Name: Kalsiyum iyon kanallarının aktivasyonunu incelemek için tek hücreli kalsiyum görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-13T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: Öğrenin tek hücreli kalsiyum görüntüleme yöntemiyle Fura-2/AM boyası kullanarak canlı hücrelerde kalsiyum iyon dinamiklerini gerçek zamanlı izlemeyi. Bu teknik TRPV1 kanallarının aktivasyon mekanizmalarını ve ağrı ile sıcaklık algısını anlamak için hücre biyolojisi ve nörobilim araştırmalarında uygulanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Kanal Aktivasyon Çalışmaları için Tek Hücreli Kalsiyum Görüntüleme

<ol><li>Murthy, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+for+contraction+and+relaxation+in+smooth+muscle+of+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signaling for contraction and relaxation in smooth muscle of the gut.</a> Annu Rev Physiol. 68, 345-374 (2006).</li>
<li>Buzsáki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+of+extracellular+fields+and+currents--eeg%2C+ecog%2C+lfp+and+spikes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The origin of extracellular fields and currents--eeg, ecog, lfp and spikes.</a> Nat Rev Neurosci. 13 (6), 407-420 (2012).</li>
<li>Rogers, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+airway+mucus+secretion+and+pathophysiology+of+hypersecretion%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Care%22%5BJournal%5D)">Physiology of airway mucus secretion and pathophysiology of hypersecretion.</a> Respir Care. 52 (9), 1134-1146 (2007).</li>
<li>Mitra, R., Hasan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Store-operated+Ca%282%2B%29+entry+regulates+neuronal+gene+expression+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Store-operated Ca(2+) entry regulates neuronal gene expression and function.</a> Curr Opin Neurobiol. 73, 2022(2022).</li>
<li>Landstrom, A. P., Dobrev, D., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+cardiac+arrhythmias%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and cardiac arrhythmias.</a> Circ Res. 120 (12), 1969-1993 (2017).</li>
<li>Zheng, C., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+deficiency+of+coagulation+factors+v+and+viii%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Combined deficiency of coagulation factors v and viii: An update.</a> Semin Thromb Hemost. 39 (6), 613-620 (2013).</li>
<li>Ahmadian Elmi, M., Motamed, N., Picard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analyses+of+the+g+protein-coupled+estrogen+receptor+gper1+reveal+constitutive+links+to+endoplasmic+reticulum%2C+glycosylation%2C+trafficking%2C+and+calcium+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Proteomic analyses of the g protein-coupled estrogen receptor gper1 reveal constitutive links to endoplasmic reticulum, glycosylation, trafficking, and calcium signaling.</a> Cells. 12 (21), 2571(2023).</li>
<li>Prakriya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orai1+is+an+essential+pore+subunit+of+the+crac+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Orai1 is an essential pore subunit of the crac channel.</a> Nature. 443 (7108), 230-233 (2006).</li>
<li>Caterina, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor%3A+A+heat-activated+ion+channel+in+the+pain+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor: A heat-activated ion channel in the pain pathway.</a> Nature. 389 (6653), 816-824 (1997).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stim1+thermosensitivity+defines+the+optimal+preference+temperature+for+warm+sensation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Stim1 thermosensitivity defines the optimal preference temperature for warm sensation in mice.</a> Cell Res. 29 (2), 95-109 (2019).</li>
<li>Bharate, S. S., Bharate, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+thermoreceptor+trpm8+by+cooling+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modulation of thermoreceptor trpm8 by cooling compounds.</a> ACS Chem Neurosci. 3 (4), 248-267 (2012).</li>
<li>Coste, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo+proteins+are+pore-forming+subunits+of+mechanically+activated+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Piezo proteins are pore-forming subunits of mechanically activated channels.</a> Nature. 483 (7388), 176-181 (2012).</li>
<li>Behera, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+Ca2%2B+dynamics+using+a+ubiquitin-10+promoter-driven+yellow+cameleon+3.6+indicator+reveal+reliable+transgene+expression+and+differences+in+cytoplasmic+Ca2%2B+responses+in+arabidopsis+and+rice+%28oryza+sativa%29+roots%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Analyses of Ca2+ dynamics using a ubiquitin-10 promoter-driven yellow cameleon 3.6 indicator reveal reliable transgene expression and differences in cytoplasmic Ca2+ responses in arabidopsis and rice (oryza sativa) roots.</a> New Phytol. 206 (2), 751-760 (2015).</li>
<li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+ca%282%2B%29+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise ca(2+) probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+analysis+of+stim1+thermal+sensation%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism analysis of stim1 thermal sensation.</a> Cells. 12 (22), 2613(2023).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATF6+safeguards+organelle+homeostasis+and+cellular+aging+in+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">ATF6 safeguards organelle homeostasis and cellular aging in human mesenchymal stem cells.</a> Cell Discov. 4, 2(2018).</li>
<li>Jiang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanosensitive+piezo1+channel+mediates+heart+mechano-chemo+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The mechanosensitive piezo1 channel mediates heart mechano-chemo transduction.</a> Nat Commun. 12 (1), 869(2021).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Orai1-mediated+store-operated+Ca%282%2B%29+channel%2Fcalpain+signaling+contributes+to+high+glucose-induced+podocyte+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced Orai1-mediated store-operated Ca(2+) channel/calpain signaling contributes to high glucose-induced podocyte injury.</a> J Biol Chem. 298 (6), 101990(2022).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+er+ion+homeostasis+maintained+by+an+er+anion+channel+clcc1+contributes+to+als-like+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Disruption of er ion homeostasis maintained by an er anion channel clcc1 contributes to als-like pathologies.</a> Cell Res. 33 (7), 497-515 (2023).</li>
<li>Gouin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trpv1+and+trpa1+in+cutaneous+neurogenic+and+chronic+inflammation%3A+Pro-inflammatory+response+induced+by+their+activation+and+their+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Trpv1 and trpa1 in cutaneous neurogenic and chronic inflammation: Pro-inflammatory response induced by their activation and their sensitization.</a> Protein Cell. 8 (9), 644-661 (2017).</li>
<li>Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+imaging+of+cortical+neurons+using+fura-2+am%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Calcium imaging of cortical neurons using fura-2 am.</a> J Vis Exp. (23), e1067(2009).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lever-like+transduction+pathway+for+long-distance+chemical-+and+mechano-gating+of+the+mechanosensitive+piezo1+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A lever-like transduction pathway for long-distance chemical- and mechano-gating of the mechanosensitive piezo1 channel.</a> Nat Commun. 9 (1), 1300(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kamera</td><td>: Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Capsaicine</td><td>Sigma</td><td>211275</td><td></td></tr><tr><td>CL-100 sıcaklık kontrol cihazı</td><td>Warner Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Siklopiazonik Asit (CPA)</td> <td>Sigma</td><td>C1530</td><td></td></tr><tr><td>DG-4 ışık</td><td>Sutter Instrument Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO) &nbsp;</td><td>Amresco</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermofisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Floresan görüntüleme yazılımı (MetaFluor, Ücretli yazılım)&nbsp;</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fura-2/</td><td>Invitrogen</td><td>F1201</td><td></td></tr><tr><td>HBSS tampon</td><td>Gibco</td><td>14175103</td><td></td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 3000</td><td>Invitrogen</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>&nbsp; Beyotime</td><td>ST501</td><td></td></tr><tr><td>poli-D-lizin</td><td>&nbsp; Beyotime</td><td>ST508</td><td></td></tr><tr><td>SC-20 sıvı sirkülasyonlu ısıtma/soğutma cihazı&nbsp;</td><td>Harvard Aygıtı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beyaz ışık kaynağı</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kalsiyum iyon kanallarının aktivasyonunu incelemek için tek hücreli kalsiyum görüntüleme

Single-Cell Calcium Imaging for Studying the Activation of Calcium Ion Channels

Sıcaklık tepkisi algılama 
Birincil keratinosit Primer keratinositler yenidoğan farelerden izole edildi ve belirlenen protokolleregöre hazırlandı 10. Bu hücreler, cam slaytlar içeren 24 oyuklu plakalara tohumlandı. Fura-2 probunun yüklenmesini takiben, Şekil 2A'da gösterildiği gibi, hücre morfolojisinin net bir görselleştirmesini elde etmek için odak mikroskop altında 380 nm dalga boyunda ayarlandı. Prob işlem sırasında başarılı bir şekilde yüklenmezse, hücreler görünmez. Odadaki hücre dışı tampon, hücreler için en uygun koşulları sağlamak için bir perfüzyon sistemi aracılığıyla sürekli olarak değiştirildi. Sıcaklık kontrol sistemi perfüzyon sistemine bağlandı ve hücre dışı tampondaki sıcaklık değişikliklerini kontrol ederek hücresel termal tepkilerin tespit edilmesini sağladı. Bu işlem, hücre dışı tamponun kademeli olarak ısıtılmasını ve ardından kademeli olarak soğutulmasını içeriyordu.
Tek hücreli Ca2+ görüntüleme sistemi, çeşitli deneysel koşullar altında hücre içi Ca2+ konsantrasyonundaki değişiklikleri izlemek için kullanıldı. Şekil 2B'de gösterildiği gibi, keratinositler, ısıtmaya maruz kaldıklarında belirgin bir termal tepki ve soğutma fazı sırasında gözle görülür bir tepki sergilediler. Özellikle, bu sıcaklık tepkisi, bu yanıttan birincil olarak sorumlu olan STIM1 geni silindiğinde ortadan kalktı (Şekil 2C)10. Tek hücreli Ca2+ görüntüleme, çeşitli dış uyaranlara yanıt olarak hücre içi Ca2+ konsantrasyonundaki gerçek zamanlı değişikliklerin gözlemlenmesine olanak tanıyarak hücresel davranışın ve sinyalizasyonun ayrıntılı analizini sağlar.
HEK293T hücrelerin hedef plazmitleri aşırı eksprese etmesi HEK293T hücreler, deneysel yönteme göre cam slaytlar içeren 24 oyuklu bir plakaya tohumlandı. Hücreler daha sonra STIM1 / Orai1 ile aşırı eksprese edildi ve aracılı termal tepkileri, birincil hücreler için yukarıda tarif edilenle aynı yöntem kullanılarak tespit edildi. Hedef plazmidi aşırı eksprese eden hücreler söz konusu olduğunda, plazmit tarafından TRITC veya FITC dalga boyları altında taşınan kırmızı veya yeşil floresan proteinler ile gösterildiği gibi, karşılık gelen plazmiti eksprese eden hücrelerin seçilmesiyle başarılı transfeksiyon doğrulandı. Bu deney için, FITC altında tespit edilen ve yeşil floresan yayan GFP ve TRITC altında tespit edilen ve kırmızı floresan yayan DsRed ile STIM1-GFP/Orai1-DsRed plazmitleri kullanıldı. Boş mCherry'yi (TRITC) aşırı eksprese eden hücreler negatif kontrol olarak kullanıldı. Şekil 3A'da gösterildiği gibi, FITC altında gözlemlenen floresan hücreler, ısıtma ve soğutma işlemleri sırasında termal tepkilerinin seçilmesini ve kaydedilmesini sağlayan STIM1'in başarılı bir şekilde ekspresyonunu göstermiştir. Transfekte edilmeyen hücreler negatif kontrol görevi gördü. Şekil 3B , STIM1/Orai1'in, Şekil 3C'de gösterilen negatif kontrolün aksine, soğutma işlemi sırasında önemli bir termal tepki sergilediğini göstermektedir.
İlaç yanıtı tespiti Tek hücreli Ca2+ görüntüleme teknolojisi, bileşiklere hücre tepkilerini tespit etmek için de kullanılabilir. Termal yanıt tespiti için hücre hazırlığı, yukarıda tarif edilenle aynıdır. İlaç yanıtı ile termal yanıt arasındaki fark, termal yanıtın genellikle bir perfüzyon sistemi aracılığıyla hücre dışı tamponun sıcaklığını değiştirerek hücrelerin aktivasyonunu gerektirmesi gerçeğinde yatmaktadır, bileşikler ise perfüzyon yoluyla veya bir pipet kullanılarak doğrudan eklenerek uygulanabilir. Bir pipetle doğrudan ekleme, kullanılan bileşik miktarını etkili bir şekilde koruyabilir; Bununla birlikte, ortaya çıkan eğri her zaman perfüzyon yoluyla elde edilen kadar görsel olarak çekici olmayabilir.
Şekil 4'ü örnek olarak alırsak, Şekil 4A, hücre dışı Ca 2+ konsantrasyonu ve Siklopiazonik Asit (CPA) içeriğinin SOCE'yi indüklemek için bir perfüzyon sistemi aracılığıyla sırayla değiştirildiği STIM1/Orai1'in depoyla çalıştırılan kalsiyum girişi (SOCE) yanıtını göstermektedir. Şekil 4B'de, TRPV1 agonisti kapsaisin, TRPV1 plazmidini aşırı eksprese eden hücrelere bir pipet kullanılarak doğrudan eklenir. Kapsaisin, TRPV1'i aktive edebilir ve hücre dışıCa2+ akışını indükleyebilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig01.jpg">
Şekil 1: Fura-2'nin şematik diyagramı. Fura-2, hücre biyolojisinde yaygın olarak kullanılan, Ca2+ 'ya 1:1 oranında seçici olarak bağlanan ve floresan yayan bir Ca2+ floresan probudur. Asidik bir bileşik olarak oldukça polar yapısı nedeniyle, Fura-2 hücrelere giremez. Hücre geçirgenliğini arttırmak için, Fura-2 /'yi oluşturmak üzere negatif grubu üzerinde asetoksimetil () ile konjuge edilir. Bu modifikasyon ester çözünürlüğünü arttırır ve negatif yükü ortadan kaldırır. Hücrelerin içinde, Fura-2/, esterazlar tarafından Fura-2'ye hidrolize edilir, bu da serbest sitoplazmik Ca2 + ile geri dönüşümlü olarak bağlanabilir. Bağlanma üzerine, maksimum uyarma dalga boyu 380 nm'den 340 nm'ye kayar (Ca2 + ile doyurulduğunda). Yayılan floresan yoğunluğu, kantitatif olarak bağlı Ca2 + konsantrasyonu ile ilişkilidir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig02.jpg"> 
Şekil 2: Primer keratinositlerin sıcaklık tepkisi tespiti. (A) 20x objektif lens altında gözlenen yenidoğan farelerden alınan keratinositlerin fura-2 boyaması. (B,C) Tek hücreli Ca2 + görüntüleme sistemi kullanılarak WT keratinositlerinin (B) ve STIM1 nakavt keratinositlerinin (C) sıcaklık tepkisi. Büyütme: 20x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig03.jpg"> 
Şekil 3: HEK293T hücrelerinde aşırı eksprese edilen STIM1-GFP/Orai1-Dsred'in sıcaklık tepkisi tespiti. (A) FITC kapsamında STIM1-GFP'yi eksprese eden pozitif hücreleri gösteren temsili bir şekil. (B,C) Tek hücreli bir Ca2+ görüntüleme sistemi tarafından tespit edilen ilgili plazmiti ifade eden HEK293T hücrelerinin sıcaklık tepkisi. Büyütme: 20x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67412/67412fig04.jpg"> 
Şekil 4: Tek hücreli Ca2+ görüntüleme kullanılarak ilaç yanıtı tespiti. (A) STIM1 / Orai1'i aşırı eksprese eden HEK293T hücrelerinin SOCE yanıtı. Hücre dışı tampon, bir perfüzyon sistemi kullanılarak Ca2 + içerenden Ca2 + içermeyen hale getirilir. Ca2 + yokluğunda, endoplazmik retikulumdan Ca2 + 'yı tüketmek için CPA eklenir. Hücre dışı tampon daha sonra, mağaza tarafından işletilen Ca2 + girişini temsil eden hücre dışı Ca2 + akışını indüklemek için Ca2 + içeren bir tampon ile değiştirilir. Tek hücreli Ca2+ görüntüleme, bu işlemlerin neden olduğu sitozolik Ca2+ konsantrasyonundaki değişiklikleri dinamik olarak kaydetmek için kullanılır. (B) mRuby'nin TRPV1-mRuby'yi aşırı eksprese eden hücreleri HEK293T, burada mRuby, TRPV1 proteininin transfeksiyon durumunu kontrol etmek için kullanılan bir floresan proteindir. Kapsaisin bir pipet kullanılarak eklenirken, Ca2 + akışı tek hücreli Ca2 + görüntüleme ile kaydedilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67412/67412fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Kalsiyum iyon kanallarının aktivasyonunu incelemek için tek hücreli kalsiyum görüntüleme

Single cell Ca2+ imaging is essential for the study of Ca2+ channels activated by various stimulations like temperature, voltage, native compound and ...

single-cell-calcium-imaging-for-studying-activation-calcium-ion

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Nöron ağları geliştirme spontan aktivite, kalsiyum duyarlı göstergesi boyalar AM ester formları kullanarak ölçülebilir. Nöronal aktivasyon gösteren hücre içi kalsiyum değişiklikler, bir veya iki foton görüntüleme göstergesi floresan geçici değişiklikler olarak algılanır. Bu protokol, gelişimsel bağımlı nöron ağları bir dizi için adapte...

Kortikal Ağları Geliştirme Fonksiyonel Kalsiyum Görüntüleme

Bu video, kalsiyum görüntülemenin arkasındaki kavramları tanıtır ve kalıplanmış agaroz kuyularında bulunan solucanların hızlandırılmış görüntülemesi için örnek bir protokol içerir.

Kalsiyum Görüntüleme: Canlı C. elegans'ta Nöral Aktiviteyi Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

Onun küçük şeffaf gövde, iyi belgelenmiş nöroanatomi ve müsait genetik teknikler ve reaktiflerin bir dizi...

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging&#39;de elegans

Burada, Ca2+ göstergeleri ile yüklü sağlam memeli hücrelerinde floresan mikroskobu kullanarak yerel IP3 aracılı Ca2+ olaylarını görüntüleme tekniklerini ve bu olayların tanımlanmasını ve analizini otomatikleştiren bir algoritma sunuyoruz.

Görüntüleme Yerel Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Kültürlenmiş memeli hücrelerinde sinyaller

Biz bütün hücreli yama-kelepçe kayıtları ve Ca2 + geçişler akut beyin dilimleri içinde nöronal dendrites kaydetmek için iki fotonlu Imaging birleştiren bir yöntem mevcut.

Nöronal Dendrites beyin dilimleri içinde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme

Burada bir protokol için tek tek hücre tiplerinin fare nöromusküler kavşakta nüfus sinyal görüntü kalsiyum mevcut.

Ex Vivo Hücre özgü kalsiyum fare diyafram Üçlü sinaps sinyal görüntüleme

Hücre kalsiyum görüntüleme, benzersiz fonksiyonel imzalar veren kalsiyum geçirgen kanalların / reseptörlerin ekspresyonuna dayanarak, bireysel hücrelerin, kültürdeki karışık popülasyonların ve hatta uyanmış hayvanların dinamik sinyalizasyonunu incelemek için çok yönlü bir metodolojidir.

Kalsiyum Görüntüleme Tekniği ile Nöron-Glia Devresindeki Değişimlerin Görselleştirilmesi

Mevcut yöntemler, kolayca bulunabilen genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerini kullanarak Caenorhabditis elegans'ta in vivo olarak yüksek çözünürlüklü, sub-kompartmanlı kalsiyum görüntüleme için orantılı olmayan bir yaklaşımı tanımlamaktadır.

Nöronal Kalsiyum Kullanımının In Vivo Subsellüler Görüntülemesi

Genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergeleri (GECI), duyusal nöron sinyalinin sağlam, popülasyon düzeyinde bir analizini sağlar. Burada, sıçan trigeminal gangliyon nöron aktivitesinin in vivo GECI görselleştirmesine izin veren yeni bir yaklaşım geliştirdik.

Canlı Olarak Taşınabilir Sıçan Trigeminal Ganglionundaki Duyusal Nöronların Kalsiyum Görüntülemesi

Burada, floresan mikroskobu kullanarak birincil murin ve insan T hücrelerinde Ca2+ mikro alanları olarak bilinen ilk yerel Ca 2+ sinyallerini çözmek için kapsamlı bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, bağışıklık hücreleri içindeki Ca2+ sinyal yolaklarını inceleyen ve işlevlerini daha da çözen araştırmacılar için değerli bir kaynak görevi görür.

Primer T Hücrelerinde İlk Ca2+ Mikro Alanlarının Görüntülenmesi

Öğrenin tek hücreli kalsiyum görüntüleme yöntemiyle Fura-2/AM boyası kullanarak canlı hücrelerde kalsiyum iyon dinamiklerini gerçek zamanlı izlemeyi. Bu teknik TRPV1 kanallarının aktivasyon mekanizmalarını ve ağrı ile sıcaklık algısını anlamak için hücre biyolojisi ve nörobilim araştırmalarında uygulanır.

Kalsiyum iyon kanallarının aktivasyonunu incelemek için tek hücreli kalsiyum görüntüleme

Daha fazla video keşfet