31 Ekim 2025
Bu protokol, pankreas kanalının görselleştirilmesini ve pankreas kanalı tıkanıklığına neden olmak için pankreas kanalının elektrokoagülasyonunu içeren kronik obstrüktif pankreatitin modellenmesine yönelik yeni bir yaklaşımı açıklamaktadır.
Kronik pankreatitin hayvan modellerini oluşturmak için, intraperitoneal sodyum enjeksiyonu ve pankreas kanalının ligasyonu dahil olmak üzere, sınırlamaları olan birçok yöntem vardır. Ekibimiz yakın zamanda farelerde kronik pankreatit için yeni bir elektrokoagülasyon modeli geliştirdi ve bu, uzun enjeksiyonlu ilaçlar veya ustalaşması zor bir yöntem gerektirmemesi avantajına sahip. Ve kolayca kronik bir pankreatit modeli kurabilirler.
Farelerde kronik pankreatiti indüklemek için elektriksel pıhtılaşmanın kullanılması, daha uygun ve deneysel bir model sağlayarak bu alanda gelecekteki araştırmalar için umut verici bir yol sunar. Başlamak için, vücut ısısını korumak için anestezi uygulanmış fareyi bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin. Bir düzeltici kullanarak göğüs ve alt karın arasındaki tüyleri tıraş edin.
Daha sonra, orta karın bölgesinde iki santimetre uzunluğunda bir kesi yapmak için makas kullanın, ardından üst karın ile ksifoid çıkıntı arasında bir santimetrelik bir kesi yapın. Elektrokoagülasyon için pankreas alanını bulmak için bir karın genişletici kullanın. Steril bir pamuklu çubuk kullanarak, sol üst karın bölgesinin arkasından duodenumu tanımlayın ve karaciğeri birbirine bağlayan safra kanalını görselleştirmek için çevirin.
Karaciğere retrograd infüzyonu önlemek için bir mikrovasküler klips kullanarak proksimal ortak safra kanalını geçici olarak kapatın. 0,25 x 0,35 milimetrelik polietilen boruyu 0,25 milimetrelik bir iğneye bağlayın ve büyük duodenal papillayı hedefleyerek ampulla çevresindeki alanı delin. Tüpü papillaya yerleştirin ve safra kanalının yarısına kadar geçirin, ardından girişi durdurun.
İnfüzyon pompasını çalıştırın ve pankreas kanalı maviye dönene kadar %0,2 metilen mavisi solüsyonunu infüze edin. İnfüzyondan sonra polietilen tüpü dışarı çekin ve mikrovasküler klipsi çıkarın. Pankreası sabitlemek için steril pamuklu çubuklar kullanın ve elektrokoagülasyon bıçağını mavi renkli alana yönlendirin.
Elektrokoagülasyonun çalışma parametrelerini ayarladıktan sonra, elektrot malzemesi olarak saf bakır kullanın ve kan damarlarından kaçınarak pankreasa iki ila üç saniye tedavi uygulayın. Metilen mavisi lekeli bölgenin rengi sarı veya kahverengiye dönene kadar elektrokoagülasyona devam edin. Mavi boyama solüsyonu pankreasta artık görünmediğinde, elektrokoagülasyon durdurulur.
Ameliyattan sonra fareyi yatak malzemesiyle kaplı polietilen bir kutuya yerleştirin. Pankreas kanalının elektrokoagülasyonundan sonra fareyi uyuşturun ve bir ameliyat platformuna yerleştirin. Orbital pleksustan kan toplamak için, göz küresinde hafif bir çıkıntı oluşturmak için cildi nazikçe arkadan tutun.
Ardından, kılcal borunun ucunu gözün köşesine yerleştirin ve 30 ila 45 derecelik bir açıyla göz küresinin altına nazikçe sokun. Kan akmaya başlayana kadar kılcal damarı döndürün. Kan alındıktan sonra gazlı bezle hafif baskı uygulayarak göz kapaklarını kapatın.
Kanı 1.200 g'da 15 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı yeni bir tüpte toplayın. Üreticinin tavsiyelerine uyarak piyasada bulunan kitleri kullanarak amilaz, bilirubin ve hyaluronik asidi ölçün. Ardından, ötenazi yapılmış fareyi dört santigrat dereceye ayarlanmış ameliyat masasına yerleştirin.
Makas ve forseps kullanarak, karın boşluğunu ortaya çıkarmak için karın duvarında bir V kesisi yapın. Pankreası çıkarın ve boyama için üç parçaya bölün. Pankreası %4 poliformaldehit çözeltisine sabitleyin, ardından sabit pankreası kesit almak için parafine gömün.
Parafin bloklarını 0,5 milimetre kalınlığında kesitler halinde kesin ve bunları hematoksilen ve eozin ile ve ayrıca immünohistokimyasal analiz için Masson boyası ile boyayın. Lekeli pankreas dokusunu ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Hematoksilen-eozin boyama, 14. günde dağınık pankreas asiner hücreleri ve elektrokoagülasyon grubunda kronik pankreatit kanıtı gösterdi.
28. günde, pankreas asiner hücrelerinde doku iyileşmesi ve patolojinin tersine döndüğü belirtileri gözlendi. Masson'un boyanması, elektrokoagülasyon grubunda sahte gruba kıyasla önemli ölçüde daha fazla fibroz ortaya çıkardı. İmmünohistokimyasal boyama, elektrokoagülasyon grubunda yüksek alfa bir, tip bir kollajen ve alfa düz kas aktin seviyeleri gösterdi, bu da daha yüksek derecede kronik pankreatite işaret ediyor.
Hyaluronik asit seviyeleri elektrokoagülasyon grubunda arttı, 21. gün civarında zirve yaparken, sahte grupta sabit kaldı. Bilirubin seviyeleri, elektrokoagülasyon grubunda 14. günde önemli ölçüde arttı ve 21. gün civarında bir zirve gösterirken, sahte grupta herhangi bir değişiklik görülmedi. Elektrokoagülasyon grubundaki amilaz seviyeleri 14. günde yükseldi, ardından 28. günde bir düşüş oldu ve sahte grup çok az değişiklik gösterdi.
Bu protokol, pankreatik kanalın elektrokoagülasyonu yoluyla farelerde kronik obstrüktif pankreatitin modellenmesi için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yaklaşım, geleneksel yöntemlere kıyasla kronik pankreatitin indüksiyonu sürecini basitleştirmektedir.
Robust preclinical models of chronic pancreatitis are essential for target validation and mechanistic de-risking in early-stage drug discovery. The electrocoagulation-based mouse model offers a reproducible and operationally accessible platform for evaluating disease mechanisms and candidate interventions. This model addresses key limitations of traditional approaches, supporting predictive confidence and translational continuity in pancreatic disease research portfolios.
This electrocoagulation model integrates into the discovery-to-preclinical continuum for pancreatic disease research and therapeutic evaluation.