Name: Bursaphelenchus xylophilusun Üçüncü Aşama Dağılmış Yavrularının Ozmotik Regülasyon Yoluyla Kriptobiyoza Girişinin İndüklenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 15 s
Description: Keşfedin Bursaphelenchus xylophilus'un üçüncü aşama dağılmış yavrularında potasyum klorür ile ozmotik regülasyon yoluyla kriptobiyoz indüksiyonunu. Bu yöntem nematodların düşük sıcaklık stresine dayanma mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir teknik destek sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. B. xylophilus'un <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq02.jpg" style="margin: auto;"> Toplanması 
<ol>
	<li>P. massoniana'nın enfekte disklerinin toplanması NOT: Tüm prosedürler Çam Solgunluğu Hastalığı Salgın Alanı ve Enfekte Ahşap için İdari Tedbirler ve diğer ilgili düzenlemelere uygundur. Zhejiang Eyaleti, Ningbo Şehri, Xiangshan İlçesinde B. xylophilus ile enfekte olmuş bir P. massoniana ormanı örnek bölge olarak seçildi. Çam solgunluğu hastalığından ölen P. massoniana, örnek alan içinde kesildi.<ol>
		<li>Kesilen ağaçların ana gövdesinin üst, orta ve alt kısımlarından yuvarlak kütükleri (5 cm kalınlığında) toplayın.</li>
		<li>Toplanan yuvarlak P. massoniana kütüklerini 0,5-1 cm kalınlığında dilimler halinde kesin, ardından 2-3 cm uzunluğunda küçük şeritler halinde kesin.</li>
		<li>Küçük ahşap şeritleri kapalı torbalara koyun ve daha sonra kullanmak üzere bir laboratuvarda saklayın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>B. xylophilus'un ekstraksiyonu <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">
	<ol>
		<li>Yaklaşık 15 cm çapında uzun boyunlu bir cam huninin dar ucuna lastik bir tüp takın. Lastik boruyu bir kıstırma musluğu ile sabitleyin. Monte edilmiş huniyi bir huni standına yerleştirin.</li>
		<li>Küçük ahşap şeritleri tamamen tek bir kağıt mendil tabakasına sarın ve ardından huniye yerleştirin. Tüm ahşap şeritler suya batırılana kadar huniye damıtılmış su ekleyin. NOT: 12-24 saat bekletildikten sonra, nematodlar ahşap şeritlerden dışarı çıktı ve huninin10 dibine yerleşti. Kağıt mendil, nematodların geçmesine izin verirken odun kalıntılarının çökmesini engelledi.</li>
		<li>Huninin altındaki kıstırma musluğunu yavaşça serbest bırakın ve mikroskobik inceleme ve morfolojik tanımlama için karışımın 2000-5000 μL'sinin bir Petri kabına (5 cm çapında) sızmasına izin verin.</li>
		<li>Stileler, medyan özofagus ampulleri, lipid damlacıkları ve "parmak benzeri" kuyruk şekilleri gibi özellikleri gözlemleyerek B. xylophilus'u tanımlayın <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">11.</li>
		<li>Mikroskop altında, her seferinde 10 μL'lik bir pipet kullanarak bir nematod ile birlikte 10 μL sıvıyı aspire ederek tek tek <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus'u bir slayt üzerine aktarın. Nematod içeren karışımdan yaklaşık 300 μL toplamak için bu işlemi 30 kez tekrarlayın.</li>
		<li>B. xylophilus'un ekstraksiyonundan <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> sonra, daha fazla kontaminasyonu önlemek için kalan ahşap şeritleri ve enfekte ahşap malzemeleri sterilize edin.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Ozmotik düzenleme proses kontrolü
<ol>
	<li>Ozmotik regülasyon karışımının hazırlanması<ol>
		<li>% 8 KCl sulu çözelti hazırlayın.</li>
		<li>Bir pipet kullanarak, B. xylophilus karışımını <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> içeren slayta 10 μL% 8 KCl sulu çözelti ekleyin, bu da yaklaşık 310 μL'lik bir nematod ve KCl çözeltisi karışımı elde eder.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Artan ozmotik basıncın düzenlenmesi ve B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> dehidrasyonu<ol>
		<li>Slaytı, suyun doğal olarak buharlaşmasına izin verecek şekilde mikroskop tablasına yerleştirin. Çevredeki ortamın ozmotik basıncını kademeli olarak artıracak ve nematodların yaklaşık 30-60 dakika içinde kurumasına neden olacaktır. NOT: Operatörün yalnızca KCL kristalleri çökelene kadar suyun doğal olarak buharlaşmasını beklemesi ve nematodların durumunu mikroskop altında gözlemlemesi gerekir. Karışımın 310 μL'sinin KCL kristalleri çökelene kadar doğal olarak buharlaşması yaklaşık 30-60 dakika sürer.</li>
		<li>Mikroskop altında B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> dehidrasyon sürecini (örneğin, vücut kıvrılması, agregasyon, vb.) gözlemleyin. Su tamamen buharlaştığında ve KCl kristalleri çökeldiğinde, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus hareket etmeyi durdurur ve kriptobiyoza girer.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Kriptobiyotik <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus'un düşük sıcaklıkta stres tedavisi
	<ol>
		<li>Kriptobiyotik <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus'u 24 saat boyunca -20 ° C'lik sabit bir sıcaklık ortamına yerleştirin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Azalan ozmotik basıncın düzenlenmesi ve B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> rehidrasyonu
	<ol>
		<li>Pipet ile düşük sıcaklıkta işlem görmüş yavruların etrafına yaklaşık 300 μL damıtılmış su ekleyin. Yaklaşık 30-60 dakika süren rehidrasyon işlemi, çevrelerindeki ortamın ozmotik basıncını kademeli olarak azaltır.</li>
		<li>Mikroskop altında B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> rehidrasyon sürecini (örneğin, vücut gerilmesi, hareketin yeniden başlaması vb.) gözlemleyin. 24 saat sonra hayatta kalma oranını hesaplayın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Bursaphelenchus xylophilus Juveniles'in kriptobiyozu

<ol><li>Li, Y., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+on+the+trend+of+invasion+and+expansion+of+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Forest+Pest+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Analysis on the trend of invasion and expansion of Bursaphelenchus xylophilus.</a> Forest Pest and Disease. 37 (5), 1-4 (2018).</li>
<li>Futai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wood+nematode%2C+Bursaphelenchus+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus.</a> Annu Rev Phytopathol. 51 (51), ?61(2013).</li>
<li>Crowe, J. H., Cooper, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryptobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Am%22%5BJournal%5D)">Cryptobiosis.</a> Sci Am. 225, 30-36 (1971).</li>
<li>Wharton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis.</a> Curr Biol. 25, 1107-1125 (2015).</li>
<li>Browne, J., Tunnacliffe, A., Burnell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%3A+plant+desiccation+gene+found+in+a+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis: plant desiccation gene found in a nematode.</a> Nature. 416 (6876), 38(2002).</li>
<li>Shatilovich, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+nematodes+from+late+Pleistocene+permafrost+of+the+Kolyma+river+lowland%5BTitle%5D)+AND+%22Dokl+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Viable nematodes from late Pleistocene permafrost of the Kolyma river lowland.</a> Dokl Biol Sci. 480 (1), 100-102 (2018).</li>
<li>Schottenfeld-Roames, J., Ghabrial, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osmotic+regulation+of+seamless+tube+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Osmotic regulation of seamless tube growth.</a> Nat Cell Biol. 15 (2), 137-139 (2013).</li>
<li>Erkut, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trehalose+renders+the+dauer+larva+of+Caenorhabditis+elegans+resistant+to+extreme+desiccation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Trehalose renders the dauer larva of Caenorhabditis elegans resistant to extreme desiccation.</a> Curr Biol. 21 (1), 1331-1336 (2012).</li>
<li>Pan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Third-stage+dispersal+juveniles+of+Bursaphelenchus+xylophilus+can+resist+low-temperature+stress+by+entering+cryptobiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biology%22%5BJournal%5D)">Third-stage dispersal juveniles of Bursaphelenchus xylophilus can resist low-temperature stress by entering cryptobiosis.</a> Biology. 10 (8), 785(2021).</li>
<li>Mao, X. F., Li, H. X., Chen, X. Y., Hu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+efficiency+of+soil+nematodes+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+J+Ecol%22%5BJournal%5D)">Extraction efficiency of soil nematodes by different methods.</a> Chinese J Ecol. 23 (3), 149-151 (2004).</li>
<li>Pan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+pine+wood+nematode+in+Pinus+koraiensis+in+Fengcheng%2C+Liaoning+province%5BTitle%5D)+AND+%22Forest+Pest+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of pine wood nematode in Pinus koraiensis in Fengcheng, Liaoning province.</a> Forest Pest and Disease. 38 (1), 4(2019).</li>
<li>Pan, L., Cui, R., Li, Y., Feng, Y., Zhang, X. Investigation of pinewood nematodes in Pinus tabuliformis Carr. under low-temperature conditions in Fushun, China. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPan%2C+L+%22Forests%22">Forests</a>. 11 (9), 993(2020).</li>
<li>Madin, K. A. C., Crowe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis+in+nematodes%3A+Carbohydrate+and+lipid+metabolism+during+dehydration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis in nematodes: Carbohydrate and lipid metabolism during dehydration.</a> J Exp Zool. 3, 193(2010).</li>
<li>Wharton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anhydrobiosis%3A+The+model+worm+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Anhydrobiosis: The model worm as a model.</a> Curr Biol. 21 (15), 578-579 (2011).</li>
<li>Li, Y., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+risk+of+invasion+and+expansion+of+pine+wood+nematode+in+the+middle+temperate+zone+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22J+Temperate+Res%22%5BJournal%5D)">High risk of invasion and expansion of pine wood nematode in the middle temperate zone of China.</a> J Temperate Res. 1 (1), 4(2018).</li>
</ol>

Bu çalışmada, B. xylophilus, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> Zhejiang Eyaleti, Ningbo'da ölü P. massoniana'dan toplanmıştır. B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> farklı instarlara sahip karışık bir popülasyondan seçildiğine dikkat edilmelidir. Spesifik olarak, yüksek yoğunluklu B. xylophilus içeren yuvarlak kütükler seçildi, ardından B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> taranması izledi. Kış aylarında, Liaoning Eyaletindeki günlük minimum sıcaklık -20 °C civarındayken, bu deneydeseçim sürecini basitleştiren ölü Pinus tabuliformis'ten çok sayıda tek kişilik <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus elde edilebilir.
Kriptobiyotik süreç sırasında, nematodların yavaş dehidrasyon hızı, hayatta kalmalarına fayda sağlar ve proteinlerinin yapısal olarak zarar görmesini önler13. Dehidrasyon süresi, B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> hayatta kalma oranını belirlemede kritik öneme sahiptir. Bu çalışmada, %8'lik bir başlangıç konsantrasyonunda bir KCl çözeltisi kullanılmış ve suyun doğal buharlaşması ile konsantrasyonu kademeli olarak arttırılarak B. xylophilus'un yavaşça dehidre olmasına ve kriptobiyoza girmesine izin verilmiştir<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">. Su çok hızlı buharlaşırsa veya nematodlar doğrudan yüksek konsantrasyonlu bir KCl çözeltisine yerleştirilirse, hayatta kalma oranları önemli ölçüde azalır.
Bu çalışmada açıklanan yöntemin çeşitli avantajları vardır. Deney materyallerine kolayca erişilebilir, B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> dehidrasyonunu ve rehidrasyonunu düzenlemek için sadece KCl çözeltisi ve damıtılmış su gerektirir. Prosedürler basittir: dehidrasyon doğal buharlaşma yoluyla meydana geldi ve damıtılmış su eklenerek rehidrasyon sağlandı. Tüm süreç 2 saat içinde tamamlanabilir. Bu yöntem, yüksek başarı ve sağkalım oranlarına sahiptir, çoğu <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus dehidrasyondan sonra kriptobiyoza girer ve çoğunluğu rehidrasyondan sonra yeniden canlanır,sırasıyla 11.
Önerilen yöntem, hem B. xylophilus'un hem de <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> dördüncü aşama dispersal juvenillerin kriptobiyotik durumunu düzenlemek için uygulanabilir (<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq03.jpg" style="margin: auto;">)14. Bununla birlikte, yayıcı B. xylophilus için etkili olmayabilir.
Son yıllarda, B. xylophilus'un neden olduğu çam solgunluğu hastalığı, güney Çin'den kuzey bölgelerine yayılmıştır. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> Bu soğuk kuzey bölgelerindeki çam ağaçlarında yaşayan B. xylophilus, soğuğa karşı daha fazla direnç gösterme eğilimindedir15. Önerilen yöntem, B. xylophilus'ta<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> kriptobiyozu indükleyerek soğuğa ve kuraklığa karşı dirençlerini artırabilir. Toplu olarak, bu yöntem B. xylophilus'un stres direnç mekanizmalarını ve çam solgunluğu hastalığının bulaşma mekanizmasını incelemek için teknik destek sağlayabilir.

Çam solgunluğu hastalığı, Çin'deki en şiddetli orman hastalıklarından biridir1. Çam ormanı nematodu Bursaphelenchus xylophilus (B. xylophilus), Pinus massoniana (P. massoniana) gibi çam türleri için konukçu içinde üreyerek hızlı solmaya ve ölüme yol açarak önemli bir tehdit oluşturur. Konağın ölümünden sonraki elverişsiz çevresel koşullar altında, B. xylophilus'un üreme yavruları dauer öncesi yavrulara girebilir (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">). Bu yavrular, transferlerine ve yayılmalarına devam etmek için böcek vektörleri ararlar ve bu da geniş çam ormanı ölümlerine neden olur2.
Kriptobiyoz, organizmaların neredeyse tüm iç sularını kaybettiği ve aşırı çevresel stres altında anhidrobiyoza girdiği bir durumdur3. Bu süreçte, organizmalar yavaş yavaş susuz kalır, bu da hareketin durmasına, metabolizmanın azalmasına ve askıya alınmış bir yaşam döngüsüne neden olur4. Uygun koşullar altında, rehidrasyon ile iyileşebilirler. Kriptobiyoz, organizmaların düşük sıcaklıklar gibi aşırı ortamlara direnmelerini ve ömürlerini uzatmalarını sağlar5. Kriptobiyozda 30.000 yıl boyunca hayatta kalan nematodlar, Antarktika permafrost6'da bulundu.
Önceki çalışmalar, nematodların dehidrasyon sırasında yüzey geçirgenliklerini ayarlayarak düşük sıcaklık, kuraklık ve yüksek ozmotik basınç gibi çeşitli abiyotik stres faktörlerine uyum sağlayabildiğini göstermiştir7. Ek olarak, nematodlar yüzey alanını azaltmak ve su kayıp oranını en aza indirmek için vücutlarını kıvırabilir. Örneğin, Caenorhabditis elegans ozmotik dengeyi düzenleyerek iyonların ve küçük moleküllerin kütikülünden serbestçe geçmesine izin verirken, daha büyük moleküller8 yapamaz. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus ayrıca kriptobiyoz sergiler. Kriptobiyozun dehidrasyon ve rehidrasyon aşamaları sırasında, kütikül boyunca madde alışverişini kontrol etmek için ozmotik düzenleme gereklidir, bu da onu kriptobiyoza girmek veya kriptobiyozdan kurtulmak için çok önemli hale getirir9.
Bu çalışma, ozmotik regülasyon yoluyla B. xylophilus'ta <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> kriptobiyozu indüklemek için bir yöntem sunmaktadır. Bu yöntem basit, verimli ve son derece güvenilirdir ve B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> stres direnci mekanizmalarını araştırmak için teknik destek sağlar.

<table><tbody><tr><td>Cam slayt</td><td>Biyolojik Arazi</td><td>GS7101-7525 Serisi</td><td>75 mm &zamanlar; 25 mm &zamanlar; 1 mm</td></tr><tr><td>Uzun boyunlu cam huni</td><td>Nanjing Kangluoda Deneysel Teknolojisi</td><td>YOK</td><td>150 mm</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Phenix</td><td>XSP-35-1600X</td><td>PH100-2B41L-IPL</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Nanjing Kangluoda Deneysel Teknolojisi</td><td>&nbsp; TB-624935792745 (İngilizce)</td><td>50 mm &kez; 50 mm</td></tr><tr><td>Çimdik horozu</td><td>Nanjing Kangluoda Deneysel Teknolojisi</td><td>&nbsp; TB-624973311743</td><td>36 mm &süre; 11 mm&nbsp; &zamanlar; 55 mm</td></tr><tr><td>Pipet</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>3123000012</td><td>10&ndash; 100 &mikro; L</td></tr><tr><td>Potasyum klorür (KCL)</td><td>Solarbio Yaşam Bilimleri</td><td>P9921</td><td>500 gr</td></tr><tr><td>Kauçuk boru</td><td>Nanjing Kangluoda Deneysel Teknolojisi</td><td>TB-624923457094</td><td>7 mm & zamanlar; 5 mm</td></tr><tr><td>Sterilizatör</td><td>BinJiang&nbsp;</td><td>https://detail.1688.com/offer/644766597053.html?_t=1730892390541&spm= a2615.7691456.co_0_0_wangpu _score_0_0_0_0_1_0_0000_0.0</td><td>75 L</td></tr><tr><td>Doku kağıdı&nbsp;</td><td>Kalpten kalbe baskı</td><td>M3</td><td>22,5 cm &zaman; 21,5 cm</td></tr></tbody></table>

bursaphelenchus xylophilus'un Üçüncü aşama dağılmış yavrularının ozmotik regülasyon yoluyla kriptobiyoza girişinin İndüklenmesi

Inducing the Entry of Third Stage Dispersal Juveniles of Bursaphelenchus xylophilus into Cryptobiosis Through Osmotic Regulation

Kriptobiyoz, organizmaların neredeyse tüm iç sularını kaybettiği ve aşırı çevresel stres altında anhidrobiyoza girdiği bir durumdur. Bursaphelenchus xylophilus'un dağılmış üçüncü aşama yavruları (pre-dauer juveniles, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;">) dehidrasyon yoluyla kriptobiyoza girebilir ve çevresel koşullar iyileştiğinde rehidrasyon üzerine canlanabilir. Ozmotik düzenleme, bu süreçte hayatta kalmaları için çok önemlidir. Bu çalışmada, Çin'in <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> Zhejiang Eyaleti, Ningbo'da çam solgunluğu hastalığı nedeniyle ölen Pinus massoniana'dan B. xylophilus örnekleri toplanmıştır. % 8 potasyum klorür (KCl) çözeltisine daldırıldıktan sonra, B. xylophilus, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> doğal su buharlaşması ile artan dış ozmotik basınç nedeniyle kademeli dehidrasyondan sonra kriptobiyotik bir duruma girdi. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus, -20 ° C'de düşük sıcaklık stresine dayanabilir. B. xylophilus% 92.1'lik bir hayatta kalma oranı ile rehidrasyon üzerine canlanabilir. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> Bu süreç, B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> kriptobiyoza girişini düzenleyerek aşırı ortamlara direnmelerini sağlayabilir. Çalışmamızda açıklanan bu yöntem basit ve güvenilirdir ve B. xylophilus'un stres direnç mekanizmalarını incelemek için teknik destek sağlar.

% 8'lik KCl çözeltisinde, su buharlaştıkça, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus başlangıçta hareketli kalırken gözle görülür bir "kıvrılma" sergiledi (Şekil 1A). Su tamamen buharlaştığında, nematodlar hareketi durdurdu ve kıvrıldı, bastırılmış yüzeyler ve birikmiş lipid damlacıkları (Şekil 1B), bu da kriptobiyotik duruma girişlerini gösterdi. Çevrelerine damıtılmış su eklendiğinde, nematodlar yeniden sulandırıldı ve yeniden canlandı (Şekil 1C). Su buharlaştıktan sonra KCL kristalleri görünecektir (Şekil 1D). Şekil 1E, B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> morfolojik özelliklerini göstermektedir.
Bir dehidrasyon deneyi, başlangıçtaki %8'lik KCl çözeltisinde su buharlaşmasının B. xylophilus'un su kaybetmesine neden olduğunu <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> gösterdi. Dehidrasyondan sonra, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus 24 saat boyunca -20 ° C'de düşük sıcaklık stresine maruz bırakıldı; ortalama sağkalım oranı% 92.1 idi11. Kriptobiyotik bir duruma girmemiş kontrol grubunda% 0'lık bir hayatta kalma oranı ile karşılaştırıldığında, yukarıdaki veriler, dehidrasyonun düşük sıcaklık koşulları altında B. xylophilus'un <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> hayatta kalma oranını önemli ölçüde artırabileceğini düşündürdü.
B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> kriptobiyozunu takip eden rehidrasyon fazı sırasında, nematodların 0'ünün @ KCl çözeltisinden damıtılmış suya aktarılırken in vivo "kabarcıklar" sergilediğini gözlemledik (Şekil 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67350/67350fig01.jpg"> 
Şekil 1: B. xylophilus'un<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> dehidrasyon-kriptobiyoz-rehidrasyon süreci. Bu görüntü, (A) dehidrasyon aşaması, (B) kriptobiyoz aşaması, (C) rehidrasyon aşaması, (D) KCL kristalleşme aşaması ve (E) <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus dahil olmak üzere B. xylophilus'taki<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> kriptobiyoz sürecini göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67350/67350fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67350/67350fig02.jpg"> 
Şekil 2: Canlanmamış <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> B. xylophilus'ta yağ granüllerinin birikimi. Bu görüntü, in vivo kabarcık şeklindeki yağ granüllerinin varlığı ile karakterize edilen rehidrasyondan sonra B. xylophilus'un durumunu <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67350/67350eq01.jpg" style="margin: auto;"> göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67350/67350fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bursaphelenchus xylophilus'un Üçüncü Aşama Dağılmış Yavrularının Ozmotik Regülasyon Yoluyla Kriptobiyoza Girişinin İndüklenmesi

Cryptobiosis is a state where organisms lose nearly all their internal water and enter anhydrobiosis under extreme environmental stress. The dispersal ...

inducing-entry-third-stage-dispersal-juveniles-bursaphelenchus

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video herbivory konak bitki direnç mekanizmaları açıklar ve direnç spittlebug Antibiyoz ve hoşgörü göreceli katkıları tahmin no-seçmeli test...

Karakterize Otobur Direnç Mekanizmaları: Spittlebugs Brachiaria Spp. Bir Örnek

Dan Ekstrasellüler Akışkan Vampiric İzolasyonu<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Bu videoda, gelişimsel olarak senkronize bir steril yetişkin C. elegans popülasyonu üretme yöntemini gösteriyoruz. Örnek protokol, canlı hayvanlarda oksijen tüketim oranlarını incelemek için solucanları senkronize eder.

Nematod Senkronizasyonu: Aynı Gelişim Aşamalarında Solucan Popülasyonları Elde Etmek İçin Bir Yöntem

Çam ağacı nematodu Bursaphelenchus xylophilus'un çiftleşme davranışını araştırmak için bir protokol sunulmuştur. B. xylophilus'un davranışsal özellikleri çiftleşme sürecinde açıklanmaktadır.

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi, Orijinli olanlar

Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses iletimini bastırmak için doğal nüfus serbest edilmektedir. Biz laboratuvar adaptasyon ve seçimi en aza indirmek önlemler alarak deneyler ve alan açıklaması, arka Ae. aegypti laboratuvarda Wolbachia enfeksiyonları ile yöntemleri açıklanmaktadır.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Çevre toxicants maruz akut geliştirme uzun vadeli etkileri ile etkileyebilir. Detaylı iletişim kuralları Bisfenol A. için erken embriyonik pozlama etkisini incelemek için bir etkili lab modelini kullanarak bir strateji göstermek için sağlanan Sağladığımız verimlilik ve bizim yaydıkları pozlama biyo-deneyleri etkinliğini izlemek için davranışsal deneyleri.

Embriyonik maruz kalma düşük doz Toxicants uzun vadeli davranış ve üreme sonuçları

Burada, Ectropis grisescens olgun larva toprak faktörler (Örneğin, substrat tipi ve nem içeriği) karşılık olarak pupation tercih araştırmak için bir protokol mevcut seçim biyoanalizler kullanarak. Biz de hayır-seçim biyoanalizler pupation davranışları etkileyen faktörleri belirlemek için bir protokol ve yaşayanlar, mevcut E. grisescens.

Seçim ve No-seçim biyoanalizler Pupation tercih ve Ectropis grisescens başarısı ortaya çıkması

Burada, larva evresi 4 C. eleganlardan aktif nükleer özü izole etmek ve transkripsiyon aktivitesini bir in vitro sistemde görselleştirmek için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz.

Aktif Caenorhabditis elegans'ın in vitro transkripsiyon için Nükleer Ekstrakt ve Rekonsitasyonu İzolasyonu

Entomopatojenik nematodlar bakterilerle simbiyoz içinde yaşarlar ve birlikte doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini zayıflatarak böcekleri başarılı bir şekilde enfekte ederler. Nematod enfeksiyonunun genetik temeli üzerine araştırmaları teşvik etmek için, entomopatojenik nematodları korumak ve genetik olarak manipüle etmek için yöntemler açıklanmaktadır.

Entomopatojenik Nematodların Kültürlenmesi ve Genetik Olarak Manipüle Edilmesi

Bu makale, alt dipteran sineği Bradysia (Sciara) coprophila'nın laboratuvar bakımını (çiftleşme ve besleme dahil) özetlemektedir.

Alt Dipteran Sineği Bradysia (Sciara) coprophila'nın Laboratuvar Bakımı: Yeni/Eski Ortaya Çıkan Bir Model Organizma

Çiftçilere entomopatogenik nematodları biyo-böcek ilaçları olarak toplu olarak yaymaları için iki yöntem sunuyoruz. İlk yöntem, nematod kültürleme alt tabakası olarak poliakrilamid jel kullanırken, ikinci yöntem kültür substratı olarak polimer kaplı pamuk yünü kullanır. Her iki yöntem de böcek kadavralarında nematodların in vivo yayılmasına dayanır.

Yetiştirici Temelli Entomopatotik Nematodların In Vivo Yayılması

Keşfedin Bursaphelenchus xylophilus'un üçüncü aşama dağılmış yavrularında potasyum klorür ile ozmotik regülasyon yoluyla kriptobiyoz indüksiyonunu. Bu yöntem nematodların düşük sıcaklık stresine dayanma mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir teknik destek sunar.

Bursaphelenchus xylophilus'un Üçüncü Aşama Dağılmış Yavrularının Ozmotik Regülasyon Yoluyla Kriptobiyoza Girişinin İndüklenmesi

Daha fazla video keşfet