Sitrik Asit Solunması Yoluyla Öksürük Aşırı Duyarlılığı Olan Bir Fare Modelinin Kurulması

Kronik öksürük, yaşam kalitesini önemli ölçüde bozarak bası bir görünüme ve önemli bir ekonomik yüke neden olur. Öksürüğün uygunluğuna, özellikle de öksürük aşırı duyarlılığının mekanizmasına odaklanıyoruz. Kronik öksürük mekanizması hakkında daha fazla çalışma için kullanılacak öksürük aşırı duyarlılığına sahip bir fare modeli oluşturduk. Diğer hayvan modelleriyle karşılaştırıldığında, özellikle kobaylar, bakımı daha kolay, daha uygun maliyetli ve genetik manipülasyona uygun. Protokolümüzün kullanımı basittir. Modelin kontrast oluşturması daha kolaydır. MA daha uygundur. Bu model, kronik öksürük için mekanizma ve potansiyel yeni tedaviler hakkında daha fazla çalışma için de değerli olacaktır.

[Ekran Okuyucusu] Başlamak için, fareleri her biri ultrasonik bir nebülizöre bağlı iki bağımsız odaya yerleştirin. Model grubunu 0.1 molar sitrik asit aerosolüne ve kontrol grubunu %0.9 normal tuzlu su aerosolüne maruz bırakın. Atomizasyon hızını dakikada maksimum üç mililitre değerine ayarlayın ve maruz kalmayı iki hafta boyunca günde iki saate ayarlayın. Her seanstan sonra fareleri kendi kafeslerine geri koyun. Öksürük hassasiyetini ölçmek için non-invaziv tüm vücut pletismografi sistemini kurun. Odaları, akış dönüştürücülerini, önyargı akışını ve diğer bileşenleri bağlayın. Doğru ölçümleri sağlamak için Kalibre Et düğmesine tıklayarak sistemi kalibre edin. Ardından, fareler için sistem yazılımında yeni bir öksürük çalışması oluşturun. Çalışma parametrelerini, iklimlendirme için bir dakika, yanıt süresi için 10 dakika ve kimyasal çözelti iletimi için 10 dakika izin verecek şekilde yapılandırın. Bundan sonra, her bilinçli fareyi ayrı odalara yerleştirin ve oda başına yalnızca bir fare olmasını sağlayın. Ardından, prosedür başladıktan sonra öksürük olaylarının sayısını kaydetmek için nebülizöre normal salin, sitrik asit veya kapsaisin gibi uygun kimyasal çözeltiden bir mililitre ekleyin. Aletleri hava yolu aşırı duyarlılığı ölçümü için hazırlayın. Fareler için sistem yazılımında bir doz yanıt çalışması oluşturun. Ölçüm parametrelerini ve görev dizisini yapılandırın. Alışma için bir dakika, metakolin iletimi için 30 saniye, yanıt süresi için üç dakika ve kurtarma için bir dakika. Her bilinçli fareyi ayrı odalara yerleştirin ve oda başına yalnızca bir fare olduğundan emin olun. Ardından, nebülizöre 50 mikrolitre PBS veya metakolin ekleyin ve çalışmayı başlatın. Artan metakolin konsantrasyonlarına yanıt olarak bronkokonstriksiyonu gösteren Penh değerini kaydedin. Öksürük duyarlılığı model grubunda bir hafta sonra önemli ölçüde artmış ve maruziyet süresi boyunca devam etmiştir. Çalışma sırasında ne modelde ne de kontrol grubunda mortalite gözlenmedi. Maruziyetten sonra, spontan öksürük olaylarının sayısı model grubunda kontrol grubuna göre anlamlı derecede yüksekti. Normal salin, sitrik asit ve kapsaisin tarafından indüklenen öksürük duyarlılığı da maruziyetten sonra model grubunda anlamlı olarak daha yüksekti. Hava yolu aşırı duyarlılığı, modellemeden sonra anlamlı bir fark olmaksızın iki grup arasında karşılaştırılabilir kaldı. Başlamak için, ötenazi uygulanmış farenin orbital sinüsünden kanı 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne toplayın. Tüpü buzun üzerine yerleştirin, kanı 3000 G'de dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı toplamak için bir pipet kullanın ve alikot edin. Ardından, trakeayı ortaya çıkarmak için göğsü açın ve trakeaya 22 gauge kalıcı bir iğne sokun. Trakeayı 0,5 mililitre önceden soğutulmuş PBS ile üç kez lavaj yapın ve bronkoalveoler lavaj sıvısını toplayın. Daha sonra, toplanan sıvıyı 500 G'de dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı toplayın, ayırın ve -80 santigrat derecede saklayın. Peleti 100 mikrolitre PBS'de tekrar süspanse edin. Akciğerleri açığa çıkarmak için göğsü açın ve akciğer dokularını dikkatlice çıkarın. Toplanan akciğer dokularını kriyojenik şişelere yerleştirin. Bronkoalveoler lavaj sıvısında toplam inflamatuar ve diferansiyel hücre sayımlarında gruplar arasında anlamlı fark gözlenmedi.