Retinal Vaskülatürde Diyabete Bağlı Yapışık Lökositlerin Miktar Tayini

Laboratuvarımızdaki araştırmaların odak noktası, diyabette retinopatiye neyin sebep olduğunu ve nasıl önlenebileceğini öğrenmektir. Birkaç laboratuvar, gözün küçük damarlarında beyaz kan hücrelerinin aşırı birikimi olan lökostasisin diyabeti artırdığını göstermiştir. Bu da diyabette retinadaki damarların tıkanmasına ve dejenerasyonuna katkıda bulunabilir. Bu teknik, retina vaskülatüründeki lökostasisin ciddiyetinin görselleştirilmesine ve ölçülmesine izin verir. Ve ilaçlar da dahil olmak üzere farklı tedavilerin etkinliğini değerlendirmek isteyen çalışmalarda kullanılabilir.

[Öğretim Görevlisi] Basınçlı demliği kurmak için, %0.9 tuzlu su torbasını seri olarak bağlayın. intravenöz kateter seti, dört bir vana valfi ve gavaj iğnesi. Perfüzyon sistemini açın ve hava kabarcıklarını gidermek için hatları ve portları dakikada 18 ila 20 mililitre akış hızında iki dakika boyunca tuzlu suyla yıkayın. Anestezi uygulanmış fareyi perfüzyon aşamasına sırtüstü yatırın. Ksifoid sürecini görsel olarak tanımlayın. Hemostat baskın elindeyken cildi sabitleyin ve kilitleyin. Daha sonra kanama durdurucuyu baskın olmayan ele aktarın ve cildi kaldırın. Daha sonra, makas kullanarak, dış karın duvarını ortaya çıkarmak için omurgaya 90 derecelik bir açıyla bir cilt parçası kesin. Ksifoid süreci ve göğüs kafesi görünür durumdayken, herhangi bir organ veya ana damardan dikkatlice kaçınarak karın duvarından iki taraflı olarak diseksiyon yapın. Şimdi, diyaframdan kalp ventriküllerini ve akciğerlerini görselleştirin. Makas ucunu kullanarak, omurganın yakınında bir taraftaki diyaframda bir kesi yapın. Sternumu ikiye böldükten sonra kalbi göğüs boşluğunda açığa çıkarın. Baskın olmayan eldeki forseps ile kalbi tepesine yakın bir yerde kavrayın. Baskın eli kullanarak, intravenöz katetere bağlı gavaj iğnesini tutun ve kalbin tepesini delin. Sol ventrikülün tamamen delinmesini veya pulmoner vaskül sistemine girmesini önlemek için gavaj iğnesinin bilye ucunun delinme bölgesinden hafifçe çıkıntı yaptığından emin olun. Ardından,% 0.9 salin akışına izin vermek için musluğu açın. Aynı anda, sağ atriyumu kesmek için makas kullanın. Damar sisteminin bükülmesini önlemek ve kalpten kan drenajını artırmak için iğneyi nazikçe bir yandan diğer yana ve yukarı ve aşağı hareket ettirerek perfüzyona iki ila üç dakika devam edin. Perfüzyondan sonra, tuzlu su akışını kapatmak ve şırıngadan gavaj iğnesine akışa izin vermek için musluk kolunu çevirin. Daha sonra 10 mililitre concanavalin A çözeltisini 30 ila 35 saniye içinde manuel olarak perfüze edin. Anestezi uygulanmış bir farenin kalbini concanavalin A solüsyonu ile perfüze ettikten sonra, fareyi yan çevirin. Baskın olmayan elin işaret parmağını üst göz kapağına ve başparmağını alt göz kapağına yerleştirin. Gözü proptolemek için göz kapaklarını ve çevresindeki cildi nazikçe geri çekin ve kısmen yuvadan çıkmasına izin verin. Daha sonra, baskın eldeki kavisli makası kullanarak, göz altına 45 derecelik bir açıyla kepçe yapın. Kas eklerini ve optik siniri kesin. Makası spatula olarak kullanarak gözü küçük bir kaba aktarın. Küre açmaya hazırlanmak için gözü diş mumunun üzerine yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu altında, mikro forseps kullanarak, gözün arka tarafına bağlı skleral kıvrımı veya kas kalıntılarını tutun ve gözü, kornea bir tarafa bakacak şekilde yönlendirin. Limbusun arkasında ve ona paralel bir kesi yapın. Göz kabının çevresindeki lens de dahil olmak üzere gözün ön segmentini ayırmak için mikro makas kullanın ve retinanın skleradan tamamen ayrıldığından emin olun. Mikro spatula ile retinayı skleradan çıkarın. Retina hala optik sinir tarafından bağlıysa, optik siniri kesmek için retina ve sklera arasına mikro makas sokun. Sabitlenmemiş retinayı bir damla PBS ile bir slayt üzerine yerleştirin. Retinaya dört ila beş radyal kesik yapın ve düz durması için bir yonca yaprağı deseni oluşturun. Düz monte edilmiş retinayı mikroskop altında 10x objektif kullanarak 100x büyütmede gözlemleyin. Retina vaskülatürünün floresan mikroskobu, diyabetik olmayan kontrollerde 1 ila 3'e kıyasla, diyabetik retinaların retina başına tipik olarak 3 ila 12 lökosit ile hafif löskostaz gösterdiğini gösterdi. Diyabetik örneklerdeki hafif kümelenmenin aksine, lipopolisakkaritlere meydan okuyan inflamatuar modellerde önemli lökosit kümeleri gözlendi.