Name: Kistik Fibrozisde Antimikrobiyalleri Test Etmek İçin Polimikrobiyal Koloni Biyofilm Modelinin Geliştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Keşfedin kistik fibroziste polimikrobiyal biyofilm modeli kullanarak antimikrobiyal duyarlılık testi yöntemini. Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ve Candida albicans ile yüksek verimli analiz sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Antimikrobiyal Test ve Mikrobiyal Dinamik Analizi için Uyarlanabilir CF Modeli

<ol><li>2021 Cf foundation patient registry highlights report. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://cysticfibrosis.msu.edu/index.php/welcome/news-and-events/39-2021-cf-foundation-patient-registry-highlights-report">https://cysticfibrosis.msu.edu/index.php/welcome/news-and-events/39-2021-cf-foundation-patient-registry-highlights-report</a> (2022).</li>
<li>Guo, J., Garratt, A., Hill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+rates+of+diagnosis+and+effective+treatment+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Worldwide rates of diagnosis and effective treatment for cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 21 (3), 456-462 (2022).</li>
<li>Mandal, V., Ghosh, N. N., Mitra, P. K., Mandal, S., Mandal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+characterization+of+a+broad-spectrum+antimicrobial+5-butyl-2-pyridine+carboxylic+acid+from+Aspergillus+fumigatus+nhf-01%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Production and characterization of a broad-spectrum antimicrobial 5-butyl-2-pyridine carboxylic acid from Aspergillus fumigatus nhf-01.</a> Sci Rep. 12 (1), 6006(2022).</li>
<li>Françoise, A., Héry-Arnaud, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiome+in+cystic+fibrosis+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">The microbiome in cystic fibrosis pulmonary disease.</a> Genes. 11 (5), 536(2020).</li>
<li>Grasemann, H., Ratjen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis.</a> New Engl J Med. 389 (18), 1693-1707 (2023).</li>
<li>Camus, L., Vandenesch, F., Moreau, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+genotype+to+phenotype%3A+Adaptations+of+pseudomonas+aeruginosa+to+the+cystic+fibrosis+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Genom%22%5BJournal%5D)">From genotype to phenotype: Adaptations of pseudomonas aeruginosa to the cystic fibrosis environment.</a> Microb Genom. 7 (3), mgen000513(2021).</li>
<li>Rossi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+adaptation+and+evolution+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa adaptation and evolution in patients with cystic fibrosis.</a> Nat Rev Microbiol. 19 (5), 331-342 (2021).</li>
<li>Flemming, H. -C., Wingender, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biofilm+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The biofilm matrix.</a> Nat Rev Microbiol. 8 (9), 623-633 (2010).</li>
<li>Grainha, T., Jorge, P., Alves, D., Lopes, S. P., Pereira, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+pseudomonas+aeruginosa+and+candida+albicans+communication+in+coinfection+scenarios%3A+Insights+through+network+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unraveling pseudomonas aeruginosa and candida albicans communication in coinfection scenarios: Insights through network analysis.</a> Front Cell Infect Microbiol. 10, 550505(2020).</li>
<li>Flemming, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms%3A+An+emergent+form+of+bacterial+life%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Biofilms: An emergent form of bacterial life.</a> Nat Rev Microbiol. 14 (9), 563-575 (2016).</li>
<li>Høiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+resistance+of+bacterial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Antimicrob+Agents%22%5BJournal%5D)">Antibiotic resistance of bacterial biofilms.</a> Int J Antimicrob Agents. 35 (4), 322-332 (2010).</li>
<li>Lorusso, A. B., Carrara, J. A., Barroso, C. D. N., Tuon, F. F., Faoro, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+efflux+pumps+on+antimicrobial+resistance+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of efflux pumps on antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa.</a> Int J Mol Sci. 23 (24), 15779(2022).</li>
<li>Michaelis, C., Grohmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+gene+transfer+of+antibiotic+resistance+genes+in+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics+.%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Horizontal gene transfer of antibiotic resistance genes in biofilms.</a> Antibiotics .(Basel). 12 (2), 328(2023).</li>
<li>Worlitzsch, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+reduced+mucus+oxygen+concentration+in+airway+pseudomonas+infections+of+cystic+fibrosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Effects of reduced mucus oxygen concentration in airway pseudomonas infections of cystic fibrosis patients.</a> J Clin Invest. 109 (3), 317-325 (2002).</li>
<li>König, J., Schreiber, R., Voelcker, T., Mall, M., Kunzelmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+%28CFTR%29+inhibits+ENaC+through+an+increase+in+the+intracellular+Cl-+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Reps%22%5BJournal%5D)">The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) inhibits ENaC through an increase in the intracellular Cl- concentration.</a> EMBO Reps. 2 (11), 1047-1051 (2001).</li>
<li>Palmer, K. L., Mashburn, L. M., Singh, P. K., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+sputum+supports+growth+and+cues+key+aspects+of+Pseudomonas+aeruginosa+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis sputum supports growth and cues key aspects of Pseudomonas aeruginosa physiology.</a> J Bacteriol. 187 (15), 5267-5277 (2005).</li>
<li>Valenza, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+antimicrobial+susceptibility+of+microorganisms+isolated+from+sputa+of+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Prevalence and antimicrobial susceptibility of microorganisms isolated from sputa of patients with cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 7 (2), 123-127 (2008).</li>
<li>Alam, F., Catlow, D., Di Maio, A., Blair, J. M. A., Hall, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+enhances+meropenem+tolerance+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+a+dual-species+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Candida albicans enhances meropenem tolerance of Pseudomonas aeruginosa in a dual-species biofilm.</a> J Antimicrob Chemother. 75 (4), 925-935 (2020).</li>
<li>Burmølle, M., Ren, D., Bjarnsholt, T., Sørensen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+in+multispecies+biofilms%3A+Do+they+actually+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Interactions in multispecies biofilms: Do they actually matter.</a> Trends Microbiol. 22 (2), 84-91 (2014).</li>
<li>Lories, B., Belpaire, T. E. R., Smeets, B., Steenackers, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competition+quenching+strategies+reduce+antibiotic+tolerance+in+polymicrobial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Biofilms+Microbiomes%22%5BJournal%5D)">Competition quenching strategies reduce antibiotic tolerance in polymicrobial biofilms.</a> NPJ Biofilms Microbiomes. 10 (1), 23(2024).</li>
<li>Nabb, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymicrobial+interactions+induce+multidrug+tolerance+in+Staphylococcus+aureus+through+energy+depletion%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Polymicrobial interactions induce multidrug tolerance in Staphylococcus aureus through energy depletion.</a> Front Microbiol. 10, 2803(2019).</li>
<li>Cornforth, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+transcriptome+during+human+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa transcriptome during human infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (22), E5125-E5134 (2018).</li>
<li>Wolter, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+small-colony+variants+are+independently+associated+with+worse+lung+disease+in+children+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus small-colony variants are independently associated with worse lung disease in children with cystic fibrosis.</a> Clin Infect Dis. 57 (3), 384-391 (2013).</li>
<li>Takagi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucin+o-glycans+are+natural+inhibitors+of+Candida+albicans+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Mucin o-glycans are natural inhibitors of Candida albicans pathogenicity.</a> Nat Chem Biol. 18 (7), 762-773 (2022).</li>
<li>Cinical and Laboratory Standard Institute. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+dilution+susceptibility+tests+for+bacteria+that+grow+aerobically%22">Methods for dilution susceptibility tests for bacteria that grow aerobically</a>. 35 Tenth Edition, (2), (2015).</li>
<li>Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+limitations+of+in+vitro+experimentation+in+understanding+biofilms+and+chronic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection.</a> J Mol Biol. 427 (23), 3646-3661 (2015).</li>
<li>Macia, M. D., Rojo-Molinero, E., Oliver, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+susceptibility+testing+in+biofilm-growing+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial susceptibility testing in biofilm-growing bacteria.</a> Clin Microbiol Infect. 20 (10), 981-990 (2014).</li>
<li>Coenye, T., Goeres, D., Van Bambeke, F., Bjarnsholt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+standardized+susceptibility+testing+for+microbial+biofilms+be+introduced+in+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Infect%22%5BJournal%5D)">Should standardized susceptibility testing for microbial biofilms be introduced in clinical practice.</a> Clin Microbiol Infect. 24 (6), 570-572 (2018).</li>
<li>Turner, K. H., Wessel, A. K., Palmer, G. C., Murray, J. L., Whiteley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+genome+of+Pseudomonas+aeruginosa+in+cystic+fibrosis+sputum%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Essential genome of Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis sputum.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (13), 4110-4115 (2015).</li>
<li>Miles, A. A., Misra, S. S., Irwin, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+estimation+of+the+bactericidal+power+of+the+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hyg%22%5BJournal%5D)">The estimation of the bactericidal power of the blood.</a> J Hyg. 38 (6), 732-749 (1938).</li>
<li>Robertson, S. N., Romero, M., Fenn, S., Kohler Riedi, P. L., Cámara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+characterization%2C+and+evaluation+of+a+simple+polymicrobial+colony+biofilm+model+for+testing+of+antimicrobial+wound+dressings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development, characterization, and evaluation of a simple polymicrobial colony biofilm model for testing of antimicrobial wound dressings.</a> J Appl Microbiol. 135 (3), lxae042(2024).</li>
<li>Rumpf, C., Lange, J., Schwartbeck, B., Kahl, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+and+cystic+fibrosis-a+close+relationship.+What+can+we+learn+from+sequencing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus and cystic fibrosis-a close relationship. What can we learn from sequencing studies.</a> Pathogens. 10 (9), 1177(2021).</li>
<li>Tay, W. H., Chong, K. K. L., Kline, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymicrobial-host+interactions+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Polymicrobial-host interactions during infection.</a> J Mol Biol. 428 (17), 3355-3371 (2016).</li>
<li>Orazi, G., O'toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%26%2334%3BIt+takes+a+village%26%2334%3B%3A+Mechanisms+underlying+antimicrobial+recalcitrance+of+polymicrobial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">&#34;It takes a village&#34;: Mechanisms underlying antimicrobial recalcitrance of polymicrobial biofilms.</a> J Bacteriol. 202 (1), e00530-e00519 (2019).</li>
<li>Arjes, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+biofilm+colony+growth+supports+a+mutualism+involving+matrix+and+nutrient+sharing%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional biofilm colony growth supports a mutualism involving matrix and nutrient sharing.</a> eLife. 10, e64145(2021).</li>
<li>Kasza, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ciprofloxacin+poly%28%CE%B2-amino+ester%29+conjugates+enhance+antibiofilm+activity+and+slow+the+development+of+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interf%22%5BJournal%5D)">Ciprofloxacin poly(β-amino ester) conjugates enhance antibiofilm activity and slow the development of resistance.</a> ACS Appl Mater Interf. 16 (5), 5412-5425 (2024).</li>
<li>Martin, I., Waters, V., Grasemann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approaches+to+targeting+bacterial+biofilms+in+cystic+fibrosis+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Approaches to targeting bacterial biofilms in cystic fibrosis airways.</a> Int J Mol Sci. 22 (4), 2155(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 ve mikro; L aşılama döngüleri&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>13 mm 0,2 ve mikro; M gözenek boyutu polikarbonat diskler ve nbsp;</td><td>İzogözen&nbsp;</td><td>GTTP01300</td><td>Daha büyük diskler de mevcuttur&nbsp;</td></tr><tr><td>2 mL takviyeli tüpler ve nbsp;</td><td>Thermofisher&nbsp;</td><td></td><td></td>15545809</tr><tr><td>2.5 mL seramik boncuklar&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>13114-325</td><td></td></tr><tr><td>500 mL borosilikat cam Duran şişe</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>Daha</td><td>büyük hacimlerde mevcut olan Z305197 büyük şişeler arzu edilir</td></tr><tr><td>6 oyuklu kültür plakaları</td><td>Greiner</td><td>657165</td><td></td></tr><tr><td>7 mL Bijou</td><td>Thermofisher&nbsp;</td><td>129B</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu plakalar</td><td>Thermofisher&nbsp;</td><td></td><td>CFU tahlilinde seri seyreltmeler için</td></tr><tr><td>167008 P. aerugnisa, S. aureus, ve C. albicans</td><td></td><td></td><td>&nbsp;LB değirmeni plakalarının hazırlanması için P. aeruginosa ve S. aureus ve Sabouraud dekstroz agar&nbsp; C. albicans&nbsp; için </td></tr><tr><td>Boncuk çırpıcı - 2 mL tüpler için uygun</td><td>Fisherbrand&nbsp;</td><td>15515799</td><td>Thermofisher boncuk değirmeni 24</td></tr><tr><td>tezgah üstü santrifüj ve nbsp;</td><td></td><td></td><td>en az 8000 x g</td></tr><tr><td>Siyah şeffaf alt 96 kuyulu plaka</td> kapasitesine sahip olmalıdır <td>Costar&nbsp;</td><td>3603</td><td></td></tr><tr><td>Bunsen Brülör&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kontamine ekipman ve malzemelerin enstitünün sağlık ve güvenlik yönetmeliklerine göre atılması için konteynerler.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Deiyonize Su&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>eDNA&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>31149</td><td></td></tr><tr><td>Filtre ünitesi&nbsp;</td><td>Balıkçı markası&nbsp;</td><td>FB12566504</td><td>Kullanılan vakum pompasına bağlı olarak değiştirilebilir ancak gözenek boyutu 0,2 & mikro olmalıdır; m</td></tr><tr><td>Hemositometre ve kapak kayması</td><td>, Hawksley&nbsp;</td><td>HC001</td><td>Hemositometreler boyut ve hacim olarak farklılık gösterebilir. CFU hesaplamalarını iki kez kontrol edin ve buna göre ayarlayın&nbsp;</td></tr><tr><td>LB et suyu&nbsp;</td><td>oksoit&nbsp;</td><td>1.46813</td><td></td></tr><tr><td>Mannitol tuzu agar&nbsp;</td><td>Oksoit&nbsp;</td><td></td><td></td>CM0085B</tr><tr><td>meropenem</td><td>abcr</td><td>Ab243429</td><td></td></tr><tr><td>Domuz midesinden müsin Tip II</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>M2378</td><td></td></tr><tr><td>Nystatin</td><td>Millipore&nbsp;</td><td></td><td></td>1003352658</tr><tr><td>Petri kapları&nbsp;</td><td>SLS</td><td>SLS2000</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pseudomonas izolasyon agar</td><td>Millipore&nbsp;</td><td>17208</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin sodyum tuzu&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td></td><td></td>199303</tr><tr><td>Sabouraud dekstroz agar&nbsp;</td><td>Oksoit&nbsp;</td><td>CM0041</td><td></td></tr><tr><td>forseps seçimi&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Seramik boncukların transferi için ince uçlu ve dişli doku forsepsleri</td></tr>, <tr><td>serolojik pipet,</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>çalkalamalı ve statik inkübatörler&nbsp;</td><td></td><td></td><td>sıcaklık kontrollü olmalıdır</td></tr><tr><td>Sparks mikrotitre plaka okuyucu</td><td>Tecan&nbsp;</td><td></td><td>Resazurin testi için, mikrotitre plaka okuyucunun floresansın tespiti için uygun filtrelere sahip olması veya bir monokromatör olması gerekir.</td></tr><tr><td>spektrofotometre</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Teknik agar (Agar Teknik No.2 )</td><td>Oxoid&nbsp;</td><td>LP0012B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>tetrasiklin</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;</td><td>T7660</td><td></td></tr><tr><td>UV çapraz bağlayıcı ve nbsp;</td><td>Spektrolin&nbsp;</td><td>11-992-89</td><td></td></tr><tr><td>vakum pompası / şişe</td><td>Fisherbrand&nbsp;</td><td></td><td></td>FB12566504</tr><tr><td>su banyosu&nbsp;</td><td></td><td></td><td>55 & °C'yi koruyabilmelidir; C</td></tr><tr><td>YPD et suyu&nbsp;</td><td>Millipore&nbsp;</td><td>Y1375&nbsp;</td><td>Önceden hazırlanmış olarak satın alınabilir veya temel malzemeler kullanılarak yapılabilir</td></tr></tbody></table>

kistik fibrozisde antimikrobiyalleri test etmek İçin polimikrobiyal koloni biyofilm modelinin geliştirilmesi

Development of a Polymicrobial Colony Biofilm Model to Test Antimicrobials in Cystic Fibrosis

Katı hava arayüzü biyofilm modelinin basitliği, aynı anda klinik olarak ilgili farklı koşullar altında çok sayıda antimikrobiyalin taranmasını sağlar. Bu model, hem mono hem de polimikrobiyal biyofilmlerde CFU sayımları ve metabolik testler kullanılarak antibiyotiklerin etkinliğinin değerlendirilmesine bir hafta içinde gerçekleştirilmesine olanak tanır. Modelin doğası gereği, ortam bileşiminin değiştirilmesi ve biyofilmlerin düşük oksijen ve anaerobik koşullar altında yerleştirilmesi gibi çevresel koşulların kolayca manipüle edilmesine de izin verir. Bu modeli kullanarak, mono-türler ve polimikrobiyal biyofilmler halinde yetiştirilen P. aeruginosa arasında pwCF'de yaygın olarak kullanılan iki antibiyotiğe toleranstaki değişiklikleri gösterdik (Şekil 1). Bunun yanı sıra, antimikrobiyal tedavinin polimikrobiyal biyofilmler içindeki popülasyon dinamiklerini nasıl etkileyebileceğini belirleyebildik (Şekil 2).
Bu deneyleri gerçekleştirmek için, ilk aşılama yukarıdaki protokolde belirtildiği gibi hazırlandı, bu da tekrarlanabilir CFU/mL ve bir veya iki yönlü ANOVA ile belirlenen küçük standart sapmalara sahip stabil mono türlerin ve polimikrobiyal biyofilmlerin oluşumuna yol açtı. Bu model aynı zamanda tutarlı büyüme ve CFU geri kazanımını vurgulamanın yanı sıra, bu klasik mikrobiyoloji tekniklerini, karmaşık işlemlere ihtiyaç duymadan bu çalışmada gerçekleştirilmeyen diğer tekniklerle birleştirme olasılığına izin verdi. Bunlar, diğer üç boyutlu modellerin bu kadar erişilebilir bir şekilde sunamadığı canlı/ölü, matris görselleştirme ve moleküler analiz gibi görüntülemeyi içerir (Şekil 1)31. Veriler CFU/mL'ye kıyasla sağkalım yüzdesi olarak görüntülendiğinde CFU/mL için beklenen standart sapmanın arttığına dikkat edilmelidir (Şekil 1). Mono türler ve polimikrobiyal biyofilmler arasındaki antibiyotik tedavisinin etkinliği karşılaştırıldığında,% 50 öldürme elde etmek için gereken tüm antibiyotik konsantrasyonlarında önemli bir artış olmuştur. Meropenem ve tobramisin için bu öldürme seviyesini elde etmek için antibiyotik konsantrasyonunda 2 log'luk bir artışa ihtiyaç vardı (Şekil 1). 64 μg / mL tobramisin ile tedavi edildiğinde polimikrobiyal biyofilmde S. aureus ve C. albicans varlığında P. aeruginosa sağkalımında genel bir artış olmuştur, oysa bunun tersi meropenem için geçerliydi.
Metabolik aktiviteyi belirlemek için kullanılan yöntem, her bir türden bireysel katkıyı ayırt edemeden tüm polimikrobiyal biyofilmin genel aktivitesini ölçer. Bu nedenle, bu model için metabolik aktivite deneylerinin kullanımını göstermek için yalnızca tek tür metabolik değişiklikler gösterilmiştir. Mono tür biyofilmler için, P. aeruginosa sağkalımı ile hem meropenem hem de tobramisin için metabolik aktivite arasında güçlü bir ilişki vardı (Şekil 2). Aynı numunelerden hem metabolik aktivitenin hem de CFU sayımlarının kullanılması, hem bakteriyostatik hem de bakterisidal etkilerin kolayca tanımlanmasını sağlar. Polimikrobiyal biyofilmler için, metabolik aktivitenin belirlenmesi, bir türün hedeflenmesinin biyofilm metabolik aktivitesinde genel bir artışa neden olabileceğini ve dolayısıyla diğer türlerin mikrobiyal büyümesini potansiyel olarak nasıl artırabileceğini gösterebilir.
CFU'lar antimikrobiyal duyarlılık testi için altın standart olmasına rağmen, polimikrobiyal biyofilmlerde biyofilm içindeki tür kompozisyonunun değerlendirilmesine de izin verirler. P. aeruginosa'yı polimikrobiyal biyofilmlerde tedavi ederek, sadece bu organizma için artmış MBEC50'yi göstermekle kalmıyor, aynı zamanda bunun diğer birlikte izole edilmiş türler üzerindeki etkisini de ortaya koyuyoruz (Şekil 3). Bu, örneğin, P. aeruginosa'nın azalmasına S. aureus ve C. albicans CFU'da bir artış eşlik ettiği ve S. aureus'un belirli antibiyotik konsantrasyonlarına maruz kaldığında en yaygın organizma haline geldiği meropenem (antipseudomonal) ile görülür (Şekil 3A). Bu, belirli bir patojeni tedavi ederken hastalığa neden olan diğer türlerin popülasyon büyüklüğündeki potansiyel artış nedeniyle biyofilmin polimikrobiyal doğasının dikkate alınmasının önemini vurgulamaktadır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67213/67213fig01.jpg"> 
Şekil 1: Katı hava arayüz modelinde büyütülen mono ve polimikrobiyal biyofilmler arasında P. aeruginosa'nın meropenem ve tobramisine karşı antimikrobiyal toleransındaki değişim. S. aureus ve C. albicans ile mono veya polimikrobiyal biyofilmlerde büyütülen P. aeruginosa PAO1, SCFM2'de 24 saat boyunca katı hava arayüz modelleri kullanılarak kurulmuştur. Biyofilmler, antibiyotik kontrolü olmadan 0.125 μg/mL ila 64 μg/mL arasında (A) meropenem veya (B) tobramisin konsantrasyonları ile tedavi edildi. Her bir biyofilmin CFU/mL'si belirlendi. P. aeruginosa CFU'lar PIA'da belirlendi ve 0 sağkalım olarak negatif kontrol kullanılarak yüzde sağkalıma dönüştürüldü. Hata çubukları standart sapmayı gösterir ve her veri noktası, her biri üç teknik tekrara sahip 3 biyolojik tekrardan türetilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/67213fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67213/67213fig02.jpg"> 
Şekil 2: Katı hava arayüz modelinde büyütülen meropenem veya tobramisin varlığında P. aeruginosa biyofilmlerinin metabolik aktivitesindeki değişim. P. aeruginosa PAO1 biyofilmleri, katı hava arayüz modelinde SCFM2 üzerinde büyütüldü ve antibiyotik kontrolü ile birlikte 0.125 μg / mL ila 64 μg / mL arasında bir dizi (A) meropenem veya (B) tobramisin konsantrasyonu eklendi. Plaka, her 30 dakikada bir 540 nm'lik bir uyarılma ve 590 nm'lik bir emisyonda floresan olarak okundu. Metabolik aktivite yüzdesi, antibiyotik kontrolü yapılmayan her bir antibiyotik ile tedavi edilen numunede bu aktivitenin yüzdesi belirlenerek hesaplandı. Hata çubukları standart sapmayı gösterir ve her veri noktası, her biri üç teknik tekrara sahip 3 biyolojik tekrardan türetilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/67213fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67213/67213fig03.jpg"> 
Şekil 3: Antimikrobiyal tedaviyi takiben polimikrobiyal katı-hava arayüz modelinden geri kazanılan P. aeruginosa, S. aureus ve C. albicans'ın toplam CFU sayıları üzerindeki etkisi. S. aureus ve C. albicans, katı hava arayüz modelinde SCFM2'de büyütüldü. P. aeruginosa ilave edildi ve antibiyotiksiz kontrolün yanı sıra biyofilmlere 0.125 μg/mL ila 64 μg/mL konsantrasyonlarda (A) meropenem veya (B) tobramisin eklendi. Her bir biyofilmin CFU/mL'si belirlendi. Hata çubukları standart sapmayı gösterir ve her veri noktası, her biri üç teknik tekrara sahip 3 biyolojik tekrardan türetilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/67213fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Şekil 1: Katı hava arayüz modelinin kurulması ve iş akışı. Katı hava arayüz modelinin kurulması, biyofilm bozulması ve çıkışlarının grafiksel gösterimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67213/Supplementary%20figure%201.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Kistik Fibrozisde Antimikrobiyalleri Test Etmek İçin Polimikrobiyal Koloni Biyofilm Modelinin Geliştirilmesi

A range of bacteria biofilm models exist for the testing of antibiotics. However, many of these are limited to a single experimental output, such as ...

development-polymicrobial-colony-biofilm-model-to-test-antimicrobials

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu iş akışı, kistik fibrozisli bireylerin akciğerlerinde bakteriyel biyofilm için yerleşik bir ex vivo modeli kullanılarak antibiyotik duyarlılık testi yapmak için kullanılabilir. Bu modelin kullanımı MBEC (minimal biyofilm eradikasyon konsantrasyonu) testlerinin klinik geçerliliğini artırabilir.

Kistik Fibrozis Akciğerinde Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus Biofilms Ex vivo Modelinde Antibiyotik Etkinliği Testi

Bu protokol, bakteri türleri arası etkileşimlerin etkisini araştırmak için kullanılabilecek kistik fibroz (KF) akciğerle ilgili dört tür polimikrobiyal biyofilm modelini tanımlar.

Topluluk fenotiplerini araştırmak için kistik fibrozla ilgili bir polimikrobiyal biyofilm yetiştirmek

Bu çalışma, kistik fibroz akciğer ortamını yansıtan Pseudomonas aeruginosa gen ekspresyonunu değerlendirmek için bir agrega polimikrobiyal biyofilm modeli geliştirmek ve bir RNA ekstraksiyon protokolünü optimize etmek için bir çerçeveyi özetlemektedir. Uygulamalar, antimikrobiyal etkilerin değerlendirilmesini ve kistik fibroz ile ilgili koşullar altında antibiyotik alternatiflerinin çalışılmasını içerir.

Enfeksiyonla İlgili Gen Ekspresyonunu İncelemek için Kistik Fibroz Agregat Biyofilm Modeli

Kolon Ascendens Peritonit Stent (CASP) kemirgenlerde polimikrobiyal abdominal sepsis için oldukça iyi standardize edilmiş bir model. Bu makale CASP cerrahi prosedürü açıklar. CASP model ve türevleri, sepsis konu ile ilgili çeşitli sorunlar sistematik soruşturma izin verir.

Kolon Peritonit Stent Ascendens (CASP) - polimikrobik Abdominal Sepsis için bir Standart Model

Güncel tanısal antimikrobiyal duyarlılık testi besin açısından zengin, aerobik koşullarda izolatların planktonik büyüme dayanır. Burada, kistik fibrozis akciğer daha fazla temsilcisi hem aerobik hem de mikroaerofilik şartlarda Pseudomonas aeruginosa biyofilmlerin antimikrobiyal duyarlılık incelemek için alternatif yapay balgam orta istihdam.

Karşı Antibiyotik Etkinlik Test Yapay Balgam Orta Kullanımı<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Kistik Fibrozis Akciğer Daha İlgili Koşullar

Bu fare modelinde kalıcı, uzun vadeli kronik Pseudomonas aeruginosa enfeksiyonu kurmak için agar-boncuklar bir yöntem tarif eder.

Uzun Vadeli Kronik<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emFarelerde&gt; Havayolu Enfeksiyon

Burada, antimikrobiyal aktivite için enzimleri hızlı bir şekilde taramak ve karakterize etmek için protokoller sunuyoruz. Mikroslayt difüzyon testi ve boya salım testi, kalitatif ve kantitatif enzimatik aktivite değerlendirmesi için hedef bakteri substratlarını kullanır.

Nitel ve Nicel Saptanması için Tahliller ve Protein Antimikrobiyal karakterizasyonu

Bu protokol, bir slayt odası modeli kullanılarak konak faktörlerine maruz kaldıktan sonra biyofilm gelişiminin görselleştirilmesini açıklar. Bu model, biyofilm gelişiminin doğrudan görselleştirilmesinin yanı sıra bilgisayar yazılım programları kullanılarak biyofilm parametrelerinin analizine olanak tanır.

Bir odacıklı coverglass Modeli Kullanılarak Biyofilm Kalkınma Sputum Etkilerinin görselleştirme

Burada açıklanan yöntem, non-invaziv biyolüminesans görüntüleme (BLI) yoluyla farelerin akciğerlerinde IL-8 promotöre bağlı inflamasyon aktivasyonunun görselleştirilmesine olanak tanır. Aynı hayvan lusiferaz muhabiri yapısının teslim edildiği andan itibaren iki aya kadar birden fazla kez BLI'ye tabi tutulabilir.

Bir IL-8 Geçici Transgenize Edilmiş Fare Modeli<emIn vivo</em&gt; İnflamatuvar Yanıtların Uzun Vadeli İzlenmesi

Burada gerçek zamanlı, non-invaziv, kollarındaki Pseudomonas aeruginosabiyofilm yara enfeksiyonları izleme için tüysüz fareler kullanan bir roman diyabetik fare modeli açıklar. Bu yöntem diğer bakteri ve genetiği değiştirilmiş mikroorganizmalar, çoklu türler biyofilmler, dahil olmak üzere enfeksiyon değerlendirmek ve antibiofilm stratejileri etkinliğini test etmek için adapte edilebilir.

Işık tarafa: In Vivo izleme bir diyabetik tüysüz fare modelinde kronik yaralarda Pseudomonas aeruginosa biyofilm enfeksiyonların

Keşfedin kistik fibroziste polimikrobiyal biyofilm modeli kullanarak antimikrobiyal duyarlılık testi yöntemini. Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ve Candida albicans ile yüksek verimli analiz sağlar.

Kistik Fibrozisde Antimikrobiyalleri Test Etmek İçin Polimikrobiyal Koloni Biyofilm Modelinin Geliştirilmesi

Daha fazla video keşfet