Farelerde yayılan depolarizasyonları görselleştirmek ve kaydetmek için görüntüleme ve elektrofizyolojiyi birleştirmek

Araştırmamızın kapsamı, yayılan depolarizasyonlar ile hafif travmatik beyin yaralanmaları arasındaki ilişkiyi beyin modelleri kullanarak anlamaktır. Grubumuz ve diğerleri son zamanlarda farelerde hafif kapalı kafatası yaralanmalarında yayılan depolarizasyonların meydana geldiğini göstermiştir. Yaygın olarak kullanılan in vivo elektrofizyoloji amplifikatörleri, yayılan depolarizasyonlarla ilişkili yavaş hücre dışı kaymaları filtreleyerek yayılan depolarizasyonu tespit etmeyi neredeyse imkansız hale getirir.

Bu protokolün avantajı, hafif bir travmatik beyin hasarını takiben yayılan depolarizasyonların yokluğunu veya varlığını doğrulamak için hem görüntüleme hem de in vivo elektrofizyolojiden yararlanmaktır. MTBI'lerle ilişkili akut davranış, patoloji ve uzun vadeli bilişsel eksikliklerde depolarizasyonların yayılmasının rolünü anlamaya başladık. Başlamak için, anestezi uygulanmış hayvanı stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin ve bir ısıtma yastığı kullanarak hayvanın vücut ısısını koruyun.

10 numara neşter bıçağı kullanarak, orta hat boyunca rostraldan kaudal'a doğru bir kesi yapın. Ve hemen kesiye siyanoakrilat yapıştırıcı sürün. Ardından, kafatasını ortaya çıkarmak için cildi yanlamasına yayın.

Ekstra koruma sağlamak için kafatasının üzerine bir veya iki damla daha siyanoakrilat yapıştırıcı ekleyin. Yapıştırıcı kururken, beyincik üzerindeki kesi boyutunu artırmak için steril cerrahi makas kullanın. Ardından, 0,8 milimetrelik bir matkap ucu kullanarak kafatasına pilot delikler açın ve vidaları kafatasına çevirin.

Fazla teli vidanın etrafına sarın ve daha sonra kafa aşaması yerleşimi için biraz gevşeklik sağlayın. Tüm kafatası vidaları yerine oturduktan sonra, tüm altın pimleri istenen kafa aşaması konektörüne takın. Konektörü stereotaksik kolla yerinde tutarak, konektör pimlerini kablo teması olmadan vida başlarının üzerine yakın konumlandırın.

Tüm alanı siyanoakrilat yapıştırıcı ile kapatın ve kafatası vidalarının önündeki görüntüleme alanının bozulmadığından emin olun. Altın pimlerin tabanının etrafında diş çimentosu oluşturun ve kafatası vidalarından gelen altın pimlerin kafa aşamasındakilere bağlı olmadığından emin olun. Baş aşaması konektörünü çıkarmadan önce diş çimentosunun kürlenmesine izin verin.

Başlamak için IOS bilgisayarı ve LED panel kartını açın. Elektrot implante edilmiş anestezi uygulanmış hayvanı kameranın altındaki bir darbe yatağına monte edin. Ve odak halkasını kortikal yüzeyi kaplayacak şekilde ayarlayın.

İçsel optik sinyali veya IOS ayarlarını yükledikten sonra, fareyi görüntülemek ve hayvanın kafatasını kameranın altında ortalamak için Canlı düğmesine basın. Ardından, çekim ayarlarına erişmek ve istediğiniz zaman noktalarını seçmek için Multi-D Acquisition düğmesine basın. Görüntüleri, uygun ad önekiyle belirlenen dosya yoluna kaydedin.

Hayvandan gelen altın pimleri baş aşamasına bağlayın tage konektörüne ve ardından baş tage'a. Elektrofizyoloji bilgisayarını açın ve bilgisayarı elektrofizyoloji ekipmanına bağlayın. Intan yazılımı için ayarları yükledikten sonra, Choose File Format (Dosya Formatı Seç) simgesine tıklayın ve açılan pencerede One File Per Signal Type Format (Sinyal Türü Formatı Başına Bir Dosya) seçeneğini seçin.

Ardından, Donanım Bant Genişliği altındaki BW sekmesinde, 0,13 ila 500 hertz arasında amplifikatör bant genişliğini seçin. Filter Display Selector (Filtre Görüntüleme Seçicisi) altında Geniş'i seçin. Düşük ve yüksek geçiş filtrelerini ayarladıktan sonra, kaydetmek için istediğiniz dosya yolunu seçmek için Dosya Adı Seç simgesine tıklayın.

Darbe için elektromanyetik çarpma tertibatını açın ve ucun düzgün bir şekilde geri çekilip çekilmediğini ve uzadığını kontrol etmek için kolu hafifçe vurun. Hayvanı hızlı bir şekilde köpük yatağa yerleştirin ve yatağı çarpma tertibatının ucunun altına kaydırın. Çarpma tertibatı ucunu orta hat ile hizalayın ve bir milimetre bregg rostral yerleştirin.

Ardından, çarpma tertibatı ucunu hayvanın başının üst kısmına sıkıca temas edene kadar indirin. Çarpma tertibatı ucunu geri çekmek için kolu itin, ardından çarpma kolunu etkinleştirmeden önce manuel olarak beş milimetre indirin. Hayvanı hemen köpük yataktan çıkarın ve beş saniye içinde görüntülemek için kameranın altına yerleştirin.

Çok Boyutlu Alım penceresinde IOS görüntülemeyi başlatmak için Al'a tıklayın. Tüm yayılan depolarizasyon olayını kaydetmek için dört dakika boyunca görüntü yakalayın. Elektrofizyoloji kaydını başlatmak için Intan yazılımındaki Kaydet simgesine tıklayın.

Kaydın tamamlanmasının ardından, hayvanı baş sahnesinden ve konektöründen çıkarın ve tekrar kafesine yerleştirin. Görüntü yığınını açmak için Dosya'ya, ardından İçe Aktar ve Görüntü Sırası'na tıklayın. Yayılan depolarizasyonun grafiğini oluşturmak için imleci kullanarak, ilgilenilen bölgeyi tanımlayan bir kare çizin.

Grafiği çizmek için Görüntü'ye, ardından Yığınlar'a ve Z Ekseni Profilini Çiz'e gidin ve Canlı düğmesini tıklayın. Oluşturulan çizimde, bir değer listesi oluşturmak için Liste'ye tıklayın. Görselleştirme için, gri tonlamalı görüntüyü bir yangın arama tablosuyla dönüştürün.

Pencereden korteks ve büyük kan damarları boyunca yayılan depolarizasyonlar gözlendi. Elektrofizyoloji kayıtlarındaki yüksek frekanslı aktivite, izofluran çıkarıldıktan sonra sahte hayvanlarda hızlı bir geri dönüş gösterdi. Ancak depolarize hayvanlarda, yüksek frekanslı aktivite iyileşmeden önce birkaç dakika boyunca baskılanmış kalmıştır.

Güç grafikleri, her iki durumda da baskıdan kurtulduktan sonra güçte net bir artış gösterdi.