Retroviral CRISPR/Cas9-Mediated Gene Targeting for the Study of Th17 Differentiation in Vitro

Zejin Cui; Pengkun Yuan; Zhishan Zhao; Fan Zhao; Linrong Lu

doi:10.3791/66966

İn vitro Th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral CRISPR/Cas9 aracılı gen hedeflemesi

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Retroviral CRISPR/Cas9-Mediated Gene Targeting for the Study of Th17 Differentiation in Vitro

İn vitro Th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral CRISPR/Cas9 aracılı gen hedeflemesi

Full Text

1,052 Views

12:08 min

November 15, 2024

DOI: 10.3791/66966-v

Zejin Cui*¹, Pengkun Yuan*², Zhishan Zhao*¹, Fan Zhao³, Linrong Lu^1,3

¹Shanghai Immune Therapy Institute,Renji Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²Zhejiang University-University of Edinburgh Institute (ZJU-UoE Institute),Zhejiang University School of Medicine, Zhejiang University, ³Institute of Immunology and Department of Rheumatology,Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Th17 farklılaşmasının incelenmesinde gen düzenleme için etkili bir alternatif sağlayan, Cas9 transgenik farelerden alınan birincil T hücrelerine kılavuz RNA'nın retroviral transdüksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Bu çalışma, immün yanıtlarda önemli bir rol oynayan T yardımcı hücrelerinin bir alt kümesi olan Th17 hücrelerinin farklılaşmasını incelemek için standart bir protokol sunmaktadır. Kılavuz RNA'nın Cas9 transgenik farelerden birincil T hücrelerine retroviral transdüksiyonu yoluyla, bilim adamları Th17 farklılaşmasını düzenlemede genlerin özel işlevini inceleyebilirler. Bu çalışma, hassas gen düzenleme için CRISPR-Cas9 teknolojisini kullanır ve birincil T hücrelerindeki spesifik genleri verimli bir şekilde hedeflemek için retroviral transdüksiyon kullanır.

Akış sitometrisi, transdüksiyon verimliliğini değerlendirmek ve hücre farklılaşmasını izlemek için kullanılır. CT4 + T hücrelerinin farklılaşmasını uyarmak için in vitro Th17 polarizasyonları gerçekleştirilir. Araştırmamız, spesifik genlerin Th17 farklılaşmasını nasıl düzenlediğinin anlaşılmasındaki boşlukları doldurmayı amaçlamaktadır.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos