Name: Mikroglia ile Manipüle Edilmiş Transgenik Farelerde EcoHIV ile Enfekte Hücrelerin Tanımlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Öğrenin, EcoHIV ile enfekte Tmem119-EGFP farelerde mikroglia hücrelerinin tanımlanması yöntemini. Bu teknik, HIV ile ilişkili nörobilişsel bozukluklarda viral rezervuarları incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Mikroglial Değişiklikleri İncelemek için TMEM119-EGFP Farelerinde EcoHIV Enfeksiyonu

<ol><li>Vigorito, M., Lashomb, A. L., Chang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+learning+and+memory+in+HIV-1+transgenic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Spatial learning and memory in HIV-1 transgenic rats.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 2, 319-328 (2007).</li>
<li>Moran, L. M., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+and+time+again%3A+Temporal+processing+demands+implicate+perceptual+and+gating+deficits+in+the+HIV-1+transgenic+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Time and time again: Temporal processing demands implicate perceptual and gating deficits in the HIV-1 transgenic rat.</a> J. Neuroimmune Pharmacol. 8 (4), 988-997 (2013).</li>
<li>Repunte-Canonigo,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+consistent+with+neuroAIDS+and+impaired+working+memory+in+HIV-1+transgenic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes consistent with neuroAIDS and impaired working memory in HIV-1 transgenic rats.</a> Mol Neurodegener. 9, 26(2014).</li>
<li>Reid, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+HIV-1+transgenic+rat+that+develops+HIV-related+pathology+and+immunologic+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">An HIV-1 transgenic rat that develops HIV-related pathology and immunologic dysfunction.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98 (16), 9271-9276 (2001).</li>
<li>McLaurin, K. A., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+timing%3A+NeuroHIV+progression+in+the+post-cART+era%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Disruption of timing: NeuroHIV progression in the post-cART era.</a> Sci Rep. 9, 827(2019).</li>
<li>Roscoe, R. F., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+transgenic+female+rat%3A+Synaptodendritic+alterations+of+medium+spiny+neurons+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">HIV-1 transgenic female rat: Synaptodendritic alterations of medium spiny neurons in the nucleus accumbens.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 9 (5), 642-653 (2014).</li>
<li>Denton, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+monoaminergic+and+histaminergic+circuit+dysregulation+following+long-term+HIV-1+protein+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22J+NeuroVirol%22%5BJournal%5D)">Selective monoaminergic and histaminergic circuit dysregulation following long-term HIV-1 protein exposure.</a> J NeuroVirol. 25 (4), 540-550 (2019).</li>
<li>Peng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HIV-1+transgenic+rat+as+a+model+for+HIV-1+infected+individuals+on+HAART%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">The HIV-1 transgenic rat as a model for HIV-1 infected individuals on HAART.</a> J Neuroimmunol. 218 (1-2), 94-101 (2010).</li>
<li>Abbondanzo, S. J., Chang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+transgenic+rats+display+alterations+in+immunophenotype+and+cellular+responses+associated+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">HIV-1 transgenic rats display alterations in immunophenotype and cellular responses associated with aging.</a> PLoS ONE. 9, e105256(2014).</li>
<li>Potash, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+study+of+systemic+HIV-1+infection%2C+antiviral+immune+responses%2C+and+neuroinvasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A mouse model for study of systemic HIV-1 infection, antiviral immune responses, and neuroinvasiveness.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102 (10), 3760-3765 (2005).</li>
<li>Li, H., McLaurin, K. A., Illenberger, J. M., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+HIV-1+expression%3A+Role+in+HIV-1+associated+neurocognitive+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Microglial HIV-1 expression: Role in HIV-1 associated neurocognitive disorders.</a> Viruses. 13 (5), 924(2021).</li>
<li>Kaiser, T., Feng, G. Tmem119-EGFP and Tmem119-CreERT2 transgenic mice for labeling and manipulating microglia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaiser%2C+T+%22eNeuro%22">eNeuro</a>. 6 (4), (2019).</li>
<li>Bennett, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+tools+for+studying+microglia+in+the+mouse+and+human+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">New tools for studying microglia in the mouse and human CNS.</a> Proc Natl Acad Sci. USA. 113 (12), E1738-E1746 (2016).</li>
<li>Satoh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TMEM119+marks+a+subset+of+microglia+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathology%22%5BJournal%5D)">TMEM119 marks a subset of microglia in the human brain.</a> Neuropathology. 36 (1), 39-49 (2016).</li>
<li>Li, H., Aksenova, M., Bertrand, S. J., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+filamentous+actin+%28F-actin%29+puncta+in+rat+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantification of filamentous actin (F-actin) puncta in rat cortical neurons.</a> J Vis Exp. (108), e53697(2016).</li>
<li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+EcoHIV+brain+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rat model of EcoHIV brain infection.</a> J Vis Exp. (167), e62137(2021).</li>
<li>Alfar, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+optimizing+production+and+quality+control+of+infective+EcoHIV+virions%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for optimizing production and quality control of infective EcoHIV virions.</a> STAR Protoc. 4 (3), 102368(2023).</li>
<li>Malatesta, P., Hartfuss, E., Götz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+radial+glial+cells+by+fluorescent-activated+cell+sorting+reveals+a+neuronal+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Isolation of radial glial cells by fluorescent-activated cell sorting reveals a neuronal lineage.</a> Development. 127 (24), 5253-5263 (2000).</li>
<li>Parpura, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate-mediated+astrocyte-neuron+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glutamate-mediated astrocyte-neuron signaling.</a> Nature. 369 (6483), 744-747 (1994).</li>
<li>Wahl, A., Al-Harthi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+infection+of+non-classical+cells+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Retrovirology%22%5BJournal%5D)">HIV infection of non-classical cells in the brain.</a> Retrovirology. 20 (1), 1(2023).</li>
<li>Pandey, H. S., Seth, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Friends+turn+foe-astrocytes+contribute+to+neuronal+damage+in+NeuroAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Friends turn foe-astrocytes contribute to neuronal damage in NeuroAIDS.</a> J. Mol. Neurosci. 69 (2), 286-297 (2019).</li>
<li>Minagar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+macrophage%2Fmicroglia+and+astrocytes+in+the+pathogenesis+of+three+neurologic+disorders%3A+HIV-associated+dementia%2C+Alzheimer%27s+disease%2C+and+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of macrophage/microglia and astrocytes in the pathogenesis of three neurologic disorders: HIV-associated dementia, Alzheimer's disease, and multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 202 (1-2), 13-23 (2002).</li>
<li>Borrajo, A., Spuch, C., Penedo, M. A., Olivares, J. M., Agís-Balboa, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Important+role+of+microglia+in+HIV-1+associated+neurocognitive+disorders+and+the+molecular+pathways+implicated+in+its+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Med%22%5BJournal%5D)">Important role of microglia in HIV-1 associated neurocognitive disorders and the molecular pathways implicated in its pathogenesis.</a> Ann Med. 53 (1), 43-69 (2021).</li>
<li>González-Scarano, F., Martín-García, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropathogenesis+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The neuropathogenesis of AIDS.</a> Nat Rev Immunol. 5 (1), 69-81 (2005).</li>
<li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+proliferation+underlies+synaptic+dysfunction+in+the+prefrontal+cortex%3A+Implications+for+the+pathogenesis+of+HIV-1-associated+neurocognitive+and+affective+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">Microglia proliferation underlies synaptic dysfunction in the prefrontal cortex: Implications for the pathogenesis of HIV-1-associated neurocognitive and affective alterations.</a> J. Neurovirol. 29 (4), 460-471 (2023).</li>
<li>Kim, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EcoHIV+infection+of+primary+murine+brain+cell+cultures+to+model+HIV+replication+and+neuropathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">EcoHIV infection of primary murine brain cell cultures to model HIV replication and neuropathogenesis.</a> Viruses. 16 (5), 693(2024).</li>
<li>Réu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lifespan+and+turnover+of+microglia+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">The lifespan and turnover of microglia in the human brain.</a> Cell Rep. 20 (4), 779-784 (2017).</li>
<li>Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+glial+cell+modulators+in+the+management+of+substance+use+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Drugs%22%5BJournal%5D)">Potential of glial cell modulators in the management of substance use disorders.</a> CNS Drugs. 34 (7), 697-722 (2020).</li>
<li>Kaalund, S. S., Johansen, A., Fabricius, K., Pakkenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untreated+patients+dying+with+aids+have+loss+of+neocortical+neurons+and+glial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Untreated patients dying with aids have loss of neocortical neurons and glial cells.</a> Front Neurosci. 13, 1398(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>293FT hücreler</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R70007</td><td></td></tr><tr><td>33 G, Küçük Hub RN İğnesi, (Nokta Stili: 3, İğne Uzunluğu: 19,25 mm)</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik çözelti</td><td>Cellgro</td><td>30004CI</td><td>100x</td></tr><tr><td>C57BL/6-Tmem119em2Gfng/J</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>Suşu #:031823</td><td></td></tr><tr><td>Corning BioCoat Jelatin 75cm ve sup2; Corning'354488 Havalandırmalı Kapaklı Dikdörtgen Eğimli Boyun Hücre Kültürü Şişesi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td></td>&nbsp;<td></td></tr><tr><td> L-Glutamin, 4.5 g/L Glikoz ve Sodyum Pirüvat ile DMEM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10013CV</td><td></td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>VWR</td><td>637-137</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>14095</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 Forseps</td> Dünya <td>Hassas Aletler</td><td>14097</td><td></td></tr><tr><td>EndoFree Plazmid Maxi Kiti (10)</td><td>Qiagen</td><td>12362</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp; Snap-Cap Mikrosantrifüj Biopur Güvenli Kilit Tüpleri</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>22600028</td><td></td></tr><tr><td>Tüy Çift Kenar Karbon Çelik Bıçaklar</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>121-9</td><td></td></tr><tr><td>Fisher BiyoReaktifleri&nbsp; Mikrobiyoloji Ortamı: LB Et Suyu, Miller</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>İnsan rekombinant anti-CD11b antikoru</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-120-214</td><td>1:50 seyreltme</td></tr><tr><td>Göz İçi Enjektör Şırıngası (6.5 & l), çıkarılabilir iğne</td><td>Hamilton</td><td>6609071-01</td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen&nbsp; Lipofectamine 3000 Transfeksiyon Reaktifi&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>L3000015</td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen&nbsp; Tek Atış TOP10 Electrocomp&nbsp;E. coli</td><td>Fisher Scientific</td><td>C404052</td><td></td></tr><tr><td>Iris Forseps</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>15914</td><td></td></tr><tr><td>İris Makas</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>500216</td><td></td></tr><tr><td>Lentivirus ile İlişkili p24 ELISA Kiti</td><td>Cell Biolabs, inc.</td><td>VPK-107-5</td><td></td></tr><tr><td>Lenti-X Konsantratör</td><td>Takara</td><td>PT4421-2</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I Azaltılmış Serum Orta</td><td>Ömürlü Teknolojiler</td><td>11058021</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>PELCO Kolay Dilimleyici Titreşimli Doku Dilimleyici</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>11000</td><td></td></tr><tr><td>PELCO&nbsp; Pro CA44 Doku Yapıştırıcısı</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>10033</td><td></td></tr><tr><td>PELCO&nbsp; Pro Numune Alıcıları</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>101-33</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan monoklonal anti-Iba1 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab178847</td><td>1:500 seyreltme</td></tr><tr><td>RN Sıkıştırma Bağlantısı 1 mm</td><td>Hamilton</td><td>55750-01</td><td></td></tr><tr><td>Sevofluran</td><td>Merritt Veteriner Kaynağı</td><td>347075</td><td></td></tr><tr><td>Sprague Dawley hamile sıçan</td><td>Inotiv</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus Slaytlar</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-154%&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>To-Pro-3</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>T3605</td><td>Çekirdek boyama kiti</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (%0,25), fenol kırmızısı</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Makas</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>500086</td><td></td></tr></tbody></table>

mikroglia ile manipüle edilmiş transgenik farelerde ecohiv ile enfekte hücrelerin tanımlanması

Identification of EcoHIV-Infected Cells in Microglia-Manipulated Transgenic Mice

3' ucunda "Cla1" ve 5' ucunda "Not1" enzim bölgelerini içeren bir mScarlet (1858 bp) fragmanı pNL4-3-EcoHIV lentiviral vektörüne yerleştirildi (Şekil 1). EcoHIV-mScarlet'in ekspresyonunu doğrulamak için, sıçan E18 embriyolarının korteksinden izole edilen birincil beyin hücreleri, in vitro olarak 6 gün boyunca EcoHIV-mScarlet (60 μL, 1.26 × 106 TU / mL) ile tedavi edildi. Şekil 2'deki veriler, mScarlet'in kırmızı floresan sinyallerinin esas olarak farklı hücre morfolojisine dayalı olarak glial hücre tiplerinde lokalize olduğunu göstermiştir. Ayrıca, CD11b/c ve Iba1 (mikroglia için hücre belirteçleri) etiketlemesi, mScarlet sinyallerinin CD11b/c + ve/veya Iba1 + hücreleri ile birlikte lokalize olduğunu gösterdi. Veriler, mikroglia'nın in vitro EcoHIV-mScarlet dağılımının ana hücre tipi olduğunu gösterdi. Kültürlenen hücrelerde önemli bir nöronal enfeksiyon yoktu (Ek Şekil 1). 
Daha sonra, EcoHIV-mScarlet enfeksiyonu yetişkin fare primer karışık glial hücreleri üzerinde test edildi. Bunu yapmak için, karışık glia hücreleri önce yetişkin farelerden (2 ay) izole edildi ve saflaştırıldı ve 2 gün boyunca EcoHIV-mScarlet (8 μL, 1.26 × 106 TU / mL) ile enfekte edildi. Şekil 3'teki görüntüler, EcoHIV-mScarlet'in yetişkin fare gliasını başarıyla enfekte ettiğini gösterdi.
EcoHIV-mScarlet'in fare beynindeki dağılım modelini daha fazla ele almak için, özellikle enfekte hücre tipini tanımlamak için, EcoHIV-mScarlet, mikroglia'nın başka herhangi bir makrofaj türü çatışma olmaksızın EGFP sinyalleri ile spesifik olarak etiketlendiği Tmem119-EGFP knock-in fare hattına retro-orbital enjekte edildi5. Şekil 4'teki sonuçlar (ayrıca Ek Şekil 2'de), EGFP pozitif hücrelerde mScarlet kırmızı floresan sinyallerinin gözlendiğini göstermektedir, bu da fare beyinlerinde EcoHIV ekspresyonunun ana hücre tipi olarak mikroglia'yı düşündürmektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig01.jpg"> 
Resim 1: EcoHIV-NL-4-3-mScarlet'in vektör haritası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig02.jpg"> 
Şekil 2: Primer sıçan beyin hücrelerinde EcoHIV-mScarlet enfeksiyonu. (A,E) Primer beyin hücrelerinde CD11b/c boyamasının temsili görüntüleri. Beyin hücreleri E18 sıçan embriyolarından izole edildi ve 6 gün boyunca EcoHIV-mScarlet virüsü ile enfekte edildi. (B,F) İn vitro beyin hücrelerinden mScarlet floresan sinyallerinin temsili görüntüleri. (C,G) Birincil beyin hücrelerinde Iba1 boyamasının temsili görüntüleri. (D,H) CD11b/c, mScarlet ve Iba1'in üçlü etiketlemesinin birleştirilmiş görüntüleri. Ölçek çubukları: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig03.jpg"> 
Şekil 3: Primer fare karışık glial hücrelerinde EcoHIV-mScarlet enfeksiyonu. (A,B) mScarlet dağılımının in vitro temsili konfokal görüntüleri. Birincil karışık glia hücreleri, yetişkin C57BL6 farelerinden (2 aylık) izole edildi ve viral enfeksiyondan önce 2 hafta boyunca kültürlendi. EcoHIV-mScarlet, iki gün boyunca kültür ortamına eklendi ve görüntüleri Konfokal mikroskobun ×60 objektifi altında yakaladı. Ölçek çubuğu: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig04.jpg"> 
Şekil 4: Tmem119-EGFP knock-in mouse serisinde EcoHIV-mScarlet dağılımı. (A,B) Beyin bölümlerinde mScarlet/EGFP/ToPro3 sinyallerinin birleştirilmiş görüntüleri. Sarı çerçeve (B) hedef alanını gösterir. Ölçek çubuğu: 300 μm. (C) Tmem119-EGFP knock-in mouse serisinin koku alma bölgesinin dış pleksiform tabakasındaki mScarlet dağılımının temsili görüntüsü. (D) EGFP dağıtımının temsili görüntüsü. Floresan sinyaller, Tmem119-EGFP knock-in mouse serisindeki mikroglia hücrelerinde lokalize edildi. (E) TO-PRO-3 çekirdek boyamanın temsili görüntüsü. Ölçek çubukları: 300 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 1: EcoHIV-mScarlet virüsü ile enfekte olmuş birincil sıçan beyin hücrelerinin MAP2 ve MOG boyaması. Ölçek çubukları: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 2: Tmem119-EGFP knock-in fare hattında EcoHIV-mScarlet enfeksiyonunun konfokal görüntüleri. Ölçek çubukları: 75 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/Supplementary%20Figure%202.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: EcoHIV-mScarlet plazmit DNA dizisi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/Supplementary%20data%20-%20EcoHIV-mScarlet%20plasmid%20DNA%20sequence.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Mikroglia ile Manipüle Edilmiş Transgenik Farelerde EcoHIV ile Enfekte Hücrelerin Tanımlanması

Combined antiretroviral therapy (cART) has dramatically improved the quality of life for people living with HIV (PLWH). However, over 4 million PLWH are ...

identification-ecohiv-infected-cells-microglia-manipulated-transgenic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Mikroglia merkezi sinir sisteminin savunma ve bağışıklık gözetim ilk satırı sağlamak makrofajlar ikamet ediyorsanız. MicroRNA aktivasyonu ve makrofaj farklılaşma da dahil olmak üzere bir çok fizyolojik süreçlerin önemli bir rol oynar düzenleyici moleküllerdir. Bu yazıda, mikroglia yılında microRNA ölçümü için bir yöntem sunduk.

Normal MSS Real-time PCR ve Nöro sırasında mikroglia içinde microRNA tespiti

Biz neonatal serebral korteks ve yetişkin omurilik canlı mikroglia verimli ve hızlı izolasyon / kültür yöntemleri özetlemektedir. Kortikal mikrogliya diseksiyonu ve kaplama ilk diseksiyonu sonrasında yer ~ 10 gün alarak sonraki mikrogliyal hasat ile, 90 dakika içinde yapılabilir.

Yenidoğan ve Erişkin Merkezi sinir sisteminin Kültüre Mikroglia

Mikrogliyal biyoloji başarılı bir soruşturma için bir anahtar CNS dokudan izolasyonu sırasında ex vivo mikroglialardan immunofunction korunmasıdır. Flüoresan görüntüleme, bağışıklık kimyası ve proenflamatuar stimuli lipopolisakarit (LPS) ile Pam 3 CSK 4 (PAM) ile ELISA aşağıda mikroglia aktivasyonu ile değerlendirilen gibi son derece saf ve immunofunctional hücre kültürlerinde döner çalkalama sonuçları ile mikroglia izole edilmesi.

Kemirgen Yenidoğan itibaren Korunan immunfenotipine ve İşlevselliği ile Kortikal mikrogliya İzolasyonu

Mikroglia aktivasyonu ve mikroglioz kronik nörodejenerasyona önemli tepkilerdir. Burada, in vivo, konfokal oftalmoskopi retinal CX3CR1-GFP + mikroglial hücreleri uzun süreli görselleştirme için yöntemler sunmak ve eşik ve morfometrik için belirlemek ve aktivasyonunu ölçmek için analiz eder. Biz yaşa bağlı glokomun erken evrelerinde mikrogliyal değişiklikleri takip.

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Bir iletişim kuralı üzerinden fare beyni birincil microglia yalıtım için sunulmaktadır. Bu teknik nörolojik koşullar geçerli anlayışı sürdürmek yardımcı olur. Yoğunluk gradient Santrifüjü ve manyetik ayırma son derece saf bir örnek yeterli verim üretmek için birleştirilmiştir. Ayrıca, biz microglia karakterizasyonu için adımlar verilmiştir.

Karakterizasyonu ve yoğunluk Gradient Santrifüjü tarafından fare birincil Microglia izolasyonu

Burada sunulan protokol, immünkompetan farelerde transnazal bir yolla indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı insan mikrogliasının (iPSMG) beyne transplantasyonuna izin verir. Hücrelerin hazırlanması ve transnazal transplantasyonu ve iPSMG'nin idamesi için sitokin karışımının uygulanması yöntemi gösterilmiştir.

İmmünkompetan Farelerin Beyinde Non-invaziv Transnazal Yolla İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Mikroglia Transplantasyonu

Bu çalışma, izole beyin mikrogliasında intranükleer akış sitometrisi kullanılarak küresel histon modifikasyonlarının ölçülmesi için bir protokolü açıklamaktadır. Çalışma ayrıca veri toplama için kullanılan mikroglia izolasyon protokolünü de içermektedir.

İzole Fare Beyni Mikrogliasında İntranükleer Akış Sitometrisi Kullanılarak Global Histon Post Translasyonel Modifikasyonların Miktar Tayini

Manyetik olarak aktive edilmiş hücre sınıflandırması (MACS) kullanarak fare hipotalamusundan (veya eşdeğer küçük beyin yapılarından) mikroglial hücreleri nispeten kısa sürede izole etmek için bir protokol açıklıyoruz. MACS ile sıralanan hipotalamik mikroglia, ex vivo analiz için kullanılabilir ve in vitro testler yapmak üzere kaplanabilir.

Hipotalamik Mikroglia'nın Manyetik Olarak Aktive Edilmiş Hücre Ayıklama ile Yeni Perfüze Edilmiş Yetişkin Fare Beyninden İzolasyonu  

Bu makale, retinadaki postsinaptik nokta ve mikroglia hareketliliğini görselleştirme ve nicelleştirme yöntemini spinning disk konfokal mikroskopisi kullanarak göstermektedir.

Hasta Sare Retinasında Mikroglia Dinamikleri ve Sinapslarla Etkileşimlerin Canlı Görüntülemesi ve Karakterizasyonu

Bu protokol, erken doğum sonrası fare beyinlerinin beyinciklerindeki mikroglial hücre durumlarını izole etmek ve karakterize etmek için akış sitometrisi ve tek hücreli RNA dizilimini birleştirir. Mikroglia heterojenliğini ortaya çıkarmak ve serebellar gelişim ve hastalıktaki rollerinin anlaşılmasını geliştirmek için enzimatik ayrışma, Percoll santrifüjleme ve immün boyama kullanır.

Erken Doğum Sonrası Fare Beyin Gelişiminde Mikroglia Aktivasyonunu Karakterize Etmek için Akış Sitometrisi ve Tek Hücre Analizi

Öğrenin, EcoHIV ile enfekte Tmem119-EGFP farelerde mikroglia hücrelerinin tanımlanması yöntemini. Bu teknik, HIV ile ilişkili nörobilişsel bozukluklarda viral rezervuarları incelemek için kullanılır.

Mikroglia ile Manipüle Edilmiş Transgenik Farelerde EcoHIV ile Enfekte Hücrelerin Tanımlanması

Daha fazla video keşfet