Name: İskemik İnme Sonrası Subakut ve Kronik Zamanlarda Transdüksiyonlu Hücrelerde Nörod1in Ektopik Ekspresyonunun Araştırılması için AAV Sistemleri ve Fare Modelleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Keşfedin iskemik inme sonrası AAV ile Neurod1 ekspresyonunu fare modellerinde subakut ve kronik fazlarda. Bu yöntem nöron rejenerasyonunu ve motor fonksiyon iyileşmesini değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>İnme Sonrası Ektopik Nörod1 Ekspresyonunu İncelemek için AAV Sistemleri ve Fare Modelleri

<ol><li>GBD 2016 Stroke Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+stroke%2C+1990-2016%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+study+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of stroke, 1990-2016: A systematic analysis for the global burden of disease study 2016.</a> Lancet Neurol. 18 (5), 439-458 (2016).</li>
<li>Iadecola, C., Buckwalter, M. S., Anrather, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+stroke%3A+Mechanisms%2C+modulation%2C+and+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Immune responses to stroke: Mechanisms, modulation, and therapeutic potential.</a> J Clin Invest. 130 (6), 2777-2788 (2020).</li>
<li>Kuriakose, D., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+and+treatment+of+stroke%3A+Present+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology and treatment of stroke: Present status and future perspectives.</a> Int J Mol Sci. 21 (20), 7609(2020).</li>
<li>Fifield, K. E., Vanderluit, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+degeneration+of+neurons+in+the+penumbra+region+following+a+small%2C+focal+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapid degeneration of neurons in the penumbra region following a small, focal ischemic stroke.</a> Eur J Neurosci. 52 (4), 3196-3214 (2020).</li>
<li>Burda, J. E., Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+gliosis+and+the+multicellular+response+to+CNS+damage+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Reactive gliosis and the multicellular response to CNS damage and disease.</a> Neuron. 81 (2), 229-248 (2014).</li>
<li>Kowalczyk, A., Kleniewska, P., Kolodziejczyk, M., Skibska, B., Goraca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endothelin-1+and+endothelin+receptor+antagonists+in+inflammatory+response+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Immunol+Ther+Exp+%28Warsz%29%22%5BJournal%5D)">The role of endothelin-1 and endothelin receptor antagonists in inflammatory response and sepsis.</a> Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 63 (1), 41-52 (2015).</li>
<li>Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glial+scar+is+more+than+just+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The glial scar is more than just astrocytes.</a> Exp Neurol. 286, 147-149 (2016).</li>
<li>Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+dissection+of+reactive+astrogliosis+and+glial+scar+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular dissection of reactive astrogliosis and glial scar formation.</a> Trends Neurosci. 32 (12), 638-647 (2009).</li>
<li>Adams, K. L., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diversity+and+disparity+of+the+glial+scar%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The diversity and disparity of the glial scar.</a> Nat Neurosci. 21 (1), 9-15 (2018).</li>
<li>Buscemi, L., Price, M., Bezzi, P., Hirt, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+overview+of+neuroinflammation+in+an+experimental+mouse+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal overview of neuroinflammation in an experimental mouse stroke model.</a> Sci Rep. 9 (1), 507(2019).</li>
<li>Vasan, L., Park, E., David, L. A., Fleming, T., Schuurmans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+reprogramming%3A+Bridging+the+gap+between+basic+science+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal reprogramming: Bridging the gap between basic science and clinical application.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 681087(2021).</li>
<li>Berninger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+properties+of+neurons+derived+from+in+vitro+reprogrammed+postnatal+astroglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional properties of neurons derived from in vitro reprogrammed postnatal astroglia.</a> J Neurosci. 27 (32), 8654-8664 (2007).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neurod1+aav-based+gene+therapy+for+functional+brain+repair+after+ischemic+injury+through+in+vivo+astrocyte-to-neuron+conversion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A neurod1 aav-based gene therapy for functional brain repair after ischemic injury through in vivo astrocyte-to-neuron conversion.</a> Mol Ther. 28 (1), 217-234 (2020).</li>
<li>Ghazale, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascl1+phospho-site+mutations+enhance+neuronal+conversion+of+adult+cortical+astrocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ascl1 phospho-site mutations enhance neuronal conversion of adult cortical astrocytes in vivo.</a> Front Neurosci. 16, 917071(2022).</li>
<li>Wang, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+astrocyte+to+neuron+conversion+with+lineage+tracing+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Revisiting astrocyte to neuron conversion with lineage tracing in vivo.</a> Cell. 184 (21), 5465-5481.e16 (2021).</li>
<li>Xie, Y., Zhou, J., Wang, L. L., Zhang, C. L., Chen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+aav+tools+fail+to+detect+neurod1-mediated+neuronal+conversion+of+muller+glia+and+astrocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">New aav tools fail to detect neurod1-mediated neuronal conversion of muller glia and astrocytes in vivo.</a> EBioMedicine. 90, 104531(2023).</li>
<li>Bocchi, R., Masserdotti, G., Gotz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+reprogramming%3A+Fast+forward+from+new+concepts+toward+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal reprogramming: Fast forward from new concepts toward therapeutic approaches.</a> Neuron. 110 (3), 366-393 (2022).</li>
<li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+promise+for+neuronal+repair%3A+Reprogramming+astrocytes+into+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">A promise for neuronal repair: Reprogramming astrocytes into neurons in vivo.</a> Biosci Rep. 44 (1), BSR20231717(2024).</li>
<li>Hickmott, J. W., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia-to-neuron+reprogramming+to+the+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Glia-to-neuron reprogramming to the rescue.</a> Neural Regen Res. 20 (5), 1395-1396 (2024).</li>
<li>Gao, X., Wang, X., Xiong, W., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+reprogramming+reactive+glia+into+iPSCs+to+produce+new+neurons+in+the+cortex+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo reprogramming reactive glia into iPSCs to produce new neurons in the cortex following traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 6, 22490(2016).</li>
<li>Guo, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+direct+reprogramming+of+reactive+glial+cells+into+functional+neurons+after+brain+injury+and+in+an+alzheimer%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo direct reprogramming of reactive glial cells into functional neurons after brain injury and in an alzheimer's disease model.</a> Cell Stem Cell. 14 (2), 188-202 (2014).</li>
<li>Livingston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ectopic+expression+of+neurod1+is+sufficient+for+functional+recovery+following+a+sensory-motor+cortical+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Ectopic expression of neurod1 is sufficient for functional recovery following a sensory-motor cortical stroke.</a> Biomedicines. 12 (3), 663(2024).</li>
<li>Tai, W., Xu, X. M., Zhang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+through+in+vivo+cell+fate+reprogramming+for+neural+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regeneration through in vivo cell fate reprogramming for neural repair.</a> Front Cell Neurosci. 14, 107(2020).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+conversion+of+striatal+astrocytes+into+gabaergic+neurons+in+mouse+models+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Gene therapy conversion of striatal astrocytes into gabaergic neurons in mouse models of Huntington's disease.</a> Nat Commun. 11 (1), 1105(2020).</li>
<li>Roome, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+endothelin-1+model+of+forelimb+motor+cortex+stroke+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A reproducible endothelin-1 model of forelimb motor cortex stroke in the mouse.</a> J Neurosci Methods. 233, 34-44 (2014).</li>
<li>Islam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+apoptosis+in+a+model+of+ischemic+stroke+leads+to+enhanced+cell+survival%2C+endogenous+neural+precursor+cell+activation+and+improved+functional+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Inhibition of apoptosis in a model of ischemic stroke leads to enhanced cell survival, endogenous neural precursor cell activation and improved functional outcomes.</a> Int J Mol Sci. 25 (3), 1786(2024).</li>
<li>Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-titer+AAV+disrupts+cerebrovascular+integrity+and+induces+lymphocyte+infiltration+in+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">High-titer AAV disrupts cerebrovascular integrity and induces lymphocyte infiltration in adult mouse brain.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 31, 101102(2023).</li>
<li>Ortinski, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+induction+of+astrocytic+gliosis+generates+deficits+in+neuronal+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective induction of astrocytic gliosis generates deficits in neuronal inhibition.</a> Nat Neurosci. 13 (5), 584-591 (2010).</li>
<li>Jiang, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+reactive+astrocytes+to+induced+neurons+enhances+neuronal+repair+and+functional+recovery+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Conversion of reactive astrocytes to induced neurons enhances neuronal repair and functional recovery after ischemic stroke.</a> Front Aging Neurosci. 13, 612856(2021).</li>
<li>Aschauer, D. F., Kreuz, S., Rumpel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+transduction+efficiency%2C+tropism+and+axonal+transport+of+AAV+serotypes+1%2C+2%2C+5%2C+6%2C+8+and+9+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Analysis of transduction efficiency, tropism and axonal transport of AAV serotypes 1, 2, 5, 6, 8 and 9 in the mouse brain.</a> PLoS One. 8 (9), e76310(2013).</li>
<li>Su, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+specificity+of+GFAP+transgenes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Expression specificity of GFAP transgenes.</a> Neurochem Res. 29 (11), 2075-2093 (2004).</li>
<li>Kofoed, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+gene+delivery+to+the+brain+using+AAV+and+ultrasound+depends+on+serotypes+and+brain+areas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Efficacy of gene delivery to the brain using AAV and ultrasound depends on serotypes and brain areas.</a> J Control Release. 351, 667-680 (2022).</li>
<li>He, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+murine+genetic+background+in+adeno-associated+virus+transduction+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">The influence of murine genetic background in adeno-associated virus transduction of the mouse brain.</a> Hum Gene Ther Clin Dev. 30 (4), 169-181 (2019).</li>
<li>Hu, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+inducible+cre+recombinase+driven+by+differential+astrocyte-specific+promoters+in+transgenic+mouse+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of inducible cre recombinase driven by differential astrocyte-specific promoters in transgenic mouse lines.</a> Neurosci Bull. 36 (5), 530-544 (2020).</li>
<li>Botterill, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Off-target+expression+of+cre-dependent+adeno-associated+viruses+in+wild-type+c57bl%2F6j+mice%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Off-target expression of cre-dependent adeno-associated viruses in wild-type c57bl/6j mice.</a> eNeuro. 8 (6), ENEURO.0363-ENEURO.0421 (2021).</li>
<li>Hasel, P., Rose, I. V. L., Sadick, J. S., Kim, R. D., Liddelow, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammatory+astrocyte+subtypes+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammatory astrocyte subtypes in the mouse brain.</a> Nat Neurosci. 24 (10), 1475-1487 (2021).</li>
<li>Kim, R. D., et al. Temporal and spatial analysis of astrocytes following stroke identifies novel drivers of reactivity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKim%2C+RD+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2023).</li>
<li>Matias, I., Morgado, J., Gomes, F. C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+heterogeneity%3A+Impact+to+brain+aging+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocyte heterogeneity: Impact to brain aging and disease.</a> Front Aging Neurosci. 11, 59(2019).</li>
<li>Miller, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+heterogeneity+in+the+adult+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocyte heterogeneity in the adult central nervous system.</a> Front Cell Neurosci. 12, 401(2018).</li>
<li>Early, A. N., Gorman, A. A., Van Eldik, L. J., Bachstetter, A. D., Morganti, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+advanced+age+upon+astrocyte-specific+responses+to+acute+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of advanced age upon astrocyte-specific responses to acute traumatic brain injury in mice.</a> J Neuroinflammation. 17 (1), 115(2020).</li>
<li>Donocoff, R. S., Teteloshvili, N., Chung, H., Shoulson, R., Creusot, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+tamoxifen-induced+cre+activity+and+its+effect+on+immune+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of tamoxifen-induced cre activity and its effect on immune cell populations.</a> Sci Rep. 10 (1), 15244(2020).</li>
<li>Gresita, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Very+low+efficiency+of+direct+reprogramming+of+astrocytes+into+neurons+in+the+brains+of+young+and+aged+mice+after+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Very low efficiency of direct reprogramming of astrocytes into neurons in the brains of young and aged mice after cerebral ischemia.</a> Front Aging Neurosci. 11, 334(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#77 Matkap Ucu (.018")</td><td>David Kopf Instruments</td><td>8177</td><td></td></tr><tr><td>AAV5-GFAP(0.7)-mNeurod1-2A-iCre</td><td>Vektörü&nbsp; Biolabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İğne Polisorb ve Ticaret ile Emilebilir Sütür; Polyester CV-15 3/8 Daire Konik Uçlu İğne Boyutu 4 - 0 Örgülü</td><td>Covidien</td><td>GL-881</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NeuN Antikoru (tavşan)&nbsp;</td><td>Millipore Sigma</td><td>ABN78&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6 Fareler</td><td>Charles River</td><td>027</td><td></td></tr><tr><td>Klorheksidin Çözeltisi</td><td>Partnar</td><td>PCH-020</td><td></td></tr><tr><td>Contec & Trade; &nbsp; PREempt & ticaret; RTU Dezenfektan Solüsyonu</td><td>Fisher Scientific</td><td>29-636-6212</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>HM525 NX&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Endotelin 1</td><td>Millipore Sigma</td><td>05-23-3800-0.5MG</td><td></td></tr><tr><td>Tüy Güvenlik Tıraş Bıçağı Mikrotom Bıçakları</td><td>Tüy</td><td>12-631P</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Kapak Camları: Dikdörtgenler</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545M&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Montaj Ortamı</td><td>Agilent Technologies</td><td>S3023&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Şırınga</td><td>Hamilton Company</td><td>7634-01</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Hızlı Stereotaksik Matkap</td><td>David Kopf Instruments</td><td>1474</td><td></td></tr><tr><td>Metacam Çözeltisi (Meloksikam)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OCT Bileşik</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td></td></tr><tr><td>pAAV2/5-GFAP-iCre</td><td>Vektör Oluşturucu</td><td>P190924-1001suq</td><td></td></tr><tr><td>Polyderm Merhem USP</td><td>TARO</td><td>2181908</td><td></td></tr><tr><td>SOMNI Scientific & Trade; &nbsp; Hayvan Sıcaklığı Isıtma Yastığı</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-777-177</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaksik Aletler</td><td>David Kopf Aletleri</td><td>Model 902</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Mikroskop Slaytları, beyaz</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>tdTomato Reporter Fareler&nbsp;</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>007914</td><td></td></tr><tr><td>V-1 Masa Üstü Laboratuvar Hayvan Anestezi Sistemi</td><td>VetEquip</td><td>901806</td><td></td></tr></tbody></table>

İskemik İnme sonrası subakut ve kronik zamanlarda transdüksiyonlu hücrelerde nörod1'in ektopik ekspresyonunun araştırılması için aav sistemleri ve fare modelleri

AAV Systems and Mouse Models for Investigating Ectopic Expression of Neurod1 in Transduced Cells at Subacute and Chronic Times Post-Ischemic Stroke

Vahşi tipte (C57BL / 6J) ve transgenik tdTom-Cre raportör suşlarında (özellikle, B6) kısa GFAP (gfaABC (1) D) promotör güdümlü, ektopik Neurod1 ekspresyonunun hücresel sonuçlarını incelemek için. Cg-Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomato)Hze/J)22 ET-1 inme yaralı farelerde iki AAV5 tabanlı sistem kullanıldı (Şekil 1A-C). Subakut bir inme modelinde, Neurod1, Cre-Flex AAV sisteminde paketlendi ve inme sonrası 7. günde vahşi tip farelere verildi (Şekil 1B). İkinci Flex vektörü, heterotipik, antiparalel loxP tipi rekombinasyon bölgeleri ile çevrili CAG promotörü tarafından yönlendirilen GFP için ters çevrilmiş diziyi içerir (Şekil 1B). Her iki viral yapı da inme sonrası aynı anda birlikte enjekte edilir. Cre, transdüksiyonlu hücrelerde eksprese edildikten sonra, GFP rekombinasyon bölgelerinde ters çevrilir ve eksize edilir, bu da diziyi anlam yönünde yönlendirir, bu da GFP'nin ekspresyonuna izin verir. Bu nedenle, Cre eksprese eden hücreler GFP pozitif olacaktır, bu da Cre-Flex vektörleri tarafından dönüştürüldüklerini gösterir. Subakut modelde, fareler transdüksiyondan 21 gün sonra (yani inmeden 28 gün sonra) safide edildi ve transdüksiyon hücrelerinin sayısı (GFP +) ve ayrıca NeuN + GFP + (NeuN eksprese eden transdüksiyon hücreleri) hücreleri, inme yaralı beyinlerin parankiminde sayıldı. Şekil 2A'da görüldüğü gibi, iskemik yaralanma bölgesinde nöronlar kaybolur. Cre-Flex AAV sistemi kullanılarak subakut paradigmada dönüştürülen hücrelerin nicelleştirilmesi, Neurod1 ile tedavi edilen farelerde Stroke-Cre kontrol farelerine kıyasla önemli ölçüde daha fazla etiketli nöron (NeuN + GFP + / GFP + hücreleri) ortaya çıkarır (43.05 +/- %5.50'ye karşı 18.43 +/- %3.03 NeuN + GFP + / GFP + hücreleri, Stroke-Neurod1'e karşı. Stroke-Cre (kontrol) ile tedavi edilen fareler, sırasıyla) (p = 0.0172) (Şekil 2B,C).
Ayrı bir deney setinde, kronik bir inme modelinde AtN dönüşümü gerçekleştirildi (Şekil 1B, C). Transkripsiyon faktörü Neurod1, inme sonrası 21. günde ET-1 inme yaralı tdTom-Cre muhabir farelerine verildi (Şekil 1C). Yabani tip farelerde kullanılan Cre-Flex sistemi ile aynı olan Neurod1 ekspresyonu, kısa GFAP promotörü tarafından yönlendirildi. Bununla birlikte, bu sistemde, Neurod1'i takip eden Cre rekombinaz ile tek bir AAV yapısı kullanıldı (Şekil 1B). Bu nedenle, GFAP eksprese eden hücreler, tdTom raportörünü indükleyerek Cre rekombinaz üretecek ve AAV transdüksiyonu yapılmış hücreleri gösterecektir. Fareler inmeden 77 gün sonra (AAV'den 8 hafta sonra) sakrifiye edildi (Şekil 1C). Şekil 3A'da görüldüğü gibi, tdTom-Cre farelerinde inme sonrası 77. günde kortikal bir lezyon gözlenir. Nöronal belirteç olan NeuN + 'yı eksprese eden transdüksiyonlu hücrelerin sayısı ölçüldü (inme sonrası kronik aşamada (NeuN + tdTom + / tdTom + hücrelerinin nispi yüzdesi) ve İnme-Nörod1 alan farelerin, Stroke-Cre kontrol farelerine kıyasla önemli ölçüde daha fazla etiketli nörona sahip olduğunu buldu (74.81 +/- %4.835'e karşı 53.05 +/- %5.028 NeuN + tdTom +/tdTom + İnme-Neurod1vs. hücreleri. Stroke-Cre (kontrol) ile tedavi edilen fareler, sırasıyla) (p = 0.0355) (Şekil 3B,C).
Genel olarak, sonuçlar, nöronların temel transdüksiyonunu ve iki farklı AAV tabanlı sistemle vahşi tip ve tdTom-Cre raportör farelerde hem subakut hem de kronik inme sonrası fazlarda Neurod1 iletimi ile NeuN + eksprese eden daha fazla sayıda transdüksiyonlu hücre göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig01.jpg"> 
Şekil 1: Neurod1'in ektopik ifadesi, vektörler ve zaman çizelgeleri. (A) Fare motor korteksine Endotelin-1 (ET-1) enjeksiyonu ile strok indüksiyonunun grafiksel gösterimi. Adeno-İlişkili Virüs (AAV) 3 bölgede, ET-1 enjeksiyon bölgesinde ve lezyonu çevreleyen bölgelerde, 1 mm ön ve arka kısımda verilir. Motor kortekste AAV-Neurod1 ile transdüksiyona uğramış hücreleri gösteren yakınlaştırılmış panel. (B) Yabani tip farelere verilen Cre-Flex sistemindeki iki AAV vektörünün şeması (üst panel). AAV5 vektör 1, kısa GFAP promotörünü, Neurod1 transkripsiyon faktörünü ve bir loxP bölgesi (siyah üçgen) ve bir lox2272 bölgesi (beyaz üçgen) ile çevrili Cre rekombinaz dizisini içerir. AAV5 vektör 2, bir çift loxP ve lox2272 bölgesi ile çevrili ters GFP gen raportör dizisini taşır. Her iki vektörün hücrelerde transdüksiyonu, Cre aracılı eksizyon ve inversiyon ile sonuçlanır ve GFP ekspresyonunun transdüksiyonlu hücreleri etiketlemesini sağlar. Neurod1 ayrıca bir AAV5 vektörü (alt panel) kullanılarak tdTom-Cre farelerine verildi. AAV5 vektör 1'de kısa GFAP promotörü, Neurod1 transkripsiyon faktörü ve Cre rekombinaz dizisi paketlenir. Transdüksiyon hücrelerindeki Cre ekspresyonu, loxP bölgelerinde (siyah üçgen) Stop kodonunun eksizyonunu tetikleyerek tdTomato ekspresyonunu mümkün kılar. (C) Cre-Flex sistemi, inme sonrası subakut dönemde (İnme Sonrası Gün 7) enjekte edilen AAV'lerle vahşi tip farelerde test edilmiştir. Yabani tip fareler, AAV transdüksiyonundan 21 gün sonra (inme sonrası 28 gün) sakrifiye edildi. AAV, inme sonrası kronik dönemde (İnme Sonrası 21. Gün) tdTom-Cre farelerine verildi ve fareler AAV transdüksiyonundan 56 gün sonra (inme sonrası 77 gün) sakrifiye edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig02v4.jpg"> 
Şekil 2: İnme sonrası subakut fazda Cre-Flex AAV'ler kullanılarak ektopik Neurod1 uygulaması, NeuN eksprese eden transdüksiyonlu hücre sayısının artmasına yol açar. (A) İnme sonrası 28. günde inme sonrası motor korteks boyunca koronal beyin bölümlerinin immün boyaması İnme-Cre kontrolü (solda) ve İnme-Nörod1 (sağda) farelerden. Lezyon bölgesinde nöronal kayıp görülür (beyaz kesikli çizgiler). Kortekste transdüksiyonlu hücreler (GFP+, yeşil), nöronlar (NeuN+, kırmızı) ve kolokalize NeuN+GFP+ (turuncu) hücreler görülür. Ölçek çubukları: 250 μm. (B) Nöronları (NeuN +, kırmızı) ve AAV ile transdüksiyonlu GFP + (yeşil) gösteren Stroke-Cre kontrolü (üstte) ve Stroke-Neurod1 (altta) beyin dokusunun temsili görüntüleri. Beyazla özetlenen iç kısımlar, her bir kanal için hücrelerin yakın çekimini gösterir. Beyaz ok uçları, AAV ile transdüksiyona uğrayan hücreleri (GFP +) gösterir. Beyaz oklar kolokalize NeuN+GFP+ hücrelerini gösterir. Ölçek çubukları: 125 μm. (C) Stroke-Cre ve Stroke-Neurod1 farelerinde NeuN + GFP + / GFP + hücrelerinin miktar tayini. N = grup başına 3 fare. Veriler ortalama ± SEM. Shapiro-Wilk Testi olarak temsil edilmiştir (p = 0.3223). Eşlenmemiş t-testi, *p &lt; 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66965/66965fig03.jpg"> 
Şekil 3: İnme sonrası kronik fazda tdTom-Cre raportör farelerde ektopik Neurod1 iletimi, NeuN eksprese eden transdüksiyonlu hücre sayısının artmasına neden olur. (A) İnme-Cre kontrolü ve İnme-Neurod1 farelerinden inme sonrası 77. günde motor korteks yoluyla koronal beyin bölümlerinin immün boyama. İskemik yaralanma bölgesinde nöronal kayıp görülür (beyaz kesikli çizgiler). Transdüksiyon hücreleri peri-enfarktüste tdTom (kırmızı) ile etiketlenir. NeuN+tdTom+ (turuncu), nöronal belirteçleri eksprese eden transdüksiyonlu hücrelerdir. Ölçek çubukları: 250 μm. (B) Nöronları (NeuN +, yeşil) ve AAV transdüksiyonlu hücreleri (tdTom +, kırmızı) gösteren Stroke-Cre kontrolü (üstte) ve Stroke-Neurod1 (altta) beyin dokusunun temsili görüntüleri. Beyazla özetlenen iç kısımlar, her bir kanal için hücrelerin yakın çekimini gösterir. Beyaz ok uçları, AAV ile dönüştürülmüş hücreleri (tdTom+) gösterir. Beyaz oklar kolokalize NeuN+tdTom+ hücrelerini gösterir. Ölçek çubukları: 125 μm. (C) Kronik paradigmadaki NeuN + tdTom + / tdTom + hücrelerinin miktar tayini, Neurod1 ile tedavi edilen farelerde NeuN + (NeuN + tdTom + / tdTom + hücreleri) eksprese eden önemli ölçüde daha fazla dönüştürülmüş hücre gösterir. N = grup başına 3 fare. Veriler ortalama ± SEM. Shapiro-Wilk Testi (p = 0.2044) olarak temsil edilmiştir. Eşlenmemiş t-testi, *p &lt; 0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66965/66965fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

İskemik İnme Sonrası Subakut ve Kronik Zamanlarda Transdüksiyonlu Hücrelerde Nörod1'in Ektopik Ekspresyonunun Araştırılması için AAV Sistemleri ve Fare Modelleri

Ectopic expression of neurogenic factors in vivo has emerged as a promising approach for replacing lost neurons in disease models. The use of neural basic ...

aav-systems-mouse-models-for-investigating-ectopic-expression-neurod1

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada, geri dönüşümsüz bir endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS) inhibitörünün (L-Nio) lokal enjeksiyonu ile murin beyaz cevherinde fokal inme üretimi için metodoloji sunuyoruz. Bu tekniğin potansiyel uygulamalarını genişleten iki stereotaktik varyasyon, retrograd nöronal izleme ve taze doku etiketleme ve diseksiyon sunulmaktadır.

Aksonal Dejenerasyon ve Beyaz Cevher Nörobiyoloji Çalışması Çok Yönlü Fare Modeli subkortikal beyaz madde İnme

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

distal orta serebral arter dalı (MCAO) Cerrahi tıkanması, deneysel inme araştırmalarında sıkça kullanılan bir modeldir. Bu el yazması farelerde boyuna intravital mikroskopi için bir fırsat sunuyor yanal kafatası pencere takılması, birlikte kalıcı MCAO temel tekniğini açıklar.

Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar İn Vivo Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Iskemik inme sonrası yaygın karotis arter (fare) veya eksternal karotis arter (sıçan) yoluyla, enjekte çözeltileri veya süspansiyonlar için uyarlanabilir nöral kök hücreleri teslim etmek için bir yöntem bildirilmiştir. Enjekte edilen hücreler beyin parankim boyunca geniş bir şekilde dağıtılır ve doğumdan sonra 30 d'ye kadar tespit edilebilir.

Nöral Kök Hücrelerin Sıçan ve Fare Beynine İntra-Arteriyel Teslimatı: Serebral İskemiye Uygulama

Burada in vitro Ca 2+ akıları orta beyin nöronlar ve caspase-3 üzerinde downstream etkilerini birincil fare orta beyin kültürleri kullanarak ölçmek için bir protokol sokuldu. Bu model, orta beyin nöronlarında anormal Ca2+ aktivitesi ile ilgili patofizyolojik değişiklikleri incelemek ve anti-apoptotik özellikler için yeni terapötikleri taramak için kullanılabilir.

Primer Fare Orta Beyin Nöronlarında Spontan Ca2+ Akılarının ve Downstream Etkilerinin Ölçülmesi

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Asimetrik bilateral ortak karotis arter stenozunun iğne yöntemi, vasküler kognitif bozukluk ve demans için bir fare modeli oluşturmak için önerilmiştir. Daha önce kurulmuş modellere kıyasla daha uzun vadeli sonuçlarla sonuçlanır ve canlı MRG ile uyumludur. Prosedürü gösteren görsel temsil, ameliyatta ustalaşmak için rehberlik sağlar.

İğne Kılavuzluğunda Asimetrik Bilateral Ortak Karotis Arter Darlığına Dayalı Vasküler Kognitif Bozukluk ve Demans için Bir Fare Modeli

Bu protokol, viral teslimat, optrod implantasyonu, fototrombotik indüksiyon, astrosit ve nöron aktivitesinin eşzamanlı kaydı ve astrositlerin optogenetik uyarılmasını içeren entegre bir yöntem sağlar. Bu entegre yöntem, iskemik incinin akut ve kronik evreleri arasında astrosit-nöron ilişkisinin eşzamanlı incelenmesini sağlamayı amaçlamaktadır.

Fototrombotik İnme Modelleme ve Davranış Eden Farelerde Nöronal ve Astrositik Aktivitenin In Vivo Optrode Kaydı İçin Entegre Bir Yöntem

Bu protokol açıklanan prosedür testosteron testosteron hakkında yönetim ve halk inançları, sosyal davranışları ile doğrudan karşı ilişkili olabileceğini göstermektedir.

Davranış Endokrinoloji ve Deneysel İktisat birleştiren: Testosteron ve Sosyal Karar Verme

Keşfedin iskemik inme sonrası AAV ile Neurod1 ekspresyonunu fare modellerinde subakut ve kronik fazlarda. Bu yöntem nöron rejenerasyonunu ve motor fonksiyon iyileşmesini değerlendirmeye yardımcı olur.

İskemik İnme Sonrası Subakut ve Kronik Zamanlarda Transdüksiyonlu Hücrelerde Nörod1in Ektopik Ekspresyonunun Araştırılması için AAV Sistemleri ve Fare Modelleri (Video) | JoVE Journal

İskemik İnme Sonrası Subakut ve Kronik Zamanlarda Transdüksiyonlu Hücrelerde Nörod1'in Ektopik Ekspresyonunun Araştırılması için AAV Sistemleri ve Fare Modelleri

Daha fazla video keşfet