İnce Endometriyumun Fare Modelinin Oluşturulması

İnce endometriyum, infertilitenin kritik nedeni olarak yaygın olarak kabul edilmektedir. İnce endometriyumun patogenezi üzerine yapılan çalışmalar hayvan modellerine dayanır ve bu da uygun bir model seçimini çok önemli hale getirir. Burada, farelerde güvenilir ve tekrarlanabilir bir ince endometriyal model üreten ayrıntılı bir protokolü açıklıyoruz.

Operasyon travmatiktir, çünkü fareyi incelememiz ve fare uterus boynuzunu manipülasyon için açığa çıkarmamız gerekir. Yanlış bir işlem enfeksiyona neden olabilir ve hatta farelerin ölümüne yol açabilir. Gerçekten de, deneysel operasyondan önce dikkatli bir eğitim ve deneyime ihtiyaç vardır.

Klinik vakalarda gözlenen değişen derecelerde ince endometriyal semptomları çoğaltmak için infüzyon süresi bir ila üç dakika arasında değişen bir endometriyal modeli başarıyla geliştirdik. Bu, araştırmamızın özel ihtiyaçlarına bağlı olarak farklı hasar seviyelerine sahip modeller oluşturmamıza olanak tanır. Protokolümüzde kullanılan yöntem, düşük maliyet, uygunluk ve deneysel süre avantajı sunmaktadır.

Patolojik mekanizmayı ve tedaviyi diğer tekniklerle karşılaştırıldığında başlangıçta üç aşamada inceler. Başlamak için, anestezi uygulanmış fareyi önceden ısıtılmış ameliyat masasına sırtüstü yatırın ve tıbbi bant kullanarak farenin uzuvlarını sabitleyin. Steril makas ve forseps kullanarak, üretral delikten yaklaşık bir santimetre uzakta bulunan ve periton boşluğuna uzanan karın bölgesinde bir santimetre kesi yapın.

Uterusu bulmak için bağırsakları steril forseps ile nazikçe kenara hareket ettirin. Sağ uterus boynuzunu açığa çıkarın ve rahim ağzının yakınındaki proksimal uca ve yumurtalığın yakınındaki distal uca hemostatik klempler uygulayın. 25 gauge bir şırınga ile rahim boşluğuna yaklaşık 50 mikrolitre% 95 etanol damlatın ve iğneyi rahim boynuzuna paralel tutun.

Şırıngayı uygun şekilde bir ila beş dakika boyunca koruyun. Daha sonra, etanolü rahim boşluğundan çekin ve kalan etanolü çıkarmak için rahim boşluğunu beş kez steril tuzlu su ile yıkayın. Şimdi, hemostatik klempleri çıkarın ve uterusu ve bağırsakları orijinal konumlarına geri getirin.

5/0 emilebilir cerrahi dikişler kullanarak peritonu ve ardından epidermisi dikin. Başlamak için, ötenazi yapılmış ince bir endometriyum fare modelini diseksiyon masasına yerleştirin ve uterusu ortaya çıkarmak için cerrahi makas kullanarak dikişleri kesin. Daha sonra cerrahi forseps kullanarak tüm uterusu dikkatlice çıkarın ve uterusu çevredeki bağırsaklardan ayırın.

Hemen her iki rahim boynuzunu da çıkarın ve her bir boynuzu üç ila dört küçük parçaya bölün. Rahim dokularını 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne alınan bir mililitre% 4 paraformaldehit içine yerleştirin. Formalinle sabitlenmiş numuneleri doku kasetlerine yerleştirin ve doku kasetlerini bir dizi etanol konsantrasyonu, ardından ksilen ve parafin ile aktarın.

Bir balmumu kalıbını 55 santigrat dereceye kadar ısıtılmış erimiş parafin mumu ile doldurun. Sızan doku segmentlerini gömme kasetinden balmumu kalıbına hızlı bir şekilde aktarmak için ısıtılmış forseps kullanın. Doku segmentleri uygun şekilde yerleştirildikten sonra, gömme kasetinin altını histoloji kalıbının üstüne yerleştirin.

Ardından, parafinin katılaşmasına izin vermek için kalıbı doğrudan en az 20 dakika boyunca dört santigrat dereceye ayarlanmış bir soğutma plakasına yerleştirin. Ardından, numuneyi kalıptan çıkarın ve etrafındaki fazla mumu kesmek için bir parafin düzeltici kullanın. Endometrial kalınlık ve endometrial bez sayısı bir, iki ve üç dakikalık gruplarda kontrol grubuna göre anlamlı olarak azaldı.

Dört ve beş dakikalık gruplarda şiddetli uterus adezyonu ve neredeyse görünmez uterus boşluğu gözlendi ve endometrial bez saptanmadı. Endometriyal fibroz, kontrole kıyasla bir ila beş dakikalık gruplarda aşırı lekelenme ile gösterildiği gibi, etanol infüzyonu süresi ile artmıştır.