Kümülüs-Oosit Komplekslerinin Hemen Kısmi Uzaklaştırılması: İn Vitro Fertilizasyonun Hızlı Gözlemi İçin Rafine Bir Yaklaşım

Araştırmamız, kümülüs oositinin hemen kısmi olarak çıkarılmasının döllenmeyi artırıp artırmadığını değerlendirerek IVF sonuçlarını iyileştirmeye odaklanmaktadır. Gözlem verimliliği, döllenme ırkını ve embriyo kalitesini etkiler ve laboratuvar prosedürlerini optimize eder. Daha iyi klinik sonuçlar için IVF tekniklerini iyileştirmeyi amaçlıyoruz.

Kümülüsün medial parsiyel uzaklaştırılmasında oosit kompreslerinin önemli ölçüde arttığını, IVF'de döllenme gözleminin etkinliğini artırdığını tespit ettik. Bu, döllenme olaylarının değerlendirilmesinde zamanlamanın iyileştirilmesine ve potansiyel olarak embriyo kalitesinin ve IVF sonuçlarının optimize edilmesine yol açar. Protokolümüz, zaman içinde el yordamını azaltarak ve çevresel maruziyeti en aza indirerek ve potansiyel olarak embriyo kalitesini iyileştirerek IVF verimliliğini artırır.

Geleneksel tekniklere kıyasla akıcı ve etkili bir yaklaşım sunar. Başlamak için, oosit toplama kaplarını gece boyunca 37 santigrat derecede inkübatöre yerleştirin. 12 mililitre folikül manipüle edici ortamı gece boyunca 37 santigrat derecede 14 mililitre, yuvarlak tabanlı test tüplerinde inkübe edin.

Daha sonra tüpleri, oosit alımından 30 dakika önce önceden ısıtılmış test tüpü rafına aktarın. Daha sonra, 14 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir test tüpüne dokuz mililitre folikül manipüle edici ortam ekleyin ve gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Oosit toplama gününde, ortamın 4,5 mililitresini iki mililitre% 100 parafin yağı ile kaplı önceden inkübe edilmiş bir oosit toplama kabına aktarın.

Daha sonra bir oosit toplama kabına 4,5 mililitre döllenme ortamı ekleyin ve gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Daha sonra,% 100 parafin yağı ile kaplı altı santimetrelik bir tabağa bir mililitre gübreleme ortamı ekleyin. Cam pastör pipetlerinin uçlarını köreltmek ve yuvarlamak için, bunları yaklaşık beş saniye boyunca bir alkol lambasında yakın.

Pastör pipetlerinin ucuna, tırmalamadan tabağın dibine değecek şekilde bir emme başlığı takın. Folikül manipülasyon ortamı ile 10 santimetrelik tabaklarda pipetlerinizi geçerek camı durulayın. Kısaca, transvajinal ultrason rehberliğinde oositleri almak için 17 gauge bir iğne kullanın.

14 mililitrelik yuvarlak tabanlı test tüpünde toplanan foliküler sıvıyı 10 santimetrelik bir tabağa dökün. Çanağı sabit sıcaklıktaki bir platforma yerleştirin. Oositlerin varlığını doğrulamak ve olgunluklarını değerlendirmek için OCCC'yi stereo mikroskop altında gözlemleyin.

OCCC'de oosit olup olmadığını onaylayın ve oosit olgunluğunun ön değerlendirmesini yapın. Yuvarlak alevle parlatılmış pastör pipeti ile bir silikon aspirasyon pipetini önceden hazırlayın. Sol yüzük parmağınızla kültür kabını dokuz ila 10:00 konumunda nazikçe kaldırırken ve yaklaşık 15 derece sola eğerken OCCC'yi aspire edin.

Tabağın saat 11:00 konumunda aspire edilmiş OCCC'yi tükürürken, yavaşça yatay olarak sağa doğru uzatın. Daha sonra genişlemiş OCCC'nin etrafındaki granüloza hücrelerinin boyutunu gözlemleyin. Şimdi, uzun OCCC üzerinde uygun yerde hızlı bir şekilde aşağı doğru bir kesim ile fazla granüloz hücrelerini nazikçe çıkarmak için bir pastör pipeti kullanın.

Kesilen OCCC'yi, OCCC yıkama solüsyonu içeren bir toplama kabına aktarın. Kalan foliküler sıvıyı steril bir numune kabına dökün. Başlamak için, toplanan semen örneğinin sperm konsantrasyonunu, hareketliliğini ve morfolojisini bir ışık mikroskobu altında değerlendirin.

Daha sonra sperm peletini yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve döllenme ortamında iki kez yıkayın. İhtiyaç duyulana kadar %6 karbondioksit ve 37 santigrat derecede inkübe edin. Fazla granüloz hücrelerini çıkardıktan sonra, döllenme kabına altı ila sekiz OCCC ve bir mililitre dölleme ortamı ekleyin.

Döllenme kabında alındıktan yaklaşık iki ila üç saat sonra, tek bir damlacıkta modal spermatozoa ile tohumlama OCCC'leri. Kısa süreli döllenme için, OCCC'leri spermatozoa ile dört ila altı saat birlikte inkübe edin. İnkübasyondan sonra, oositleri çevreleyen kümülüs hücrelerini mekanik olarak çıkarın.

Hücrelerin tamamen çıkarılmasını sağlamak için oositlerden biraz daha küçük bir iç çapa sahip bir pipet kullanarak oositleri aspire edin. Döllenmeyi doğrulamak için iki polar cismin varlığını gözlemleyin. İkinci bir polar cisim gösteren oositler döllenmiş olarak kabul edilir.

Düzenli gübreleme için, döllenme değerlendirmesi için 18 ila 20 saatlik birlikte inkübasyondan sonra pipetleri kullanarak kümülüs hücrelerini çıkarın. Döllenmiş oositleri, oosit alımını takiben üç ila beş gün boyunca kültürleyin. Pronükleus sayısını belirlemek için tohumlamadan 20 saat sonra döllenmeyi değerlendirin.

Daha sonra, her bir zigotu orta boy bir damlacık içinde ayrı ayrı kültürleyin ve döllenme sonrası embriyoları bir bölünme ortamına aktarın. Üçüncü gün embriyolarını blastosit ortamına aktarın ve beşinci günde değerlendirin. Sürekli verileri ortalama ve standart sapma olarak raporlayın ve sıralı verileri oranlar olarak ifade edin.

Kısa süreli inseminasyon yapılan 47 hastadan hastaların yaşı ve alınan oosit sayısı açısından anlamlı bir fark gözlenmedi. Bölünme hızı, optimal embriyo hızı ve optimal blastosit oranında anlamlı bir fark bulunmamasına rağmen, OCC grubunun kısmi çıkarılmasında ortalama işlem süresi kontrol grubuna göre anlamlı olarak daha kısaydı. Geleneksel IVF uygulanan hastalarda, iki grup arasında hastaların yaşı ve alınan oosit sayısı açısından benzerlikler kaydedildi.

OCCC grubunun kısmi çıkarılmasında biraz daha kısa bir ortalama operasyon süresi kaydedilmesine rağmen, istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu. Önceki grupta olduğu gibi, bölünme oranı, optimal embriyo oranı ve optimal blastosit oranında önemli bir tutarsızlık tespit edilmedi.