Name: Maya Bütün Hücrelerinde Mitokondriyal Solunum Miktar Tayini (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Öğrenin, maya bütün hücrelerinde mitokondriyal solunumu miktar tayini yaparak hücre biyoenerjisini değerlendirme yöntemini. Bu teknik, polifenollerin biyoenerjetik etkilerini ve metabolik yolakları incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Hücresel Bağlamı Korurken Maya Mitokondriyal Solunumunun Ölçülmesi

<ol><li>Jang, D. H., Seeger, S. C., Grady, M. E., Shofer, F. S., Eckmann, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+and+respiration+within+cells+with+increased+open+pore+cytoskeletal+meshes%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics and respiration within cells with increased open pore cytoskeletal meshes.</a> Biol Open. 6 (12), 1831-1839 (2017).</li>
<li>Duvezin-Caubet, S., Caron, M., Giraud, M. F., Velours, J., di Rago, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+rotor+components+of+yeast+mitochondrial+ATP+synthase+are+mechanically+coupled+by+subunit+delta%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">The two rotor components of yeast mitochondrial ATP synthase are mechanically coupled by subunit delta.</a> Proc Natl Acad Sci. 100 (23), 13235-13240 (2003).</li>
<li>Vakifahmetoglu-Norberg, H., Ouchida, A. T., Norberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondria+in+metabolism+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Comm%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondria in metabolism and cell death.</a> Biochem Biophys Res Comm. 482 (3), 426-431 (2017).</li>
<li>Matus-Ortega, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+complexes+containing+the+internal+alternative+NADH+dehydrogenase+%28Ndi1%29+in+mitochondria+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">New complexes containing the internal alternative NADH dehydrogenase (Ndi1) in mitochondria of Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 32 (10), 629-641 (2015).</li>
<li>Avéret, N., Jobin, M. L., Devin, A., Rigoulet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proton+pumping+complex+I+increases+growth+yield+in+Candida+utilis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys%22%5BJournal%5D)">Proton pumping complex I increases growth yield in Candida utilis.</a> Biochim Biophys. 1847 (10), 1320-1326 (2015).</li>
<li>Schägger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+chain+supercomplexes%5BTitle%5D)+AND+%22IUBMB+Life%22%5BJournal%5D)">Respiratory chain supercomplexes.</a> IUBMB Life. 52 (3-5), 119-128 (2001).</li>
<li>Lasserre, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+as+a+system+for+modeling+mitochondrial+disease+mechanisms+and+discovering+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Yeast as a system for modeling mitochondrial disease mechanisms and discovering therapies.</a> Dis Model Mech. 8 (6), 509-526 (2015).</li>
<li>Turina, P., Samoray, D., Gräber, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H%2B%2FATP+ratio+of+proton+transport-coupled+ATP+synthesis+and+hydrolysis+catalysed+by+CF0F1-liposomes%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">H+/ATP ratio of proton transport-coupled ATP synthesis and hydrolysis catalysed by CF0F1-liposomes.</a> EMBO J. 22 (3), 418-426 (2003).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+energy+metabolism+in+cultured+cells%2C+including+human+pluripotent+stem+cells+and+differentiated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Prot%22%5BJournal%5D)">Measuring energy metabolism in cultured cells, including human pluripotent stem cells and differentiated cells.</a> Nat Prot. 7 (6), 1068-1085 (2012).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., Javadov, S., Margreiter, R., Hagenbuchner, J., Ausserlechner, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function%2C+structure%2C+and+intracellular+organization+in+situ+in+cardiomyocytes+and+skeletal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function, structure, and intracellular organization in situ in cardiomyocytes and skeletal muscles.</a> Int J Mol Sci. 23 (4), 2252(2022).</li>
<li>Divakaruni, A. S., Jastroch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+for+the+analysis%2C+standardization+and+interpretation+of+oxygen+consumption+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Metab%22%5BJournal%5D)">A practical guide for the analysis, standardization and interpretation of oxygen consumption measurements.</a> Nat Metab. 4 (8), 978-994 (2022).</li>
<li>Brand, M. D., Nicholls, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+mitochondrial+dysfunction+in+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Assessing mitochondrial dysfunction in cells.</a> Biochem J. 435 (2), 297-312 (2011).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+intracellular+rates+of+glycolytic+and+oxidative+ATP+production+and+consumption+using+extracellular+flux+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Quantifying intracellular rates of glycolytic and oxidative ATP production and consumption using extracellular flux measurements.</a> J Biol Chem. 292 (17), 7189-7207 (2017).</li>
<li>Rosenfeld, E., Beauvoit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+non-respiratory+pathways+in+the+utilization+of+molecular+oxygen+by+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">Role of the non-respiratory pathways in the utilization of molecular oxygen by Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 20 (13), 1115-1144 (2003).</li>
<li>Granados-Arvizu, J. A., Canizal-García, M., Madrigal-Pérez, L. A., González-Hernández, J. C., Regalado-González, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+alternative+respiration+system+of+Scheffersomyces+stipitis+and+effect+on+glucose+or+xylose+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Yeast+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of alternative respiration system of Scheffersomyces stipitis and effect on glucose or xylose fermentation.</a> FEMS Yeast Res. 21 (2), foab005(2021).</li>
<li>Carrillo-Garmendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Snf1p%2FHxk2p%2FMig1p+pathway+regulates+hexose+transporters+transcript+levels%2C+affecting+the+exponential+growth+and+mitochondrial+respiration+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Genet+Biol%22%5BJournal%5D)">Snf1p/Hxk2p/Mig1p pathway regulates hexose transporters transcript levels, affecting the exponential growth and mitochondrial respiration of Saccharomyces cerevisiae.</a> Fungal Genet Biol. 161, 103701(2022).</li>
<li>Maslanka, R., Zadrag-Tecza, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+potential+of+yeast+cells+depends+on+overall+action+of+interconnected+changes+in+central+carbon+metabolism%2C+cellular+biosynthetic+capacity%2C+and+proteostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Reproductive potential of yeast cells depends on overall action of interconnected changes in central carbon metabolism, cellular biosynthetic capacity, and proteostasis.</a> Int J Mol Sci. 21 (19), 7313(2020).</li>
<li>Olivares-Marin, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+carbon+and+nitrogen+sources+depend+on+RIM15+and+determine+fermentative+or+respiratory+growth+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Interactions between carbon and nitrogen sources depend on RIM15 and determine fermentative or respiratory growth in Saccharomyces cerevisiae.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 102 (10), 4535-4548 (2018).</li>
<li>Malecki, M., Kamrad, S., Ralser, M., Bähler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+respiration+is+required+to+provide+amino+acids+during+fermentative+proliferation+of+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial respiration is required to provide amino acids during fermentative proliferation of fission yeast.</a> EMBO Rep. 21 (11), e50845(2020).</li>
<li>Carrillo-Garmendia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxicity+of+quercetin+is+related+to+mitochondrial+respiration+impairment+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Yeast%22%5BJournal%5D)">Cytotoxicity of quercetin is related to mitochondrial respiration impairment in Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 39 (11-12), 617-628 (2022).</li>
<li>Hagman, A., Sall, T., Piskur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+yeast+short-term+Crabtree+effect+and+its+origin%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Analysis of the yeast short-term Crabtree effect and its origin.</a> FEBS J. 281 (21), 4805-4814 (2014).</li>
<li>Gancedo, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+carbon+catabolite+repression%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Mol+Biol+Rev%22%5BJournal%5D)">Yeast carbon catabolite repression.</a> Microbiol Mol Biol Rev. 62 (2), 334-361 (1998).</li>
<li>Katzmann, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+an+ATP-binding+cassette+transporter-encoding+gene+%28YOR1%29+is+required+for+oligomycin+resistance+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of an ATP-binding cassette transporter-encoding gene (YOR1) is required for oligomycin resistance in Saccharomyces cerevisiae.</a> Mol Cell Biol. 15 (12), 6875-6883 (1995).</li>
<li>Madrigal-Perez, L. A., Nava, G. M., Gonzalez-Hernandez, J. C., Ramos-Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+increases+glycolytic+flux+in+Saccharomyces+cerevisiae+via+a+SNF1-dependet+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerr+Biomemb%22%5BJournal%5D)">Resveratrol increases glycolytic flux in Saccharomyces cerevisiae via a SNF1-dependet mechanism.</a> J Bioenerr Biomemb. 47 (4), 331-336 (2015).</li>
<li>Gueguen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+directly+binds+to+mitochondrial+complex+I+and+increases+oxidative+stress+in+brain+mitochondria+of+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Resveratrol directly binds to mitochondrial complex I and increases oxidative stress in brain mitochondria of aged mice.</a> PloS One. 10 (12), e0144290(2015).</li>
<li>Lagoa, R., Graziani, I., Lopez-Sanchez, C., Garcia-Martinez, V., Gutierrez-Merino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+I+and+cytochrome+c+are+molecular+targets+of+flavonoids+that+inhibit+hydrogen+peroxide+production+by+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Complex I and cytochrome c are molecular targets of flavonoids that inhibit hydrogen peroxide production by mitochondria.</a> Biochim Biophys Acta. 1807 (12), 1562-1572 (2011).</li>
<li>de Oliveira, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+and+the+mitochondria%3A+A+mechanistic+view%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Quercetin and the mitochondria: A mechanistic view.</a> Biotechnol Adv. 34 (5), 532-549 (2016).</li>
<li>Carrillo-Garmendia, A., Madrigal-Perez, L. A., Regalado-Gonzalez, C. The multifaceted role of quercetin derived from its mitochondrial mechanism. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarrillo-Garmendia%2C+A+%22Mol+Cell+Biochem%22">Mol Cell Biochem</a>. , (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2- tenoiltrifloroaseton (TTFA)</td> <td>Merck</td><td>T27006</td><td>İnhibitör kompleksi II</td></tr><tr><td>3-klorofenilhidrazon karbonil siyanür (CCCP)</td> <td>Merck</td><td>C2759</td><td>Mitokondriyal solunum birleştirici&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Absolut ethanol</td><td>Merck</td><td>107017</td><td>Quercetin&nbsp'yi çözmek için;</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Merck</td><td>A1296</td><td>YPD agar hazırlığı</td></tr><tr><td>Amonyum sülfat granül (NH4)2SO4</td><td>J.T. Baker</td><td>0792-05</td><td>SC et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Antimisin A (AA)</td><td>Merck</td><td>A8674</td><td>İnhibitör kompleksi III</td></tr><tr><td>aYSI5300A</td><td>----</td><td>----</td><td>Monitör&nbsp;</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Hermle</td><td>Z 206 A Hücreler</td> için <td>santrifüjleme</td></tr><tr><td>Clark tipi oksijen</td><td>----</td><td>----</td><td>Elektrot&nbsp;</td></tr><tr><td>Bilgisayar</td><td>----</td><td>----</td><td>Veri toplama için&nbsp;</td></tr><tr><td>Dipotasyum fosfat K2HPO4</td><td>JT Baker</td><td>3252-05</td><td>SC et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Merck</td><td>G7021</td><td>YPD et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Merck</td><td>G5516</td><td>Substrat ortamı takviyesi&nbsp;</td></tr><tr><td>Lactate</td><td>Merck</td><td>L1250</td><td>Substrat ortamı takviyesi&nbsp;</td></tr><tr><td>Streptomyces diastatochromogenesMerck'ten oligomisin</td><td></td> <td>O4876</td><td>Mitokondriyal ATP sentaz</td></tr><tr><td>Orbital Shaker</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td>SHKE6000 İnkübum inkübasyon cam tüpleri ve şişelerinin</td></tr> inhibisyonu<tr><td>Kazeinden pepton, enzimatik sindirim</td><td>Merck</td><td>82303</td><td>YPD et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Quercetin&nbsp;</td><td>Merck</td><td>337951</td><td>Mitokondriyal solunumu azaltmak için</td></tr><tr><td>Urasil&nbsp;</td><td>Merck</td><td>U0750</td><td>SC et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Merck</td><td>Y1625</td><td>YPD et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Amino asit ve amonyum sülfat içermeyen maya azot bazı</td><td>Merck</td><td>Y1251</td><td>SC et suyu hazırlama</td></tr><tr><td>Maya Sentetik Urasil içermeyen bırakma ortamı takviyeleri</td><td>Merck</td><td>Y1501</td><td>SC et suyu hazırlama</td></tr></tbody></table>

maya bütün hücrelerinde mitokondriyal solunum miktar tayini

Mitochondrial Respiration Quantification in Yeast Whole Cells

Bu mitokondriyal solunum tekniği, Scheffersomyces stipitis15 ve K. marxianus16 gibi S. cerevisiae dışındaki maya türleri için kullanılabilir. Bununla birlikte, temsili amaçlar için, yalnızca S. cerevisiae'den elde edilen sonuçları sunuyoruz. S. cerevisiae'nin düşük glikoz konsantrasyonlarında (0,8 mM'nin altında) baskın bir solunum metabolizması sergilediği iyi bilinmektedir17,18. Bu nedenle, solunum fenotipini doğrulamak için S. cerevisiae, mitokondriyal solunumu uyarmak (% 0.5 glikoz) ve sınırlayıcı (% 5 glikoz) için iki glikoz konsantrasyonunda büyütüldü18,19. Beklendiği gibi, bazal solunum (oksitlenebilir substrat), ATP'ye bağlı solunum (oligomisin) ve maksimal solunum kapasitesinde (CCCP) elde edilen sonuçlar, S. cerevisiae'nin karakteristik enerjik metabolizmasını doğrulamaktadır (Şekil 2). %0.5 glukoz ile büyütülen hücrelerde oksijen tüketimi (bazal solunum, ATP'ye bağlı solunum ve maksimal solunum kapasitesi) %5 glukoz ile büyütülen hücrelerde elde edilen değerlere göre daha yüksek değerler gözlenmiştir (Şekil 2).
Ek olarak, tahlillerde üç substrat kullanıldı: glikoz, gliserol ve L-laktat. Farklı substratların kullanılmasının amacı, mitokondriyal solunum zincirinin farklı kısımlarını değerlendirmektir. Bu koşullarda, mitokondriyal solunum, solunum zincirini bozacak herhangi bir tedavi eklenmediğinden substrata bağlı önemli değişiklikler göstermedi (Şekil 2).
Mitokondriyal solunumu olumsuz yönde etkileyen bir bileşik olan tekniğin kapasitesini değerlendirmek için quercetin kullandık20. Elde edilen veriler, quercetin'in% 0.5 glikoz ile desteklenmiş ortamda yetiştirilen hücrelerde mitokondriyal solunumu önemli ölçüde azalttığını göstermiştir (Şekil 3). Öte yandan,% 5 glikoz ile takviye edilmiş ortamda yetiştirilen hücreler, quercetinden önemli bir olumsuz etki göstermemiştir (Şekil 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig01.jpg"> 
Şekil 1: Temsili oksijen tüketim eğrisi. SC besiyerinde büyütülen S. cerevisiae hücrelerinde elde edilen oksijen tüketim eğrisi (%0.5 glikoz). Renkler, substratta, ayrıştırıcılarda ve inhibitör takviyesinde elde edilen farklı eğimleri temsil eder. Yeşil: Substrat, glikoz ve eğime karşılık gelen bazal solunumu kullandı. Mavi: oligomisin, ATP sentaz inhibitörü, ATP'ye bağlı solunumun belirlenmesi için kullanılan eğim. Sarı: CCCP, birleştirici, maksimal solunumu değerlendirmek için kullanılan eğim. Gri ve kırmızı: sırasıyla inhibitör kompleksi II ve III; mitokondriye bağlı olmayan oksijen tüketimini belirlemek için kullanılan eğim. Kısaltmalar: CCCP = 3-klorofenilhidrazon karbonil siyanür; TTFA = 2- tenoiltrifloroaseton; AA = antimisin A. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig02.jpg"> 
Şekil 2: %0.5 ve %5 glikozda büyütülen S. cerevisiae hücrelerinde oksijen tüketimi testleri. Mitokondriyal solunum, bazal solunumda ölçülen oksijen tüketimi, maksimum solunum kapasitesi ve %0.5 ve %5 glikoz ile desteklenmiş SC'de yetiştirilen S. cerevisiae hücrelerinde ATP'ye bağlı solunum ile değerlendirilir. Elektron taşıma zinciri üzerindeki spesifik etkilerini değerlendirmek için üç substrat kullanıldı: glikoz (NADH dehidrojenazlar), gliserol (ubikinon havuzu) ve L-laktat (sitokrom c). (A) substrat olarak glikoz, gliserol ve L-laktat ile% 5 ve% 0.5 glikozda bazal solunum; (B) substrat olarak glikoz, gliserol ve L-laktat ile% 5 ve% 0.5 glikozda maksimum solunum; (C) Substrat olarak glikoz, gliserol ve L-laktat ile% 5 ve% 0.5 glikozda ATP'ye bağlı solunum. Sonuçlar, her deneyde iki teknik tekrara sahip olacak şekilde, üç bağımsız deneyden elde edilen ortalama ± S.D. olarak sunulmuştur. İstatistiksel analiz için tek yönlü varyans analizi (p ≤ 0.05; farklı harfler: anlamlı fark, aynı harfler: anlamlı fark yok) test uygulandı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig03_.jpg"> 
Şekil 3: Quercetin, yetiştirilen S. cerevisiae hücrelerinde düşük glikoz konsantrasyonunda mitokondriyal solunumu sınırladı. Oksijen tüketimi ölçümü, SC ortamında (%0.5 glukoz) quercetin takviyeli (100 μM) büyütülen S. cerevisiae hücrelerinde bazal solunum, maksimal solunum kapasitesi ve ATP'ye bağlı solunumda gerçekleştirildi. Kuersetin çözeltisini çözmek için etanol kullanıldı. Sonuçlar, her deneyde iki teknik tekrara sahip olacak şekilde, üç bağımsız deneyden elde edilen ortalama ± S.D. olarak sunulmuştur. İstatistiksel analizler öğrenci t-testi ile eşleştirilmiş olarak yapıldı (*, ** p ≤ 0.05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig03_large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67186/67186fig04_.jpg"> 
Şekil 4: Quercetin, S. cerevisiae'de yüksek glikoz konsantrasyonunda mitokondriyal solunumu etkilemez. Oksijen tüketimi, SC ortamında (%5 glikoz) quercetin takviyeli (100 μM) büyütülen S. cerevisiae hücrelerinde bazal solunum, maksimal solunum kapasitesi ve ATP'ye bağlı solunumda ölçüldü. Quercetin çözeltisini çözmek için etanol kullanılır. Sonuçlar, her biri iki teknik tekrara sahip üç bağımsız deneyden elde edilen ortalama ± S.D.'yi göstermektedir. İstatistiksel analizler öğrenci t-testi eşleştirilmiş kullanılarak yapıldı (p ≤ 0.05; ns: anlamlı değil). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67186/67186fig04_large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Maya Bütün Hücrelerinde Mitokondriyal Solunum Miktar Tayini

Metabolism is mainly coordinated by cellular energy availability and environmental conditions. Assays for knowing how cells adapt energetic metabolism to ...

mitochondrial-respiration-quantification-in-yeast-whole-cells

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Biz canlı maya hücrelerinde hücre içi çözünürlükte mitokondriyal redoks devlet ve ATP düzeylerini izlemek için, GFP temel alan iki rasyometrik, genetik olarak kodlanmış biyosensör, kullanımı açıklanmaktadır.

Yaşam Maya Hücreleri Mitokondriyal Redoks Devlet ve ATP ölçün oranlı metrik Biyosensörler

Vastus lateralis biyopsi saflaştırılmış mitokondrinin preparasyonu ve respirometrik profil için yöntemler tarif edilmiştir. Küçük kas hacminin kullanımı klinik araştırma uygulamaları için bu teknik uygundur.

Perkütan İğne Biyopsisi ile Elde Edilen İskelet Kası Doku İzole Mitokondri hazırlanması ve Respirometrik Değerlendirmesi

Sunulan yöntemler, minimum miktarlarda fare iskelet kasından izole mitokondri kullanılarak yapılan bir mikroplaka bazlı respirometrik tahliller koleksiyonunun performansı için adım adım talimatlar sağlar. Bu tahliller, yaygın olarak kullanılan bir hayvan modelinde mitokondriyal oksijen tüketimindeki mekanik değişiklikleri/adaptasyonları ölçebilir.

Yüksek verim Mikroplate Solunum Ölçümler Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen kondriyayı İzole kullanma

Yüksek çözünürlüklü Solunum mitokondriyal oksijen tüketimini belirlemek için kullanılır. Bu mitokondriyal solunum zinciri kompleksleri '(I-IV) solunum hızları, maksimum mitokondriyal elektron transport sistem kapasitesi ve mitokondriyal dış membran bütünlüğü belirlemek için basit bir tekniktir.

Yüksek çözünürlüklü Solunum permeabilize ve bozulmamış Hücreleri Mitokondrial fonksiyonu değerlendirmek için

Baker mayası mitokondriyal genom sekiz polipeptid kodlar. Mevcut protokolün amacı, hepsini etiketlemek ve daha sonra bunları ayrı bantlar olarak görselleştirmektir.

Fırıncı Maya saccharomyces cerevisiae Mitokondriyal Genom İfade Ürünlerinin Etiketlenmesi ve Görselleştirilmesi

Bu çalışmada, mikro plaka bazlı respirometri ile birlikte rekombinant perfringolysin O kullanarak mitokondriyal solunum substrat akısını test etmek için değiştirilmiş bir protokol açıklıyoruz. Bu protokol ile metforminin iki farklı tümör hücre hattının mitokondriyal solunumunu nasıl etkilediğini gösteriyoruz.

Rekombinant Perfringolysin O-Permeabilized Hücrelerde Mitokondriyal Substrat Akılarının Ölçülmesi

Yüksek çözünürlüklü respirometreler kullanılarak oksidatif fosforilasyonun değerlendirilmesi, mitokondri ve hücresel enerji metabolizmasının fonksiyonel analizinin ayrılmaz bir parçası haline gelmiştir. Burada, oda ve mikroplaka tabanlı yüksek çözünürlüklü respirometreler kullanılarak hücresel enerji metabolizmasının analizi için protokoller sunuyoruz ve her cihazın temel faydalarını tartışıyoruz.

Oda ve Plaka Tabanlı Respirometreler Kullanarak Hücrelerdeki ve Dokulardaki Biyoenerjetik Değerleri Değerlendirmek için Yüksek Çözünürlüklü Respirometri

Burada, fare iskelet kasından mitokondri izolasyonu için ayrıntılı bir yöntem ve ardından mikroplaka tabanlı respirometrik testler kullanılarak Oksijen Tüketim Hızı (OCR) ile solunum analizi için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Bu boru hattı, çoklu çevresel veya genetik müdahalelerin mitokondriyal metabolizma üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanabilir.

Respirometrik Testler için Fare İskelet Kasından Mitokondri İzolasyonu

Burada, insan veya fare kasından taze geçirgen iskelet kası liflerinde mitokondriyal oksidatif fosforilasyonu ölçmek için kapsamlı bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, mevcut mitokondriyal ağları ve membran bütünlüğünü korurken mitokondriyal solunumun gerçek zamanlı olarak ölçülmesine ve yakıt tercihinin ve metabolik esnekliğin değerlendirilmesine olanak tanır.

İnsan ve Fare İskelet Kası Liflerinde Mitokondriyal Solunumun Yüksek Çözünürlüklü Respirometri ile Ölçülmesi

Bu makale, lipid-proksimal bir ortamda çeşitli partner faktörlerle in vitro olarak integral membran proteinlerinin etkileşimlerini ve montajlarını değerlendirmek için bir yöntemi açıklamaktadır.

İskele Lipozomlar kullanarak Lipid-proksimal protein-protein etkileşimleri Sulandırın için İn Vitro

Öğrenin, maya bütün hücrelerinde mitokondriyal solunumu miktar tayini yaparak hücre biyoenerjisini değerlendirme yöntemini. Bu teknik, polifenollerin biyoenerjetik etkilerini ve metabolik yolakları incelemek için kullanılır.

Maya Bütün Hücrelerinde Mitokondriyal Solunum Miktar Tayini

Daha fazla video keşfet