Eucommia ulmoides Kabuğu Özü Kullanılarak Çinko Bazlı Nanomalzemelerin Formülasyonu ve Yara İyileştirme Potansiyelleri

Araştırmamız, biyomühendislik ürünü metal nanopartiküllerin yara iyileşme potansiyelini ortaya çıkarmaya odaklanmaktadır. Bu nanopartiküllerin iyileşme sürecini nasıl etkilediğini ve doku onarımındaki terapötik uygulamalarıyla ilgili temel soruları ele almak için etki mekanizmalarını anlamayı amaçlıyoruz. Doğal polimerler kullanarak çeşitli nano bazlı yara örtülerini başarıyla geliştirdik, çeşitli yara iyileştirici uygulamalar için potansiyellerini gösterdik ve doku onarımında yenilikçi yaklaşımlar geliştirdik.

Bu araştırma, in vivo modellerde potansiyel mekanizmaların tanımlanmasını kolaylaştıracak ve biyouyumlu özelliklere sahip yara iyileştirici materyallerin geliştirilmesine katkıda bulunacak, çeşitli tıbbi uygulamalarda kullanılmak üzere etkinliklerini ve güvenliklerini artıracaktır. Başlamak için, Eucommia ulmoides ağacından toplanan kabuğu makas kullanarak küçük parçalar halinde doğrayın. Kıyılmış kabuk malzemelerini iki kez çift damıtılmış suyla yıkayın.

Daha sonra kabuk parçalarını gölgeli koşullarda 24 saat boyunca 37 santigrat derecede kurutun. 20 gram gölgede kurutulmuş kabuğu 220 mililitre steril, çift damıtılmış su içeren konik bir şişeye aktarın. Ardından şişeyi 130 santigrat derecede 20 dakika ısıtın.

Çözeltinin renginin 10 dakika sonra açık sarıya döndüğünü unutmayın. Daha sonra, daha fazla kullanım için poliizopren içeren ham özü dört santigrat derecede saklayın. İplik benzeri bir yapının oluşumu, ekstraktlarda poliizopren varlığını gösterir.

500 mililitrelik bir şişede 50 mililitre deiyonize suya bir molar çinko nitrat dihidrat ekleyin. Çinko nitrat dihidrat tamamen eriyene kadar manyetik bir karıştırıcı kullanarak çözeltiyi 60 RPM'de sürekli olarak karıştırın. Daha sonra, 15 mililitre Eucommia ulmoides kabuğu özütü, 20 mililitre bir molar çinko nitrat dihidrat çözeltisine damla damla ekleyin.

Kapalı reaksiyon karışımını manyetik bir karıştırıcı üzerine yerleştirin. Açın ve üç saat boyunca dönmeye ayarlayın. Daha sonra, pH'ı dokuza ayarlamak için reaksiyon karışımına damla damla bir normal sodyum hidroksit çözeltisi ekleyin.

Çözelti süt beyazı olana kadar sodyum hidroksit ekleyin, pH'ı dokuzun altında tutun, bu da çinko oksit nanopartiküllerinin oluşumunu gösterir. Daha sonra, sentezlenen Eucommia ulmoides çinko oksit nanopartiküllerini 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve dört santigrat derecede beş dakika boyunca 100 G'de santrifüjleyin. Yıkanmış Eucommia ulmoides çinko oksit nanopartiküllerini bir cam plaka üzerinde toplayın ve bir saat boyunca 45 ila 50 santigrat derecede sıcak hava fırınında kurutun.

Başlamak için, 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğunda 4 insan göbek veni endotel hücresinin gücüne 1 çarpı 10 tohum atın. Plakayı% 5 karbondioksit ve 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin. Sitotoksisite değerlendirmesi için,% 90 birleşen hücrelere 10 mikrolitre çeşitli konsantrasyonlarda Eucommia ulmoides çinko oksit nanopartikülleri ekleyin.

Plakayı% 5 karbondioksit inkübatöründe 37 santigrat derecede 24 saat inkübe edin. İnkübasyondan sonra, hücreleri rahatsız etmeden eski ortamı dikkatlice çıkarın. 90 mikrolitre taze DMEM ortamı içeren her bir oyuğa 10 mikrolitre CCK-8 çözeltisi ekleyin ve plakayı daha önce gösterildiği gibi inkübe edin.

Daha sonra, bir spektrofotometre kullanarak 450 nanometrede CCK-8 çözeltisi ile muamele edilen hücrelerin absorbansını ölçün. % 10 FBS ve% 1 penisilin streptomisin ile desteklenmiş, DMEM içeren 12 oyuklu kültür plakalarında 5 insan göbek veni endotel hücresinin gücüne 1 kez 10 tohum. Plakaları% 5 karbondioksit ve 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin.

200 mikrometre genişliğinde temsili bir yara oluşturmak için steril bir 200 mikrolitre pipet ucu kullanarak hücre tek tabakası boyunca nazikçe bir çizik yapın. Tüm ortamı kuyulardan çıkardıktan sonra, ayrılmış hücreleri çıkarmak için tek tabakayı bir mililitre PBS kullanarak nazikçe yıkayın. Şimdi, kuyucuklara mililitre başına 0, 10 ve 20 mikrogramlık Eucommia ulmoides çinko oksit nanopartikül çözeltilerini,% 10 FBS içeren tam ortam ile birlikte ekleyin.

Plakaları% 5'lik bir karbondioksit inkübatöründe 37 santigrat derecede inkübe edin. Ters çevrilmiş bir mikroskop kullanarak sıfır saat ve 24 saatte çizik yarasının mikro fotoğraflarını elde edin. Burada gösterilen formülü kullanarak yara kapanma yüzdesini hesaplayın.

Eucommia ulmoides çinko oksit nanopartikülleri, 24 saat sonra mililitre başına 50 mikrograma kadar konsantrasyonlarda insan göbek veni endotel hücreleri üzerinde sitotoksisite göstermedi. Mililitre başına 20 mikrogram Eucommia ulmoides çinko oksit nanopartikülleri ile tedavi edilen hücrelerde yara kapanması önemli ölçüde artmıştır ve kontrol grubundaki %16'ya kıyasla 24 saat sonra %81.5 kapanma göstermiştir. Mikroskobik görüntüler, 24 saat sonra kontrole kıyasla mililitre başına 20 mikrogram tedavi grubunda yara boşluğu genişliklerinin azaldığını gösterdi.