Name: Triton X-114 Tabanlı Fraksiyonasyon Yaklaşımı Kullanılarak Leptospirada Hücre Altı Proteinlerin Zenginleştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Keşfedin Leptospira'da hücre altı protein izolasyonunu Triton X-114 fraksiyonasyonu ve yüksek verimli kütle spektrometrisi kullanarak. Bu yöntem virülans faktörlerinin belirlenmesine ve patojen protein mimarisinin anlaşılmasına yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Curreem, S. O. T., Watt, R. M., Lau, S. K. P., Woo, P. C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+gel+electrophoresis+in+bacterial+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional gel electrophoresis in bacterial proteomics.</a> Protein Cell. 3 (5), 346-363 (2012).</li>
<li>King, B. R., Latham, L., Guda, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+subcellular+proteomes+in+bacterial+species%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Appl+Informatics+J%22%5BJournal%5D)">Estimation of subcellular proteomes in bacterial species.</a> Open Appl Informatics J. 3 (1), 1-11 (2009).</li>
<li>Brown, R. N., Romine, M. F., Schepmoes, A. A., Smith, R. D., Lipton, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+subcellular+proteome+of+Shewanella+oneidensis+MR-1+using+Sarkosyl-based+fractionation+and+LC%E2%88%92MS%2FMS+protein+identification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mapping the subcellular proteome of Shewanella oneidensis MR-1 using Sarkosyl-based fractionation and LC−MS/MS protein identification.</a> J Proteome Res. 9 (9), 4454-4463 (2010).</li>
<li>Cash, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+pathogen+biology+at+the+level+of+the+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Investigating pathogen biology at the level of the proteome.</a> Proteomics. 11 (15), 3190-3202 (2011).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+regulation+of+a+Salmonella+Typhimurium+virulence+factor+by+the+transcriptional+regulator+YdcR%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Temporal regulation of a Salmonella Typhimurium virulence factor by the transcriptional regulator YdcR.</a> Mol Cell Proteomics. 16 (9), 1683-1693 (2017).</li>
<li>Rey, S., Gardy, J. L., Brinkman, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+precision+of+high-throughput+computational+and+laboratory+approaches+for+the+genome-wide+identification+of+protein+subcellular+localization+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Assessing the precision of high-throughput computational and laboratory approaches for the genome-wide identification of protein subcellular localization in bacteria.</a> BMC Genomics. 6 (1), 162(2005).</li>
<li>Lietzén, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+subcellular+proteome+and+secretome+profiling+of+influenza+A+virus-infected+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Quantitative subcellular proteome and secretome profiling of influenza A virus-infected human primary macrophages.</a> PLoS Pathog. 7 (5), e1001340(2011).</li>
<li>Arioka, Y., Watanabe, A., Saito, K., Yamada, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation-induced+cytidine+deaminase+alters+the+subcellular+localization+of+Tet+family+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Activation-induced cytidine deaminase alters the subcellular localization of Tet family proteins.</a> PLoS One. 7 (9), e45031(2012).</li>
<li>Del Duca, S., Faleri, C., Iorio, R. A., Cresti, M., Serafini-Fracassini, D., Cai, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+transglutaminase+in+pear+pollen+tubes+in+relation+to+cytoskeleton+and+membrane+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distribution of transglutaminase in pear pollen tubes in relation to cytoskeleton and membrane dynamics.</a> Plant Physiol. 161 (4), 1706-1721 (2013).</li>
<li>Gennaris, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repairing+oxidized+proteins+in+the+bacterial+envelope+using+respiratory+chain+electrons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Repairing oxidized proteins in the bacterial envelope using respiratory chain electrons.</a> Nature. 528 (7582), 409-412 (2015).</li>
<li>Schilling, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translocation+of+endothelial+nitric-oxide+synthase+involves+a+ternary+complex+with+caveolin-1+and+NOSTRIN%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Translocation of endothelial nitric-oxide synthase involves a ternary complex with caveolin-1 and NOSTRIN.</a> Mol Biol Cell. 17 (9), 3870-3880 (2006).</li>
<li>Mintz-Oron, S., Aharoni, A., Ruppin, E., Shlomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network-based+prediction+of+metabolic+enzymes%27+subcellular+localization%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Network-based prediction of metabolic enzymes' subcellular localization.</a> Bioinformatics. 25 (12), i247-i252 (2009).</li>
<li>Phukan, H., Sarma, A., Rex, D. A. B., Rai, A. B., Prasad, T. S. K., Madanan, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+posttranslational+modification+sites+of+acetylation%2C+citrullination%2C+glutarylation%2C+and+phosphorylation+are+found+to+be+specific+to+the+proteins+partitioned+in+the+Triton+X-114+fractions+of+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">Unique posttranslational modification sites of acetylation, citrullination, glutarylation, and phosphorylation are found to be specific to the proteins partitioned in the Triton X-114 fractions of Leptospira.</a> ACS Omega. 7 (22), 18569-18576 (2022).</li>
<li>Tinrat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+phytochemical+analysis%2C+antibacterial+and+anti-biofilm+activities+of+Curcuma+zedoaria+%28Christm.%29+Roscoe+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Malaysian+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Preliminary phytochemical analysis, antibacterial and anti-biofilm activities of Curcuma zedoaria (Christm.) Roscoe extracts.</a> Malaysian J Microbiol. 18 (4), 344-353 (2022).</li>
<li>Silhavy, T. J., Kahne, D., Walker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bacterial+cell+envelope%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">The bacterial cell envelope.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (5), a000414-a000414 (2010).</li>
<li>Arnold, T., Linke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+detergents+to+purify+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">The use of detergents to purify membrane proteins.</a> Curr Protoc Protein Sci. 53 (1), ps0408s53(2008).</li>
<li>Santos, H. deL., Ciancaglini, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+the+choice+of+a+suitable+detergent+and+optimal+conditions+for+solubilizing+a+membrane+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Educ%22%5BJournal%5D)">A practical approach to the choice of a suitable detergent and optimal conditions for solubilizing a membrane protein.</a> Biochem Educ. 28 (3), 178-182 (2000).</li>
<li>Picard, M., Duval-Terrié, C., Dé, E., Champeil, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilization+of+membranes+upon+interaction+of+amphipathic+polymers+with+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Stabilization of membranes upon interaction of amphipathic polymers with membrane proteins.</a> Protein Sci. 13 (11), 3056-3058 (2004).</li>
<li>Rice, A. J., Alvarez, F. J., Davidson, A. L., Pinkett, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+lipid+environment+on+the+conformational+changes+of+an+ABC+importer%5BTitle%5D)+AND+%22Channels%22%5BJournal%5D)">Effects of lipid environment on the conformational changes of an ABC importer.</a> Channels. 8 (4), 327-333 (2014).</li>
<li>Arnold, T., Linke, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+separation+in+the+isolation+and+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Phase separation in the isolation and purification of membrane proteins.</a> BioTechniques. 43 (4), 427-440 (2007).</li>
<li>Fricke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+separation+of+nonionic+detergents+by+salt+addition+and+its+application+to+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Phase separation of nonionic detergents by salt addition and its application to membrane proteins.</a> Anal Biochem. 212 (1), 154-159 (1993).</li>
<li>Pryde, J. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPryde%2C+JG+%22Partitioning+of+proteins+in+Triton+X-114.+In%3A+Methods+in+Molecular+Biology%22">Partitioning of proteins in Triton X-114. In: Methods in Molecular Biology</a>. , Humana Press. Totowa. (2000).</li>
<li>Haake, D. A., Walker, E. M., Blanco, D. R., Bolin, C. A., Miller, J. N., Lovett, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+surface+of+Leptospira+interrogans+serovar+grippotyphosa+during+in+vitro+cultivation%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Changes in the surface of Leptospira interrogans serovar grippotyphosa during in vitro cultivation.</a> Infect Immun. 59 (3), 1131-1140 (1991).</li>
<li>Haake, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+leptospiral+major+outer+membrane+protein+LipL32+is+a+lipoprotein+expressed+during+mammalian+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">The leptospiral major outer membrane protein LipL32 is a lipoprotein expressed during mammalian infection.</a> Infect Immun. 68 (4), 2276-2285 (2000).</li>
<li>Thoduvayil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triton+X-114+fractionated+subcellular+proteome+of+Leptospira+interrogans+shows+selective+enrichment+of+pathogenic+and+outer+membrane+proteins+in+the+detergent+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Triton X-114 fractionated subcellular proteome of Leptospira interrogans shows selective enrichment of pathogenic and outer membrane proteins in the detergent fraction.</a> Proteomics. 20 (19-20), (2020).</li>
<li>Phukan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+temperature+and+osmotic+changes+drive+dynamic+proteome+alterations+in+the+leptospiral+outer+membrane+and+enhance+protein+export+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Physiological temperature and osmotic changes drive dynamic proteome alterations in the leptospiral outer membrane and enhance protein export systems.</a> J Proteome Res. 22 (11), 3447-3463 (2023).</li>
<li>Murray, G. L., King, A. M., Srikram, A., Sermswan, R. W., Adler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+luminescent+Leptospira+interrogans+for+enumeration+in+biological+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Use of luminescent Leptospira interrogans for enumeration in biological assays.</a> J Clin Microbiol. 48 (6), 2037-2042 (2010).</li>
<li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+protein+using+bicinchoninic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Measurement of protein using bicinchoninic acid.</a> Anal Biochem. 150 (1), 76-85 (1985).</li>
<li>Shang, E. S., Summers, T. A., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+and+sequence+analysis+of+the+gene+encoding+LipL41%2C+a+surface-exposed+lipoprotein+of+pathogenic+Leptospira+species%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning and sequence analysis of the gene encoding LipL41, a surface-exposed lipoprotein of pathogenic Leptospira species.</a> Infect Immun. 64 (6), 2322-2330 (1996).</li>
<li>Evangelista, K. V., Hahn, B., Wunder, E. A. Jr, Ko, A. I., Haake, D. A., Coburn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cell-binding+adhesins+of+Leptospira+interrogans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Identification of cell-binding adhesins of Leptospira interrogans.</a> PLoS Negl Trop Dis. 8 (10), e0003215(2014).</li>
<li>Picardeau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulence+of+the+zoonotic+agent+of+leptospirosis%3A+still+terra+incognita%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Virulence of the zoonotic agent of leptospirosis: still terra incognita.</a> Nat Rev Microbiol. 15 (5), 297-307 (2017).</li>
<li>Hu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+identification+of+membrane+proteins+from+urinary+extracellular+vesicles+using+Triton+X-114+phase+partitioning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Purification and identification of membrane proteins from urinary extracellular vesicles using Triton X-114 phase partitioning.</a> J Proteome Res. 17 (1), 86-96 (2018).</li>
<li>Radolf, J. D., Chamberlain, N. R., Clausell, A., Norgard, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+localization+of+integral+membrane+proteins+of+virulent+Treponema+pallidum+subsp.+pallidum+by+phase+partitioning+with+the+nonionic+detergent+Triton+X-114%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Identification and localization of integral membrane proteins of virulent Treponema pallidum subsp. pallidum by phase partitioning with the nonionic detergent Triton X-114.</a> Infect Immun. 56 (2), 490-498 (1988).</li>
<li>Nally, J. E., Whitelegge, J. P., Bassilian, S., Blanco, D. R., Lovett, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+outer+membrane+proteome+of+Leptospira+interrogans+expressed+during+acute+lethal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Characterization of the outer membrane proteome of Leptospira interrogans expressed during acute lethal infection.</a> Infect Immun. 75 (2), 766-773 (2007).</li>
<li>Crother, T. R., Nally, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+bacterial+membrane+proteins+produced+during+mammalian+infection+using+hydrophobic+antigen+tissue+Triton+extraction+%28HATTREX%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of bacterial membrane proteins produced during mammalian infection using hydrophobic antigen tissue Triton extraction (HATTREX).</a> Curr Protoc Microbiol. 9 (1), mc1201s9(2008).</li>
<li>Casey, T. M., Meade, J. L., Hewitt, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organelle+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Organelle proteomics.</a> Mol Cell Proteomics. 6 (5), 767-780 (2007).</li>
<li>Bell, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomics+characterization+of+abundant+Golgi+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Proteomics characterization of abundant Golgi membrane proteins.</a> J Biol Chem. 276 (7), 5152-5165 (2001).</li>
<li>Boonciew, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+antibody+detection+for+canine+leptospirosis%3A+ELISAs+modified+using+local+leptospiral+serovar+isolates+from+asymptomatic+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">Improved antibody detection for canine leptospirosis: ELISAs modified using local leptospiral serovar isolates from asymptomatic dogs.</a> Animals. 14 (6), (2024).</li>
<li>Nogueira, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptospira+interrogans+enolase+is+secreted+extracellularly+and+interacts+with+plasminogen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Leptospira interrogans enolase is secreted extracellularly and interacts with plasminogen.</a> PLoS One. 8 (10), e0078150(2013).</li>
<li>Riazi, M., Zainul, F. Z., Bahaman, A. R., Amran, F., Khalilpour, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+72+kDa+protein+of+Leptospira+interrogans.+as+a+diagnostic+marker+in+acute+leptospirosis%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Role of 72 kDa protein of Leptospira interrogans. as a diagnostic marker in acute leptospirosis.</a> Indian J Med Res. 139 (2), 308-313 (2014).</li>
<li>Domingos, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+two+proteins+of+Leptospira+interrogans+with+potential+role+in+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Features of two proteins of Leptospira interrogans with potential role in host-pathogen interactions.</a> BMC Microbiol. 12, 50(2012).</li>
<li>Dhandapani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+approach+and+expression+analysis+revealed+the+differential+expression+of+predicted+leptospiral+proteases+capable+of+ECM+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Proteins+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomic approach and expression analysis revealed the differential expression of predicted leptospiral proteases capable of ECM degradation.</a> Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1866 (5-6), 712-721 (2018).</li>
<li>Matsunaga, J., Werneid, K., Zuerner, R. L., Frank, A., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LipL46+is+a+novel+surface-exposed+lipoprotein+expressed+during+leptospiral+dissemination+in+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">LipL46 is a novel surface-exposed lipoprotein expressed during leptospiral dissemination in the mammalian host.</a> Microbiology. 152 (12), 3777-3786 (2006).</li>
<li>Pinne, M., Haake, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+approach+to+identification+of+surface-exposed%2C+outer+membrane-spanning+proteins+of+Leptospira+interrogans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A comprehensive approach to identification of surface-exposed, outer membrane-spanning proteins of Leptospira interrogans.</a> PLoS One. 4 (6), e6071(2009).</li>
<li>Madathiparambil, M. G., Cattavarayane, S., Perumana, S. R., Manickam, G. D., Sehgal, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+46+kDa+gelatinase+on+the+outer+membrane+of+Leptospira%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Presence of 46 kDa gelatinase on the outer membrane of Leptospira.</a> Curr Microbiol. 62 (5), 1478-1482 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Asetik asit</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 695092</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 32201</td><td></td></tr><tr><td>Akrilamid</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-3553</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum persülfat</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-3678</td><td></td></tr><tr><td>Denge</td><td>&nbsp; ŞİMADUZ</td><td>&nbsp; Z741079</td><td></td></tr><tr><td>Bis Akrilamid</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; M7279 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümin fraksiyonu V (BSA)</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; A-8022</td><td></td></tr><tr><td>Bromofenol Mavisi</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; B-8026 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpü (50 mL)</td><td>Tarson'lar</td><td>500020</td><td></td></tr><tr><td>Kapaklı Konik Matara (150 mL)</td><td>Tarson'lar</td><td>431030</td><td></td></tr><tr><td>Soğutma santrifüjü</td><td>&nbsp; Eppendorf Belediyesi</td><td>&nbsp; 5355316200</td><td></td></tr><tr><td>Coomassie parlak mavi</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>1.12553</td><td></td></tr><tr><td>Karanlık alan mikroskobu</td><td>&nbsp; ZEİSS</td><td>&nbsp; GmbH37081</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Görev Mendilleri</td><td>Kimtech Bilim</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Kuru banyo</td><td>&nbsp; Eppendorf Belediyesi</td><td>&nbsp; 535531620</td><td></td></tr><tr><td>Ellinghausen&ndash; McCullough&ndash; Johnson&ndash; Harris (EMJH) orta, Difco</td><td>&nbsp; Difco</td><td>&nbsp; 279410</td><td></td></tr><tr><td>Jel tepsileri: Jel tepsileri en az 2cm daha geniş boyutlarda olmalı ve düz ve düz bir yüzeye sahip olmalıdır.&nbsp;</td><td>&nbsp; Hoefer</td><td>&nbsp; Uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Cam Gaga (150 mL)</td><td>Tarson'lar</td><td>421030</td><td></td></tr><tr><td>Glisin G8790</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; G-8898 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon Kurutma Filtre Kağıdı</td><td>Kırlangıç</td><td>IBFP0813C</td><td></td></tr><tr><td>Immunoblot yarı kuru kurulum</td><td>&nbsp; ATTA</td><td>&nbsp; AE-6675 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>İnkübatör - Jel tepsilerini 37&°C'de 18 saat inkübe etmek için.</td><td>&nbsp; GÖZ</td><td>&nbsp; SLI-700 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Laminer hava akışı</td><td>&nbsp; Uygulanamaz</td><td>&nbsp; Uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Luminol</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 09253</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür M8266</td><td>&nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; M8266 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik karıştırıcı</td><td>&nbsp; TARSONLAR</td><td>&nbsp; 6040</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 17995-7</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet Uçları (10 &micro; L&ndash; 10 mL)</td><td>Axygen</td><td>T-10, T-200-C, T-1000-C, T-10ML-C</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetler</td><td>&nbsp; Eppendorf Belediyesi</td><td>&nbsp; EP2231300010</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotüpler (1,5 mL Güvenli Kilit)</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>EP022363212</td><td></td></tr><tr><td>Mini döndürme</td><td>&nbsp; Soy</td><td>&nbsp; GEN-MINI-6K</td><td></td></tr><tr><td>Çok modlu okuyucu</td><td>BMG LABORATUVAR TEKNOLOJİSİ</td><td>&nbsp; S/N 413-3877</td><td></td></tr><tr><td>Yağsız kurutulmuş süt, sığır</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7409 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>P-Kumarik asit</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; C9008</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>P4417&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Buzdolabı</td><td>&nbsp; LG</td><td>&nbsp; GC-B217BLJ2</td><td></td></tr><tr><td>Rocker - Jeli boyamak için düşük hızda sallanan veya döner çalkalayıcı.</td><td>&nbsp; TARSONLAR</td><td>&nbsp; 4080</td><td></td></tr><tr><td>SDS-SAYFA KURULUMU- Elektroforez Aparatı</td><td>&nbsp; Hoefer, Inc.</td><td>&nbsp; SE300-10A-1.0 Serisi</td><td>&nbsp; Hoefer modeli ' miniVE' 10 cm x 8 cm boyutunda jel dökebilen 1 mm kalınlığında.&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; 5886</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum dodesil sülfat (SDS)</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; L-4396</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; T-9281</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-114</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>648468</td><td></td></tr><tr><td>Trizma Baza (TRIS) T6066</td><td>&nbsp; &nbsp; Sigma</td><td>&nbsp; T6066 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Girdap</td><td>&nbsp; TARSONLAR</td><td>&nbsp; 3020</td><td></td></tr></tbody></table>

triton x-114 tabanlı fraksiyonasyon yaklaşımı kullanılarak leptospira'da hücre altı proteinlerin zenginleştirilmesi

Enriching Subcellular Proteins in Leptospira Using a Triton X-114-Based Fractionation Approach

Bu deneyde, hücre altı bölmeleri çıkarmak için spiroket Leptospira'yı model organizma olarak kullandık. İyonik olmayan bir deterjan olan Triton X-114'ün etkinliğinden yararlanarak bulutlanma noktası ve kritik misel konsantrasyonuna (CMC) bağlı stratejik bir metodoloji kullandık (Şekil 1). Daha fazla ilerlemeden önce, tek bir biyolojik kopya için her bir fraksiyondaki konsantrasyonu değerlendirmek için protein tahmini yapıldı. Sulu (A): Deterjan (D): Pelet (P) fraksiyonlarında 3:1:1....

Triton X-114 Tabanlı Fraksiyonasyon Yaklaşımı Kullanılarak Leptospira'da Hücre Altı Proteinlerin Zenginleştirilmesi

Prokaryotes lack precise subcellular organelles but exhibit distinct regions such as cytoplasm, inner membrane, periplasm, and outer membrane, where most ...

enriching-subcellular-proteins-leptospira-using-triton-x-114-based

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Kütle spektrometrisi (antipersonel mayınları) ile kombinasyon halinde etiketli proteinlerin saflaştırılması Affinity protein etkileşimi ağların sistematik eşleme için ve biyolojik süreçlerin mekanistik temeli araştırmak için güçlü bir yöntem. Burada, bakteri için geliştirilmiş optimize edilmiş sıralı peptid afinite (SPA) antipersonel mayınları prosedürü...

Protein Kompleksi belirlenmesi<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Tandem Kütle Spektrometresi ile Kombine Sıralı Peptid Affinity Arıtma kullanarak

Biz doğru ve yanlış protein-protein etkileşimleri ayırmak için önce tanıtıldı HIZLI (Nakavt ile birlikte kantitatif immünopresipitasyon) yaklaşımın bir çeşitleme sunuyor. Bizim yaklaşıma...

Dayanarak protein-protein etkileşimleri ve kimliği için bir protokol<sup&gt; 15</sup&gt; K Metabolik Etiketleme, immünopresipitasyon, Kantitatif Kütle Spektrometrisi ve Affinity Modülasyon

Kaynak: Armbruster, K.M., Meredith, T.C. Bakteriyel Lipoproteinlerin Zenginleştirilmesi ve Kütle Spektrometresi ile Yapısal Belirleme için N-terminal Lipopeptitlerin Hazırlanması. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, ısıtıldığında faz ayrımına uğrayan iyonik olmayan bir deterjan kullanılarak bakteriyel lipoproteinlerin zenginleştirilmesini göstermektedir. Sıralı sıcaklık değişimleri ve santrifüjleme adımları yoluyla, lipoproteinler seçici olarak deterjan fazına bölünürken, lipoprotein olmayan...

İyonik Olmayan Deterjan Faz Ayrımı Kullanılarak Bakteriyel Lipoproteinlerin Zenginleştirilmesi

Membran-gömülü protein etki arasındaki etkileşimler biyofiziksel ve biyokimyasal çalışmalarda uygun çalışma malzemesi elde edilir ilki birçok teknik sorunlarla karşı karşıya. Bu makale, çözelti nükleer manyetik rezonans (NMR) ve diğer analitik uygulamalar tarafından yapısal analizi için uygun olan disülfid stabilize transmembran peptid komplekslerini üretme ve arıtma için bir protokol açıklanmaktadır.

Yapısal Çalışmaları üretimi disülfid stabilize Transmembran Peptit Kompleksi

Bir yaklaşım, biyokimyasal zar proteinlerinin in vivo protein-protein etkileşimleri (PPI) tanımlamak için tarif edilmektedir. Yöntem, protein çapraz-bağlama, afinite arıtma ve kütle spektrometrisi birleştirir, ve hemen hemen herhangi bir hücre tipi ya da organizma için uyarlanabilir. Bu yaklaşımla, geçici PPI bile tespiti mümkün olur.

Membran-OMURGA: Membran Proteinleri protein-protein etkileşimleri belirlemek için bir Biyokimyasal Aracı In Vivo

Bakteriyel lipoproteinler yöntemi bölümleme bir iyonik olmayan yüzey aktif faz kullanarak zenginleştirme doğrudan TLR deneyleri kullanımda veya diğer uygulamalar için tanımlanır. Daha fazla adımlar için yapısal karakterizasyon N-terminal tryptic lipopeptides hazırlamak için kütle spektrometresi tarafından ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Zenginleştirme bakteriyel lipoproteinler ve kütle spektrometresi tarafından yapısal kararlılık için N-terminal Lipopeptides hazırlanması

Periplasmic Geçiş metalleri refakatçi yerli bağlama ortakları bağlamında ve x-ışını Floresans ve radiometal alımını sundu tarafından substrat içeriğini biyofiziksel karakterizasyonu çıkarılması için bir protokol.

Ayagin Gram-negatif bakterilerde temel Metal alımı: x-ışını Floresans, Radioisotopes ve hücre ayırma

Bu iletişim kuralı tarafından cryo-elektron mikroskobu, verimli bir şekilde en az çaba ve toksisite, protein ayıklama, arıtma ile memeli hücrelerinde genlerin ifade etmek için kullanılan bir baculovirus sistemi de dahil olmak üzere iyon kanal yapılarını belirlemek için kullanılan teknikler açıklanır, ve kalite kontrol, örnek kılavuz hazırlık ve tarama, hem de veri toplama ve işleme.

İfade ve insan Lipid duyarlı ba * kanal TRPC3 arınma için tek-parçacık Cryo-elektron mikroskobu ile yapısal kararlılık

Burada, küçük hücre dışı veziküller (EVs) tüm dokular, beyin ve tümör örnekleri de dahil olmak üzere gelen yalıtmak için detaylı bir protokol sağlar. Bu yöntem daha da aşağı akım analizleri için sağlam doku EVs ayıklamak için tekrarlanabilir bir teknik sunar.

Hücre dışı veziküller çekme--dan tüm doku

Bu protokol, Mycobacterium tuberculosis hücre dışı veziküllerini kültür süpernatantlarından zenginleştirmek için kolay ve tekrarlanabilir bir teknik olan boyut dışlama kromatografisini tanımlar.

Mycobacterium tuberculosis Boyut Dışlama Kromatografisi ile Hücre Dışı Vezikül Zenginleştirme

Bu protokol, Escherichia coli'den elastin benzeri polipeptit (ELP) arındırılması için hızlı, tekrarlanabilir organik çözücü bazlı ekstraksiyon ve çökeltme yöntemini tanımlar; bu yöntem, geleneksel ELP arıtma yöntemlerine potansiyel olarak ölçeklenebilir bir alternatif sunar.

E. coli'den Elastin Benzeri Polipeptitlerin (ELP) Organik Çözücü Bazlı Ekstraksiyon ve Çökeltme Yöntemi Kullanılarak Verimli Arındırılması

Keşfedin Leptospira'da hücre altı protein izolasyonunu Triton X-114 fraksiyonasyonu ve yüksek verimli kütle spektrometrisi kullanarak. Bu yöntem virülans faktörlerinin belirlenmesine ve patojen protein mimarisinin anlaşılmasına yardımcı olur.

Triton X-114 Tabanlı Fraksiyonasyon Yaklaşımı Kullanılarak Leptospira'da Hücre Altı Proteinlerin Zenginleştirilmesi

Daha fazla video keşfet