Name: Mezenterik İskemi-Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Mezenterik Venüllerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İntravital Mikroskopi ile Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Öğrenin mezenterik iskemi-reperfüzyon yaralanmasında intravital mikroskopi ile nötrofil hücre dışı tuzak oluşumunu ve endotelyal PAR1'in rolünü fare modellerinde. Bu yöntem tromboz ve inflamasyon mekanizmalarını canlı ortamda gözlemlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>I/R Hasarı Sırasında Lökosit Yapışması ve NET Oluşumunda Endotelyal PAR1 Rolü

<table><tbody><tr><td>Akridin portakal</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>&nbsp; A-6014</td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu plaka Multiply PCR-Platten&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>721977202.00</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgenler için Anestezi Sistemleri</td><td>GROPPLER medizintechnik</td><td>Uni Vet -Porta T-8</td><td></td></tr><tr><td>Aqua ad injectabilia IVM</td><td>B Braun Melsungen</td><td>53402101</td><td></td></tr><tr><td>siyah hamur</td><td>Staedtler</td><td></td><td>modelleme kili</td></tr><tr><td>CD146 Mikro boncuklar, fare</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-007</td><td></td></tr><tr><td>cellSens</td><td>Olympus</td><td>Olympus cellSense Dimension Desktop 2.3</td><td>yazılımı</td></tr><tr><td>şarj bağlantılı cihaz kamerası</td><td>Hamamatsu Photonics</td><td>ORCA-R2</td><td>kamera</td></tr><tr><td>pamuklu çubuklar</td><td>B&ouml; ttger</td><td>09-119-9100</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Hemostat 125mm / 5 "</td><td>Indigo Instruments&nbsp;</td><td>22466</td><td></td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td><td>Balya</td><td>uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Dorbene Vet</td><td>zoetis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Etanol pa 99,5 %</td><td>Roth</td><td>5504.20</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra Dar Makas &ndash; Düz/Keskin-Keskin/10.5</td><td>FST</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Fentanil</td><td>Janssen-Cilag GmBH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forseps "Dumont #5" (Inox, uç 0,1 mm, uzunluk 11 cm)</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS C Tüpleri</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-236</td><td></td></tr><tr><td>Graphpadprism</td><td>Graphpad</td><td>Prism 10</td><td>yazılım</td></tr><tr><td>izofluranı&nbsp;</td><td>Piramal</td><td>4150097146757.00</td><td></td></tr><tr><td>iTaq UniversalSYBR Green Supermix 10x5ml</td><td>BioRad</td><td>1725125.00</td><td></td></tr><tr><td>Leukofix tıbbi bant</td><td>BSNMedical</td><td>0213600</td><td></td></tr><tr><td>Karaciğer Ayrışma Kiti, fare</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-105-807</td><td></td></tr><tr><td>LS-Ayırma sütunları MACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS Akıllı Süzgeç 100 ve mikro; m</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-098-463</td><td></td></tr><tr><td>Microseal B Conta Contaları</td><td>Biorad</td><td>MSB1001</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>hameln</td><td>5918501.00</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Braun</td><td>2350748</td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>FST</td><td>12001-13</td><td></td></tr><tr><td>Emilmeyen Örgülü İpek Sütür, Boyut: 7/0, 91 Metre&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18020-70</td><td></td></tr><tr><td>Olympus BX51WI floresan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td></td><td>mikroskobu</td></tr><tr><td>Tüp Şeritleri için PCR</td><td>Sarstedt</td><td>72985002.00</td><td></td></tr><tr><td>PCR Tüp Kapakları</td><td>Sarstedt</td><td>65989002.00</td><td></td></tr><tr><td>Vinil Kateter</td><td>Smith Medical Deutschland GmbH</td><td>800/100/100</td><td></td></tr><tr><td>Prolene (8648G), Polipropilen 6-0, Nahtmalzeme&nbsp;</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH&nbsp;</td><td>8695H</td><td></td></tr><tr><td>Relia Prep RNA Miniprep Sistemleri</td><td>Promega</td><td>Z6112</td><td></td></tr><tr><td>Ters Tanscription Kiti (Yüksek Kapasiteli cDNA)</td><td>Applied Biosystems</td><td>4368813.00</td><td></td></tr><tr><td>Okul ölçeği&nbsp;</td><td>KERN & SOHN GmbH</td><td>EMB 500-1</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makas - Yana Açılı</td><td>FST</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Stereo mikroskop</td><td>Leica</td><td>M50</td><td></td></tr><tr><td>Düz Kanama Durdurucular 135mm/5.5"</td><td>Indigo Instruments&nbsp;</td><td>22468</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 1 mL</td><td>Braun</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Turuncu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11368</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık Kontrol Cihazı TC-1000</td><td>FMI F&ouml; hr Medical Instruments GmbH</td><td>uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Doku Forseps - 1x2 Diş</td><td>FST</td><td>18057-14</td><td></td></tr><tr><td>vasküler kelepçe</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18055-02</td><td></td></tr><tr><td>Vetiva mini</td><td>WAHL</td><td>1584-0480</td><td></td></tr></tbody></table>

mezenterik İskemi-reperfüzyon yaralanması sonrası mezenterik venüllerde nötrofil hücre dışı tuzakların İntravital mikroskopi ile görüntülenmesi

Visualization of Neutrophil Extracellular Traps in Mesenteric Venules After Mesenteric Ischemia-Reperfusion Injury via Intravital Microscopy

Lökosit yuvarlanması ve adezyonu ile NET oluşumu üzerindeki endotel hücresine bağlı etkileri incelemek için, başlangıçta, endotel hücrelerinde VE-Cadherin Cre ile indüklenebilir F2r eksikliğinin etkinliği incelenmiştir. Hepatik endotel hücrelerini izole etmek için manyetik hücre sınıflandırması yapıldı. Daha sonra, RNA izole edildi, ardından kantitatif gerçek zamanlı PCR (qRT-PCR) izledi. VE-Cadherin promotörü kontrolü altında eksprese edilen Cre rekombinazının bulunmadığı F2rΔEC fareleri, WT kontrollerine kıyasla önemli ölçüde azalmış F2r (PAR1) mRNA seviyeleri (yaklaşık üçte bir) göstermiştir (Şekil 1).
Fare hattındaki eksiklik doğrulandıktan sonra, vasküler endotel hücreleri tarafından eksprese edilen PAR1'in intravital mikroskopi ile görüntülenen lökosit yuvarlanması ve adezyonu üzerindeki etkisini incelemek için mezenterik I/R hasarı gerçekleştirildi (Şekil 2A,B). 1 saatlik iskemi sonrasında, klemp çıkarıldı ve damarın tekrar perfüze olmasına izin verildi. Lökosit yuvarlanması ve yapışması gözlendi ve kaydedildi (beyaz oklarla gösterilen yeşil lekeli). Her iki grup da I/R hasarından sonra yapışık lökosit sayısında artış gösterse de, endotelyal F2r (PAR1) eksikliği, I/R ile aktive olan mezenterik endotelyuma belirgin ancak önemli ölçüde azalmamış lökosit yapışması ile sonuçlandı, bu da iskemik mezenterik venüllere lökosit alımında endotelyal PAR1 aktivasyonunun aktif bir rol oynadığını düşündürmektedir (Şekil 2C).
Bir sonraki amaç, endotelyal PAR1 ekspresyonunun I/R hasarına bağlı NET oluşumunu düzenleyip düzenlemediğini incelemekti. Bu nedenle, hücre dışı nükleik asitler hücre geçirimsiz bir boya30 ile boyandı ve üretilen NET'ler intravital mikroskopi (siyah oklarla gösterilen) kullanılarak görüntülendi (Şekil 2A,B). I/R hasarından sonra, NET'ler sadece endotel hücrelerinde normal PAR1 seviyelerini eksprese eden WT grubunda gözlendi, bu da NET1'in NETosis'te düzenleyici bir rolü olduğunu gösteriyor (Şekil 2C, D). Özellikle, endotelyal F2r ekspresyonu baskılandığında, I/R ile yaralanan mezenterik venüllerde NET yoktu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67264/67264fig01.jpg"> 
Şekil 1: F2r (PAR1) mRNA ekspresyonu. L32 temizlik genine göre WT (n = 6) ve F2rΔEC (n = 9) farelerinin F2r<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67264/67264fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67264/67264fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67264/67264fig02large.jpg" target="_blank"></a>

Mezenterik İskemi-Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Mezenterik Venüllerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İntravital Mikroskopi ile Görüntülenmesi

Intestinal ischemia-reperfusion (I/R) injury is an acute condition characterized by tissue damage resulting from restricted blood flow to the mesenteric ...

visualization-neutrophil-extracellular-traps-mesenteric-venules-after

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar (NET), patojen bakteriler, mantarlar ve parazitler mücadele için önemli bir doğuştan gelen bağışıklık mekanizması. Burada insan kan nötrofil granülositler izole etmek ve NET'ler oluşturmak için bunları etkinleştirmek yöntemleri açıklanmaktadır. Biz ışık ve elektron mikroskobu NET'ler görselleştirmek için hazırlama teknikleri mevcut.

Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar: Onları nasıl oluşturun ve görselleştirin için

Biz aydınlık intravital mikroskopi, in vivo olarak nötrofil kemoatraktan kaynak yanıt nötrofil göçünü sırasında dinamik nötrofil-endotel hücre etkileşimleri ölçmek için bir protokol tanımlamaktadır. Nötrofil intraluminal tarama, fare Cremaster'ın kas dokusu transendoteliyal göç ve kemotaksis zaman lapsed video ImageJ ile fotoğraf ve takip ile görüntülendi.

Takip Nötrofil Lumen Crawling, intravital video Mikroskopi Doku transendoteliyal Göç ve Kemotaksis

Bu video, anti-nötrofil sitoplazmik antikorlar içeren hasta serumu kullanılarak önceden etiketlenmiş nötrofillerde nötrofil hücre dışı tuzakların veya NET'lerin indüksiyonunu ve görselleştirilmesini göstermektedir. Ayrıca, geçirimsiz bir DNA boyası ve floresan mikroskobu kullanmak, NET'lerin görüntülenmesini sağlar.

Önceden Etiketlenmiş Nötrofillerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İndüksiyonu ve Görselleştirilmesi

Burada vasküler inflamasyon ve canlı farelerde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için floresan intravital mikroskobu deneysel bir tekniktir rapor. Bu mikroskobik teknoloji vasküler hastalığın moleküler mekanizmasını incelemek ve patofizyolojik durumlardaki farmakolojik ajanları test için değerli olacaktır.

Canlı Fare Damar İltihabı ve trombüs oluşumu sırasında Activated Endotel üzerinde heterotypic Trombosit nötrofil Etkileşimleri Gerçek zamanlı Görüntüleme

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Anestezi uygulanmış farelerde intravital konfokal mikroskopi kullanarak kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında mezenterik venlerdeki nötrofillerin ve monositlerin davranışını izlemek için bir protokolü detaylandırıyoruz.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Bu protokol mıknatıs sıkma kullanarak fare kulak cilt üzerinde bir iskemi-reperfüzyon (İR) modeli indüksiyon açıklar. Özel bir dahili Intravital görüntüleme modeli kullanarak, in vivo inflamatuvar yanıt sonrası reperfüzyon eğitim. Bu tekniğin gelişiminin arkasındaki mantık lökosit cilt IR hasarı nasıl cevap anlayışı yaygınlaştırmaktır.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Monosit arteriogenesis periferik arter hastalığı bağlamında önemli arabulucu vardır. Bu iletişim kuralı bir membran benzeri matris ve intravital mikroskobu kullanarak, monosit enjeksiyon femoral arter ligasyonu fare modeli sonra monosit izleme ve tümör ile ilgili angiogenez inceler.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Nötrofil ekstrasellüler tuzakları (NETs) uyarılmış nötrofil granülositler tarafından oluşturulan üç boyutlu yapılardır. Son yıllarda NET'lerin çok çeşitli hastalıklara karıştıkları ortaya çıkmıştır. Dokudaki NET'lerin saptanması tanısal bir önemi olabilir, bu nedenle NET bileşenlerinin etiketlenmesi için standart protokoller gereklidir.

Parafin-Gömülü Dokuda İnsan ve Mürin Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklarının İmmünofloresan Etiketlemesi

Isıya bağlı antijen alma ve çift immün etiketleme protokolü kullanarak formaldehit sabit ve parafin gömülü kedi kardiyojenik arteriyel trombisinde nötrofil ekstrasellüler tuzaklarını (NET) tanımlamak için bir yöntem tanımladık.

İmmünofluoresans Mikroskobu kullanılarak Parafin Gömülü Kedi Arteriyel Trombisinde Nötrofil Ekstrasellüler Tuzakların Belirlenmesi

Nötrofil hücre dışı tuzaklar (NET'ler) çeşitli hastalıklarla ilişkilidir ve immünofloresan genellikle görselleştirmeleri için kullanılır. Bununla birlikte, çeşitli boyama protokolleri vardır ve çoğu durumda sadece bir doku türü incelenir. Burada, fare ve insan dokusunda NET'lerin boyanması için genel olarak uygulanabilir bir protokol oluşturuyoruz.

İnsan ve Fare Dokularında Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İmmünofloresan Görüntülemesi

Öğrenin mezenterik iskemi-reperfüzyon yaralanmasında intravital mikroskopi ile nötrofil hücre dışı tuzak oluşumunu ve endotelyal PAR1'in rolünü fare modellerinde. Bu yöntem tromboz ve inflamasyon mekanizmalarını canlı ortamda gözlemlemeyi sağlar.

Mezenterik İskemi-Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Mezenterik Venüllerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İntravital Mikroskopi ile Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal

Mezenterik İskemi-Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Mezenterik Venüllerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İntravital Mikroskopi ile Görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet