Name: Brassicada Hipoksi Toleransını İncelemek için Bir Lahana Protoplast Sisteminin Geliştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Keşfedin lahana protoplast sistemi kullanarak Brassica'da hipoksi toleransının moleküler mekanizmalarını. Bu yöntem, sel stresine dayanıklı yeni lahana çeşitlerinin geliştirilmesine katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Taşkın tolerans mekanizmalarını incelemek için verimli lahana protoplast sistemi

<ol><li>Tanoue, M., Hirabayashi, Y., Ikeuchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global-scale+river+flood+in+the+last+50+years%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Global-scale river flood in the last 50 years.</a> Sci Rep. 6 (1), 36021(2016).</li>
<li>Voesenek, L. aC. J., Bailey-Serres, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flood+adaptive+traits+and+processes%3A+An+overview%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Flood adaptive traits and processes: An overview.</a> New Phytol. 206 (1), 57-73 (2015).</li>
<li>Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+transduction+in+maize+and+Arabidopsis+mesophyll+protoplasts%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Signal transduction in maize and Arabidopsis mesophyll protoplasts.</a> Plant Physiol. 127 (4), 1466-1475 (2001).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+transient+protoplast+system+for+analyzing+defense+gene+expression+and+protein-protein+interactions+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">A highly efficient transient protoplast system for analyzing defense gene expression and protein-protein interactions in rice.</a> Mol Plant Pathol. 7 (5), 417-427 (2006).</li>
<li>Yoo, S. -D., Cho, Y. -H., Sheen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+mesophyll+protoplasts%3A+A+versatile+cell+system+for+transient+gene+expression+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis mesophyll protoplasts: A versatile cell system for transient gene expression analysis.</a> Nat Protoc. 2 (7), 1565-1572 (2007).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+protoplast+isolation%2C+transformation%2C+and+its+application+in+sugarcane+%28Saccharum+spontaneum+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+J%22%5BJournal%5D)">Optimization of protoplast isolation, transformation, and its application in sugarcane (Saccharum spontaneum L).</a> Crop J. 9 (1), 133-142 (2021).</li>
<li>Adedeji, O. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+protocol+for+efficient+protoplast+isolation+and+transient+gene+expression+in+carnation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Hortic%22%5BJournal%5D)">Optimization of protocol for efficient protoplast isolation and transient gene expression in carnation.</a> Sci Hortic. 299, 111057(2022).</li>
<li>Lin, H. -Y., Chen, J. -C., Fang, S. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protoplast+transient+expression+system+to+enable+molecular%2C+cellular%2C+and+functional+studies+in+Phalaenopsis+orchids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">A protoplast transient expression system to enable molecular, cellular, and functional studies in Phalaenopsis orchids.</a> Front Plant Sci. 9, (2018).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+mesophyll+protoplast+isolation+and+PEG-mediated+transient+expression+system+in+eggplant%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Hortic%22%5BJournal%5D)">A highly efficient mesophyll protoplast isolation and PEG-mediated transient expression system in eggplant.</a> Sci Hortic. 304, 111303(2022).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+protoplast+isolation+system+for+functional+gene+expression+and+characterization+using+petals+of+Camellia+oleifera%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Development of a protoplast isolation system for functional gene expression and characterization using petals of Camellia oleifera.</a> Plant Physiol Biochem. 201, 107885(2023).</li>
<li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+isolation+of+Populus+mesophyll+protoplasts+and+its+application+in+transient+expression+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Highly efficient isolation of Populus mesophyll protoplasts and its application in transient expression assays.</a> PLOS One. 7 (9), e44908(2012).</li>
<li>Gottschald, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TIAR+and+TIA-1+mRNA-binding+proteins+co-aggregate+under+conditions+of+rapid+oxygen+decline+and+extreme+hypoxia+and+suppress+the+HIF-1%CE%B1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">TIAR and TIA-1 mRNA-binding proteins co-aggregate under conditions of rapid oxygen decline and extreme hypoxia and suppress the HIF-1α pathway.</a> J Mol Cell Biol. 2 (6), 345-356 (2010).</li>
<li>Cho, H. -Y., Chou, M. -Y., Ho, H. -Y., Chen, W. -C., Shih, M. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethylene+modulates+translation+dynamics+in+Arabidopsis+under+submergence+via+GCN2+and+EIN2%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Ethylene modulates translation dynamics in Arabidopsis under submergence via GCN2 and EIN2.</a> Sci Adv. 8 (22), eadm7863(2022).</li>
<li>Boudreau, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitation+light+dose+engineering+to+reduce+photo-bleaching+and+photo-toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Excitation light dose engineering to reduce photo-bleaching and photo-toxicity.</a> Sci Rep. 6 (1), 30892(2016).</li>
<li>Shcherbakova, D. M., Cox Cammer, N., Huisman, T. M., Verkhusha, V. V., Hodgson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+multiplex+imaging+and+optogenetics+of+Rho+GTPases+enabled+by+near-infrared+FRET%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct multiplex imaging and optogenetics of Rho GTPases enabled by near-infrared FRET.</a> Nat Chem Biol. 14 (6), 591-600 (2018).</li>
<li>Jiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+sulfite+is+a+potential+hypoxia+inducer+that+mimics+hypoxic+stress+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Inorg+Chem%22%5BJournal%5D)">Sodium sulfite is a potential hypoxia inducer that mimics hypoxic stress in Caenorhabditis elegans.</a> J Biol Inorg Chem. 16 (2), 267-274 (2011).</li>
<li>Lin, C. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SUB1A-1+anchors+a+regulatory+cascade+for+epigenetic+and+transcriptional+controls+of+submergence+tolerance+in+rice%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS+Nexus%22%5BJournal%5D)">SUB1A-1 anchors a regulatory cascade for epigenetic and transcriptional controls of submergence tolerance in rice.</a> PNAS Nexus. 2 (7), pgad229(2023).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bis-molybdopterin+guanine+dinucleotide+modulates+hemolysin+expression+under+anaerobiosis+and+contributes+to+fitness+in+vivo+in+uropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bis-molybdopterin guanine dinucleotide modulates hemolysin expression under anaerobiosis and contributes to fitness in vivo in uropathogenic Escherichia coli.</a> Mol Microbiol. 116 (4), 1216-1231 (2021).</li>
<li>Liu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+light+and+hypoxia-induced+gene+zmPORB1+determines+tocopherol+content+in+the+maize+kernel%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The light and hypoxia-induced gene zmPORB1 determines tocopherol content in the maize kernel.</a> Sci China Life Sci. 67 (3), 435-448 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2- (N-morfolino) etansülfonik Asit (MES)</td> <td>PhytoTech Labs</td><td>M825</td><td>Enzim çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>228 lahana tohumu</td><td>Takii & Co., Ltd. (Kyoto, Japonya)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>50 mL Konik Tüp</td><td>SPL Yaşam Bilimleri</td><td>50050</td><td>Enzim çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>6 oyuklu doku kültürü plakası</td><td>Alpha Plus</td><td>16106</td><td>Protoplast inkübasyonu için</td></tr><tr><td>70 &mu; m hücreli süzgeç</td><td>Sorfa&nbsp;</td><td>SCS701</td><td>Protoplast filtrasyonu için</td></tr><tr><td>9 cm Petri kabı</td><td>Alpha Plus</td><td>16001</td><td>Enzimatik sindirim için</td></tr><tr><td>Anaerobik kavanoz</td><td>HIMEDIA</td><td>Anaerobik Kavanoz 3,5 L</td><td>Hipoksi tedavisi için&nbsp;</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td>W5 çözeltisi hazırlama ve kültür plakası kaplaması için</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>JTbaker</td><td>131301</td><td>W5 çözeltisi ve PEG çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Selülaz R10</td><td>Yakult</td><td></td><td>Enzim çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Desiccator</td><td>Tarsons&nbsp;</td><td>402030</td><td>Vakum sızması için</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Bioshop</td><td>GLU501</td><td>W5 çözeltisinin hazırlanması için</td></tr><tr><td>Çözünmüş oksijen ölçer</td><td>Thermo Scientific</td><td>Orion Star A223</td><td>Oksijen ölçümü için</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1902</td><td>Enzim çözeltisi, PEG çözeltisi ve MMG çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Çift Lusiferaz Raportör Test Sistemi</td><td>Promega</td><td>E1960</td><td>Çift lusiferaz raportör testi için</td></tr><tr><td>EC-Oxyrase</td><td>Oxyrase Inc.</td><td>EC-0005</td><td>Hipoksi tedavisi için</td></tr><tr><td>Fuyudori lahana tohumları</td><td>Kobayashi Seed Co., Ltd. (Kakogawashi, Japonya)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Yüksek Hızlı soğutmalı santrifüj</td><td>Hitachi</td><td>CR21GIII</td><td>Protoplast hasadı için</td></tr><tr><td>Makrozyme R10 &nbsp;</td><td>Yakult</td><td></td><td>Enzim çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Alfa Aesar</td><td>12315</td><td>MMG çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td>Hitachi</td><td>CT15RE</td><td>Protoplast hasadı için</td></tr><tr><td>Mikroplaka</td><td>Greiner</td><td>655075</td><td>Çift lusiferaz raportör tahlili için</td></tr><tr><td>Mikroplaka Okuyucu</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>SpectraMax Mini</td><td> Çift lusiferaz raportör testi</td></tr><tr><td>Millex 0.22 & mu; m şırınga filtresi</td><td>Merck</td><td>SLGP033RS</td><td>Enzim çözeltisi hazırlama için</td></tr><tr><td>Yağsız Vakum Pompası</td><td>Rocker&nbsp;</td><td>Vakum sızması için</td> <td>Rocker 300</td></tr><tr><td>OxyFluor</td><td>Oxyrase Inc.</td><td>OF-0005</td><td>Hipoksi tedavisi için</td></tr><tr><td>Oksijen emici paketi</td><td>Mitsubishi Gas Chemical Company</td><td>AnaeroPack, MGCC1</td><td>Hipoksi tedavisi için</td></tr><tr><td>Oksijen konsantratörü</td><td>SON DERECE MÜKEMMEL</td><td>AII-X</td><td>W5 çözeltisinde oksijen köpürmesi için</td></tr><tr><td>Bitki substratı</td><td>Klasmann-Deilmann</td><td>Potgrond H substratı</td><td>Lahana fidelerinin hazırlanması için</td></tr><tr><td>Plazmid Midi Kiti</td><td>QIAGEN</td><td>12145</td><td>Transfeksiyon dereceli plazmit DNA'nın saflaştırılması için&nbsp;</td></tr><tr><td>Polietilen Glikol 4000</td><td>Fluka</td><td>81240</td><td>Protoplast transfeksiyonu için</td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>J.T.Baker</td><td>304001</td><td>W5 çözeltisinin hazırlanması için</td></tr><tr><td>Jrazor blade</td><td>Gillette</td><td></td><td>Lahana yaprağı şeritlerinin hazırlanması için</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td></td><td>Bioshop SOD002</td><td>W5 çözeltisinin hazırlanması için</td></tr><tr><td>Sodyum sülfit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0505</td><td>Hipoksi tedavisi için</td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Yihder</td><td>BU-240D</td><td>Enzim çözeltisi hazırlama için</td></tr></tbody></table>

brassica'da hipoksi toleransını İncelemek için bir lahana protoplast sisteminin geliştirilmesi

Development of a Cabbage Protoplast System for Studying Hypoxia Tolerance in Brassica

Bu çalışma, lahana protoplastlarını kullanan geçici bir ifade sistemini başarıyla geliştirdi (iş akışı için Şekil 1'e bakın). Protoplastlar, selülaz/maerozim sindirimi ve koyu vakum infiltrasyonu kullanılarak ticari lahana çeşitleri 'Fuyudori' ve '228'den uygun büyüklükteki 2 ila 3 haftalık lahana gerçek yapraklarından (Şekil 2A) izole edildi (Şekil 2B,C). İnkübasyon sırasında batık protoplastların yaşadığı hipoksik koşulları hafifletmek için, W5 çözeltisi, bir oksijen makinesine bağlı bir hava taşı fıskiyesi kullanılarak oksijenlendirildi (Şekil 2D). Bu işlem, W5 çözeltisindeki çözünmüş oksijen konsantrasyonunu 7.84 mg· L-1 ± 0.05 mg· L-1 ila 29.18 mg · L-1 ± 0.43 mg · 5 dakikalık oksijen köpürmesinden sonra L-1. İzolasyon işlemini takiben, protoplastların verimi 'Fuyudori' için 1.04 x 107 ve bir gece boyunca sindirim süresinden sonra '228' için 4.00 x 106 protoplast·g-1 taze ağırlık idi (Şekil 2E). Daha sonra, GFP, PEG aracılı transfeksiyon yönteminin dönüşüm verimliliğini değerlendirmek için bir raportör gen olarak kullanıldı, bu da lahanada protoplast transfeksiyon verimliliğinin her iki çeşitte de @'ın üzerinde olduğunu gösterdi (Şekil 2F), böylece bu sistemin uygulanabilirliğini doğruladı.
Ayrıca, lahana anaerobik solunum yanıtı genlerinin, BoADH1p::Luc ve BoSUS1Lp::Luc vektörlerinin (Şekil 3A) promotör yapıları, çeşitli tedavilerin hipoksik indüksiyon etkilerini değerlendirmek için raportör olarak lahana protoplastlarına dahil edildi. Bu geçici ekspresyon modeli sistemine çeşitli oksijen ayarlama işlemleri de uygulanmıştır. Sonuçlar, sodyum sülfit hariç tüm oksijen süpürücü tedavilerin, lahana protoplastlarında başarılı bir şekilde hipoksi tepkisi oluşturduğunu göstermiştir (Şekil 3B). Spesifik olarak, BoADH1'in promotör aktivitesi, EC-Oksirase ve OxyFluor ile tedaviyi takiben kontrole kıyasla sırasıyla yaklaşık 2.6 kat ve 3.2 kat artmıştır ve özellikle oksijen emici paket tedavisi ile 7.0 kattan fazla artmıştır (Şekil 3B). Benzer şekilde, BoSUS1L promotör aktivitesi, EC-Oksirase ve OxyFluor tedavisi ile sırasıyla yaklaşık 1.7 kat ve 1.8 kat artarken, oksijen emici paket tedavisi 5.6 katın üzerinde önemli bir artışa neden oldu (Şekil 3B). Bu sonuçlar, oksijen emici paketinin, bu lahana protoplast deney sisteminde hipoksik bir ortam yaratmada üstün etkinlik gösterdiğini göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig01.jpg"> 
Şekil 1: Protoplast izolasyon iş akışının grafiksel gösterimi. Bu şekil, protoplastların lahana yaprağı dokusundan izole edilmesinde yer alan adım adım süreci göstermektedir. İş akışı, prosedürün net bir şekilde anlaşılmasını sağlamak için görsel olarak tasvir edilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig02v2.jpg"> 
Şekil 2: Lahananın yaprak dokusundan protoplast izolasyonu. (A) Ticari lahana çeşitleri 'Fuyudori' ve '228'in önerilen büyüme aşamasında görünümü gösterilmiştir. 2 yapraklı aşamadaki lahanaların ikinci, tamamen genişlemiş gerçek yaprakları (ok ucu ile gösterilir) protoplast izolasyonu için seçilir. Ölçek çubuğu: 2 cm. (B) Lahana yaprağı şeritlerinin vakumlu sızma işlemi için bir vakum pompası ve desikatör kullanılır ve enzimatik sindirimden önce 30 dakikalık bir sızma gerçekleştirilir. (C) Enzimatik sindirim sırasında lahana yaprağı şeritlerinin durumu tasvir edilmiştir. Yaprak dokusunun tam sindirimi toplam 4-16 saat gerektirir. Ölçek çubuğu: 3 cm. (D) Fotoğraflar, W5 çözeltisindeki çözünmüş oksijen konsantrasyonunu artırmak için bir hava taşına bağlı bir oksijen konsantratörünün kullanımını göstermektedir. Ölçek çubuğu: 5 cm. (E) Hem 'Fuyudori' hem de '228' lahana çeşitlerinden gram taze ağırlık (FW) başına 4.00 x 106'dan fazla mezofil protoplastı elde edildi ve mikroskop altında gözlendi. Ölçek çubuğu: 200 μm. (F) Yapısal olarak ifade edilen bir GFP raportörü kullanılarak her iki lahana genotipinden protoplastların transfeksiyon verimliliğinin @'ın üzerinde olduğu gösterilmiştir. Ölçek çubuğu: 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig02largev2.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67444/67444fig03.jpg"> 
Şekil 3: Oksijen eksikliği olan koşullar altında lahana protoplastlarının hipoksi tepkisi. (A) Hipoksi yanıtı gen yapıları, BoADH1 ve BoSUS1L destekleyicileri, 'Fuyudori' lahana protoplastlarındaki hipoksi tepkisini değerlendirmek için raportör olarak kullanılır. (B) Toplam 5 μg raportör plazmit, 4 saat boyunca hipoksi tedavilerine maruz kalmadan önce oksijen kabarcıklı bir W5 çözeltisi içinde inkübe edilen 'Fuyudori' lahana protoplastlarına transfekte edilir. W5 çözeltisine EC-oksiraz (0.6 birim · mL-1), OxyFluor (0.6 birim · mL-1) ve sodyum sülfit (1 g · mL-1) eklenerek inkübasyon sırasında oksijen seviyeleri azaltılır. Oksijen emici paket işlemi, 3,5 L'lik anaerobik bir kavanoza iki oksijen emici torba yerleştirilerek gerçekleştirilir. "CK" grubu, herhangi bir hipoksi tedavisi olmayan kontrol grubunu temsil eder. Tedaviden sonra, protoplastlar ikili lusiferaz testi için hasat edilir. Her değer, n = 4 ile ± SD'nin ortalamasını temsil eder. Farklı harfler, LSD post-hoc testi ile tek yönlü bir ANOVA'ya dayalı olarak önemli farklılıkları (P &lt; 0.05) gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/67444fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Tablo 1: Enzim çözeltisi, W5 çözeltisi ve MMG çözeltisinin hazırlanması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/Table%201.xlsx" target="_blank">Bu Tabloyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: Protoplast transfeksiyonu için plazmid detayları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67444/Plasmids.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Brassica'da Hipoksi Toleransını İncelemek için Bir Lahana Protoplast Sisteminin Geliştirilmesi

As climate change brings more heavy rainfall, cabbage, a key Brassicaceae vegetable, faces significant yield losses due to flooding-induced hypoxia ...

development-cabbage-protoplast-system-for-studying-hypoxia-tolerance

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video 14 günlük fide Arabidopsis dokuları bozulmadan protoplast izole etmek için bir prosedür gösterir. Izole protoplast en az 96h bozulmadan kalır ve bir aylık olgun bitkilerin yerine fide izole olduğunu göz önüne alındığında, bu yordamı sağlam protoplast gerektiren testleri hızlandırır.

14 gün eski Fideler Dokular protoplast izolasyonu Arabidopsis thaliana</em

Biz stoma farklılaşma belgeleyen, gelişme birkaç gün içinde epidermis konfokal görüntüleme için bitki kotiledon hareketsiz odası slaytlar ve medya kullanarak bir protokol açıklar. Fluorofor etiketli proteinlerin hücre bölünmesi ve hücre tipi farklılaşması esnasında olası rollerini anlamayı arttırıyor, ifade ve hücre içi lokalizasyonu dinamik izlenebilir.

Uzun süreli, yüksek çözünürlüklü Konfokal Time Lapse Görüntüleme<em&gt; Arabidopsis Kotiledon</emÇimlenme sırasında&gt; Epidermis

Bu makalede, tropik yanıtı sırasında plasmodesmal geçirgenliği ve oksin gradyanı kontrol eden genlerin taranması için yöntemler açıklanmaktadır. Bu hipokotil içinde tropik yanıtın derecesi ölçümü içerir   Arabidopsis thaliana ve 8-hydroxypyrene-1,3,6-trifülfonik asit (HPTS) yükleme ve nihayet kaloz seviye değerlendirme ile plasmodesmal geçirgenliği kontrol edilmesi.

Bir Strateji Tropic Tepkisi kaloz aracılı Plasmodesmal Gating Rolü doğrulamak için

Burada stres altında izole kloroplastların içine protein ithalat incelemek için yeni bir yöntem tarif. yöntemi hızlı ve basittir ve kloroplast protein alma için farklı stres koşullarında sonuçlarını ve ilgili düzenleyici mekanizmaları incelemek için uygulanabilir.

Stresli bitkilerden izole edilen kloroplastlarda içine Protein İthalat analizi

Burada, yüksek numerik diyafram açıklığı hedefleri ve daldırma ortamı olarak perflorodekalin kullanılarak 3 güne kadar kök ve hipokotil gelişiminin yüksek çözünürlüklü konfokal zaman atlamalı görüntülemesi için basit bir teknik sunulmuştur.

Kök ve Hipokotil Gelişimin Uzun Süreli Konfokal Görüntülemesi için Basit Bir Oda

Bu iletişim kuralının amacı Arabidopsis thaliana fidan cotyledons içindeki kümelenmiş stoma bantlı daldırma tedavi şeker içeren orta solüsyonu tarafından teşvik ve kloroplast gibi hücre içi yapılar dikkat göstermektir ve confocal kullanarak kümelenmiş guard hücrelerdeki mikrotübüller mikroskobu lazer.

Kümelenmiş stoma bantlı şeker çözüm daldırma tedavisinde Arabidopsis thaliana fidan tarafından için bir indüksiyon sistemi

Mikropsuz Napa lahanaları yetiştirme yöntemi, araştırmacıların tek mikrobiyal türlerin veya çok türlü mikrobiyal toplulukların lahana yaprağı yüzeylerinde nasıl etkileşimde bulunduklarını değerlendirmelerini sağlar. Steril bir sebze özü de sebze fermantasyon sırasında toplum kompozisyon vardiya ölçmek için kullanılabilir sunulmaktadır.

Fillosferde ve Bitkisel Fermantasyonda Mikrobiyom Montajı Nın İncelenmesi için Gnotobiyotik Sistem

Klorofil floresansı kullanılarak düşük CO2 ile muamele edildikten sonra bitkilerde fotosentetik verimlilikteki değişiklikleri ölçmek için bir yaklaşım tanımladık.

Fotorespiratuar Mutantlarda Fotosentetik Etkinliğin Klorofil Floresan Analizi ile Değerlendirilmesi

Mevcut protokol, Plasmodiophora brassicae tarafından indüklenen safra kesesi histolojik gözlemi için optimize edilmiş bir yöntemi tanımlamaktadır. Hipokotillerin vibratom kesitleri, hastalığın ilerlemesi sırasında transkripsiyon faktörlerinin ve fitohormonların tutulumunu incelemek için floresan görüntülemeden önce temizlenir. Bu protokol, reçine gömme sınırlamalarının üstesinden gelerek floresan proteinlerinin planta görselleştirmesini sağlar.

Gen İfadesindeki Değişiklikleri ve Plasmodiophora brassicae'ye Fizyolojik Yanıtları Görselleştirmek için Temizleme ve Floresan Mikroskopisinin Birleştirilmesi

Protokol , Arabidopsis birincil çiçeklenme sapları ve Brassica napus hipokotilleri kullanılarak tüylü kök indüksiyonunu açıklar. Tüylü kökler kültürlenebilir ve transgenik bitkileri yenilemek için eksplant olarak kullanılabilir.

Arabidopsis thaliana ve Brassica napus'ta Tüylü Kök Dönüşümü ve Rejenerasyonu

Tek ve birleşik ısı, kuraklık ve su basması tedavilerine morfolojik ve fizyolojik yanıtları belirlemek için görüntü tabanlı bir fenotipleme protokolü tasarladık. Bu yaklaşım, erken, geç ve geri kazanım tepkilerinin tüm tesis düzeyinde, özellikle yer üstü kısımlarda tanımlanmasını sağladı ve birden fazla görüntüleme sensörünün kullanılması gerekliliğini vurguladı.

Patateste Tek ve Kombine Streslere Morfolojik ve Fizyolojik Tepkileri Belirlemek için Yüksek Verimli Görüntü Tabanlı Fenotipleme

Keşfedin lahana protoplast sistemi kullanarak Brassica'da hipoksi toleransının moleküler mekanizmalarını. Bu yöntem, sel stresine dayanıklı yeni lahana çeşitlerinin geliştirilmesine katkı sağlar.

Brassica'da Hipoksi Toleransını İncelemek için Bir Lahana Protoplast Sisteminin Geliştirilmesi

Daha fazla video keşfet