Name: CMG Helikaz ile DNA Çözmenin Tek Moleküllü Gerçek Zamanlı Görselleştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Öğrenin, tek moleküllü TIRF mikroskobisi ile CMG helikazın DNA çözme aktivitesini gerçek zamanlı görselleştirme yöntemini. Drosophila melanogaster protein saflaştırma ve biyotin-PEG akış hücresi hazırlama tekniklerini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>ssDNA-RPA Yolu Büyümesi ile Gözlenen CMG Aracılı DNA Çözülmesi

<ol><li>Bell, S. P., Labib, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+Duplication+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Chromosome Duplication in Saccharomyces cerevisiae.</a> Genetics. 203 (3), 1027-1067 (2016).</li>
<li>Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structural+basis+for+MCM2-7+helicase+activation+by+GINS+and+Cdc45%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The structural basis for MCM2-7 helicase activation by GINS and Cdc45.</a> Nat Struct Mol Biol. 18 (4), 471-477 (2011).</li>
<li>Jones, M. L., Baris, Y., Taylor, M. R. G., Yeeles, J. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+a+human+replisome+shows+the+organisation+and+interactions+of+a+DNA+replication+machine%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Structure of a human replisome shows the organisation and interactions of a DNA replication machine.</a> EMBO J. 40 (23), e108819(2021).</li>
<li>Moyer, S. E., Lewis, P. W., Botchan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+the+Cdc45%2FMcm2-7%2FGINS+%28CMG%29+complex%2C+a+candidate+for+the+eukaryotic+DNA+replication+fork+helicase%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Isolation of the Cdc45/Mcm2-7/GINS (CMG) complex, a candidate for the eukaryotic DNA replication fork helicase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (27), 10236-10241 (2006).</li>
<li>Douglas, M. E., Ali, F. A., Costa, A., Diffley, J. F. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+eukaryotic+CMG+helicase+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The mechanism of eukaryotic CMG helicase activation.</a> Nature. 555 (7695), 265-268 (2018).</li>
<li>Ilves, I., Petojevic, T., Pesavento, J. J., Botchan, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+MCM2-7+helicase+by+association+with+Cdc45+and+GINS+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Activation of the MCM2-7 helicase by association with Cdc45 and GINS proteins.</a> Mol Cell. 37 (2), 247-258 (2010).</li>
<li>Dewar, J. M., Walter, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+DNA+replication+termination%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of DNA replication termination.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (8), 507-516 (2017).</li>
<li>Burnham, D. R., Kose, H. B., Hoyle, R. B., Yardimci, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+DNA+unwinding+by+the+eukaryotic+replicative+helicase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The mechanism of DNA unwinding by the eukaryotic replicative helicase.</a> Nat Commun. 10 (1), 2159(2019).</li>
<li>Kose, H. B., Larsen, N. B., Duxin, J. P., Yardimci, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+eukaryotic+replicative+helicase+at+lagging-strand+protein+barriers+support+the+steric+exclusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the eukaryotic replicative helicase at lagging-strand protein barriers support the steric exclusion model.</a> Cell Rep. 26 (8), 2113-2125.e6 (2019).</li>
<li>Kose, H. B., Xie, S., Cameron, G., Strycharska, M. S., Yardimci, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Duplex+DNA+engagement+and+RPA+oppositely+regulate+the+DNA-unwinding+rate+of+CMG+helicase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Duplex DNA engagement and RPA oppositely regulate the DNA-unwinding rate of CMG helicase.</a> Nat Commun. 11 (1), 3713(2020).</li>
<li>Tanner, N. A., Van Oijen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+DNA+replication+at+the+single-molecule+level%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Visualizing DNA replication at the single-molecule level.</a> Methods Enzymol. 475, 259-278 (2010).</li>
<li>Swoboda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+oxygen+scavenging+for+photostability+without+ph+drop+in+single-molecule+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Enzymatic oxygen scavenging for photostability without ph drop in single-molecule experiments.</a> ACS Nano. 6 (7), 6364-6369 (2012).</li>
<li>Baris, Y., Taylor, M. R. G., Aria, V., Yeeles, J. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+and+efficient+DNA+replication+with+purified+human+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fast and efficient DNA replication with purified human proteins.</a> Nature. 606, 204-210 (2022).</li>
<li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunability+of+DNA+polymerase+stability+during+eukaryotic+DNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Tunability of DNA polymerase stability during eukaryotic DNA replication.</a> Mol Cell. 77 (1), 17-25.e5 (2020).</li>
<li>Li, Z., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-translational+modifications+of+the+mini-chromosome+maintenance+proteins+in+DNA+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Post-translational modifications of the mini-chromosome maintenance proteins in DNA replication.</a> Genes. 10 (5), 331(2019).</li>
<li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+replication+origin+melting+nucleated+by+CMG+helicase+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanism of replication origin melting nucleated by CMG helicase assembly.</a> Nature. 606 (7916), 1007-1014 (2022).</li>
<li>Zeman, M. K., Cimprich, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Causes+and+consequences+of+replication+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Causes and consequences of replication stress.</a> Nat Cell Biol. 16 (1), 2-9 (2014).</li>
<li>Sparks, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CMG+helicase+bypasses+DNA-protein+cross-links+to+facilitate+their+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The CMG helicase bypasses DNA-protein cross-links to facilitate their repair.</a> Cell. 176 (1-2), 167-181.e21 (2019).</li>
<li>Taylor, M. R. G., Yeeles, J. T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+initial+response+of+a+eukaryotic+replisome+to+DNA+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">The initial response of a eukaryotic replisome to DNA damage.</a> Mol Cell. 70 (6), 1067-1080.e12 (2018).</li>
<li>Amunugama, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+fork+reversal+during+DNA+interstrand+crosslink+repair+requires+CMG+unloading%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Replication fork reversal during DNA interstrand crosslink repair requires CMG unloading.</a> Cell Rep. 23 (12), 3419-3428 (2018).</li>
<li>Wu, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRAIP+is+a+master+regulator+of+DNA+interstrand+crosslink+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">TRAIP is a master regulator of DNA interstrand crosslink repair.</a> Nature. 567 (7747), 267-272 (2019).</li>
<li>Vrtis, K. B., Dewar, J. M., Chistol, G., Wu, R. A., Graham, T. G. W., Walter, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-strand+DNA+breaks+cause+replisome+disassembly%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-strand DNA breaks cause replisome disassembly.</a> Mol Cell. 81 (6), 1309-1318.e6 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148-25ML</td><td></td></tr><tr><td>Akrilamid / Bis Çözeltisi %40&nbsp;</td><td>BioRad</td><td>1610148</td><td></td></tr><tr><td>Agarose UltraPure&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td>Tris Buffer (pH 8) hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>& Auml; KTA Pure&nbsp;</td><td>GE Healthcare</td><td>-</td><td>Fraksiyon Toplayıcı F9-C ile kullanıldı; Protein Arıtma Sistemi</td></tr><tr><td>ANTI-FLAG M2 affinity jeli</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2220</td><td></td></tr><tr><td>APS %10&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3678-25G</td><td></td></tr><tr><td>ATP (200 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7699-5G</td><td></td></tr><tr><td>ATP-g-s (100 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11162306001</td><td></td></tr><tr><td>Biotin-PEG örtü slipi</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>Tarif edildiği şekilde hazırlandı: https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2012.03.033</td></tr><tr><td>Biotinile edilmiş anti-digoksigenin antikor&nbsp;</td><td>Perkin Elmer</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Blu Tack</td><td>Bostik</td><td>Yok</td><td>Yapıştırıcı macun</td></tr><tr><td>Borik asit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B/3800/53</td><td></td></tr><tr><td>BSA; 33 mg/mL</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A3858-10G</td><td>Stoktan seyreltilmiş</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>CaptoHiRes Sorusu (5/50)</td><td>Cytiva</td><td>29275878</td><td>AKTA protein arıtma sistemine bağlı; Yüksek çözünürlüklü iyon değişimi kromatografi sütunu</td></tr><tr><td>Kazein (%5 suda, 50 mg/mL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4765-10ML</td><td></td></tr><tr><td>ChemiDoc sistemi</td><td>Bio-Rad</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Klipler</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Kesme tahtası</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Diyaliz tüpü (3.5 kDa)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11425859</td><td></td></tr><tr><td>digoksigenin-11-dUTP</td><td>Roche</td><td>11209256910</td><td></td></tr><tr><td>DNA yükleme boyası 6x&nbsp;</td><td>NEB</td><td>B7024S</td><td></td></tr><tr><td>dNTP 10 mM</td><td>NEB</td><td>N0447S</td><td></td></tr><tr><td>Çift taraflı bant (0,14 mm kalınlığında)</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Fluorochem Limited</td><td>M02712-10G</td><td></td></tr><tr><td>DYKDDDDK peptide&nbsp;</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>Francis Crick Enstitüsü'nün kimyasal biyoloji STP tarafından sentezlenmiştir</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D/0700/68</td><td></td></tr><tr><td>EGFP-RPA&nbsp;</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>' bölümünde tanımlandığı gibi arındırılmış. Tek Molekül Analizi', Moleküler Biyoloji Yöntemleri Serisi, Cilt 783 (2011), Peterman, E. J. G. G. ve Wuite G. J. L. editörler, Humana Press. Protein bilgisi: 2 mM, insan, E. coli'de ifade edilmiş.</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>03779-10G</td><td></td></tr><tr><td>Epoksi - 5 dakika</td><td>Devcon</td><td>20845</td><td></td></tr><tr><td>Fujifilm FLA-5000&nbsp;</td><td>Fujifilm</td><td>&nbsp; FLA-5000&nbsp;</td><td>Floresan görüntü analizörü</td></tr><tr><td>GelRed Nuklein Asit Boyaması; 10000x</td><td>Cambridge Bioscience</td><td>41003-BT</td><td>Etidiyum bromid yerine daha güvenli bir alternatif olan nüklein asit boyama örneği.</td></tr><tr><td>Cam veya kuvars sürgü, boru için delikler;</td><td>Dremel Model 395</td><td></td><td>1 mm kalınlığında kaydırak, 2,4 cm x 1 cm ölçümde kesilmiş, aralarından 1,4 mm aralıklı iki delik açılmış. Delikler, her iki uçta farklı boru yerleştirmek için farklı boyutlarda delinmelidir.</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Fisher Scientific</td><td>G/0650/17</td><td></td></tr><tr><td>Glisin HCl, pH 3.5</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırıngası, 1000 serisi GASTIGHT, PTFE luer kilidi 1010TLL, PTFE Luer kilidi (yuvalı), hacim 10 mL</td><td>Merck</td><td>26211-U</td><td></td></tr><tr><td>HEPES pH 7.5</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>I-CeuI</td><td>NEB</td><td>R0699L</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P/4280/53</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2545</td><td></td></tr><tr><td>Maxi GeBaFlex-tüplü Diyaliz Kiti; MWCO 14 kDa&nbsp;</td><td>Generon</td><td>D055</td><td></td></tr><tr><td>Metal spatula</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Metal cımbızlar</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP (Şırınga filtreleri) 0.22 & mikro; m&nbsp;</td><td>Merck</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>İğne</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>NotI-HF</td><td>NEB</td><td>R3189L</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4%&ndash; %12 Bis-Tris Protein Jeli</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10247002;</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE MOPS SDS Çalıştıran Buffer&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0001</td><td></td></tr><tr><td>Objektif ısıtıcı</td><td>Okolab</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>PCR karışımı - 2x</td><td></td><td></td><td>Füzyon DNA polimerazından hazırlanmıştır (20 &micro; L), 10 mM dNTP'ler (40 ve mikro; L), 5x Phusion HF tamponu (400 &micro; L) ve su (540 &micro; L).</td></tr><tr><td>LD655-MAL&nbsp ile etiketlenmiş peptid NH2-CHHHHHHHHHHLPETGG-COOH;</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>Sistein kalıntısında LD655-MAL (Lumidyne Technologies) ile etiketlenmiş peptit NH2-CHHHHHHHHHHLPETGG-COOH, Francis Crick Enstitüsü'nün peptit kimyası STP tarafından sentezlenip saflaştırıldı</td></tr><tr><td>pGC261 plazmid</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>https://doi.org/10.1016/j.cell.2018.10.053</td></tr><tr><td>Füzyon Yüksek Hassasiyetli DNA Polimeraz</td><td>NEB</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>Plastik cımbızlar</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen boru PE20 (iç çapı 0.015", dış çapı 0.043")</td><td>Becton Dickinson</td><td>427406</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen boru PE60 (iç çapı 0.03", dış çapı 0.048")</td><td>Becton Dickinson</td><td>427416</td><td></td></tr><tr><td>poli-hazırlık kromatografi sütunları; 10 ml ve 20 ml&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>7311550</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Glutamat (L-glutamik asit potasyum tuzu monohidrat)</td><td>Sigma</td><td>G1501-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Proteaz inhibitörü kokteyli (cOmplete, EDTA içermemiş)</td><td>Roche</td><td>5056489001</td><td></td></tr><tr><td>Pump 11 Elite İnfüzyon/Çekilme Programlanabilir Tek Şırınga</td><td>Harvard Aparatı</td><td>70-4504</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR Temizleme Kiti</td><td>QIAGEN</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>Jilet bıçağı</td><td>VWR International Ltd</td><td>233-0156</td><td></td></tr><tr><td>rCutSmart Buffer; 10x</td><td>NEB</td><td>B6004S</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum asetat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S/2120/53</td><td></td></tr><tr><td>Sortase (pentamutant)</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>Aşağıda arındırılmış: https://doi.org/10.1073/pnas.1101046108</td></tr><tr><td>Spin-X Santrifüj Tüp Filtreleri; 0.22 & mikro; M selüloz asetat&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>10310361</td><td></td></tr><tr><td>Steril bistürpel</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Steritop Vakumla Tek Kullanımlık Filtrasyon Sistemi; 0.22 um; PES; &nbsp;</td><td>Millipore</td><td>S2GPT05RE</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin (1 mg/mL) 1x PBS tamponunda</td><td>Sigma</td><td>S4762-10MG</td><td>20 &micro; L aliquotes</td></tr><tr><td>SYBR Gold</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11494</td><td>DNA çatal alt tabakasını görselleştirmek için kullandığımız çok hassas nükleik asit boyası.</td></tr><tr><td>SYTOX turuncu; 5 &micro; DMSO'da M</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11368</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA ligazı</td><td>NEB</td><td>M0202M</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligaz Reaksiyon Tamponu &nbsp;</td><td>NEB</td><td>B0202S</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9281-25ML&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>TEV proteaz (1 mg/mL); EZCut&nbsp;</td><td>Biyovizyon</td><td>7847-10000</td><td></td></tr><tr><td>Doku öğütücüler, Dounce tipi (40 mL, Wheaton)</td><td>DWK Yaşam Bilimleri</td><td>432-1273</td><td></td></tr><tr><td>Tris tabanı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>Tris Buffer (pH 8) hazırlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Tris HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Promega UK Ltd</td><td>H5152</td><td></td></tr></tbody></table>

cmg helikaz ile dna Çözmenin tek moleküllü gerçek zamanlı görselleştirilmesi

Single-Molecule Real-Time Visualization of DNA Unwinding by CMG Helicase

CMG Helikaz ile DNA Çözmenin Tek Moleküllü Gerçek Zamanlı Görselleştirilmesi

Faithful genome duplication is essential for preserving the genetic stability of dividing cells. DNA replication is carried out during the S phase by a ...

single-molecule-real-time-visualization-dna-unwinding-cmg

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu protokol, gerçek zamanlı olarak bireysel replisomes DNA replikasyonu görselleştirmek için basit bir tek-molekül floresan mikroskopi tekniği gösterir.

Floresan Mikroskop ile görselleştirme Tek molekül DNA replikasyonu

Biz bireysel DNA molekülleri bakteriyofaj çoğaltma sistemi proteinleri aracılığı ile gerçek zamanlı çoğaltma gözlemlemek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Enzimlerin Klonlanması DNA Doğrudan Gözlem Tek bir molekülü DNA Testi Esneme

Optik bir tuzakta yerinde tutulan doğrusal DNA molekülleri üzerindeki floresan etiketli, tamamen yeniden yapılandırılmış Cdc45 / Mcm2-7 / GINS (CMG) helikazının hareketini doğrudan görüntülemek ve ölçmek için hibrit bir topluluk ve tek moleküllü bir test sunuyoruz.

Tamamen Yeniden Yapılandırılmış CMG'nin Hareketini Görüntülemek için Hibrit Topluluk ve Tek Moleküllü Test

Bu protokol, DNA polimerazlar ve G-dörtlü yapılar gibi engeller arasındaki etkileşimlerin gerçek zamanlı görselleştirilmesini sağlayan floresan mikroskobu tabanlı tek moleküllü DNA replikasyon testini ana hatlarıyla belirtir.

G-Dörtlülerinde DNA Polimeraz Dinamiğinin Tek Moleküllü Floresan Görselleştirmesi

Bu iletişim kuralı tek boyutlu (1 D) Difüzyon boyunca DNA moleküllerinin çalışmak için bir basit, sağlam ve yüksek üretilen iş tek molekül akışı uzanan tahlil göstermektedir.

Basit, sağlam ve yüksek üretilen iş tek bir molekül akışı germe tahlil uygulama boyunca DNA moleküllerinin taşıma eğitimi için

Geleneksel kütük jel elektroforezi (SGE) deneyleri karmaşık bir aparat ve yüksek kimyasal tüketim gerektirir. Bu çalışma kısa bir zaman aralığında DNA parçalarını ayırmak için düşük maliyetli bir yöntemi açıklayan bir protokol sunmaktadır.

Akıllı Telefon ile DNA Parçalarının Ayırılmasının Gerçek Zamanlı İzlenmesi

G-quadruplexes işlemek için bir tek molekül manyetik cımbız platform, G4 istikrar ve yönetmelik çalışması için izin veren çeşitli proteinler tarafından bildirilmektedir.

G-quadruplexes manyetik cımbız tarafından manipülasyon tek molekül

Bu iletişim kuralı ile örneklenir bir heterobifunctional silane Bağlantı Aracısı atomik kuvvet mikroskobu dayalı tek molekül kuvvet spektroskopisi için tasarlanmış silikon-oksit yüzeyler için proteinlerin immobilizasyon kovalent açıklar RrgA etkileşim (pilus-1 İpucu adhesin, S. pneumoniae) fibronektin ile.

Proteinler kovalent immobilizasyon için tek molekül kuvvet spektroskopisi

DNA'ın sistemleri tarafından Rad51 aracılı Satım tepki strand floresans rezonans enerji transferi tabanlı gerçek zamanlı gözlem için geliştirilmiştir. Burada sunulan iletişim kurallarını kullanarak, biz tepki ara ürün ve ayrıca reaksiyon enzimatik kinetik analiz ederken onların dönüşüm ürünlerde, oluşumu tespit edebiliyoruz.

Rad51 tarafından aracılı DNA Strand Exchange tepki gerçek zamanlı gözlem

Burada, karmaşık protein örnek tek molekül düzeyinde her protein türler için etiketleme homojenliği değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Proteom çapında Quantification maddelerinin homojenliği tek molekül düzeyinde etiketlenmesi

Öğrenin, tek moleküllü TIRF mikroskobisi ile CMG helikazın DNA çözme aktivitesini gerçek zamanlı görselleştirme yöntemini. Drosophila melanogaster protein saflaştırma ve biyotin-PEG akış hücresi hazırlama tekniklerini keşfedin.

CMG Helikaz ile DNA Çözmenin Tek Moleküllü Gerçek Zamanlı Görselleştirilmesi

Daha fazla video keşfet