Name: İn vitro Th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral CRISPR/Cas9 aracılı gen hedeflemesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T13:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 8 s
Description: Öğrenin, retroviral CRISPR/Cas9 ile primer T hücrelerinde gen hedefleme yaparak Th17 farklılaşmasını incelemeyi. Bu yöntem, bağışıklık yanıtlarındaki gen düzenlemesini anlamak için etkili bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Th17 Farklılaşmasında Gen Düzenleme için Kılavuz RNA'nın Retroviral Transdüksiyonu

<ol><li>Wu, B., Wan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+control+of+pathogenic+th17+cells+in+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Molecular control of pathogenic th17 cells in autoimmune diseases.</a> Int Immunopharmacol. 80, 106187(2020).</li>
<li>Dong, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th+17+cells+in+development%3A%3A+An+updated+view+of+their+molecular+identity+and+genetic+programming%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Th 17 cells in development:: An updated view of their molecular identity and genetic programming.</a> Nat Rev Immunol. 8 (5), 337-348 (2008).</li>
<li>Patel, D. D., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th17+cell+pathway+in+human+immunity%3A+Lessons+from+genetics+and+therapeutic+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Th17 cell pathway in human immunity: Lessons from genetics and therapeutic interventions.</a> Immunity. 43 (6), 1040-1051 (2015).</li>
<li>Ghoreschi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+pathogenic+Th17+cells+in+the+absence+of+TGF-%CE%B2+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of pathogenic Th17 cells in the absence of TGF-β signalling.</a> Nature. 467 (7318), 967-U144 (2010).</li>
<li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+molecular+signature+of+pathogenic+th17+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction and molecular signature of pathogenic th17 cells.</a> Nat Immunol. 13 (10), 991-999 (2012).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+generation+of+mice+carrying+reporter+and+conditional+alleles+by+CRISPR%2FCas-mediated+genome+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering.</a> Cell. 154 (6), 1370-1379 (2013).</li>
<li>Yang, H., Wang, H., Jaenisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+genetically+modified+mice+using+CRISPR%2FCas-mediated+genome+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating genetically modified mice using CRISPR/Cas-mediated genome engineering.</a> Nat Protoc. 9 (8), 1956-1968 (2014).</li>
<li>Doench, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+sgrna+design+to+maximize+activity+and+minimize+off-target+effects+of+crispr-cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Optimized sgrna design to maximize activity and minimize off-target effects of crispr-cas9.</a> Nat Biotechnol. 34 (2), 184-191 (2016).</li>
<li>Holst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+t-cell+receptor+retrogenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of t-cell receptor retrogenic mice.</a> Nat Protoc. 1 (1), 406-417 (2006).</li>
<li>Ordonez, P., Bishop, K. N., Stoye, J. P., Groom, H. C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+SAMHD1+restriction+by+flow+cytometry+in+human+myeloid+U937+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of SAMHD1 restriction by flow cytometry in human myeloid U937 cells.</a> J Vis Exp. (172), (2021).</li>
<li>Akcakaya, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+CRISPR+editing+with+no+detectable+genome-wide+off-target+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">In vivo CRISPR editing with no detectable genome-wide off-target mutations.</a> Nature. 561 (7723), 416-419 (2018).</li>
<li>Bae, S., Park, J., Kim, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cas-OFFinder%3A+A+fast+and+versatile+algorithm+that+searches+for+potential+off-target+sites+of+cas9+rna-guided+endonucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Cas-OFFinder: A fast and versatile algorithm that searches for potential off-target sites of cas9 rna-guided endonucleases.</a> Bioinformatics. 30 (10), 1473-1475 (2014).</li>
<li>Singh, Y., Garden, O. A., Lang, F., Cobb, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+transduction+of+helper+T+cells+as+a+genetic+approach+to+study+mechanisms+controlling+their+differentiation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retroviral transduction of helper T cells as a genetic approach to study mechanisms controlling their differentiation and function.</a> J Vis Exp. (117), e54698(2016).</li>
<li>Naviaux, R. K., Costanzi, E., Haas, M., Verma, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pCL+vector+system%3A+Rapid+production+of+helper-free%2C+high-titer%2C+recombinant+retroviruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">The pCL vector system: Rapid production of helper-free, high-titer, recombinant retroviruses.</a> J Virol. 70 (8), 5701-5705 (1996).</li>
<li>Cante-Barrett, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+gene+transfer+into+human+and+murine+hematopoietic+stem+cells%3A+Size+matters%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Lentiviral gene transfer into human and murine hematopoietic stem cells: Size matters.</a> BMC Res Notes. 9, 312-312 (2016).</li>
<li>Zhong, S., Malecek, K., Perez-Garcia, A., Krogsgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+transduction+of+T-cell+receptors+in+mouse+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retroviral transduction of T-cell receptors in mouse T-cells.</a> J Vis Exp. (44), 2307(2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5 M EDTA (pH 8.0)</td><td>Solarbio</td><td>E1170</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Hücre ve Doku Kültür Kabı</td><td>BIOFIL</td><td>TCD010100</td><td></td></tr><tr><td>1 M Hepes (Serbest Asit, steril)</td><td>Solarbio</td><td>H1090</td><td></td></tr><tr><td>24 oyuklu hücre ve doku kültürü plakası</td><td>NEST</td><td>702002</td><td></td></tr><tr><td>48 oyuklu hücre ve doku kültürü plakası</td><td>NEST</td><td>748002</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin Bir Çözüm (1,000x)</td><td>BioLegend</td><td>420601</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 650 anti-fare CD4 Antikoru (RM4-5)</td><td>BioLegend</td><td>100546</td><td></td></tr><tr><td>CD3e Monoklonal Antikor (145-2C11), Fonksiyonel Sınıf, eBioscience</td><td>Invitrogen</td><td>16-0031-82</td><td></td></tr><tr><td>CD44 Monoklonal Antikor (IM7), PE, eBioscience</td><td>Invitrogen</td><td>12-0441-83</td><td></td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoklonal Antikor (MEL-14), APC, eBioscience</td><td>Invitrogen</td><td>17-0621-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Hücre sayacı</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>Cellometer Auto 2000</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci (40 &mu; m)</td> <td>biosharp</td><td>BS-40-CS</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci (70 & mu; m)</td><td><a name="ARALIK! B14">biosharp</a></td><td>BS-70-CS</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj&nbsp;</td><td>eppendorf</td><td>5425&nbsp; R</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj&nbsp;</td><td>eppendorf</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ SYBR Renk qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q411-02</td><td></td></tr><tr><td>ClonExpress II Tek Adımlı Klonlama</td><td>Kiti Vazyme</td><td>C112</td><td></td></tr><tr><td>DH5 & alpha; Yetkili Hücreler</td><td>Sangon Biotech</td><td>B528413</td><td></td></tr><tr><td>Direct-zol RNA Miniprep</td><td>ZYMO RESEARCH</td><td>R2050</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Orta</td><td>BasalMedia</td><td>L110KJ</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Fare CD4+ T Hücre İzolasyon Kiti</td><td>STEMCELL</td><td>19852</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience Sabitlenebilir Canlılık Boyası eFluor 660</td><td>Invitrogen</td><td>65-0864-18</td><td></td></tr><tr><td>EndoFree Mini Plazmid Kiti II</td><td>TIANGEN</td><td>DP118-02</td><td></td></tr><tr><td>ExFect Transfeksiyon Reaktifi</td><td>Vazyme</td><td>T101-01</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, Premium Plus</td><td>Gibco</td><td>A5669701</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-fare IL-17A Antikoru (TC11-18H10.1)</td><td>BioLegend</td><td>506907</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit çözeltisi</td><td>Macklin</td><td>F864792</td><td></td></tr><tr><td>HiScript IV RT SuperMix qPCR?+gDNA sileceği için?</td><td>Vazyme</td><td>R423-01</td><td></td></tr><tr><td>İyonomisin</td><td>Beyotime</td><td>S1672</td><td></td></tr><tr><td>Mitomisin C</td><td>Maokang Biyoteknoloji</td><td>7/7/1950</td><td></td></tr><tr><td>Fare GRCm38</td><td>NCBI</td><td>RefSeq v.108.20200622</td><td></td></tr><tr><td>OPTI-MEM Azaltılmış Serum Ortamı</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td>azaltılmış serum ortamı</td></tr><tr><td>Pasifik Mavisi anti-fare CD4 Antikoru (RM4-5)</td><td>BioLegend</td><td></td><td></td>100531</tr><tr><td>PE / Siyanin7 anti-fare CD25 Antikoru (PC61)</td> <td>BioLegend</td><td>102015</td><td></td></tr><tr><td>PE / Cyanine7 anti-fare CD4 Antikoru (GK1.5)</td> <td>BioLegend</td><td>100422</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U / mL)</td> <td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>PMA / TPA ve nbsp;</td><td>Beyotime</td><td>S1819</td><td></td></tr><tr><td>R26-CAG-Cas9 fareler&nbsp;</td><td>Şangay Model Organizmalar Merkezi Cat</td><td>. NO. NM-KI-00120</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan TGF-beta 1 (CHO-Eksprese Edilmiş) Protein, CF</td><td>R& D Systems</td><td>11409-BH</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Murin IL-6</td><td>PeproTech</td><td>216-16</td><td></td></tr><tr><td>Araştırma Hücresi Analiz</td> Cihazı <td>BD Biosciences</td><td>BD LSRFortessa</td><td></td></tr><tr><td>Araştırma Hücresi Sıralayıcısı</td><td>SONY</td><td>MA900</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta</td><td>BasalMedia</td><td>L210KJ</td><td></td></tr><tr><td>SimpliAmp Termal Döngüleyici PCR Sistemi</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>A24811</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat çözeltisi (100 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Saflaştırılmış anti-fare CD28 Antikoru (37.51)</td><td>BioLegend</td><td>102121</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Saflaştırılmış anti-fare IFN-&gama; Antikor (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505847</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Saflaştırılmış anti-fare IL-4 Antikoru (11B11)</td><td>BioLegend</td><td>504135</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-LEAF Saflaştırılmış anti-fare IL-12/IL-23 p40 Antikoru (C17.8)</td><td>BioLegend</td><td>505309</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Merkaptoetanol (50 mM)</td><td>Solarbio</td><td>M8211</td><td></td></tr></tbody></table>

İn vitro th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral crispr/cas9 aracılı gen hedeflemesi

Retroviral CRISPR/Cas9-Mediated Gene Targeting for the Study of Th17 Differentiation in Vitro

Çalışmada, sgRNA hedefini Rorc'a ve sgRNA-hedeflemesiz kodlama dizilerini mCherry floresan proteini ile pMX-U6-MCS vektörüne klonladık (Şekil 1A,B). Retrovirüs üretimi, Şekil 2'de belirtilen protokole göre gerçekleştirildi. Transfeksiyon 0. günde başlatıldı ve retroviral hasat 2. günde gerçekleşti. Transfeksiyon verimliliği, mCherry floresan yoğunluğu ile test edilebilir (Şekil 1C). Virüs hasat edilmeden önce, saf CD4 + T hücreleri sıralandı ve aktive edildi. Bu aktive edilmiş CD4 + T hücreleri daha sonra spin enfeksiyonu kullanılarak enfekte edildi, ardından tarif edildiği gibi farklılaşma adımlarının devamı geldi. Son olarak, transdüksiyonun etkinliği ve farklılaşma sonuçları akış sitometri analizi ve qPCR analizi kullanılarak değerlendirildi.
Şekil 3, saf CD4+ T hücrelerini sıralamak için uygulanan geçit stratejisini göstermektedir. Ana hücre popülasyonu ve singlet hücreler seçildikten sonra (Şekil 3'ün ilk iki kapısında gösterildiği gibi), FVD-CD4+ hücreleri, Th17 hücrelerine polarize CD4 T hücrelerini APC'lerdekilerden ayırt etmek için kapılandı. Son olarak, CD4 T hücreleri tarafından üretilen IL-17A, nakavt verimliliğini gösteren Th17 farklılaşma verimliliğini temsil eder. mCherry pozitif hücrelerin yüzdesi, retroviral enfeksiyonun etkinliğini yansıtırken, nakavt etkinliği, IL-17A pozitif hücrelerin yüzdesi ile gösterilir. Hücre canlılığını artırmak ve sıralama süresini en aza indirmek için, splenositler bir fare CD4 +<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66966/66966fig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66966/66966fig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66966/66966fig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66966/66966fig2large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66966/66966fig3.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66966/66966fig3large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66966/66966fig4.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66966/66966fig4large.jpg" target="_blank"></a><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"></td><td colspan="4"></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td rowspan="2"></td><td rowspan="2"></td><td rowspan="2"></td><td rowspan="2"></td><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İn vitro Th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral CRISPR/Cas9 aracılı gen hedeflemesi

T helper cells that produce IL-17A, known as Th17 cells, play a critical role in immune defense and are implicated in autoimmune disorders. CD4 T cells ...

retroviral-crisprcas9-mediated-gene-targeting-for-study-th17

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, CRISPR-Cas9 teknolojisini kullanarak insan T hücrelerinde gen düzenlemesi yapmak için bir testi göstermektedir. Birincil CD4 + ve CD8 + T hücrelerinin bir karışımı, nakavt için spesifik genleri hedefleyen bir CRISPR-Cas9 ribonükleoprotein kompleksi ile birleştirilir. Elektroporasyon üzerine, sgRNA, Cas9'u hedef DNA dizisine yönlendirerek hassas kesimler oluşturur. Bu kesikler daha sonra hücrenin homolog olmayan uç birleştirme mekanizması tarafından onarılır ve bu da gen nakavtına yol...

T Hücrelerinde Gen Düzenleme için Bir CRISPR-Cas9 Tekniği

Naif CD4 Coxsackie adenovirüs reseptör transgenik ekspresyonu ile T-hücreleri içine adenoviral gen transferi düzenleyici T hücre farklılaşmasının moleküler analiz...

Naif CD4 adenoviral İletimi Treg Farklılaşma Eğitim Hücreler T

Bir çok deney sistemleri, bir immün yanıt olarak T hücresi gelişimini ve fonksiyonunu düzenlemek mekanizmaları anlamak için kullanılmıştır. İşte retroviral transdüksiyon kullanarak genetik yaklaşım düzenleyici yolları belirlenmesinde, ekonomik zaman verimli ve en önemlisi, son derece bilgilendirici olan tarif edilmektedir.

Eğitim için bir genetik Yaklaşım olarak yardımcı T hücrelerinin retroviral İletimi Mekanizmaları kendi Farklılaşma ve Kontrol Fonksiyonunun

Protokoller iCRISPR platformu kullanılarak hPSC mutan çizgileri oluşturmak için ve tarif edilen glukoz duyarlı β-benzeri hücrelere hPSCs ayırt etmek. hPSC yönettiği farklılaşma ile genom düzenleme teknolojisini birleştirerek insan gelişimi ve hastalık seyrinde soy belirleyicilerinin rolü sistematik analizi için güçlü bir platform sunmaktadır.

İnsan Pankreas Geliştirme Lineage Belirleyicileri sorgulanması için Genom Düzenleme ve hPSCs arasında Yönetmen Farklılaşma

Yeni nesil elektroporasyon, gen ekspresyonunu ve hücre davranışını değiştirmek için insan Th17 hücrelerini küçük RNA'larla transfekte etmek için etkili bir yöntemdir.

Yeni Nesil Electroporasyonun tarafından İlköğretim İnsan Th17 Hücreleri Küçük RNA Transfeksiyon

Biz yeni tüp bebek modelleri üretimi için seçili genomik sitelerdeki proviral tümleştirme özetlemek HIV-1 enfeksiyonu için genom mühendislik iş akışı mevcut. HIV kaynaklı gazetecilere hedefleme CRISPR-Cas9-aracılı, siteye özgü genom manipülasyon tarafından yönetilir. Detaylı iletişim kuralları tek hücreli klon üretimi, tarama ve doğru hedefleme doğrulama için sağlanan.

HIV-1 enfeksiyonu seçili Proviral tümleştirme siteleri ile Jurkat muhabir modelleri oluşturmak için CRISPR-Cas9-esaslı genom mühendislik

Hematopoetik kök ve ata hücrelerinin (HSPC) CRISPR/Cas9 sistemi tarafından hematopoetik sisteme özgü gen modifikasyonları ile fare model sistemlerini hızla geliştirmek için yüksek verimli genom düzenlemesi için protokoller tanımlanmıştır.

Hastalık Modellerinde Hematopoetik Hücrelerin İncelemi için Lentiviral CRISPR/Cas9-Aracılı Genom Düzenleme

Bu protokol, naif CD4+ T hücrelerinin in vitro olarak patojenik Th17 hücrelerine farklılaşmasını tanımlar. Spesifik olarak, çok parametreli akış sitometrisi tabanlı bir yaklaşımla birleştirildiğinde, bu farklılaşma yöntemi kullanılarak saf CD4+ T hücrelerinden %90 saflıkta patojenik Th4 hücreleri elde edilebilir.

Farede Naif CD4+ T Hücrelerinin Patojenik Th17 Hücrelerine İn Vitro Farklılaşması

Bu protokol, insan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücreleri (CAR Treg'ler) oluşturmak ve test etmek için kolaylaştırılmış bir iş akışı sağlar.

İnsan kimerik antijen reseptörü düzenleyici T hücrelerinin üretimi

THP-1 hücre hattı, biyoloji ile ilgili çeşitli araştırma alanlarında insan monositlerinin / makrofajlarının işlevlerini araştırmak için bir model olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu makale, sağlam ve tekrarlanabilir fenotipik verilerin üretilmesini sağlayan verimli CRISPR-Cas9 tabanlı mühendislik ve tek hücreli klon izolasyonu için bir protokolü açıklamaktadır.

THP-1 Hücrelerinde Elektroporasyon Tabanlı CRISPR-Cas9 Aracılı Gen Nakavt ve Tek Hücreli Klon İzolasyonu

Öğrenin, retroviral CRISPR/Cas9 ile primer T hücrelerinde gen hedefleme yaparak Th17 farklılaşmasını incelemeyi. Bu yöntem, bağışıklık yanıtlarındaki gen düzenlemesini anlamak için etkili bir alternatif sunar.

İn vitro Th17 farklılaşmasının incelenmesi için retroviral CRISPR/Cas9 aracılı gen hedeflemesi

Daha fazla video keşfet