Name: Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Öğrenin orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için modifiye bir hazırlık yöntemini. Bu protokol, sıçan modellerinde serebral iskemi çalışmalarını kolaylaştırarak nöroprotektif ilaç keşfini hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82173781 ve 82373835), Doktora Sonrası araştırma projesi (BKS212055), Foshan Bilim ve Teknoloji Bürosu Bilim ve Teknoloji İnovasyon Projesi (2320001007331), Guangdong Temel ve Uygulamalı Temel Araştırma Vakfı (2019A1515010806), Guangdong Eyaletindeki Genel Üniversitelerin Anahtar Alan Projeleri (Akıllı Üretim) (2020ZDZX2057) ve Genel Bilimsel Araştırma Projeleri (Karakteristik Yenilik) tarafından desteklenmiştir. Guangdong Eyaletindeki Üniversiteler (2019KTSCX195).

Deney protokolü, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nde Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi yönergelerine uygun olarak yürütülmüştür (Kayıt numarası: 2019-DL-002). Tüm hayvan araştırma verileri, ARRIVE (Hayvan Araştırmaları: İn Vivo Deneylerin Raporlanması) yönergelerine göre belgelenmiştir. Bu çalışma için 250 g ± 20 g ağırlığında ve 6-8 haftalık erkek Sprague Dawley (SD) sıçanları kullanıldı. Kullanılan hayvanlar, reaktifler ve ekipmanla ilgili ayrıntılar Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Hayvan hazırlama
<ol><li>Zoletil 50 (50 mg / kg, IM) ve Ksilazin Hidroklorür (40 mg / kg, IP) kullanarak sıçanlarda derin anesteziyi indükleyin ve koruyun. Cerrahi prosedür boyunca bir ısıtma yastığına bağlı bir rektal prob kullanarak vücut sıcaklığının 37 ± 0,5 °C'de tutulduğundan emin olun. Kurumasını önlemek için farenin gözlerine veteriner merhemi sürün.</li>
	<li>Sıçanların baş ve boynundan saçları tıraş edin. Baş ve boyundaki tüyleri çıkarmak için tüy dökücü krem kullanın, ardından kremi normal tuzlu suyla yıkayın. Steril pamuk topları kullanarak üç kez etanol ve povidon-iyot uygulayarak cerrahi bölgedeki cildi dezenfekte edin.</li>
	<li>Bir neşter kullanarak sıçan kafasının ortasında sagital sütür yönü boyunca 2 cm'lik bir kesi yapın ve kafatasını kaplayan kasları dikkatlice çıkarın.</li>
	<li>Bir kafatası matkabı kullanarak farenin iskemik tarafındaki kafatasını inceltin. Öğütme işlemi sırasında soğumak ve kalıntıları temizlemek için normal tuzlu su kullanın. Lazer benek kontrast görüntüleme (LSCI) kullanarak sıçanların temel kan akışını kaydedin.</li>
	<li>Steril pamuk topları kullanarak boynun derisine üç kez etanol ve povidon-iyot uygulayın. Cerrahi bir bıçak kullanarak boynun orta hattı boyunca 2 cm'lik bir kesi yapın. Cildi ve tükürük bezlerini yanal olarak geri çekmek, sternokleidomastoid ve servikal kasları açığa çıkarmak için ekartörler kullanın.</li>
	<li>Karotis bölgesini ortaya çıkarmak için sternokleidomastoid ve servikal kasları ayırın. Ortak karotis arter (CCA), internal karotis arter (ICA) ve dış karotis arterin (ECA) vasküler anatomisini tanımlayın. Vasküler anatomiye dayanarak, CCA'nın yanı sıra CCA'dan türetilen ECA ve ICA15'i ayırın. NOT: Sıçanın anatomik yapısı, CCA bölgesinin esas olarak sternokleidomastoid ve servikal kaslarla kaplı olduğunu ve CCA'dan türetilen ICA ve ECA ile birlikte olduğunu gösterir. Ayırma CCA'yı açığa çıkardıktan sonra, CCA boyunca ICA ve ECA'yı temsil eden Y şeklinde bir çatal görülebilir. CCA'ya paralel uzanan vagus sinirine zarar vermemek için dikkatli olun.</li>
</ol>2. MCA'nın tıkanması
<ol><li>Kan akışını geçici olarak engellemek için 3-0 ipek iplik kullanarak dış karotis arter (ECA) ve ortak karotis arter (CCA) üzerine kolayca çözülen bir düğüm atın. CCA'nın üzerine ilk düğümden yaklaşık 0.5 cm uzakta bir damar klipsi yerleştirin.<ol><li>5 mL'lik bir şırınganın iğnesini siyaha boyayın. Siyaha boyanmış iğneyi kullanarak CCA'da küçük bir delik oluşturun ve iğne deliklerini siyah olarak işaretleyin.</li>
	</ol></li>
	<li>Monofilament naylon sütürü siyah işaretten CCA'ya yerleştirin. Vasküler klipsi açın ve naylon teli hafif bir dirençle durana kadar Dahili Karotis Arterine (ICA) yönlendirin. Monofilament naylon ipliği arterin içinde yerinde tutmak için ikinci düğümü güvenli bir şekilde sıkın ve blokaj konumundan yer değiştirmesini önleyin.</li>
	<li>Bu noktada iskemi zamanını not edin ve LSCI kullanarak iskemik taraftaki kan akış değerini ölçün. Analjezi ve yara kapanması için boyun yarasına bupivakain damlaları uygulayın. Anestezi maskesini çıkarın ve farenin iyileşmesine izin verin. NOT: Monofilament naylon sütür ICA'ya girmekte zorluk çekiyorsa, hafifçe geri çekin ve tekrar takmayı deneyin.</li>
</ol>3. MCAO'nun Reperfüzyonu
<ol><li>90 dakikalık iskeminin ardından, sıçanları izofluran ile yeniden uyuşturun. LSCI kullanarak iskemik taraftan serebral kan akışını ölçün ve monofilament naylon sütürün kaymadığından emin olun.</li>
	<li>Kan reperfüzyonuna izin vermek için dış karotis arter (ECA) üzerindeki düğümleri çözün. Ortak karotis arter (CCA) üzerindeki düğümü serbest bırakın, monofilament ipliği sabitleyin ve dikişi geri çekin. Kanamayı önlemek için sabit monofilament sütürün önüne vasküler bir klips uygulayın.</li>
	<li>İlk CCA düğümünü vasküler bir klipsle değiştirin. Damar kesisini yana doğru döndürmek için cımbız kullanın (Şekil 1). Kesi cımbızla kelepçeleyin ve kesiği onarmak için 6-0 iplik kullanarak bağlayın. Vasküler klipsi çıkarın, sızıntı olup olmadığını kontrol edin ve tam reperfüzyonu onaylayın (Video 1). NOT: CCA darlığına yol açabilecek aşırı damar klemplenmesini önlemek için insizyonu onarmak için ligasyon yapın.</li>
	<li>Başarılı reperfüzyonu doğrulamak için insizyon ligasyonundan sonra LSCI kullanarak serebral kortikal kan akışı değerlerini kaydedin. Boyun kesisini dikişlerle kapatın ve enfeksiyon ve dehidrasyonu önlemek için 1.000.000 ünite penisilin ve 2 mL salin uygulayın.</li>
	<li>Sıçanlar bilincini geri kazanana kadar sıcaklığı koruyun. Ameliyat sonrası yumuşak yiyecekler verin ve hayvanların yaşamsal belirtilerini izleyin.</li>
</ol>4. Sinir fonksiyonunun ve serebral iskemik hasarın değerlendirilmesi
<ol><li>Sıçanlar tamamen uyandıktan sonra, sinirsel işlevleri, hayvan gruplamasından habersiz araştırmacılar tarafından değerlendirilecektir. Tüm sıçanların nörolojik fonksiyonunu değerlendirmek için Longa skoru ölçeğini (Tablo 1) ve modifiye nörolojik şiddet skoru (mNSS) ölçeğini (Tablo 2) kullanın.</li>
	<li>Ameliyattan 24 saat sonra, sıçanları izofluran kaynaklı anestezi altında (4 L / dak oksijende% 4 izofluran) servikal dislokasyon16 yoluyla (kurumsal olarak onaylanmış protokolleri izleyerek) ötenazi yapın. Kalan kanı çıkarmak için beyni buzlu suyla durulayın.</li>
	<li>Beyin dokusunu 5 bölüme ayırın ve TTC ile boyayın. Beyin dokusu dilimlerinin her iki tarafının görüntülerini yakalayın, Image J yazılımını kullanarak ön ve arka tarafların iskemik alanını ölçün ve aşağıdaki formülü kullanarak enfarktüs oranını hesaplayın: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67060/67060eq01.jpg" style="margin: auto;"> NOT: S1 ve S2 , sırasıyla beyin dilimlerinin proksimal ön beyin ve proksimal beyin sapı taraflarının enfarktüs alanını temsil eder. Her beyin diliminin enfarktüs alanı, h'nin beyin diliminin kalınlığını temsil ettiği Swanson formülü kullanılarak düzeltilir. Yazar tarafından daha önce önceki araştırma17'de özetlenen bu formül, enfarktüs lezyon boyutunun daha doğru bir şekilde hesaplanmasına izin verir.</li>
	<li>Modelin başarı oranını ve kararlılığını değerlendirmek için istatistiksel ve grafik yazılımı kullanarak verileri analiz edin.</li>
	<li>Sıçanlarda kortikal nöronları etiketlemek için immünofloresan yöntemini kullanın ve bu yöntemin neden olduğu nöronal hasarı daha da doğrulayın. Sıçanlarda 24 saatlik iskemi-reperfüzyondan sonra, beyin dokusu elde etmek için önceden soğutulmuş PBS kullanılarak kardiyak perfüzyon yapıldı.</li>
	<li>Beyin dokusunu bölümlere ayırın ve dondurun. Olgunlaşmamış nöronal belirteç Doublecortin (DCX)18, nöronal çekirdek belirteci Nöronal Çekirdekler (NeuN)18 ve nöron dendritik belirteç Mikrotübül ile ilişkili protein-2 (MAP-2)19 gibi nöronal antikorları kullanın. Lazer konfokal mikroskopi kullanarak iskemik nöronların ekspresyonunu gözlemleyin.</li>
</ol>

Gelişmiş Reperfüzyon ve Stabilite için Korunmuş ECA'lı Modifiye MCAO/R Modeli

<ol><li>Paul, S., Candelario-Jalil, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+neuroprotective+strategies+for+the+treatment+of+ischemic+stroke%3A+An+overview+of+clinical+and+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Emerging neuroprotective strategies for the treatment of ischemic stroke: An overview of clinical and preclinical studies.</a> Exp Neurol. 335, 113518(2021).</li>
<li>Feigin, V. L., Owolabi, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pragmatic+solutions+to+reduce+the+global+burden+of+stroke%3A+a+World+Stroke+Organization-Lancet+Neurology+Commission%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Pragmatic solutions to reduce the global burden of stroke: a World Stroke Organization-Lancet Neurology Commission.</a> Lancet Neurol. 22 (12), 1160-1206 (2023).</li>
<li>Putaala, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+Stroke+in+Young+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Continuum+%28Minneapolis%2C+Minn%29%22%5BJournal%5D)">Ischemic Stroke in Young Adults.</a> Continuum (Minneapolis, Minn). 26 (2), 386-414 (2020).</li>
<li>Girotra, T., Lekoubou, A., Bishu, K. G., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contemporary+and+comprehensive+analysis+of+the+costs+of+stroke+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">A contemporary and comprehensive analysis of the costs of stroke in the United States.</a> J Neurol Sci. 410, 116643(2020).</li>
<li>Howells, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+strokes+for+different+folks%3A+The+rich+diversity+of+animal+models+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22JCBFM%22%5BJournal%5D)">Different strokes for different folks: The rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia.</a> JCBFM. 30 (8), 1412-1431 (2010).</li>
<li>Matur, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+animal+models+of+ischemic+stroke+to+the+human+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Translating animal models of ischemic stroke to the human condition.</a> Transl Stroke Res. 14 (6), 842-853 (2023).</li>
<li>O'Collins, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1%2C026+experimental+treatments+in+acute+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">1,026 experimental treatments in acute stroke.</a> Ann Neurol. 59 (3), 467-477 (2006).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema+1.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema 1. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Nosotchu. , 1-7 (1986).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Faber, J. E., Moore, S. M., Lucitti, J. L., Aghajanian, A., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+the+cerebral+collateral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Sex differences in the cerebral collateral circulation.</a> Transl Stroke Res. 8 (3), 273-283 (2017).</li>
<li>Justić, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+the+Koizumi+model+of+mouse+cerebral+ischemia%3A+A+comparative+longitudinal+study+of+cerebral+and+retinal+ischemia+in+the+Koizumi+and+Longa+middle+cerebral+artery+occlusion+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Redefining the Koizumi model of mouse cerebral ischemia: A comparative longitudinal study of cerebral and retinal ischemia in the Koizumi and Longa middle cerebral artery occlusion models.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 42 (11), 2080-2094 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cerebral+microcirculation+perfusion+in+rat+models+of+middle+cerebral+artery+occlusion+prepared+through+common+carotid+artery+insertion+and+external+carotid+artery+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22CJTER%22%5BJournal%5D)">Comparison of cerebral microcirculation perfusion in rat models of middle cerebral artery occlusion prepared through common carotid artery insertion and external carotid artery insertion.</a> CJTER. 27 (11), 1683-1691 (2023).</li>
<li>Dittmar, M., Spruss, T., Schuierer, G., Horn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+carotid+artery+territory+ischemia+impairs+outcome+in+the+endovascular+filament+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">External carotid artery territory ischemia impairs outcome in the endovascular filament model of middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 34 (9), 2252-2257 (2003).</li>
<li>Trueman, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+re-examination+of+the+intraluminal+filament+MCAO+model%3A+impact+of+external+carotid+artery+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">A critical re-examination of the intraluminal filament MCAO model: impact of external carotid artery transection.</a> Transl Stroke Res. 2 (4), 651-661 (2011).</li>
<li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovasc Res. 114 (2), 291-299 (2018).</li>
<li>Pitoulis, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodelling+of+adult+cardiac+tissue+subjected+to+physiological+and+pathological+mechanical+load+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Remodelling of adult cardiac tissue subjected to physiological and pathological mechanical load in vitro.</a> Cardiovasc Res. 118 (3), 814-827 (2022).</li>
<li>Ma, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cerebral+ischemia%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Animal models of cerebral ischemia: A review.</a> Biomed Pharmacother. 131, 110686(2020).</li>
<li>Belayev, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Docosanoids+promote+neurogenesis+and+angiogenesis%2C+blood-brain+barrier+integrity%2C+penumbra+protection%2C+and+neurobehavioral+recovery+after+experimental+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Docosanoids promote neurogenesis and angiogenesis, blood-brain barrier integrity, penumbra protection, and neurobehavioral recovery after experimental ischemic stroke.</a> Mol Neurobiol. 55 (8), 7090-7106 (2018).</li>
<li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carthamin+yellow+improves+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+by+attenuating+inflammation+and+ferroptosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Carthamin yellow improves cerebral ischemia-reperfusion injury by attenuating inflammation and ferroptosis in rats.</a> Int J Mol Med. 47 (4), 52(2021).</li>
<li>Chia, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+the+number+of+ischemic+strokes+potentially+eligible+for+endovascular+thrombectomy%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Determining the number of ischemic strokes potentially eligible for endovascular thrombectomy: a population-based study.</a> Stroke. 47 (5), 1377-1380 (2016).</li>
<li>Henninger, N., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+time+window+for+endovascular+and+pharmacological+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Extending the time window for endovascular and pharmacological reperfusion.</a> Transl Stroke Res. 7 (4), 284-293 (2016).</li>
<li>Zhang, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Intravenous+thrombolytic+therapy+in+acute+ischemic+stroke+patients%3A+evaluation+of+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Use of Intravenous thrombolytic therapy in acute ischemic stroke patients: evaluation of clinical outcomes.</a> Cell Biochem Biophys. 72 (1), 11-17 (2015).</li>
<li>Morris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+variables+influencing+ischemic+injury+in+the+Longa+and+Koizumi+methods+of+intraluminal+filament+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">A comparative study of variables influencing ischemic injury in the Longa and Koizumi methods of intraluminal filament middle cerebral artery occlusion in mice.</a> PLOS One. 11 (2), e0148503(2016).</li>
<li>Smith, H. K., Russell, J. M., Granger, D. N., Gavins, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+differences+between+two+classical+surgical+approaches+for+middle+cerebral+artery+occlusion-induced+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Critical differences between two classical surgical approaches for middle cerebral artery occlusion-induced stroke in mice.</a> J Neurosci Methods. 249, 99-105 (2015).</li>
<li>Dittmar, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ECA+transection+in+the+development+of+masticatory+lesions+in+the+MCAO+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The role of ECA transection in the development of masticatory lesions in the MCAO filament model.</a> Exp Neurol. 195 (2), 372-378 (2005).</li>
<li>Lourbopoulos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inadequate+food+and+water+intake+determine+mortality+following+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 37 (6), 2084-2097 (2017).</li>
<li>Ogishima, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligation+of+the+pterygopalatine+and+external+carotid+arteries+induces+ischemic+damage+in+the+murine+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Ligation of the pterygopalatine and external carotid arteries induces ischemic damage in the murine retina.</a> Invest Ophth Vis Sci. 52 (13), 9710-9720 (2011).</li>
<li>Irvine, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reperfusion+after+ischemic+stroke+is+associated+with+reduced+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Reperfusion after ischemic stroke is associated with reduced brain edema.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 38 (10), 1807-1817 (2018).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+Size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: Size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2 (3), 396-409 (2005).</li>
<li>Dirnagl, U., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+The+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: The quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).</li>
<li>Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+parameters%27+impact+on+mortality+and+variability+in+mouse+stroke+experiments%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Method parameters' impact on mortality and variability in mouse stroke experiments: A meta-analysis.</a> Sci Rep. 6, 21086(2016).</li>
<li>McColl, B. W., Carswell, H. V., McCulloch, J., Horsburgh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+cerebral+hypoperfusion+and+ischaemic+pathology+beyond+MCA+territory+after+intraluminal+filament+occlusion+in+C57Bl%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Extension of cerebral hypoperfusion and ischaemic pathology beyond MCA territory after intraluminal filament occlusion in C57Bl/6J mice.</a> Brain Res. 997 (1), 15-23 (2004).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+Evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: Evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 18 (5), 570-579 (1998).</li>
<li>Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Fern, R., Gibson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+surgical+approach+reduces+variability+following+filament+induction+of+experimental+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">An alternative surgical approach reduces variability following filament induction of experimental stroke in mice.</a> Dis Model Mech. 10 (7), 931-938 (2017).</li>
</ol>

Monofilament naylon sütür ile indüklenen orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) modeli, MCAO modellerinin hazırlanmasında kullanılan en yaygın yöntemdir. Bu yaklaşım klinik öncesi çalışmalarda yaygın olarak benimsenmiştir ve basitliği, kraniyotomi ihtiyacının olmaması, minimal cerrahi travma ve reperfüzyon elde etme yeteneği nedeniyle birçok uygulayıcı tarafından kabul görmüştür.
İntraluminal filament MCAO için iki klasik cerrahi teknik vardır: Koizumi yöntemi8 ve Longa yöntemi9. Bu yöntemler arasındaki temel fark, MCA'yı tıkamak için sütürün nasıl sokulduğunda yatmaktadır. Koizumi yönteminde dikiş, ortak karotis arter (CCA) kesisinden internal karotis artere (ICA) yerleştirilir. Sütürün ön ucu, MCA'nın başlangıç noktasını bloke etmek için silikon ile kaplanmıştır. Tersine, Longa yönteminde sütür, kopmuş dış karotis arter (ECA) yoluyla ICA'ya yerleştirilir. Sütürün ön ucu, MCA'nın başlangıç noktasını bloke etmek için küresel bir şekle genişletilir (Şekil 5). Reperfüzyon sırasında, kan akışını yeniden sağlamak için sütür nazikçe geri çekilir.
Longa yöntemi, sütürün kopmuş dış karotis arter (ECA) yoluyla internal karotis artere (ICA) sokulmasını içerir. Bu işlem, ECA'nın ayrılması ve bağlantısının kesilmesinin yanı sıra küçük dalların ayrılmasını ve çıkarılmasını gerektirir, bunlar daha sonra kanamayı önlemek için bir elektrokoagülasyon kalemi kullanılarak kesilir. Sonuç olarak, bu yöntem dikkatli ve hassas bir çalışma gerektirir. Ayrıca, kopmuş ECA'nın kısa rezidüel ucu, yerleştirme sırasında sütürün kaymasını kolaylaştırabilir ve prosedürün karmaşıklığını daha da artırabilir. Bu zorluk, serebral iskeminin bir fare modelini hazırlarken özellikle belirgindir, çünkü doğruluğu sağlamak için genellikle bir mikroskop kullanılmasını gerektirir ve böylece operasyonun genel karmaşıklığına katkıda bulunur.
Koizumi yöntemiyle ilgili birincil endişe, ortak karotis arterin (CCA) ligasyonunda yatmaktadır, bu da iskemik taraftaki beyin dokusunun yalnızca Willis Çemberi yoluyla telafi edici reperfüzyonu ile sonuçlanır. CCA, kalpten gelen aort arkının çok önemli bir dalıdır ve serebral kan akışı perfüzyonunu sağlayan ana arter olarak görev yapar. Bu nedenle, Koizumi yöntemi ile oluşturulan serebral iskemi-reperfüzyon modeli sıklıkla bir hipoperfüzyon durumu yaşar. Bu hipoperfüzyon sadece orta serebral arter bölgesi ile sınırlı değildir, aynı taraftaki tüm iskemik hemisfere yayılır. 35 günlük modellemeden sonra bile, kan akış değeri taban çizgisine dönmez, bu da Koizumi yönteminin bir iskemi-reperfüzyon modeli10 yerine kronik hipoperfüzyonlu iskemik bir model olarak kabul edilmesi gerektiğini düşündürmektedir.
Buna karşılık, Longa yöntemi MCAO/R hayvanlarında %100'lük bir kan akış değerine ulaşabilir. Bununla birlikte, tam bir yeniden kanalizasyona ulaşmanın, Koizumi yönteminin mutlaka terk edilmesi gerektiği anlamına gelmediğine dikkat etmek çok önemlidir. Klinik çeviri düşünüldüğünde, Koizumi yöntemi, arter tıkanıklığı sonrası spontan yavaş rekanalizasyonu olan hastalar için daha uygun olabilir. Bununla birlikte, bu fenomen klinik uygulamada nispeten nadirdir. İskemik inme hastalarının sadece küçük bir yüzdesi tromboliz kriterlerini karşılamaktadır ve tedavi süresi20,21 içinde etkili tedavi almaktadır. Ayrıca, bazı hastalar trombolitik tedaviden sonra bile tam revaskülarizasyon elde edemezler22. Bu nedenle, Koizumi yöntemi bu tür hastaların durumlarını simüle etmek için kullanılabilir.
Öte yandan, Longa yöntemi, oklüzyondan sonra damarların hızlı bir şekilde yeniden kanalize olmasına izin vererek, klinik pratikte etkili trombolitik tedavi veya trombektomi alan hastaları simüle etmek için daha uygun hale getirir. Trombolitik tedavi görmemiş simüle edici hastalar için, Koizumi yöntemi ile hazırlanan kalıcı serebral iskemi modeli, daha tam bir oklüzyon ve daha basit bir cerrahi prosedür sunabilir.
Orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonunu (MCAO/R) indüklemek için Longa yöntemi, ortak karotis arter (CCA) kaynaklı vasküler rekanalasyonu koruyarak daha önemli reperfüzyon hasarına yol açabilir23,24. Bununla birlikte, Longa yöntemi sırasında dış karotis arterin (ECA) kesilmesi ve kalıcı olarak bağlanması gerektiğini, bunun da beynin tam kan akış yapısını bozduğunu ve klinik hastalarla tutarlı olmadığını belirtmek önemlidir. Ayrıca, lingual, maksiller ve oksipital arterler ECA13'ün dallarıdır. Bu nedenle, ECA'nın kesilmesi veya kalıcı olarak bağlanması, yeme ve içme bozukluklarına neden olarak kilo kaybına neden olabilir25. Önceki çalışmalar, MCAO modellemesini takiben farelerin ölümlerinin öncelikle serebral iskemik hasardan ziyade yetersiz gıda veya su alımından kaynaklandığını göstermiştir14,26. Ek olarak, ECA'nın bağlanması retinal kan akışını azaltabilir ve hücre ölümü şeklinde retina hasarına neden olabilir27.
Ek olarak, inme araştırmaları için en önemli gösterge enfarktüs hacmidir; Bununla birlikte, sütür yöntemiyle indüklenen enfarktüs hacminin, sıkı cerrahi ve veri toplama protokollerine rağmen önemli bir standart sapmaya sahip olduğu kanıtlanmıştır. Önceki raporlarda enfarktüs hacmireperfüzyon derecesi 28 ile ilişkilendirilmişti ve Koizumi'nin yöntemi ile hazırlanan inme modelinin reperfüzyonu Willis dolaşımınabağlı 29,30,31. Bununla birlikte, Willis döngüsünün, özellikle hayvanların %90'ının bir veya iki posterior komünikan arterden yoksun olabileceği C57Bl/6 farelerinde yüksek anatomik değişkenliğe sahip olduğu kanıtlanmıştır32, bu da iskemik yaralanmada yüksek değişkenliğin temel belirleyicisidir33. Bu nedenle, CCA perfüzyonunun korunması, enfarktüs hacmi34'ün değişkenliğini azaltabilir. İnme çalışmalarında enfarktüs boyutundaki ortalama varyasyon katsayısının %29,5 olduğu bildirilmiştir31 ve bu da inme çalışmalarının düşük istatistiksel gücüne katkıda bulunmuştur. Aynı zamanda potansiyel ilaç keşfi için büyük bir zorluk teşkil etmektedir. Bu kuşkusuz geliştirme ve klinik çeviri maliyetini artırır ve araştırmacıların potansiyel olarak etkili ilaçları kaçırmasına neden olabilir. Ayrıca, deneyin istatistiksel analizine dahil edilecek hayvan sayısını da artırır ve bu da hayvan etiğinin 3R ilkesini daha da ihlal eder.
Bu nedenle, bu çalışmada, serebral iskemi sonrası beyin dokusu kan akış yapısının bütünlüğünü ve yeterli reperfüzyonu sağlamak için modelleme yöntemleri değiştirildi. Ana modifikasyonlar iki adım içerir: (1) küçük bir kesi yapmak yerine 5 mL'lik bir şırınga iğnesi kullanarak sütürün CCA'ya yerleştirilmesi; bu adım CCA'nın insizyonunu azaltır ve insizyonun bağlanması için daha elverişlidir; (2) CCA'nın kan akışı perfüzyonunu etkilemeden dikişin geri çekilmesi ve CCA'nın iğne açıklığını bağlamak için daha ince ipek iplikler kullanılması. Tabii ki, bu da dikkatli bir cerrahi operasyon gerektirir, ancak ECA yoluyla sütürün tanıtılmasından farklıdır; bu yöntem, serebral kan akış yapısının bütünlüğünü korurken, kan akışının CCA yoluyla tam olarak reperfüze edilmesine izin verir, ameliyat prosedürünü basitleştirir ve enfarktüs hacminin değişkenliğini azaltır. Bazı araştırmacılar, insizyonları doku yapıştırıcısı ile onarmak için benzer araştırma yöntemleri kullanmışlardır, ancak bu, kontrol edilemeyen etkiler getirecek tromboz potansiyeline sahiptir. Ve insizyonu stabilize etmek daha uzun sürer25.
Sonuç olarak, bu çalışma, filament çekilmesinden sonra yeterli kan perfüzyonuna izin veren ve önemli ölçüde tekrarlanabilir enfarktüs hacimleri ve nörolojik hasara neden olabilen serebral iskemi-reperfüzyon modelinin hazırlanmasına yönelik modifiye bir yaklaşım sunmaktadır. Yukarıdaki sonuçların tümü, modifiye edilmiş yöntemin uygulanabilir ve tekrarlanabilir olduğunu ve pratisyenlerin serebral iskemik ilaçların etkili klinik translasyonunu kolaylaştırmak için modeller hazırlamaları için bir referans sağlayabileceğini göstermektedir.

Dünya Sağlık Örgütü'ne göre, inme, yüksek insidans oranı, yüksek mortalite ve yüksek sakatlık oranı 1,2 ile son on yılda dünya çapında ikinci önde gelen ölüm nedeni olmaya devam etmiştir. Küresel nüfus yaşlandıkça, gelişmekte olan ülkelerde inme insidansının artması ve potansiyel olarak yetişkinlerde erken ölüm ve sakatlığın önde gelen nedeni haline gelmesi beklenmektedir. Ek olarak, felçlerin daha genç yaşta ortaya çıkma eğilimi vardır3. Felç sonrası iş gücü kaybı da ailelere ve topluma ağır bir yük getirmektedir4. Bu nedenle, güvenli ve etkili tedavilerin geliştirilmesi inme araştırmalarında büyük bir zorluk teşkil etmektedir.
Hayvan modelleri, insan hastalıklarının önlenmesi ve tedavisini incelemek için çok önemli araçlar olarak hizmet eder. İnme tedavi stratejilerinin başarılı çevirisi, inme hayvan modellerinintekrarlanabilirliğine ve güvenilirliğine dayanır 5,6. Orta serebral arter (MCA), klinik inme için yaygın bir bölgedir ve MCAO modelini insan iskemik inmeye en yakın model yapar. Sütür yöntemi kullanılarak hazırlanan MCAO modeli, kraniyotomi olmaması ve iskemik zamanın kolay kontrol edilebilmesi gibi avantajları nedeniyle araştırmacılar tarafından tercih edilmiştir. Nöroprotektif deneylerin %40'ından fazlasında kullanılmıştır7. Bununla birlikte, sayısız avantajına rağmen, bu modelin operasyonel detayları birçok araştırmacı için tartışmalı bir konu olmaya devam etmektedir.
Dikişe bağlı orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli için reperfüzyon, dikişin geri çekilmesiyle gerçekleşir. Şu anda, sütür yerleştirme için iki ana yöntem kullanılmaktadır: Koizumi'nin yöntemi8 ve Longa'nın yöntemi9. Koizumi'nin yönteminde sütür, internal karotis artere (ICA) esas olarak ortak karotis arter (CCA) insizyonundan girerken, Longa'nın yönteminde kopmuş dış karotis arterden (ECA) ICA'ya geçer. Reperfüzyon sırasında, Koizumi yöntemi CCA insizyonunun kalıcı olarak bağlanmasını gerektirir ve reperfüzyon10 için Willis çemberine dayanır. Bununla birlikte, bazı çalışmalar, etkili reperfüzyonun, CCA arzını kaybettikten sonra yalnızca Willis çemberinin telafi edici arzı yoluyla elde edilemeyeceğini göstermektedir. Ayrıca, Willis çemberi, özellikle C57Bl / 6 farelerinde yüksek anatomik değişkenlik sergiler, enfarktüs değişkenliğini arttırır ve deneysel veri güvenilirliğini azaltır. Sonuç olarak, bu yöntem araştırmacılar tarafından giderek daha fazla sorgulanmaya başlanmıştır11.
Longa'nın yöntemi, kopmuş ECA'dan bir sütür yerleştirilmesini ve ardından sütür çekildikten sonra internal karotis arterin (ICA) kalıcı olarak bağlanmasını içerir. Bu, CCA açıklığını koruyarak başlangıç değerlerinin% 100'üne kadar kan perfüzyonuna izin verir. Ancak bu yöntemde eksternal karotis arter ile küçük arter dallarının ayrılması, kesilmesi veya elektrokoagüle edilmesi işlemi zorlaştırmaktadır. Aynı zamanda beynin tam kan akış yapısını bozar, bu da klinik hastanın durumundanfarklıdır 12. Önemli olarak, çalışmalar, ECA'nın kesilmesinin veya bağlanmasının çiğneme ve yutmayı kontrol eden kaslarda iskemik lezyonlara neden olabileceğini, hayvan diyetini etkileyebileceğini ve sıçanlarda postoperatif hayvan ölümüne ve ciddi duyusal ve motor hasara yol açabileceğini göstermektedir13,14.
Bu nedenle, bu sorunları ele almak için acilen değiştirilmiş bir model hazırlama yöntemine ihtiyaç vardır. Bu çalışma, CCA yerleştirme insizyonunu onaran ve etkili reperfüzyon sağlayan modifiye bir MCAO modelleme yöntemini tanıtmaktadır. Prosedür basit, pratik ve uygulanabilir olup, önemli nörolojik hasara ve tekrarlanabilir enfarktüs lezyonlarına neden olur ve inme araştırmacıları için değerli rehberlik sağlar.

<table><tbody><tr><td>Hayvan anestezi sistemi</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan sıcaklığı koruyucu</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 ikincil antikoru</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB21303</td><td></td></tr><tr><td>DAP1 antikoru</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>G1012</td><td></td></tr><tr><td>DCX antikoru</td><td>Wuhan Saiweier Biyoteknoloji Co, Ltd</td><td>GB13434</td><td></td></tr><tr><td>Keçi serumu</td><td>Beyotime Biotechnology Co., LTD</td><td>C0265</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prizma</td><td>GraphPad Yazılımı</td><td>GraphPad Prizma 8.0</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Ulusal Sağlık</td><td>Enstitüleri ImageJ yazılımı</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Lazer benek kanı akış görüntüleme sistemi</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>PeriCam PSI NR</td><td></td></tr><tr><td>MAP-2 antikoru</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB11128</td><td></td></tr><tr><td>Minyatür el tipi kafatası matkabı</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>87001</td><td></td></tr><tr><td>monofilament sütür</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>250-280g</td><td></td></tr><tr><td>NeuN antikoru</td><td>Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd</td><td>GB11138</td><td></td></tr><tr><td>OCT gömme maddesi</td><td>BIOSHARP</td><td>BL557A</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin sodyum</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.</td><td>17121709-2</td><td></td></tr><tr><td>Donmuş Bölümler için Hızlı Antijen Alma Çözümü</td><td>Beyotime Biotechnology Co., LTD</td><td>P0090</td><td></td></tr><tr><td>SD sıçanlar</td><td>SPF (Pekin) Biotechnology Co., Ltd.</td><td>250-280g</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Beyotime Biyoteknoloji A.Ş., LTD</td><td>ST795</td><td></td></tr><tr><td>TTC</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>2019030101</tr></tbody></table>

orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için modifiye bir model hazırlığı

A Modified Model Preparation for Middle Cerebral Artery Occlusion Reperfusion

Orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyon (MCAO/R) modeli, inmenin patolojik mekanizmalarının anlaşılması ve ilaç geliştirilmesi için çok önemlidir. Bununla birlikte, yaygın olarak kullanılan modelleme yöntemleri arasında, Koizumi yöntemi, ortak karotis arterin (CCA) ligasyonu ve yeterli reperfüzyon elde edememesi nedeniyle sıklıkla incelemeyle karşı karşıyadır. Benzer şekilde, Longa yöntemi, dış karotis arterin (ECA) bağlantısını kesmek ve bağlamak için eleştirilmiştir. Bu çalışma, ECA'nın bütünlüğünü koruyan, CCA'dan monofilament naylon sütürün sokulmasını, bağlanmış CCA insizyonunun onarılmasını ve CCA'dan reperfüzyonun sürdürülmesini içeren modifiye bir model hazırlama yöntemini tanıtmayı amaçlamaktadır. Kan akımının reperfüzyonu, lazer benek akışı görüntüleme kullanılarak doğrulandı. Longa ölçeği, Modifiye Nörolojik Şiddet Skoru, trifeniltetrazolyum klorür (TTC) boyaması ve nöronların immünofloresan etiketlemesi gibi değerlendirme yöntemleri, bu yaklaşımın stabil iskemik sinir hasarına neden olabileceğini göstermiştir. Bu modifiye MCAO/R model protokolü basit ve stabil olup, serebral iskemi alanındaki uygulayıcılar için değerli rehberlik sağlar.

Lazer benek akımı görüntüleme, monofilament naylon sütürün tıkanmasından önce orta serebral arter (MCA) bölgesinde bol miktarda kan akımı olduğunu gösterdi ve sıçanların başlangıç kan akış değerleri kaydedildi. MCA'nın tıkanmasını takiben, beynin iskemik tarafındaki kan akış değeri hızla azaldı. Sütür çekilmeden önce, iskemik taraftaki kan akış değerleri, sütürün MCA'yı tıkayıp tıkamadığını doğrulamak için tekrar kontrol edildi. Sonuçlar kan akışında sadece hafif bir değişiklik olduğunu gösterdi. Sütür geri çekildikten sonra, kan akışı perfüzyonu hızla geri döndü (Şekil 2). Video 1 ayrıca ortak karotis arterin sağlam doldurma nabzını gösterir, bu da bu yöntemin serebral iskemi sonrası yeterli kan akışı perfüzyonu sağlayabileceğini düşündürmektedir.
Nörolojik fonksiyon skorları sonuçları (Şekil 3), sahte cerrahi grubuna göre model grubun Longa skorunun 1.80 ± 0.27 (p &lt; 0.05) ve mNSS skorunun 7.4 ± 0.89 (p &lt; 0.05) olduğunu ortaya koydu. Bu skorlar, bu yöntem kullanılarak hazırlanan orta serebral arter oklüzyon/reperfüzyon (MCAO/R) modelinin önemli nörolojik hasara yol açtığını göstermektedir. Video 2 , inme kaynaklı yaralanmanın ayırt edici bir özelliği olan emekleme sırasında dönen model grubu sıçanların karakteristik davranışını göstermekte ve bu yöntemin geçerliliğini daha da doğrulamaktadır.
TTC boyama, model grubu sıçanlarda enfarktüs oranının 5.58 ± 1.79 (p &lt; 0.05) olduğunu, enfarktüs alanının esas olarak striatum ve korteksi etkilediğini ve enfarktüs boyutunun nispeten sabit kaldığını gösterdi. İmmünofloresan boyama, iskemi-reperfüzyonu takiben kortikal nöronların kaybını gösterdi (Şekil 4). Bu bulgular toplu olarak, bu yöntemin klinik öncesi ilaç etkinliğini değerlendirmek için uygun stabil bir MCAO/R modeli oluşturabileceğini göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig01v5.jpg"> Şekil 1: CCA'nın konektör ligasyonunun şematik diyagramı. Sarı daire, tel tapasının giriş noktasını ve ligasyon bölgesini belirtirken, ligasyon konumu (sarı ok), ortak karotis arterin (CCA) tel ile nerede bağlandığını gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig02v5.jpg"> Şekil 2: İskemik taraftaki sıçanların oklüzyon öncesi, sonrası ve reperfüzyon öncesi ve sonrası zamanlarında lazer benekli kan akışı görüntüleri. (A) Mavi alanların düşük kan akış değerlerini ve kırmızı alanların yüksek kan akış değerlerini gösterdiği sıçanların serebral kan akışı görüntüleri. Ölçek çubukları: 200 mm. (B) Sıçanlarda serebral iskemi-reperfüzyondaki değişiklikler, ortalama ± standart sapma olarak sunulur ve örneklem büyüklüğü n = 5'tir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig03v5.jpg"> Şekil 3: Sham grubu ve model grubunda enfarktüs alanı ve nörolojik fonksiyon skorlarının sonuçları. (A) TTC boyama, hem sahte grupta hem de model grubunda beyin dokusunun enfarktüslü alanlarını gösterdi, beyaz alanlar enfarktüslü dokuyu ve kırmızı alanlar normal dokuyu gösterdi. (B) Longa ve mNSS skorlarının kantitatif sonuçları ve enfarktüs oranı sunulmaktadır. Sahte gruba kıyasla istatistiksel anlamlılık, n = 5 örneklem büyüklüğü ile *p &lt; 0.05 ile gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig04v5.jpg"> Şekil 4: Sahte grup ve model grupta kortikal nöron hasarının sonuçları. Kortikal nöronlarda NeuN (A), DCX (B) ve MAP-2 (C) ekspresyonu. Ölçek çubukları: 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67060/67060fig05v5.jpg"> Şekil 5: Koizumi, Longa ve modifiye yöntemle MCA oklüzyonu ve reperfüzyonunun diyagramı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/67060fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Motor Testleri/güçlü&gt;</td>
			<td>Nokta</td>
		</tr><tr><td>Kuyruğundan sıçan yetiştirmek</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Ön ayağın bükülmesi</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Arka bacağın fleksiyonu</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Kafa, 30 saniye içinde 10° &gt; dikey eksene taşındı</td>
		</tr><tr><td>Fareyi yere yerleştirmek</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td colspan="2">0 Normal yürüyüş</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Düz yürüyememe</td>
		</tr><tr><td colspan="2">2 Paretik tarafa doğru daire çizerek</td>
		</tr><tr><td colspan="2">3 Paretik tarafa düşmek</td>
		</tr><tr><td>Duyusal testler</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Yerleştirme testi (görsel ve dokunsal test)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">2 Proprioseptif test (derin his, pençeyi masa kenarına doğru iterek</td>
		</tr><tr><td colspan="2">uzuv kaslarını uyarır)</td>
		</tr><tr><td>Işın dengesi testleri</td>
			<td>6</td>
		</tr><tr><td colspan="2">0 Sabit duruş ile dengeler</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Kirişin yan tarafını kavrar</td>
		</tr><tr><td colspan="2">2 Kirişi sarar ve bir uzuv kirişten düşer</td>
		</tr><tr><td colspan="2">3 Kirişi sarar ve iki uzuv kirişten düşer veya kiriş üzerinde döner (&gt;60 s)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">4 Kiriş üzerinde dengede durmaya çalışıyor ancak düşüyor (&gt;40 sn)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">5 Kiriş üzerinde dengede durmaya çalışıyor ancak düşüyor (&gt;20 sn)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">6 Düşme: Kirişi dengelemeye veya ona tutunmaya çalışmak yok (&lt;20 sn)</td>
		</tr><tr><td>Refleksler yok ve anormal hareketler</td>
			<td>4</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Pinna refleksi (işitsel meatusa dokunurken baş sallama)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Kornea refleksi (korneaya pamukla hafifçe dokunulduğunda göz kırpma)</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 İrkilme refleksi (bir pano kağıdının kopmasından kaynaklanan kısa bir sese motor tepkisi</td>
		</tr><tr><td colspan="2">1 Nöbetler, miyoklonus, miyodiston</td>
		</tr><tr><td>Maksimum puan</td>
			<td>18</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: Modifiye nörolojik şiddet skoru.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2">Zea-Longa skorları</td>
		</tr><tr><td>Puan</td>
			<td>Belirti</td>
		</tr><tr><td>0 puan</td>
			<td>Nörolojik eksiklik yok</td>
		</tr><tr><td>1 puan</td>
			<td>Hafif: Kuyruk kaldırıldığında sağ ön pençe tamamen uzatılamıyor</td>
		</tr><tr><td>2 noktaları</td>
			<td>Orta: yürürken sağa/sola daireler çizer</td>
		</tr><tr><td>3 noktaları</td>
			<td>Şiddetli: Yürürken sağa/sola yuvarlanıyor</td>
		</tr><tr><td>4 noktaları</td>
			<td>Bilinç kaybı ile kendiliğinden yürüyememe</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 2: Zea-Longa skorları.
Video 1: Sıçanlarda reperfüzyon sırasında CCA insizyonunun ligatür onarımı için temel adımlar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/video%201.zip" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Video 2: MCAO/R uygulanan sıçanların davranışsal videoları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67060/video%202.zip" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

The middle cerebral artery occlusion reperfusion (MCAO/R) model is crucial for understanding the pathological mechanisms of stroke and for drug ...

a-modified-model-preparation-for-middle-cerebral-artery-occlusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İpliksi Orta serebral arter oklüzyonu farelerde iskemik inme eğitimi için ortak bir model.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Burada büyük kortikal infarkt ve sürekli açıklarını oluşturmak için karotis arter eşzamanlı tıkanıklığı olan yaşlı dişi farelerde kalıcı distal orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir protokol mevcut. Biz 24 saat ve inme sonrası 8 hafta yapısal MRI kullanarak lezyon büyüklüğü teyidini göstermektedir.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Neonatal inme, çalışmayı mümkün kılmak için tutarlı fokal yaralanma paternlerine ve yüksek tekrarlanabilirliğe sahip translasyonel bir model gerektiren erken beyin hasarının önemli bir nedenidir. Bu çalışmada, tam terim eşdeğeri kemirgenlerde hemorajik olmayan, tek taraflı fokal iskemi-reperfüzyon hasarı oluşturmak için ayrıntılı cerrahi prosedür anlatılmaktadır.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Mevcut protokol, serebral damarların anatomik yapısını hasara neden olmadan koruyan bir orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu sıçan modelini tanımlar.

Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli

Bu protokol, araştırmacıların modifiye Longa eksternal karotis arter yöntemini kullanarak fareler üzerinde orta serebral arter oklüzyon prosedürünü gerçekleştirmeleri için adım adım bir kılavuz sunar. Bu makalede sunulan modifikasyonlar orta serebral arter oklüzyonunun doğruluğunu arttırmayı ve tam reperfüzyonu sağlamayı amaçlamaktadır.

Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu

Öğrenin orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için modifiye bir hazırlık yöntemini. Bu protokol, sıçan modellerinde serebral iskemi çalışmalarını kolaylaştırarak nöroprotektif ilaç keşfini hızlandırır.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Daha fazla video keşfet