Name: Hassaslaştırılmış Emisyonlu Förster Rezonans Enerji Transferi (SE-FRET) Kullanılarak 8 Kanal (LRRC8/VRAC) Aktivitesi İçeren Lösin Açısından Zengin Tekrarın İzlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Öğrenin, SE-FRET yöntemiyle LRRC8 anyon kanalı aktivitesini canlı hücrelerde izlemeyi. Bu teknik, ozmotik değişimler sırasında kanal düzenlemesini sürekli ve invaziv olmayan şekilde incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Elektrofizyoloji Olmadan LRRC8 Kanal Aktivitesini İzlemek için FRET Tabanlı Yöntem

8 (LRRC8) ailesi proteini içeren lösin açısından zengin tekrar heteromerlerinden oluşan iyon kanalları, omurgalı hücreleri boyunca bulunur ve çok çeşitli fizyolojik işlevlere katılır 1,2. İlk olarak hacim regüle anyon kanalları (VRAC'ler) veya hacim duyarlı dışa doğru doğrultucu kanallar (VSOR) olarak tanımlanan bu LRRC8 kanalları, hücresel düzenleyici hacim azalmasında çok önemli bir rol oynar 3,4. Klorür iyonlarının ve organik ozmolitlerin atılmasını kolaylaştırırlar, bunu ozmotik şişmeye yanıt olarak su akışı izler. Ozmotik stres yanıtındaki rollerinin ötesinde, hücresel hacim regülasyonundaki rolleri hücre proliferasyonu ve göçü, apoptoz, spermiyogenez ve epitel bütünlüğü ile ilişkilendirilmiştir 5,6,7. LRRC8 / VRAC aktivasyonu üzerine membran potansiyelinin değişmesinin, miyotüp farklılaşmasına8 ve pankreas β hücreleri 9,10,11 tarafından insülin sekresyonuna katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Ayrıca, LRRC8 kanalları, purinerjik sinyal molekülleri ATP ve cGAMP veya uyarıcı amino asit glutamat gibi çeşitli organik ozmolitleri iletir ve bu kanalları bağışıklık sisteminde hücre-hücre iletişimine veya glia-nöron etkileşimine yerleştirir 12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22. Floresein boyası, antibiyotik blasticidin S veya antikanser ilacı sisplatin gibi ksenobiyotikler bile LRRC8 kanalları 23,24,25 tarafından gerçekleştirilir.
LRRC8/VRAC aktivasyonuna yol açan sinyal iletimi hakkında çok sayıda rapor vardır 26,27,28. Bununla birlikte, mekanizma belirsizliğini korumaktadır ve literatür, spesifik fizyolojik sürece bağlı olabilecek çok çeşitli potansiyel mekanizmalar sunmaktadır. Bunlar, sitozolik iyon kuvvetindeki değişiklikleri, hücre iskeleti ile etkileşimi, zar bileşimini, G proteinlerini, redoks durumunu ve fosforilasyon kaskadlarını 2,27,29,30,31 içerir.
LRRC8/VRAC kanalları, fizyolojik olarak işlevsel kanallar 4,14,32 oluşturmak için LRRC8B-E paraloglarından en az biri LRRC8B E ile heteromerize olması gereken temel bir alt birim 3,4 olarak LRRC8A'yı içerir. Alt birim bileşimi, kanalın rektifikasyon ve depolarizasyona bağlı inaktivasyon 4,29,32,33,34, substrat özgüllüğü 15,17,20,21,24,35 ve bazı aktivasyon yolları 36,37 gibi biyofiziksel özelliklerini belirler. Kriyo-elektron mikroskobu (kriyo-EM) yapıları, LRRC8A homomerlerinin yanı sıra heteromerlerin heksamer38,39,40 olarak bir araya geldiğini, fonksiyonel kanalları oluşturan LRRC8A/LRRC8C kimeralarının ise heptamer41 olduğunu göstermektedir. Tüm LRRC8 proteinlerinin N-terminal kısmı, dört transmembran sarmal içerir ve C-terminal kısmı, lösin açısından zengin tekrarlara (LRRD) sahip bir alan içerir. Mevcut LRRC8 kompleks yapıları, sitozol 3,4,23'e uzanan LRRD'lerin, kanal geçitlemesi 34,42,43 sırasında konformasyonel yeniden düzenlemelere uğrayabileceğine dair kanıt sağlar. Bu fikir, floresan proteinlerin C-terminal füzyonunun bazal kanal aktivitesi14 ile sonuçlandığı ve nanocisimlerin alanlara bağlanmasının kanal aktivitesi44 ile modüle edebileceği bulgusu ile desteklenmektedir. Ayrıca, C-terminalinin konformasyonel değişiklikleri, kompleks içi Förster rezonans enerji transferi (FRET)45 ile gösterilmiştir.
İyon kanalı aktivitesini incelemek için en yaygın yöntem, moleküler tanımlamalarından47 önce VRAC'lerin araştırılmasında yaygın olarak uygulanan elektrofizyolojik ölçümlerdir46. Bununla birlikte, iletilen substratlarının (halojenür iyonları veya organik ozmolitler) ölçümü veya hücre hacmi48 üzerindeki etkisi de dahil olmak üzere, VRAC aktivitesini dolaylı olarak izlemenin çeşitli ek yolları vardır. Aslında, LRRC8 proteinlerinin VRAC olarak tanımlanması, halojenüre duyarlı bir floresan proteinin49 aktive edilmiş VRAC'ler 3,4 yoluyla hücreye giren iyodür ile söndürülmesine dayanan bir teste dayanıyordu. LRRC8/VRAC kanal aktivitesini izlemek için başka bir yöntem, diğer iyon kanallarında olduğu gibi 50,51,52,53 FRET 45'teki değişikliklerle gözlemlenebilen sitozolik alanların hareketini kullanır. Bu amaçla, donör olarak camgöbeği-floresan proteini (CFP)/mCerulean3 ve alıcı olarak sarı-floresan proteini (YFP)/mVenüs gibi FRET çiftleri olarak hizmet eden floresan proteinler, LRRC8 proteinlerinin C-terminaline kaynaştırıldı (Şekil 1). LRRC8 alt birimleri arasındaki kompleks içi FRET , alıcı fotoağartma deneyleri45 ile gösterilmiştir. Yıkıcı foto-ağartma yönteminden kaçınarak, zaman içindeki FRET değişiklikleri, temel olarak vericinin emisyon spektrumunun alıcının uyarma spektrumu ile örtüşmesi nedeniyle vericinin uyarılması üzerine alıcının duyarlı emisyonunun ölçüldüğü hassaslaştırılmış emisyon FRET (SE-FRET) ile izlendi. LRRC8 / VRAC aktivasyonu için bir uyaran olan hücre dışı hipotonisitenin uygulanması, SE-FRET yoğunluğunda45 geri dönüşümlü bir azalma ile sonuçlandı. Daha da önemlisi, hipotonik tedavi sırasında eşzamanlı tüm hücre yama kelepçesi ölçümleri ve FRET izlemesi, FRET'teki bu azalmanın gerçekten de LRRC8 / VRAC aktivasyonunuyansıttığını gösterdi 45. Pipet çözeltisi ile plazma zarının bozulmasını veya hücre içi ortamın değiştirilmesini önleyen bu yöntem, LRRC8/VRAC aktivitesinin izlenmesi için bir alternatif sunar. Doğal sitozolün korunmasının çok önemli olduğu, hücre altı çözünürlüğün gerekli olduğu veya kanal aktivitesinin uzun süreli gözleminin gerekli olduğu fizyolojik ortamlarda özellikle yararlıdır.
Burada, LRRC8/VRAC'ı böyle bir FRET tabanlı okuma ile incelemek için bir protokol sunuyoruz. Protokol, hücrelerin nasıl işleneceğini ve transfekte edileceğini, numune ve kontrol görüntülerinin nasıl elde edileceğini, verilerin nasıl analiz edileceğini ve hassaslaştırılmış emisyon FRET (SE-FRET) değerlerinin nasıl hesaplanacağını gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66953/66953fig01v2.jpg"> 
Şekil 1: LRRC8 FRET çift sisteminin şeması. mCerulean3 camgöbeği, mVenüs ise sarı renkle gösterilir. VRAC açılmasını takiben, floroforlar arasındaki mesafe (ve/veya uzamsal yönelim) değişir, bu da verici (Don) ve alıcı (Acc) arasında enerji transferinin azalmasına ve dolayısıyla gözlemlenen FRET'in düşmesine neden olur. BioRender.com ile oluşturuldu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66953/66953fig01largev2.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>% 0.05 Tripsin-EDTA</td><td>gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Kamera DFC9000GTC</td><td>Leica</td><td>11547007</td><td></td></tr><tr><td>CFP-18aa-YFP</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Elder ve ark. 2009 PMCID: PMC2706461; CF Kaminski'den Hediye (Cambridge Üniversitesi, İngiltere)</td></tr> <tr><td>Sikloheksimid (CHX)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>66-81-9</td><td></td></tr><tr><td>D (-) - Mannitol</td><td>Carl Roth</td><td>4175.1</td><td></td></tr><tr><td>D (+) - Glikoz</td><td>Carl Roth</td><td>HN06.1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (Dulbeccos Modifiye Kartal Ortamı)</td> <td>PAN-Biotech</td><td>P04-03590</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco'nun Fosfat Tampon Salini)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P04-36500</td><td></td></tr><tr><td>Emisyon filtre tekerleği (460/80, 535/70, 590/50, 642/80, %100)</td><td>Leica</td><td>11525480</td><td></td></tr><tr><td>FBS (Fetal Sığır Serumu)</td><td>PAN-Biotech</td><td>P30-3302</td><td></td></tr><tr><td>Filtre küpü CYR71010</td><td>Leica</td><td>11525416</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE</td><td>Promega</td><td>E2691</td><td></td></tr><tr><td>Glas Alt Kültür Kapları 35 mm</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-10-C</td><td></td></tr><tr><td>HeLa hücreleri</td><td>Leibniz Forschungsinstitut DSMZ</td><td>ACC 57</td><td>Memeli serviks karsinomu/ Leibniz Forschungsinstitut DSMZ</td></tr><tr><td>HEPE'den</td> alındı <td>Carl Roth</td><td>9105.4</td><td></td></tr><tr><td>ibidi &micro;-Disch 35 mm</td><td>ibidi</td><td>81156</td><td></td></tr><tr><td>KCl (Potasyum klorür)</td><td>Carl Roth</td><td>6781.1</td><td></td></tr><tr><td>LAS X FRET Wizard</td><td>Leica</td><td></td><td></td>11640862</tr><tr><td>Işık kaynağı LED8</td><td>Leica</td><td>11504256</td><td></td></tr><tr><td>LRRC8A-mCerulean3</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>K&ouml; nig ve ark. 2019</td></tr><tr><td>LRRC8E-mVenüs</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>K&ouml; nig ve ark. 2019</td></tr><tr><td>Luna-II Otomatik Hücre Sayacı</td><td>logoları biosystems</td><td>L40002</td><td></td></tr><tr><td>Luna-II Hücre Sayacı Slaytları</td><td>logolar biyosistemler</td><td>L12001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 (Magnezyum klorür)</td><td>Carl Roth</td><td>KK36.1</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop THUNDER Görüntüleyici canlı hücre</td><td>Leica</td><td>11525681</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (Sodyum klorür)</td><td>Carl Roth</td><td>9263</td><td></td></tr><tr><td>Objektif HC PL APO 63x/1.40 YAĞ</td><td>Leica</td><td>11506349</td><td></td></tr><tr><td>Opti-Minimal Esansiyel Orta (MEM)</td><td>gibco</td><td>11058</td><td></td></tr><tr><td>Ozmometre OM807</td><td>Vogel</td><td>V04807</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin (Kalem Adımı)</td><td>gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi çözeltisi (%0,4)</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Tümör nekroz faktörü (TNF)-a</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94948-59-1</td><td></td></tr><tr><td>Valf Kontrollü Yerçekimi Perfüzyon Sistemi</td><td>ALA Bilimsel Aletler</td><td>VC3-4xG</td><td></td></tr></tbody></table>

hassaslaştırılmış emisyonlu förster rezonans enerji transferi (se-fret) kullanılarak 8 kanal (lrrc8/vrac) aktivitesi İçeren lösin açısından zengin tekrarın İzlenmesi

Monitoring Leucine-Rich Repeat Containing 8 Channel (LRRC8/VRAC) Activity Using Sensitized-Emission F&#246;rster Resonance Energy Transfer (SE-FRET)

Bu FRET tabanlı yöntemle, ozmotik stimülasyon sırasında LRRC8 / VRAC aktivitesi izlenebilir ve SE-FRET'teki azalma, hücre dışı hipotonisitederecesi 45 ile ilişkilidir. Hipotonisite ile indüklenen kanal aktivasyonu için temsili sonuçlar da burada gösterilmektedir (Şekil 3 ve Şekil 4). Ek olarak, diasilgliserol sinyalinin45 manipülasyonu veya miyosit aktivasyonu56 sırasında farklı izozmotik uyaranlarla LRRC8/VRAC aktivasyonu gözlemlenebilir.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66953/66953fig04.jpg"> 
Şekil 4: SE-FRET izleri. (A) 5 bağımsız deneyden görünen SE-FRET izleri. Veriler, görüş alanı (FOV) başına N = 2 ila N = 7 hücrenin ortalama ± SD'sini temsil eder. (B) Tüm hücrelerin ortalama ± SD'si (N = 31 hücre). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66953/66953fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
LRRC8/VRAC kanalları da apoptotik hacim azalmasında rol oynadığından24,57, apoptozun indüklenmesi üzerine kanal aktivitesini gözlemlemek burada açıklanan yöntem için başka bir uygulama olacaktır. Buna göre, LRRC8A-mCerulean3 ve LRRC8E-mVenüs eksprese eden HeLa hücrelerinde SE-FRET izleme protokolü, ölüm reseptörü aracılı apoptozu indükleyen ilaçlar uygulanırken gerçekleştirildi. Tümör nekroz faktörü (TNF)-α ve sikloheksimidin (CHX) daha önce birkaç dakika içinde VRAC akımlarını uyandırdığı gösterilmişti58. İzotonik tamponda 2 ng/mL TNF-α ve 1 μg/mL CHX ilavesinden sonra, SE-FRET'te sağlam bir azalma olmuştur (Şekil 5). TNF-α ve CHX içermesine rağmen tamponun hipertonik bir ortamla değiştirilmesi, SE-FRET değerleri taban çizgisine yakın bir yerde geri kazanıldı (Şekil 5A), apoptozu indükleyen Fas ligandı58 ile tedavi sırasında hipertonik banyo çözeltisindeki azalan VRAC akımlarına karşılık geldi. Hücrelerin TNF-α ve CHX için çözücü olan DMSO ile muamelesi, SE-FRET azalması ile sonuçlanmadı. TNF-α + CHX, FRET kontrolü59 olarak bir EYFP ve ECFP tandem yapısı olan CFP-18aa-YFP'nin SE-FRET'ini etkilemedi ve LRRC8 / VRAC için özgüllüğü gösterdi (Şekil 5B).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66953/66953fig05v2.jpg"> 
Şekil 5: Ölüm reseptörü aracılı apoptoz ile izomotik VRAC aktivasyonu. (A) Zaman içinde LRRC8A-mCer / LRRC8E-mVen eksprese eden HeLa hücrelerinden (n = 8 tabak, 23 hücre) normalleştirilmiş SE-FRET değerleri. İzotonik görüntüleme tamponunda (taban çizgisi) 15 döngüden sonra, banyo çözeltisi, 30 döngü için 2 ng / mL TNF-α ve 1 μg / mL sikloheksimid (CHX) ile takviye edilmiş izotonik tampon ile değiştirildi, ardından TNF-α ve CHX ile 20 döngü hipertonik görüntüleme tamponu izledi. Her bir ROI ve zaman noktasının ham ortalama SE-FRET değeri, ilgili ROI için temel (izotonik) değerin ortalamasına normalleştirildi. (B) CHX (n = 5 tabak, 12 hücre) veya A'daki gibi apoptoz indükleyicileri içeren izotonik tampon (n = 8 tabak, 23 hücre) için araç kontrolü olarak DMSO içeren izotonik çözelti ile A'daki gibi LRRC8A / E eksprese eden HeLa hücrelerinin normalleştirilmiş SE-FRET değerlerinin ölçülmesi veya apoptoz indükleyicileri ile CFP-18aa-YFP eksprese eden HeLa hücrelerinin (n = 3 tabak, 9 hücre). Veriler, tek tek hücrelerin (semboller) ilgili tamponundaki son 10 zaman noktasının ortalamasını ve SD'± tüm hücrelerin ortalamasını temsil eder; ** p &lt; 0.01 sıradan tek yönlü ANOVA ve ardından Tukey'in çoklu karşılaştırma post-hoc testi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66953/66953fig05largev2.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Hassaslaştırılmış Emisyonlu Förster Rezonans Enerji Transferi (SE-FRET) Kullanılarak 8 Kanal (LRRC8/VRAC) Aktivitesi İçeren Lösin Açısından Zengin Tekrarın İzlenmesi

Members of the LRRC8 protein family form heteromeric ion and osmolyte channels with roles in numerous physiological processes. As volume-regulated anion ...

monitoring-leucine-rich-repeat-containing-8-channel-lrrc8vrac

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu konjuge polimer polydiacetylene (PDA), florofor biyomoleküllerin algılama için PDA lipozomlar yüzeyine bağlı arasında FRET göstermektedir. PDA lipozomlar da problar olarak kullanılmak üzere biyomoleküllerin için, yüzeyleri üzerinde reseptör molekülleri içermektedir. Ligand-reseptör etkileşimlerinin algılama mekanizmasının temelidir florofor ve PDA arasında FRET verim değişikliklere yol açmaktadır.

Floresans Rezonans Enerji Transferi Ligand-reseptör etkileşimleri gerçek zamanlı izleme

Biz burada bir verici ve alıcı florofor siteleri arasında bir proteaz bölünme mevkisinin katılması, geliştirilmiş bir lüminesans Rezonans Enerji Transferi (LRET) yöntemini tarif etmektedir. Bu tadilat ile proteinlerin arıtılmadan zar proteinlerinin çalışmaya izin ilgi zar proteinleri, ortaya çıkan spesifik LRET sinyalleri elde edilmesine olanak sağlamaktadır.

Lüminesans Rezonans Enerji memeli hücrelerinde ifade Membran Proteinleri Konformasyonel Değişiklikleri Eğitim transfer

Şu anda, mevcut kalsiyum indikatörlerinin çoğu, kültürlenmiş düz kas hücrelerinde sarkoplazmik retikulumdan salınan kalsiyumun dolaylı ölçümleri olarak sitoplazmik kalsiyum geçişlerini ölçmek için kullanılmaktadır. Bu protokol, sarkoplazmik retikulum lümeni içindeki kalsiyum sinyallerinin doğrudan ölçülmesine izin veren spesifik bir FRET tabanlı göstergenin kullanımını açıklar.

Kullanımı Kültür düz kas hücrelerinin sarkoplazmik retikulum içinde Kalsiyum Değişiminin Ölçülmesi FRET tabanlı Konfokal Görüntüleme

Bu da çalışmanın Rab10 fosforilasyon endojen düzeyleri lösin yönünden zengin tekrar kinaz 2 algılama basit bir yöntem açıklanır.

Rab10 fosforilasyon algılama SDS-sayfa bir fosfat bağlayıcı etiketi ile kullanarak LRRK2 etkinliğini tarafından

Bu çalışma, doğal olmayan amino asit (UAA) dahil etme yoluyla bölgeye özgü etiketleme kullanarak G proteinine bağlı reseptörler (GPCR'ler) üzerinde tek moleküllü floresan rezonans enerji transferi (smFRET) deneyleri gerçekleştirmek için ayrıntılı bir prosedür sunmaktadır. Protokol, smFRET numune hazırlama, deneyler ve veri analizi için adım adım bir kılavuz sağlar.

Tek Moleküllü FRET Kullanarak Membran Reseptörlerinin Konformasyonel Dinamiğinin Görselleştirilmesi

Floresan rezonans enerji transferi (FRET), canlı hücrelerdeki protein etkileşimlerini tespit etmek için kullanılan bir görüntüleme tekniğidir. Burada, histon modifiye edici enzimlerin, bitki dokularındaki gen ekspresyonunun epigenetik düzenlenmesi için hedef promotörlere onları işe alan transkripsiyon faktörleri ile ilişkisini incelemek için bir FRET protokolü sunulmaktadır.

Histon Modifiye Edici Enzimler ve Transkripsiyon Faktörleri Arasındaki Etkileşimlerin in vivo Floresan Rezonans Enerji Transferi ile İncelenmesi

Doğası gereği düzensiz bölgeler (IDR'ler), çevresel değişikliklere yanıt olarak konformasyonlarını değiştiren esnek protein alanlarıdır. Topluluk floresan rezonans enerji transferi (FRET), farklı koşullar altında protein boyutlarını tahmin edebilir. Hiperozmotik stres altında yaşayan Saccharomyces cerevisiae hücrelerinde IDR yapısal duyarlılığını değerlendirmek için bir FRET yaklaşımı sunuyoruz.

Canlı Hücrelerde Hiperozmotik Strese Yanıt Olarak İntrinsik Olarak Düzensiz Bölgelerin Yapısal Duyarlılığının FRET Kullanılarak Tahmini

Bu protokol, canlı hücrelerde CRAF kinazın 14-3-3 proteinleri ile etkileşimlerini ölçmek için BRET tabanlı bir testi tanımlar. Protokol, hücrelerin hazırlanması, BRET emisyonlarının okunması ve veri analizi için adımların ana hatlarını çizmektedir. Tahlil optimizasyonu için uygun kontrollerin tanımlanması ve sorun gidermenin yer aldığı örnek bir sonuç da sunulmaktadır.

Canlı Hücrelerde CRAF'ın 14-3-3 Proteinleri ile Etkileşimlerinin Ölçülmesi için Biyolüminesans Rezonans Enerji Transferi (BRET) Tabanlı Test

Biz nicotinatmide adenin dinükleotit fosfat (NAD(P)H) + H + doğrudan doku örnekleri '. oluşturmak enzimler için enzimatik aktivite kayma dağıtım eşleştirmek için bir protokol...

Eşleme metabolizma: doğrudan dokusunda laktat dehidrogenaz etkinliğini izleme

Protein-protein etkileşimleri biyolojik sistemleri için kritik olan ve bağlama Kinetik çalışmalar dynamics ve protein kompleksleri fonksiyonu sağlar. Floresans rezonans enerji transferi ve durdu-akış tekniği kullanarak karmaşık bir proteinin Kinetik parametrelerin quantifies bir yöntemi açıklanmaktadır.

Protein kompleksleri milisaniyelik zaman ölçekte dinamikleri çalışmaya vitro Floresans rezonans enerji transferi içinde kullanma

Öğrenin, SE-FRET yöntemiyle LRRC8 anyon kanalı aktivitesini canlı hücrelerde izlemeyi. Bu teknik, ozmotik değişimler sırasında kanal düzenlemesini sürekli ve invaziv olmayan şekilde incelemenizi sağlar.

Hassaslaştırılmış Emisyonlu Förster Rezonans Enerji Transferi (SE-FRET) Kullanılarak 8 Kanal (LRRC8/VRAC) Aktivitesi İçeren Lösin Açısından Zengin Tekrarın İzlenmesi (Video) | JoVE Journal

Hassaslaştırılmış Emisyonlu Förster Rezonans Enerji Transferi (SE-FRET) Kullanılarak 8 Kanal (LRRC8/VRAC) Aktivitesi İçeren Lösin Açısından Zengin Tekrarın İzlenmesi

Daha fazla video keşfet