Name: İki Tip Yapışık Hücre Hattı Kullanan Ko-Kültür Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-08T14:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Keşfedin, 3D baskılı iskele kullanarak insan embriyonik kök hücreleri ve Ishikawa hücreleriyle ko-kültür modeli oluşturmayı. Bu maliyet etkin yöntem, implantasyon bölgesinin in vivo anatomisini daha doğru temsil ederek üreme biyolojisi araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Embriyo İmplantasyon Mekanizmalarını Araştırmak için 3D Baskılı İskele Modeli

<ol><li>Iske, J., Elkhal, A., Tullius, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fetal-maternal+immune+interface+in+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Immunol%22%5BJournal%5D)">The fetal-maternal immune interface in uterus transplantation.</a> Trend Immunol. 41 (3), 213-224 (2020).</li>
<li>Dey, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cues+to+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular cues to implantation.</a> Endocrine Rev. 25 (3), 341-373 (2004).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culture+models+of+human+endometrium+for+studying+trophoblast-endometrium+interaction+during+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culture models of human endometrium for studying trophoblast-endometrium interaction during implantation.</a> Reprod Biol Endocrinol. 20 (1), 120(2022).</li>
<li>Goss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mod3d%3A+A+low-cost%2C+flexible+modular+system+of+live-cell+microscopy+chambers+and+holders%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mod3d: A low-cost, flexible modular system of live-cell microscopy chambers and holders.</a> PLoS One. 17 (6), e0269345(2021).</li>
<li>Zheng, J., Liu, L., Wang, S., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sumo-1+promotes+Ishikawa+cell+proliferation+and+apoptosis+in+endometrial+cancer+by+increasing+sumoylation+of+histone+h4%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynecol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Sumo-1 promotes Ishikawa cell proliferation and apoptosis in endometrial cancer by increasing sumoylation of histone h4.</a> Int J Gynecol Cancer. 25 (8), 1364-1368 (2015).</li>
<li>Damdimopoulou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Obst+Gynaecol%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cells.</a> Best Pract Res Clin Obst Gynaecol. 31, 2-12 (2016).</li>
<li>Gargett, C. E., Schwab, K. E., Deane, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+stem%2Fprogenitor+cells%3A+The+first+10+years%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Endometrial stem/progenitor cells: The first 10 years.</a> Hum Reprod Update. 22 (2), 137-163 (2015).</li>
<li>Lerman, M. J., Lembong, J., Gillen, G., Fisher, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3d+printing+in+cell+culture+systems+and+medical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+Rev%22%5BJournal%5D)">3d printing in cell culture systems and medical applications.</a> Appl Phys Rev. 5 (4), 041109(2018).</li>
<li>Palmara, G., Frascella, F., Roppolo, I., Chiappone, A., Chiadò, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+3d+printing%3A+Approaches+and+bioapplications%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Functional 3d printing: Approaches and bioapplications.</a> Biosens Bioelectron. 175, 112849(2021).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+architecture+design+of+3d+printed+biodegradable+zn-based+porous+scaffolds+for+immunomodulatory+osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Multiscale architecture design of 3d printed biodegradable zn-based porous scaffolds for immunomodulatory osteogenesis.</a> Nat Comm. 15 (1), 3131(2024).</li>
<li>Arnold, J. T., Lessey, B. A., Seppälä, M., Kaufman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+normal+endometrial+stroma+on+growth+and+differentiation+in+Ishikawa+endometrial+adenocarcinoma+cells1%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of normal endometrial stroma on growth and differentiation in Ishikawa endometrial adenocarcinoma cells1.</a> Cancer Res. 62 (1), 79-88 (2002).</li>
<li>Casper, R. F., Yanushpolsky, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+endometrial+preparation+for+frozen+embryo+transfer+cycles%3A+Window+of+implantation+and+progesterone+support%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Optimal endometrial preparation for frozen embryo transfer cycles: Window of implantation and progesterone support.</a> Fertil Steril. 105 (4), 867-872 (2016).</li>
<li>Cooke, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+estrogen+receptors+mediate+mitogenic+effects+of+estradiol+on+uterine+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+Am%22%5BJournal%5D)">Stromal estrogen receptors mediate mitogenic effects of estradiol on uterine epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S Am. 94 (12), 6535-6540 (1997).</li>
<li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Hum Reprod Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li>
<li>Evans, J., Hutchison, J., Salamonsen, L. A., Azlan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+inflammasome+activation+accompanies+menstruation+and+may+have+implications+for+systemic+inflammatory+events+of+the+menstrual+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Endometrial inflammasome activation accompanies menstruation and may have implications for systemic inflammatory events of the menstrual cycle.</a> Hum Reprod. 35 (6), 1363-1376 (2020).</li>
<li>Gołąbek-Grenda, A., Olejnik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+modeling+of+endometriosis+and+endometriotic+microenvironment+-+challenges+and+recent+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signal%22%5BJournal%5D)">In vitro modeling of endometriosis and endometriotic microenvironment - challenges and recent advances.</a> Cellular Signal. 97, 110375(2022).</li>
<li>Berger, C., Boggavarapu, N. R., Menezes, J., Lalitkumar, P. G. L., Gemzell-Danielsson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ulipristal+acetate+on+human+embryo+attachment+and+endometrial+cell+gene+expression+in+an+in+vitro+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of ulipristal acetate on human embryo attachment and endometrial cell gene expression in an in vitro co-culture system.</a> Hum Reprod. 30 (4), 800-811 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Hanks ve başbakan; Dengeli Tuz çözeltisi</td><td>Solarbio</td><td>H1046</td><td>1/10</td></tr><tr><td>12 oyuklu Şeffaf TC ile muamele edilmiş Plakalar</td><td>Corning</td><td>3513-25</td><td></td></tr> <tr><td>cm&sup2; Hücre Kültürü Şişesi</td><td>Corning</td><td></td> <td>430639-Alüminyum</td></tr> <tr><td></td><td>Markforged</td><td>6061-T6-DMEM</td><td></td></tr><tr><td>/F12</td><td>Sigma-aldrich</td><td>D2906-Dulbecco</td><td></td></tr><tr><td>' s Modifiye Eagle Medium&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>10099141C</td><td>1/10</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Gibco</td><td>10099141C</td><td></td></tr><tr><td>ITS Premiks</td><td>Biocoat</td><td>354350</td><td>1/100</td></tr><tr><td>Matrigel Matris</td><td>Corning</td><td>354248</td><td>ECM</td></tr><tr><td>Metal X</td><td>Markforged</td><td>M F-PR-5000-Penisilin-Streptomisin</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>1/100</td></tr><tr><td>Yuvarlak Lamel</td><td>Biosharp</td><td>BS-18-RC-TrypLE</td><td></td></tr> <tr><td>Select (10X)</td><td>Gibco</td><td>A1217701</td><td>ayrışma enzimi</td></tr></tbody></table>

İki tip yapışık hücre hattı kullanan ko-kültür modeli

Co-culture Model Using Two Types of Adherent Cell Lines

Şekil 1, dört L şeklinde çubuk benzeri yapıya sahip bir bazal hücre sürgü tutucusu ile tamamlanan, standart 12 oyuklu hücre kültürü plakalarına bağlanmak üzere uyarlanmış bir üst destek halkası içeren, bu işlemde kullanılan hücre kızakları için ev yapımı iskeleyi göstermektedir.
Şekil 2'ye göre, ko-kültür koşulundaki her iki hücre tipinin yoğunluğu (Şekil 2A,B) 72 saatlik ko-kültürden sonra düşük kalmıştır; bununla birlikte, bağımsız olarak kültürlenen her iki hücre tipinin yoğunluğu önemli ölçüde artmıştır (Şekil 2C, D). Ayrıca, birlikte kültürlenmiş hESC'nin uzunluğu, bağımsız olarak kültürlenmiş hESC ile karşılaştırıldığında daha kısaydı (Şekil 2E-G).
Ishikawa hücrelerinin ve hESC hücrelerinin profili, iki hücre türü arasındaki etkileşimlerin varlığını gösterir. Aynı zamanda, sistem, immünokimya boyama ve western blot dahil olmak üzere ayrı hücre hatları üzerinde takip deneyleri yapmaya devam etmemizi sağlıyor.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67314/67314fig01.jpg"> 
Şekil 1: Deney protokolünde kullanılan 3D baskılı lamel iskele. (A) Tek formda iskele. (B) İkili formda iskele. (C) Lamelin iskele üzerine yerleştirilmesini gösteren resim. (D) İskelenin standart 12 oyuklu bir plakaya yerleştirilmesini gösteren resim. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67314/67314fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67314/67314fig02.jpg"> 
Şekil 2: Farklı koşullarla 3 gün boyunca tedavi edilen hESC ve Ishikawa hücre hatlarının profili. (A) Lamel üzerindeki Ishikawa tohumu, iskele ile hESC ile birlikte kültürlenmiştir (Bar = 200 μm). (B) Lamel üzerindeki hESC tohumu, bir iskele kullanılarak Ishikawa ile birlikte kültürlenmiştir. (C) Ishikawa hücreleri,% 10 FBS ile tamamlayıcı bir ortamda kültürlendi. (D) hESC hücreleri, FBS içeren tamamlayıcı bir ortamda kültürlendi. (E) Ko-kültür koşulları altında hESC'lerin hücre yoğunluğu, bağımsız kültür koşulları altındakinden önemli ölçüde daha düşüktür. (F) Ko-kültür koşulları altında ISHIKAWA hücrelerinin hücre yoğunluğu, bağımsız kültür koşulları altındakinden önemli ölçüde daha düşüktür. (G) Ko-kültür koşulları altında hESC'nin uzunluğu önemli ölçüde daha kısadır. N=3; , P&lt;0.05, hata çubuğu standart hatayı gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67314/67314fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: 3D baskı kodlama dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67314/3D-print.stl" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

İki Tip Yapışık Hücre Hattı Kullanan Ko-Kültür Modeli

Embryo implantation is affected by the interactions among different cell types in the mother-embryo interface. The direct and indirect communications ...

co-culture-model-using-two-types-of-adherent-cell-lines

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Geleneksel iki boyutlu hücre kültür teknikleri genellikle farklılaşma belirteçleri, sitokinler ve büyüme faktörleri açısından değişmiş özellikleri. Extravillous trofoblast hücre hattı ile burada gösterildiği gibi dönen hücre kültür sistemi Üç boyutlu hücre kültürü (RCC), bu faktörlerin çoğunun ifade yeniden kurar.

İnsan Hücre Kültürü Döner Hücre Kültür Sistemleri: Bir Model Olarak İnsan trofoblast Hücreleri

Kaynak: Calatayud Arroyo, M. ve diğerleri. In vitro bağırsak konak-mikrob arayüzünde sentetik bakteriyel konsorsiyumunun uygulanabilirliğinin değerlendirilmesi. J. Vis. Exp. (2018).Bu video, bakteriyellerin canlılığını incelemek için in vitro bağırsak konakçı-mikrop modelini gösteriyor. Caco-2 ve HT29-MTX hücrelerinin ortak kültürü, simüle edilmiş sindirim koşullarında önceden işlenmiş bakterilerle kuluçka geçirilir. Epitel bariyer bütünlüğü transepitelyal elektriksel direnç kullanılarak...

Bakteriyel Yapışma ve İçselleştirmeyi Değerlendirmek İçeriği Değerlendirmek İçerik Bağırsak Modeli

Burada, kanser hücresi davranışının çok hücreli etkileşimlerini ve hücre dışı matrise bağlı modülasyonunu araştırmak için yararlı olan üç boyutlu ko-kültür için bir protokol sunuyoruz. Bu deneysel modelde, kanser hücreleri, insan kanseriyle ilişkili fibroblastlarla gömülü kollajen jelleri üzerinde kültürlenir.

Tümör-stromal Etkileşim için üç boyutlu Co-kültür Modeli

Çok hücreli organizmalarda, salgılanan çözünür faktörler, parakrin sinyalizasyonunun bir sonucu olarak farklı hücre tiplerinden yanıtlar ortaya çıkarır. Insert ko-kültür sistemleri, hücre-hücre temasının yokluğunda salgılanan çözünür faktörlerin aracılık ettiği değişiklikleri değerlendirmek için basit bir yol sunar.

Hücre-Hücre İletişim Yokluğunda iki Hücresel Türleri Ekleme Co-kültür Sisteminin Geliştirilmesi

Tümör mikroçevresini (TME) taklit etmek için geçirgen bir mikro gözenekli membran ekini uyarladık. Model, karışık bir hücre kültüründen oluşur, floresan etiketleme veya hücre sıralama kullanmadan yüksek oranda zenginleştirilmiş bireysel hücre popülasyonlarının basitleştirilmiş üretimine izin verir ve normal veya stres koşulları altında TME içinde hücreler arası iletişimin incelenmesine izin verir.

Tümör mikroçevresinin A Mimik: Hücreler arası İletişim Zenginleştirilmiş hücre popülasyonları oluşturma ve incelenmesi için Basit Bir Yöntem

İn vitro model sistemi, akciğer skuamöz karsinomu (LUSC) ilerlemesi sırasında kanserle ilişkili fibroblastlarla (CAF) 3 boyutlu (3D) bir ortak kültürde doku mimari değişikliklerini yakalamak için geliştirilmiştir. Bu organoid sistem tümör fenotip modüle çeşitli tümör hücre içsel ve dışsal değişikliklerin rollerini araştırmak için benzersiz bir platform sağlar.

Akciğer Skuamöz Karsinom Progresyonunu Modellemek Için Çok Boyutlu Coculture Sistemi

Burada sunulan birincil insan kanı monosit izolasyon yanı sıra makrofajlar ve dendritik hücreler ve çok hücreli insan akciğer modeli içine epitel hücreleri ile montaj içine farklılaşma için bir protokoldür. Proinflamatuar uyaranlara maruz kalındığında, taze izole edilmiş veya çözülmüş monositlerden farklı bağışıklık hücrelerinden oluşan kokültürlerin biyolojik yanıtları karşılaştırılır.

Tehlike Değerlendirmesi İçin Epitel Hücreleri ve Primer İmmün Hücrelerden Oluşan Çok Hücreli İnsan Alveoler Modeli

İmmünoterapi ve tek hücreli genomik profilleme çağında, kanser biyolojisi, tümör-bağışıklık arayüzünü uygun bir mekansal zamansal bağlamda araştırmak için yeni in vitro ve hesaplama araçları gerektirir. Hücresel fonksiyonların dinamik, multiparametrik izlenmesi ile uyumlu, 2D ve 3D ortamlarda tümör-immün mikroakışkan ko-kültürlerden yararlanmak için protokolleri açıklıyoruz.

İn vitro tümör mikroortamlarında immün yanıtı diseksiyon için mikroakışkan ko-kültür modelleri

Burada, nanofibröz membran bazlı iki katmanlı sistemde fibroblastlarla kültürlenen epitel hücrelerinin membrana nasıl stabil bir şekilde yapışabileceğini ve zar üzerinde büyüyebileceğini gösteriyoruz.

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Bu video laboratuarımızda rutin tripsin tonlar insan embriyonik kök hücre hatları geçişleri nasıl göstermektedir.

Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları

Keşfedin, 3D baskılı iskele kullanarak insan embriyonik kök hücreleri ve Ishikawa hücreleriyle ko-kültür modeli oluşturmayı. Bu maliyet etkin yöntem, implantasyon bölgesinin in vivo anatomisini daha doğru temsil ederek üreme biyolojisi araştırmalarına katkı sağlar.

İki Tip Yapışık Hücre Hattı Kullanan Ko-Kültür Modeli

Daha fazla video keşfet