Name: Hemaglutinasyon İnhibisyonu için Antijen Preparatının Optimizasyonu: Newcastle Hastalığı Virüsü Serolojisinin Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Öğrenin, Newcastle hastalığı virüsü serolojik testleri için 4 hemaglutinasyon üniteli antijen preparasyonunu optimize etme yöntemini. Geri titrasyon ve ayarlama süreci kullanılarak antikor tespiti doğruluğu artırılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Protokol için onay, yerel kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından verildi. Canlı virüs antijenleri ve klinik serum örneklerini içeren tüm prosedürler, belirlenmiş güvenlik protokollerine uygun olarak bir Biyogüvenlik Seviye 2 laboratuvarında gerçekleştirildi.
1.% 1 tavuk RBC süspansiyonunun hazırlanması
<ol>
	<li>Steril 15 mL'lik konik santrifüj tüpüne 3 mL Alserver solüsyonu (antikoagülan) ekleyin.</li>
	<li>Bağışık olmayan üç tavuğun her birinin kanat damarından 1 mL kan toplayın (NDV antikorları olmadan). Kanı hemen antikoagülan içeren tüpe aktarın ve yavaşça karıştırın.</li>
	<li>Tüpü steril 1x fosfat tamponlu tuzlu su çözeltisi (PBS, pH 7.2-7.4) ile toplam 12 mL hacme kadar doldurun ve hafifçe karıştırın. Yatay bir rotor kullanarak 500 × g'da 10 dakika santrifüjleyin.</li>
	<li>Süpernatanı ve beyaz kan hücresi tabakasını dikkatlice çıkarın. RBC peletini elde etmek için 1.3 ve 1.4 2x adımlarını tekrarlayın.</li>
	<li>%1'lik bir RBC süspansiyonu hazırlamak için 1 mL RBC peletini 99 mL steril PBS'ye ters pipetleyin. NOT: %1'lik tavuk RBC süspansiyonunun gerekli hacmi 3 mL/plaka olarak tahmin edilmektedir (25 μL/kuyu x 96 kuyucuk x 1,25 = 3,0 mL; burada 1,25, yeterli hacmi sağlamak için pipetleme israfını hesaba katar).</li>
</ol>
2. Liyofilize antijen veya serumun sulandırılması
<ol>
	<li>Liyofilize antijen veya serum içeren ampule 2 mL steril PBS ekleyin. Ampulü hafifçe sallayın ve kabarcıkları en aza indirmek ve tamamen çözünmesini sağlamak için 2-3 dakika bekletin. NOT: Bu çalışmada farklı liyofilize malzeme türleri karşılaştırılmadığından, ilgili üreticinin talimatlarına uyun.</li>
	<li>Sulandırılmış çözeltiyi 1.5 mL santrifüj tüplerine alın ve kullanılana kadar -20 ° C'de dondurun. NOT: Antijen her çözüldüğünde ve kullanıldığında veya yeni bir RBC süspansiyonu hazırlandığında HA titresini yeniden belirleyin.</li>
</ol>
3. Antijenlerin HA titrasyonu
<ol>
	<li>Sırasıyla 40, 80, 120 ve 160 μL PBS'yi, tek kullanımlık 96 oyuklu V-tabanlı mikrotitre plakasının dört bitişik kuyucuğuna dağıtın, ardından her bir oyuğa 20 μL antijen ekleyin ve sırasıyla 1:3, 1:5, 1:7 ve 1:9 seyreltmeler elde etmek için 10 kat yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın. Seyreltme işleminin şematik bir diyagramı Şekil 1'de gösterilmiştir.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig1.jpg"> 
Şekil 1: Hemaglutinasyon testinde antijen çözeltisinin seyreltilmesi prosedürünü gösteren şematik diyagram. Antijen çözeltisi PBS içinde sırasıyla 1:3, 1:5, 1:7 ve 1:9 oranlarında seyreltilir. Kuyucuklardaki veya santrifüj tüplerindeki PBS mavi renkle gösterilirken, antijenler yeşil renkle gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="2">
	<li>Yeni bir mikrotitre plakasını etiketleyin. 1-5. sıralardaki her bir oyuğa 25 μL PBS ekleyin.</li>
	<li>25 μL seyreltilmiş antijen solüsyonlarını çok kanallı bir pipet kullanarak 1-5. sıraların ilk kuyucuklarına yerleştirin ve en az 5 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın.</li>
	<li>Her sıranın birinci kuyucuğundan ikinci kuyucuğa 25 μL aktarın ve iyice karıştırın. İki katlı seri seyreltmeler (1:2 ila 1:2048) oluşturmak için bir kuyudan diğerine, 11. sütuna aktarmaya devam edin. 11. sütundan sonra 25 μL atın.</li>
	<li>En düşük antijen konsantrasyonunu içeren kuyucuklardan başlayarak her oyuğa 25 μL PBS ekleyin.</li>
	<li>Her bir oyuka 25 μL% 1 tavuk RBC süspansiyonu ekleyin, yine en düşük antijen konsantrasyonunu içeren kuyucuklardan başlayın.</li>
	<li>İyice karıştırmak için plakayı bir mikroplaka çalkalayıcı üzerinde ~ 20 s çalkalayın.</li>
	<li>20. sütunun RBC'si tamamen yerleşene kadar ~ 30 dakika oda sıcaklığında (12-12 ° C) tezgah üzerinde rahatsız edilmeden bırakın. Plaka düzeni için Şekil 2'ye bakın.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig2.jpg"> 
Şekil 2: Hemaglutinasyon testinde kullanılan bir mikroplakanın şematik yerleşimi. 1-5. sıraların ilk sütunu, antijen çözeltisinin seyreltilmemiş ve çeşitli başlangıç seyreltmelerini içerir, ardından sütun 11'e kadar soldan sağa iki katlı bir seri seyreltme yapılır. PBS kontrolü son sütuna yerleştirilir. Karanlıktan aydınlığa geçiş, antijen konsantrasyonunun azaldığını gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="9">
	<li>Sonuçları okuyun ve kaydedin. HA, plakanın ~25 s boyunca 90° eğilmesi ve RBC'lerin yırtılma şeklinde akışının varlığının veya yokluğunun gözlemlenmesiyle belirlenir. Tam hemaglutinasyon (akış yok) gösteren en yüksek seyreltme, 1 HA Birimini temsil eder. 12. sütundaki kuyular RBC (negatif) kontroller olarak işlev görür.</li>
	<li>Tablo 1'i kullanarak her sıranın HA titresini hesaplayın, maksimum 4-HAU antijen çözeltisinin hazırlanması için kullanılır. Örneğin, a, b, c, d ve e sırasıyla 9, 8, 7, 6, 6'ya eşitse, 3 x 28 = 768 maksimum değerdir ve antijen stoğunun HA titresidir.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antijen</td>
			<td>Tam HA'nın en yüksek seyreltme sütunu</td>
			<td>Seyreltilmemiş stoğun HA titresi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seyreltilmemiş stok</td>
			<td>a</td>
			<td>2bir</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 kat seyreltme</td>
			<td>b</td>
			<td>3 x 2b</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 kat seyreltme</td>
			<td>c</td>
			<td>5 x 2c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7 kat seyreltme</td>
			<td>d</td>
			<td>7 x 2gün</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9 kat seyreltme</td>
			<td>e</td>
			<td>9 x 2e</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: HA tahlil sonuçları ve stok çözeltisinin HA titresinin hesaplanması.
4. 4-HAU antijen çözeltisinin hazırlanması
<ol>
	<li>4-HAU antijen çözeltisinin hazırlanması için seyreltme faktörünü hesaplayın: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq3.jpg">. Gereken toplam 4-HAU hacmini belirleyin: V = 3mL x Mikroplaka sayısı. Ardından, gerekli antijen stok çözeltisi hacimlerini hesaplayın: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq5.jpg">ve PBS: Vp = V - Va. NOT: Hacimler mililitre cinsinden ölçülür. 4-HAU'nun mikrotitre plakası başına 3 mL tahmin edin (25 μL/kuyu x 96 kuyucuk x 1.25 = 3 mL).</li>
	<li>Hesaplanan PBS hacmini bir kaba pipetleyin, ardından karşılık gelen hacimde antijen stok solüsyonunu ekleyin ve 4-HAU antijen solüsyonunu elde etmek için iyice karıştırın. NOT: 4-HAU antijen çözeltisi mümkün olan en kısa sürede kullanılmalıdır.</li>
</ol>
5. 4-HAU antijen çözeltisinin geri titrasyonu
<ol>
	<li>25, 50, 75, 100, 125 ve 150 μL PBS'yi bir mikrotitre plakasının altı bitişik kuyucuğuna dağıtın, ardından her bir oyuğa 25 μL 4-HAU antijen çözeltisi ekleyin ve 10 kat yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın. NOT: 4-HAU antijen çözeltisini 1: 2, 1: 3, 1: 4, 1: 5, 1: 6 ve 1: 7 dilüsyonlarında PBS ile seyreltin. Seyreltme işleminin şematik bir diyagramı Şekil 3'te gösterilmiştir.</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig3.jpg"> 
Şekil 3: Geri titrasyonda 4 hemaglutinasyon ünitesinin çözeltisinin seyreltme prosedürünün şematik diyagramı. 4-HAU çalışma çözeltisi, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 ve 1:7 oranlarında PBS ile seyreltilir. PBS mavi renkle ve antijenler yeşil renkle gösterilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="2">
	<li>Her seyreltilmiş antijen çözeltisinin 25 μL'sini çok kanallı bir pipet kullanarak başka bir sıranın kuyucuklarına aktarın. Negatif kontrol olarak ekstra bir kuyuya 25 μL PBS ekleyin.</li>
	<li>Her oyuğa 25 μL PBS ekleyin, ardından her oyuğa 25 μL% 1 tavuk RBC ekleyin.</li>
	<li>Karıştırmak için plakayı bir mikroplaka çalkalayıcı üzerinde ~ 20 s çalkalayın.</li>
	<li>Negatif kontrolün RBC'leri tamamen yerleşene kadar ~ 30 dakika boyunca oda sıcaklığında (20-25 ° C) tezgah üzerinde rahatsız edilmeden bırakın.</li>
	<li>Sonuçları okuyun ve kaydedin. NOT: Negatif kontrol kuyusu HA göstermemelidir. İdeal olarak, 1:4 seyreltme, tam HA ile tam olarak en yüksek seyreltmedir. 4-HAU çözeltisinin titresi 4'ten fazlaysa, en yüksek seyreltme 1:5, 1:6 veya 1:7 olabilir; Daha az ise, 1:2 veya 1:3 olabilir. Geri titrasyonun şematik bir düzeni ve temsili sonuçlar Şekil 4'te gösterilmiştir.</li>
</ol>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig4.jpg"> 
Şekil 4: Geri titrasyon ve temsili sonuç için kuyucukların şematik yerleşimi. Seyreltilmiş 4-HAU çalışma çözümü, ek bir PBS kontrolü eklenerek yeni bir sıraya aktarılır. Koyudan açık yeşile geçiş, yüksekten düşüğe antijen konsantrasyonunu gösterir. Temsili sonuçlar, 1: 4 seyreltmenin tam hemaglutinasyon gösteren en yüksek seyreltme olduğunu göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol start="7">
	<li>Gerekirse 4-HAU antijen çözeltisini ayarlayın veya yeniden formüle edin. NOT: Geri titrasyonda kullanılan 4-HAU antijen çözeltisinin hacmi toplam hacmin %≤1'i ise (4-HAU antijen çözeltisinin hacmi ≥ 15 mL), özel ayarlamalar için Tablo 2'ye bakın. Örneğin, tam HA ile en yüksek seyreltme 1: 2 ise, 4-HAU antijen çözeltisinin titresi şimdi 2'dir ve 4-HAU antijen çözeltisinin önceki hazırlığında olduğu gibi eşit hacimde bir antijen eklenmelidir. Tersine, tam HA'nın en yüksek seyreltilmesi 1: 6 ise, titre şimdi 6'dır ve PBS hacminin yarısı yenilenmelidir. Geri titrasyonda kullanılan hacim toplamın %1'ini aşarsa (4-HAU antijen çözeltisinin hacmi &lt; 15 mL), düzeltilmiş seyreltme faktörünü kullanarak 4-HAU antijen çözeltisini yeniden formüle edin. Özel düzeltmeler için Tablo 3'e bakın. Örneğin, tam HA'nın en yüksek seyreltilmesi 1:2 ise, 4-HAU antijen çözeltisinin titresi şimdi 2'dir ve seyreltme faktörü orijinalin 1/2'sine ayarlanmalıdır. Tersine, tam HA'nın en yüksek seyreltilmesi 1: 6 ise, 4-HAU antijen çözeltisinin titresi şimdi 6'dır ve seyreltme faktörü orijinalin 3 / 2'sine ayarlanır.</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Geri titrasyonun HA titresi</td>
			<td>Antijen veya PBS'nin yenilenmesi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>Va</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>Va/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>Başkan Yardımcısı/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>Başkan Yardımcısı/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>3Vp/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 2: Geri titrasyon sonuçlarına dayalı olarak 4-HAU konsantrasyonunu ayarlamak için referans tablosu. Va ve Vp, sırasıyla 4-HAU antijen çözeltisinin formülasyonunda kullanılan antijen ve PBS hacimlerini temsil eder.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Geri titrasyonun HA titresi</td>
			<td>Seyreltme faktörü düzeltmesi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>3 boyutlu/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>5D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>3 boyutlu/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>7 BOYUTLU/4 BOYUTLUDUR</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 3: 4-HAU antijeninin yeniden hazırlanması için seyreltme faktörü düzeltmesinin referans tablosu. D, daha önce 4-HAU antijen preparatında kullanılan seyreltme faktörünü temsil eder.
6. Serumun hazırlanması
<ol>
	<li>Antikoagülan kullanmadan tavuk kanatlarından ~ 1 mL kan toplayın.</li>
	<li>Kanı 1.5 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın ve 37 ° C'de ~ 2 saat inkübe edin. 10 dakika boyunca 3.000 x g'da santrifüjleyin ve süpernatanı dikkatlice yeni bir tüpe aspire edin.</li>
</ol>
7. HI testi
<ol>
	<li>Mikrotitre plakalarını tahlil düzenine göre etiketleyin. Çok kanallı bir pipet kullanarak 1-11 sütunlarındaki her bir oyuğa 25 μL PBS ve sütun 12'deki kuyucuklara 50 μL ekleyin.</li>
	<li>Pozitif ve negatif serum kontrol sıraları dahil olmak üzere her sıranın ilk oyuğuna 25 μL serum ekleyin. En az 5 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek iyice karıştırın.</li>
	<li>Her sıranın ilk kuyucuğundan ikinci kuyucuğa 25 μL aktarın ve iyice karıştırın. İkinci kuyudan üçüncüye aktarmaya ve karıştırmaya devam edin ve 10. sütuna kadar devam edin. Karıştırdıktan sonra 10. sütundaki kuyudan 25 μL sıvıyı atın.</li>
	<li>Düşük ila yüksek serum konsantrasyonu yönünde 1-11 sütunlarındaki her bir oyuğa 25 μL 4-HAU antijeni ekleyin.</li>
	<li>Plakayı bir mikroplaka çalkalayıcı üzerinde ~20 saniye çalkalayın. ~ 30 dakika boyunca tezgah üzerinde rahatsız edilmeden bırakın.</li>
	<li>Her bir oyuğa düşük ila yüksek serum konsantrasyonu yönünde 25 μL% 1 tavuk RBC ekleyin.</li>
	<li>İyice karıştırmak için plakayı bir mikroplaka çalkalayıcı üzerinde ~ 20 s çalkalayın. PBS kontrol kuyularının RBC'leri tamamen yerleşene kadar ~ 30 dakika boyunca tezgah üzerinde rahatsız edilmeden bırakın.</li>
	<li>Sonuçları okuyun ve kaydedin. NOT: HI titresi, 4-HAU antijeninin hemaglutinasyonunu tamamen inhibe eden en yüksek serum dilüsyonudur. RBC'lerin yırtılma şeklindeki akışı, plakayı 25 saniye boyunca 90° eğerek her sıranın son sütununda gözlemlenebilir. Her sıranın sonundan itibaren sondan ikinci kuyuda tam HA (akış yok) gözlemlenebilir. Geçerli test sonuçları, pozitif serum kontrolünün HI titresinin bilinen HI titresinin bir seyreltilmesi içinde olmasını gerektirir; negatif serum kontrolünün HI titresi ≤ 2 log2; ve RBC kontrolünün kendi kendine HA'sının olmaması. HA tahlili iş akışının şematik diyagramı için Şekil 5'e bakın.</li>
</ol>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig5.jpg"> 
Şekil 5: Hemaglutinasyon testi test iş akışının şematik diyagramı. PBS mavi, serum sarı, 4-HAU antijen çözeltisi yeşil ve %1'lik tavuk RBC süspansiyonu kırmızı ile temsil edilir. Oklar, sıvı dağıtımının sırasını gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<meta charset="utf8"></head><body>Doğru NDV Antikor Tespiti için 4—HAU Antijeninin Kolaylaştırılmış Hazırlanması

<ol><li>Ayllon, J., García-Sastre, A., Martínez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+recombinant+Newcastle+disease+virus+from+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rescue of recombinant Newcastle disease virus from cDNA.</a> J Vis Exp. (80), e50830(2013).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HN+protein+of+Newcastle+disease+virus+induces+cell+apoptosis+through+the+induction+of+lysosomal+membrane+permeabilization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">The HN protein of Newcastle disease virus induces cell apoptosis through the induction of lysosomal membrane permeabilization.</a> PLoS Pathog. 20 (2), e1011981(2024).</li>
<li>Miller, P. J., Decanini, E. L., Afonso, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease%3A+evolution+of+genotypes+and+the+related+diagnostic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease: evolution of genotypes and the related diagnostic challenges.</a> Infect Genet Evol. 10 (1), 26-35 (2010).</li>
<li>Terregino, C., Capua, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+traits+and+pathology+of+Newcastle+disease+infection+and+guidelines+for+farm+visit+and+differential+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Influenza+and+Newcastle+Disease%3A+A+Field+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Clinical traits and pathology of Newcastle disease infection and guidelines for farm visit and differential diagnosis.</a> Avian Influenza and Newcastle Disease: A Field and Laboratory. , 113-122 (2009).</li>
<li>Dimitrov, K. M., Afonso, C. L., Yu, Q., Miller, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease+vaccines%E2%80%94A+solved+problem+or+a+continuous+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease vaccines—A solved problem or a continuous challenge.</a> Vet Microbiol. 206, 126-136 (2017).</li>
<li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characteristics+and+phylogenetic+analysis+of+pigeon+paramyxovirus+type+1+isolates+from+pigeon+meat+farms+in+Shanghai+%282009-2012%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Molecular characteristics and phylogenetic analysis of pigeon paramyxovirus type 1 isolates from pigeon meat farms in Shanghai (2009-2012).</a> Sci Rep. 14 (1), 10741(2024).</li>
<li>Yates, J. G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+high-titer+recombinant+Newcastle+disease+virus+from+allantoic+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of high-titer recombinant Newcastle disease virus from allantoic fluid.</a> J of Vis Exp. (183), e63817(2022).</li>
<li>van Boven, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herd+immunity+to+Newcastle+disease+virus+in+poultry+by+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Pathol%22%5BJournal%5D)">Herd immunity to Newcastle disease virus in poultry by vaccination.</a> Avian Pathol. 37 (1), 1-5 (2008).</li>
<li>Oberländer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Newcastle+disease+antibody+titers+in+backyard+poultry+in+Germany+with+a+vaccination+interval+of+twelve+weeks%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Newcastle disease antibody titers in backyard poultry in Germany with a vaccination interval of twelve weeks.</a> PloS One. 15 (8), e0238068(2020).</li>
<li>Bhattacharya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spillover+of+Newcastle+disease+virus+to+Himalayan+Griffon+vulture%3A+a+possible+food-based+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Genes%22%5BJournal%5D)">Spillover of Newcastle disease virus to Himalayan Griffon vulture: a possible food-based transmission.</a> Virus Genes. 60 (4), 385-392 (2024).</li>
<li>World Organisation for Animal Health (OIE). Newcastle disease (Infection with Newcastle disease virus). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Manual+of+diagnostic+tests+and+vaccines+for+terrestrial+animals%22">Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals</a>. , (2024).</li>
<li>Council of European Union. Council Directive 92/66/EEC of 14 July 1992 Introducing Community measures for the control of Newcastle disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Document+31992L0066%22">Document 31992L0066</a>. L260, 1-20 (1992).</li>
<li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGrimes%2C+SE+%22A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine%22">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine</a>. 2002/22, RAP Publication. 1-129 (2002).</li>
<li>Dortmans, J. C. F. M., Peeters, B. P. H., Koch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease+virus+outbreaks%3A+Vaccine+mismatch+or+inadequate+application%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease virus outbreaks: Vaccine mismatch or inadequate application.</a> Vet Microbiol. 160 (1-2), 17-22 (2012).</li>
<li>De Sousa, R. L. M., Montassier, H. J., Pinto, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantification+of+antibodies+to+Newcastle+disease+virus+in+ostrich+and+Rhea+sera+using+a+liquid+phase+blocking+enzyme-linked+immunosorbent+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantification of antibodies to Newcastle disease virus in ostrich and Rhea sera using a liquid phase blocking enzyme-linked immunosorbent assay.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 7 (6), 940-944 (2000).</li>
<li>Chumbe, A., Izquierdo-Lara, R., Calderón, K., Fernández-Díaz, M., Vakharia, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+Newcastle+disease+virus+%28NDV%29+neutralization+test+based+on+recombinant+NDV+expressing+enhanced+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Development of a novel Newcastle disease virus (NDV) neutralization test based on recombinant NDV expressing enhanced green fluorescent protein.</a> Virol J. 14 (1), 232(2017).</li>
<li>Webster, R., Cox, N., Stöhr, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WHO+animal+influenza+manual%5BTitle%5D)+AND+%22WHO%2FCDS%2FCSR%2FNCS%22%5BJournal%5D)">WHO animal influenza manual.</a> WHO/CDS/CSR/NCS. 2002.5, 1-99 (2002).</li>
</ol>

Bu makalede önerilen optimize edilmiş yöntem, 4-HAU antijen çözeltisinin doğru bir şekilde hazırlanması için bir yaklaşım sunmaktadır. OIE ve AB kılavuzları, HA titrasyonu için ilk seyreltmeleri önerse de, kullanılacak seyreltme oranlarıyla ilgili kesin ayrıntılar sağlamaz veya belirli metodolojiler sunmaz1,12. Ayrıca, FAO ve OIE, 4-HAU'nun doğruluğunu arttırmanın bir yolu olarak geri titrasyonu önermesine rağmen, net bir protokolden yoksundurlar11,13</su...

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Steril Santrifüj Tüpü (15 mL)&nbsp;</td><td>Labshark</td><td>130201030</td><td></td></tr><tr><td>Hava Soğutmalı Düşük Hızlı Masaüstü Santrifüj&nbsp;</td><td>Titan</td><td>LDC-5</td><td></td></tr><tr><td>Alserve'in Çözümü</td><td>Sangon Biotech</td><td>E607058</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>DLAB</td><td>9032002121</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Pastör Pipeti</td><td>Titan</td><td>SWXG-004</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Steril Şırınga (1 mL)</td> <td>Beyotime</td><td>FS801-30PCS</td> Tek Kullanımlık V-alt Mikro Titre <td></td></tr><tr><td>Plakası (96 kuyulu)</td> <td>Labshark</td><td></td><td></td>130207001</tr><tr><td>Mikroplaka Çalkalayıcı</td><td>Jiangsu Xinkang Medical Equipment Co., Ltd</td><td>XK96-3</td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Negatif Sera</td><td>Qingdao Regen Teşhis Geliştirme Merkezi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Pozitif Sera</td><td>Qingdao Regen Teşhis Geliştirme Merkezi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI Testi Antijen</td><td>Qingdao Regen Teşhis Geliştirme Merkezi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS Çözüm (1x)&nbsp;</td><td>Adamas Life</td><td>C8020</td><td></td></tr><tr><td>Steril Santrifüj Tüpü (1.5 mL)</td><td>Labshark</td><td>130201012</td><td></td></tr></tbody></table>

hemaglutinasyon İnhibisyonu için antijen preparatının optimizasyonu: newcastle hastalığı virüsü serolojisinin testi

Optimization of Antigen Preparation for Hemagglutination Inhibition Assay of Newcastle Disease Virus Serology

Optimize edilmiş yöntem kullanılarak formüle edilen 4-HAU antijen çözeltisinin titresinin doğrulanması Çalışma, HA titresini doğru bir şekilde belirlemek için antijen stok çözeltisinin çeşitli seyreltmelerini kullandı ve 4-HAU antijen çözeltisinin hazırlanması için seyreltme faktörünün hesaplanmasını kolaylaştırdı. Sonuçlar, optimize edilmiş yöntemin hem verimli hem de hassas olduğunu ve tekrarlanan geri titrasyon ve ayarlama prosedürlerinin sayısını azalttığını ortaya koymaktadır. İlk senaryoda, ~ 51...

Hemaglutinasyon İnhibisyonu için Antijen Preparatının Optimizasyonu: Newcastle Hastalığı Virüsü Serolojisinin Testi

Accurate assessment of Newcastle disease virus (NDV) antibody titers is crucial for effective poultry disease control and surveillance. This article ...

optimization-antigen-preparation-for-hemagglutination-inhibition

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Video, spesifik antijenlere karşı serum antikorlarını tespit etmek için bir hemaglutinasyon inhibisyon testini göstermektedir. Test kuyusunda hemaglutinasyon inhibisyonunun ve kontrol kuyusunda hemaglutinasyonun doğrulanması, farklı görsel desenlerle elde edilir. Bu test, viroloji ve immünolojide bağışıklık tepkisini, aşı etkinliğini değerlendirmede ve viral enfeksiyonları incelemede çok önemli bir rol oynar.

Bir Hedef Antijene Karşı Serum Antikorlarını Tespit Etmek için Hemaglutinasyon İnhibisyonu Testi

Bu video, insan serumunda α2,6'ya bağlı sialik asidi aşırı eksprese eden Madin-Darby Köpek Böbrek hücrelerini kullanarak nötralize edici antikorları ölçmek için Mikronötralizasyon testlerini göstermektedir. Bu test genellikle influenza insan serolojisi için...

İnsan Serumunda Nötralize Edici Antikor Titrelerini Ölçmek için Bir Mikronötralizasyon Testi

Bu video, bir serum örneğinde influenza nöraminidaz (NA) inhibe eden antikor titrelerini ölçen bir testi göstermektedir. NA'ya karşı antikorlar içeren bir serum örneği, fetuin kaplı bir mikrokuyu plakasına eklenir. Virüs eklendikten sonra, antikorlar viral NA'nın fetuini parçalamasını ve galaktoz kısmını açığa çıkarmasını önler. Daha sonra, açıkta kalan galaktoza bağlanan peroksidaz konjuge bir lektin eklenir. NA-inhibe edici antikor titresi, bir peroksidaz substratının, renk üretmek için...

İnfluenza Nöraminidaz İnhibisyonu Antikor Titrelerini Ölçmek İçin Bir Test

Newcastle hastalığı virüsü (NDV) yaygın olarak, diğerleri arasında, aşı ve tedavi için yeni vektörler geliştirmek için, son birkaç yıl içinde incelenmiştir. Bu çalışmalar nedeniyle bu tür burada açıklandığı gibi rekombinant virüs cDNA'sından kurtarmak için teknikler, mümkün olmuştur.

CDNA&#39;dan rekombinant Newcastle Hastalığı Virüsü Rescue

Burada, bir proof-of-prensibi iki değerlikli adenovirüs tip 5 (Ad5) vektörü oluşturmak için bir protokol mevcut Ad5 / H5-HVR1-Kwas-HVR5-His 6 Antijen Kapsid-Ortaklık stratejisi kullanılarak. Bu vektör nitel uygunluk arzettiği gösterilmiştir, yetenek dahil antijenlere Ad5-pozitif in vitro sera'yı ve antijenikliği yanı sıra immünojenitesini kaçmak için.

Adenovirüs Serotipinin 5-vektörlü Aşı Yaklaşımlar Geliştirme Antijen Kapsid-Ortaklık Stratejisi kullanmak

Serumlarda influenza nöraminidaz (NA)-inhibisyon antikor titrelerini ölçmek için enzime bağlı lektin testini (ELLA) tarif ediyoruz. Tahlil, NA'nın fetuin kaplı, 96 oyuklu plakalardan sialik asidi çıkardığında erişilebilir hale gelen galaktoz kalıntılarını ölçmek için fıstık aglütinini kullanır.

Enzim-linked Lektin Testi tarafından Grip Nöraminidaz İnhibisyon antikor titreleri Ölçme

Bu çalışma, bir açıklar   görüntüleme bazlı mikro-nötralizasyon deneyi virüsler arasında antijenik ilişkileri analiz etmek. protokol düz yataklı tarayıcı kullanır ve titrasyon, titrasyon kantitatif, nötralizasyon ve nötralizasyon kantitatif olmak üzere dört adım vardır. Tahlil akımı dolaşan grip A (H1N1) pdm09, A (H3N2) ve B virüsleri ile iyi çalışır.

Bir Kantitatif Mikro-nötralizasyon Testi optimizasyonu

Sunulan iletişim kuralları nasıl grip özgü antikor titreleri serum numuneleri grip aşısı alıcıların üzerinden ölçmek için bir hemaglütinasyon inhibisyon tahlil gerçekleştirileceğini açıklar. İlk tahlil hemaglütinasyon tarafından en iyi viral antijen konsantrasyonları belirler. İkinci tahlil hemaglütinasyon inhibisyon tarafından grip özgü antikor titreleri quantifies.

Grip özgü antikor titreleri ölçmek için bir en iyi duruma getirilmiş hemaglütinasyon inhibisyon (hı) tahlil

Burada, yüksek titreli rekombinant Newcastle hastalığı virüsünün üretimi, saflaştırılması ve miktarının belirlenmesi için ayrıntılı bir prosedür sunuyoruz. Bu protokol sürekli olarak &gt; 6 × 109 plak oluşturan birim / mL verir ve in vivo hayvan çalışmaları için uygun virüs miktarlarını sağlar. İn vivo güvenliği sağlamak için ek kalite kontrol testleri açıklanmaktadır.

Allantoik Sıvıdan Yüksek Titerli Rekombinant Newcastle Hastalığı Virüsü Üretimi

Biz süreci için bir metodu tanımlar ve ekran alanında toplanan Vero hücre kültürü yöntemi ile virüs bir çeşitliliğe sivrisinekler. Bu tekniği kullanılarak, Connecticut toplanan sivrisinek 4 taksonomik ailelerden gelen 9 farklı virüsler tespit ettik.

Vero Hücre Kültür Testi ile Alan toplanan Sivrisinekler Enfeksiyon Virüs Algılama

Öğrenin, Newcastle hastalığı virüsü serolojik testleri için 4 hemaglutinasyon üniteli antijen preparasyonunu optimize etme yöntemini. Geri titrasyon ve ayarlama süreci kullanılarak antikor tespiti doğruluğu artırılır.

Hemaglutinasyon İnhibisyonu için Antijen Preparatının Optimizasyonu: Newcastle Hastalığı Virüsü Serolojisinin Testi

Daha fazla video keşfet