Akciğer Adenokarsinomu ile İlişkili Primer Sjögren Sendromu: Potansiyel Ortak Patojenik Mekanizmaların Araştırılması ve Deneysel Doğrulama

Araştırmam, biyoinformatik içgörüler ve deneysel doğrulama yoluyla primer Sjögren sendromu ve adenokarsinomu birbirine bağlayan potansiyel yaygın patojenik mekanizmaları araştırıyor. Bu koşulların nasıl araya girdiğini ve ilişkiye katkıda bulunan temel faktörleri anlamayı amaçlıyorum. Araştırmam, primer Sjögren sendromu ile adenokarsinom arasındaki bağlantıyı anlamadaki boşluğu ele alıyor ve ortak patojenik mekanizmalarını vurguluyor.

Bu içgörü, etkilenen hastalar için gelecekteki tanı ve tedavi stratejilerinden geldi. Gelecekteki araştırmalarda, lenfosit infiltrasyonundan neoplastik proksimal bölgelere ilerlemeyi göstermek için pSS hastalarından pulmoner cerrahi örnekler elde etmek için göğüs cerrahisi ile işbirliği yapmayı umuyoruz Başlamak için, Gene Expression Omnibus veya GEO veritabanını açın ve gen ekspresyon profillerini aramak için anahtar kelime olarak primer Sjögren sendromu ve akciğer adenokarsinomunu kullanın. GEO DataSets veritabanındaki sonuçlara tıklayın ve En İyi Organizmalar bölümünde Homo sapiens'i seçin.

İlgilendiğiniz veri kümesini, ilgili platform bilgileriyle birlikte seçin ve indirin. Daha sonra GeneCard veritabanını açın ve pSS ve LUAD ile ilgili genleri elde etmek için primer Sjögren sendromu ve akciğer adenokarsinomunu anahtar kelime olarak kullanın. Hastalık genlerinin elektronik tablolarını indirin.

R yazılımını kullanarak, 0,05'ten daha düşük ayarlanmış bir P değeri ve 1,2'den büyük veya 0,83'ten daha düşük bir kat değişikliği ile diferansiyel olarak ifade edilen genleri veya DEG'leri tanımlayın ve görselleştirin. Bu veri kümeleri arasındaki gen ekspresyonunu karşılaştırın ve analiz edin. GeneCard veritabanından pSS ve LUAD ile ilgili 20'ye eşit veya daha büyük bir ifade seviyesine sahip genleri seçin.

pSS ve LUAD ile ilişkili DEG'leri hem GEO veritabanından hem de GeneCard veritabanından birleştirin. Venn Şeması paketini R yazılımına kurduktan sonra, pSS ve LUAD ile ilişkili DEG'leri elde edin ve görselleştirin. Metascape web sitesinde, Dosya Seç'e tıklayın ve pSS-LUAD-DEGs'in xlsx formatındaki dosyasını yükleyin.

Hem tür olarak girdi hem de tür olarak analiz için Homo sapiens'i seçin. Özel Analiz'e tıklayın, ardından Zenginleştirme'ye tıklayın ve KEGG yolunu seçin. Diğer seçeneklerin işaretini kaldırın.

Zenginleştirme Analizi'ni tıklatın ve tamamlandıktan sonra Analiz Raporu Sayfası'nı tıklatın. Sonuçları indirmek için Hepsi Bir Arada Zip Dosyası'na tıklayın. _FINAL_GO erişin.

Sonuçları görüntülemek için Enrichment_GO klasöründeki CSV dosyasını açın. R yazılımındaki ggplot2 paketini kullanarak KEGG görselleştirme programını gerçekleştiriniz. Gen ontolojisi veya GO zenginleştirme analizi için, pSS-LUAD-DEG'lerin metin biçimi listesini R'ye aktarın. GO zenginleştirme analizi ve sonuç görselleştirmesi için Küme Profil Oluşturucusu ve Zenginleştirme Grafiği paketlerini çalıştırın.

Analizde istatistiksel anlamlılığı 0,05'ten daha düşük bir ayarlanmış P değerine ayarlayın. STRING veritabanına erişin ve Gözat'a tıklayın ve pSS-LUAD-DEGs dosyasını yükleyin. Organizmalar'da Homo sapiens'i seçin ve Ara'yı tıklayın.

Devam'a tıkladıktan sonra, sonuçlar mevcut olduğunda Ayarlar'a tıklayın. Temel Ayarlar ve gereken en düşük etkileşim puanı'nın altında yüksek güvenilirlik 0,7'yi seçin. Gelişmiş Ayarlar'da ağdaki bağlantısı kesilen düğümleri gizle seçeneğini işaretleyin ve ardından Güncelle'yi tıklayın.

Protein-protein etkileşimi veya PPI ilişkisi metnini TSV formatında indirmek için başlık çubuğundaki Dışa Aktarmalar'a tıklayın. Cytoscape 3.7.1 yazılımında, PPI ağını oluşturmak için TSV formatındaki dosyayı içe aktarmak için Dosya'ya ve ardından İçe Aktar ve Dosyadan Ağ'a tıklayın. Ağdaki topolojik parametreleri analiz etmek ve kontrol panelindeki Stil çubuğu aracılığıyla düğüm boyutunu ve rengini optimize etmek için NetworkAnalyzer aracını kullanın.

Menü çubuğunda Araçlar'ı ve Ağı Analiz Et'i seçin. Tablo panelinde, bileşenleri dereceye göre azalan düzende sıralamak için Derece'ye tıklayın. Hub genlerinin tanımlanması ve doğrulanması için, hub genlerinin metin biçimindeki listesini PROC paketi ile yüklenen R'ye aktarın.

Hub genlerinin alıcı çalışma karakteristiğini veya ROC eğrilerini çizin ve ROC eğrisi değerlerinin altındaki alanı hesaplayın. Analizden sonra pSS DEG'ler ve LUAD DEG'ler arasında toplam 233 paylaşılan DEG, bir Venn diyagramı kullanılarak görselleştirildi. pSS LUAD DEG'leri için ilk 10 önemli KEGG yolu tanımlandı ve esas olarak PI3K-Akt, MAPK ve sitokin-sitokin reseptör etkileşimleri dahil olmak üzere metabolik yollarla ilişkilendirildi.

pSS LUAD DEG'lerin GO zenginleştirme analizi, virüse yanıt ve doğuştan gelen bağışıklık tepkisi, hücre bileşen kategorileri ve sitokin reseptörü bağlanması ve aktivitesi gibi moleküler işlevler dahil olmak üzere önemli biyolojik süreçleri ortaya çıkardı. PPI ağı, 99 düğüm ve 466 kenardan oluşuyordu ve STAT3, STAT1 ve TP53'ü en üst hub genleri olarak tanımladı. TNF, IL6 ve EGFR dahil olmak üzere PPI ağında daha yüksek dereceye sahip ilk 20 gen görselleştirildi.

Başlamak için, primer Sjögren sendromu ve akciğer adenokarsinomunun birlikte ortaya çıkmasındaki inflamatuar yolları belirlemek için biyoinformatik analiz yapın. Hayvan modelini geliştirmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi, karnı yukarı bakacak, başı yukarıda ve kuyruğu 45 derecelik bir açıyla indirilmiş küçük bir hayvan tutucuya yerleştirin. Farenin üst kesici dişlerinin etrafından dolaşmak, onları yukarı doğru çekmek için ince iplik kullanın ve farenin ağız boşluğunu tamamen ortaya çıkarmak için ipliği hayvan tutucusundaki bir vidaya sabitleyin.

Soğuk ışık lambasını açtıktan sonra, farenin dilini nazikçe çıkarmak ve glottisi tamamen ortaya çıkarmak için forseps kullanın. Fare trakeasına 18 gauge venöz kalıcı bir iğne yerleştirin ve iğne çekirdeğini dışarı çekin. İğnenin dış ucuna bir pamuk ipliği yerleştirin ve iplik farenin göğüs hareketleriyle hareket ettiğinde başarılı bir şekilde yerleştirildiğini onaylayın.

Bir mililitrelik bir şırınga kullanarak, 0.2 mililitre hava, ardından 0.1 mililitre PM 2.5 süspansiyonu ve son olarak 0.2 mililitre daha hava aspire edin. Karışımı 18 gauge venöz kalıcı iğne ile trakeaya enjekte edin. Kalıcı iğneyi dışarı çektikten sonra, hayvan tutucuyu dik olarak sabitleyin ve PM 2.5 süspansiyonunu akciğerlere eşit olarak dağıtmak için saat yönünde ve saat yönünün tersine 30 kez döndürün.

Boğulmayı önlemek için farenin boynunu düz bir şekilde uzatın ve yan yatırın ve iyileşmesine izin verin. 29 gün sonra, ötenazi yapılmış fareyi temiz bir diseksiyon tahtası üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Makas ve forseps kullanarak ventral, göğüs ve boyun bölgelerini kaplayan cildi ve kasları çıkarın.

Göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için göğüs boşluğunun her iki yanındaki kaburgaların kenarları boyunca kesiler yapın. Akciğer loblarının incelenmesi için yeterince geniş bir açıklık oluşturmak için köprücük kemiğini kesin. Sternum ve kaburgalardan çeneye uzanan boyun kaslarını çıkarın.

Kaburgaların ön kenarının altına makas sokun ve trakeayı kaplayan kemikli kısmı çıkarmak için her iki tarafta kesiler yapın. Trakeayı çenenin yakınında forseps ile kavrayın ve forsepsin üzerine yerleştirilmiş makas kullanarak tam bir enine kesi yapın. Daha sonra trakeayı forseps ile nazikçe yukarı çekin, tüm torasik doku vücuttan çıkarılana kadar ventral doku bağlantılarını makasla kesin.

Akciğerleri düz bir şekilde yatırın ve yüzeyi tuzlu su ile durulayın. Kuruduktan sonra, gelecekteki biyokimyasal kullanım için eksi 80 santigrat derecede saklamak için dokuyu kriyotüplere ayırın.