syn agregaları görülür. (F, G) Büyütülmüş görüntüler, Lewy nörit benzeri p-α-Syn'in intranazal uygulamadan 6 ve 12 ay sonra yüksek büyütmeli görüntüleridir. (H) Tedavi edilen ve kontrol taraflarında OB'de Lewy nörit benzeri p-α-Syn birikiminin miktarı (n = 4-5). Grafikler ortalama ± SEM'i göstermektedir. Tek yönlü ANOVA ve ardından Dunnett'in testi; **&lt;0.01. Bu rakam önceki bir rapora göre değiştirilmiştir20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66943/66943fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

α-Sinüklein Agregatlarının İntranazal Uygulama Tekniği

Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by the presence of Lewy bodies, which are aggregates of &#945;-synuclein ...

technique-for-intranasal-administration-of-synuclein-aggregates

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Parkinson hastalığı, pestisitlere maruz kalma ile ilgili olmuştur. Burada bir gastrik tüp istenen konsantrasyon ve enterik sinir sistemi alfa-sinüklein birikimi etkilerini analiz etmek için bir yöntem kullanarak pestisitler sağlamak için bir yöntem gösteriyor.

Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi

Intranazal beyin hedefleme amacıyla uyanık farelerde için ilaç uygulamak için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, uzun anestezi olmadan ilacın intranazal uygulama kullanarak dönemleri, ve minimal sistemik maruz kalma ile burun-için-beyin teslimi üzerinde dozaj tekrar sağlar.

Uyanık Fare CNS Therapeutics İntranazal İdaresi

Bu video, alfa-sinüklein (αS) agregatları ile tedavi edilen nöronların immün boyamayı göstermektedir. Nöronlar ilk olarak αS agregatları ile muamele edilir. Daha sonra sabitlenir, geçirgen hale getirilir ve bir bloke edici çözelti ile muamele edilir. Birincil antikorlar eklenir, ardından floresan olarak işaretlenmiş bir ikincil antikorlar ve bir nükleer leke gelir. Numune daha sonra monte edilir ve mikroskop altında gözlemlenir.

Alfa-Sinüklein Agregatları ile Tedavi Edilen Nöronların İmmün Boyanması

Bu video, nöroinflamasyonu indüklemek için alfa-sinüklein fibrillerinin bir fareye enjeksiyonunu göstermektedir. Fibriller, mutasyona uğramış alfa-sinüklein proteinlerini eksprese eden transgenik bir fareye intraperitoneal olarak enjekte edilir. Merkezi sinir sistemine ulaştıktan sonra, fibriller nöronlara girer ve mutasyona uğramış proteinlerin toplanmasını indükler. Agregalar komşu nöronlara, mikroglialara ve astrositlere yayılır. Agregaların tanınması, nöroinflamasyonu indüklemek için...

Alfa-sinüklein Fibrillerinin Enjeksiyonu ile Farelerde Nöroinflamasyonun İndüksiyonu

Kaynak: Ullah, I., et.al. Merkezi sinir sistemine intranazal siRNA iletimi sırasında farelerin yerleştirilmesi için bir konumlandırma cihazı. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, özel bir konumlandırma cihazı kullanarak fare beynine nöron hedefleyen peptit-siRNA kompleksleri iletmek için hassas bir intranazal uygulama tekniğini göstermektedir. Anestezi uygulanmış fareler, akciğer drenajını önlerken siRNA inhalasyonunu optimize etmek için baş aşağı ve ileri pozisyonda sabitlenir. Hedefleme peptidi,...

Bir konumlandırma cihazı kullanılarak siRNA'nın fare beynine intranazal iletimi

Kaynak: Kanazawa, T., et al. Burundan beyine ilaç dağıtımını değerlendirmek için inhalasyon anestezisi altında intranazal uygulama için yeni yöntemler. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, burundan beyine ilaç dağıtımını sağlamak için anestezi uygulanmış bir farede radyoaktif işaretli ilaçların intranazal uygulamasını göstermektedir. İlaçların nazal epitelden nasıl geçtiğini ve beyne ulaşmak için nöronal yollardan nasıl geçtiğini ve ayrıca siliyer hareketin ilaç tutulmasını ve klerensini nasıl...

Farelerde burundan beyine ilaç iletimi için pipet ve ters kanülasyon yoluyla intranazal ilaç uygulaması

(+/- M83: GFAP -Luc +/-) Tg periton ya da dil içine alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel enjeksiyon ailesel A53T mutasyon ve ateş böceği lusiferaz ile insan alfa-sinükleinin eksprese eden farelerden, nöro de dahil olmak üzere, nevropatlojinin uyarabilir bunların merkezi sinir sistemindeki.

Alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel Aşılama sonrası Tranjenik Farelerde Nöroinflamasyondan Biyoparlaklık Görüntüleme

Bu iletişim kuralı, Alfa-synuclein oluşumu çoğaltır hücre tabanlı bir sistem içinde vivoagrega sağlamak için hedeftir. Hücre içi Alfa-synuclein kapanımlar birincil nöronlarda tarafından içselleştirilmesi numaralı seribaşı ve eksojen yayılması hastalıklı Alfa-synuclein transgenik fareler izole yerli microsomes ilişkili Alfa-synuclein toplamları yönetilen.

Microsomes ilişkili Alpha-synuclein toplamları için birincil nöronlar eksojen yönetim olarak güçlü hücre modeli liflerinde oluşumu

Burada, merkezi sinir sisteminde etkili gen susturma sağlayan beyin hedeflemepeptipeptipeptik peptid-siRNA formülasyonunun intranazal uygulaması için farelerin uygun yerleştirilmesine olanak tanıyan bir fare konumlandırma cihazı kullanarak bir protokol salıyoruz.

Merkezi Sinir Sistemine İntranazal siRNA Teslimi Sırasında Farelerin Yerleştirilmesi için Bir Konumlandırma Cihazı

Bu makalenin amacı, monomerik Alfa-synuclein, sonraki kalite kontrol ve önceden biçimlendirilmiş liflerinde in vivo kullanımı liflerinde nesil için gerekli adımları özetlemesidir.

Monomers ve Use In vivo Alfa-Synuclein önceden biçimlendirilmiş fibrils üretimi

Bu protokol, Rayleigh parçalanmasını viral olmayan mRNA vektörlerinin aerosolize edilmesi için hafif bir süreç olarak sunar. Aerosol mRNA vektörleri için bölgesel birikim, Alberta İdealize Burun Girişi (AINI) modeliyle değerlendirilmiştir. İnsan akciğer hücrelerinde yeşil floresan protein (GFP) ekspresyonu, aerosol sonrası mRNA vektörlerinin fizikokimyasal ve biyolojik işlevlerinin korunmasını temsil eder.

Rayleigh Parçalanma Aerosolleri Yoluyla MRNA Poliplekslerinin Burun İçinden Ulaşılması: Burun Biriktirme ve Fonksiyonel Test İçin Vitro Yöntem

Öğrenin, fare modelinde intranazal yöntemle α-sinüklein agregatlarının burun mukozasından koku soğanlarına prion benzeri yayılımını inceleyin. Bu teknik Parkinson hastalığı patolojisinin kökenini anlamaya yardımcı olur.

α-Sinüklein Agregatlarının İntranazal Uygulama Tekniği

Daha fazla video keşfet