Name: Yerçekimi ve Ev Yapımı Mini Biyoreaktörler Altında Düşük Yapışkan Koşullar Kullanılarak Çeşitli Kondrositlerden Sferoidlerin Üretilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T13:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Öğrenin, iPSC'lerden kondrositik sferoidler üretmek için yerçekimi ve ev yapımı mini biyoreaktörlerle düşük yapışkan koşulları kullanmayı. Bu yöntem, kronik eklem hastalıklarında kıkırdak onarımı için hücre bazlı tedavileri geliştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma, LOPUKHIN FRCC PCM Etik Kurulu tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır (9 Nisan 2019 tarihli 2019/02 sayılı protokol). Tüm donör örnekleri Helsinki Bildirgesi ilkelerine uygun olarak elde edildi. Tüm katılımcılardan ve/veya yasal vasilerinden bilgilendirilmiş onam alındı.
NOT: Protokol boyunca steril tekniği koruyun. Tüm kültür ortamlarını ve çözeltilerini hücrelere veya sferoidlere uygulamadan önce 37 °C'ye ısıtın. Hücreleri bir CO2 inkübatöründe 37 ° C'de,% 5 CO2 % 80 nem ile yetiştirin. Protokol şeması Şekil 1'de gösterilmiştir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67481/67481fig1.jpg"> 
Şekil 1: iPSC hattından kondrosfer üretme protokolü IPSRG4S. (A) Başlangıçta, iPSC'ler% 80 birleşmeye ulaşılana kadar pluripotent kök hücre ortamında kültürlenir. (B) Kondrositik çizgiye doğru farklılaşmayı indüklemek için, iPSC'ler daha sonra 2 gün boyunca ortam A'da kültürlenir. Ortam daha sonra Chir 99021 ve Rho kinaz inhibitörü içermeyen bir formülasyonla değiştirilir ve hücreler her 2 günde bir orta değişikliklerle 6 gün daha kültürlenir. (C) Hücreler daha sonra sonraki 10 gün boyunca kondrogenezi teşvik etmek için B ortamına aktarılır. (D) Yeterli hücre sayısı elde edildiğinde, süreç sferoidlerin üretim aşamasına ilerler. (E) Hücreler, yerçekimi altında düşük yapışkan koşullarda sferoidler halinde toplanır. (F) Elde edilen sferoidler, orta B ile mini biyoreaktörlerde kültürlenir. Bu <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67481/67481fig1large.jpg" target="_blank">rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
1. Petri kaplarının mini biyoreaktörlere dönüştürülmesi
NOT: Ayrıntılar bir önceki makaledeyer almaktadır 5.
<ol>
	<li>Steril otoklav makası kullanarak santrifüj tüplerini 7-8 mm yüksekliğinde halkalar halinde dilimleyin (otoklav ayarları: 15 psi'de 121 °C (250 °F), 30 dakika ve otoklav sonrası 20 dakika kurutma).</li>
	<li>Düşük yapışma özelliğine sahip, işlenmemiş veya mikrobiyolojik Petri kaplarını küçük parçalara ayırın. Sıvı bir plastik çözelti oluşturmak için yaklaşık 1 g plastik parçacığı gece boyunca 10 mL kloroformda çözün. Bu prosedürü bir çeker ocakta gerçekleştirin.</li>
	<li>Sıvı plastiğin pipetleme için yeterince viskoz olduğunu doğrulayın. Damlacıkların yüzeye yayılmak yerine küresel bir şekli koruduğundan emin olun. Çözelti çok inceyse, genellikle 1-3 g gerektiren daha fazla plastik parçacık ekleyin. Çok kalınsa, genellikle 5 mL'ye kadar gerektiren ek kloroform ekleyin.</li>
	<li>Aşağıda özetlenen iki etkili yöntemden birini kullanarak steril, ultra düşük yapışma özelliğine sahip 60 mm'lik bir Petri kabının ortasında plastik bir düğme oluşturun.<ol>
		<li>Seçenek 1: Otoklavlanmış plastik halkayı Petri kabının ortasına yerleştirin, ardından halkanın içine sıvı plastik uygulayın; bir damla yaklaşık 100-200 μL damla sıvı plastik gerektirecektir.</li>
		<li>Seçenek 2: Plastik halkayı kullanmadan aynı sayıda sıvı plastik damlasını doğrudan Petri kabının ortasına uygulayın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Bulaşıkların laminer akış başlığında 2-3 saat üstü açık olarak kurumasına izin verin. Kuruduktan sonra bulaşıkları 20-30 dakika ultraviyole radyasyona maruz bırakın.</li>
</ol>
2. Kültür yemeklerinin jelatin ile işlenmesi
<ol>
	<li>Toz jelatini 95 °C'de damıtılmış suda çözerek %0.1'lik bir jelatin çözeltisi hazırlayın. Çözeltiyi sırayla 0.45 μm ve 0.25 μm membran filtrelerden geçirin, ardından süzüntüyü 4 °C'de saklayın.</li>
	<li>Kondrosit yeniden tohumlamadan hemen önce, 3 mL jelatin solüsyonunu 25 cm2'lik şişeye uygulayın (T25 şişesi başına 15 g'a kadar kıkırdak dokusu önerilir). Oda sıcaklığında (RT) 30 dakika inkübe edin, jelatini çıkarın, PBS ile iki kez durulayın ve hücre tohumlamaya devam edin.</li>
</ol>
3. Kondrositlerin izolasyonu ve yetiştirilmesi
NOT: Kondrositler, total diz protezi yapılan hastalardan ağırlık taşımayan kıkırdak bölgelerinden izole edilir. Tüm örnekleri steril koşullar altında hasat edin ve 200 U / mL penisilin / streptomisin çözeltisi içeren DMEM ile doldurulmuş steril tüplerde saklayın. Kıkırdak dokusunu buzdolabında 2-8 °C'de saklayın.
<ol>
	<li>Kıkırdak alımından sonraki 2 gün içinde enzimatik tedaviye başlayın. 60 mm Petri kapları kullanarak Hankıç parçalarını Hanks solüsyonunda yıkayın, ardından kıkırdağı otoklavlanmış makas kullanarak yaklaşık 1-2 mm çapında parçalar halinde kesin.</li>
	<li>Kıkırdak parçalarını 15 mL'lik tüplere aktarın ve DMEM'de% 0.01 kollajenaz tip II çözeltisinde, 1 g kıkırdak başına yaklaşık 1 mL, 8-12 saat içinde% 5 CO2,% 100 nem ile 37 ° C'ye ayarlanmış bir CO2 inkübatörinde, 150-200 rpm'de bir orbital çalkalayıcı üzerinde sürekli çalkalama altında sindirin.</li>
	<li>Sindirimden sonra, kıkırdak parçalarını 15 mL'lik bir tüpe DMEM ekleyerek yıkayın, ardından 300 × g'da 10 dakika santrifüjleyin. Parçaları bir kondrosit kültür ortamında (Ek Tablo 1) yeniden süspanse edin ve bunları% 0.1 jelatin çözeltisi ile önceden kaplanmış yapışkan bir T25 şişesi üzerine tohumlayın.</li>
	<li>% 80'lik bir birleşik yoğunluk elde edildiğinde geçiş kondrositleri.<ol>
		<li>Geçiş için, kondrositleri Hanks solüsyonu ile yıkayın, daha sonra hücreleri% 0.25 tripsin solüsyonu ile 37 ° C'de 5 dakika inkübe edin.</li>
		<li>Tripsini etkisiz hale getirmek için eşit miktarda DMEM +% 10 FBS ekleyin. Kondrositleri taze kültür ortamında yeniden süspanse edin, daha sonra 1cm2'de 20.000-30.000 hücre tohumlayarak 1: 3 oranında dağıtın.</li>
		<li>Kültür şişesini 37 °C'de, %5 CO2 ve 0 nem oranına sahip bir inkübatöre yerleştirin.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Pluripotent kök hücrelerin yetiştirilmesi
NOT: Moleküler Beyin Araştırma Grubu, Nörobiyoloji Anabilim Dalı Kök Hücre Laboratuvarı ile işbirliği içinde, A.I. Virtanen Enstitüsü, Doğu Finlandiya Üniversitesi, Kuopio, Finlandiya, bir iPSC hattı IPSRG4S, önceki bir çalışmada başarıyla oluşturulmuştur8.
<ol>
	<li>iPSC'leri, hücre dışı proteinler içeren bir matris ile önceden kaplanmış 6 oyuklu plakalarda yetiştirin ( Şekil 1A). Pluripotent kök hücreler için bir ortam kullanın (Ek Tablo 1).</li>
	<li>1:4 oranını koruyarak (1cm2</li><li></li><li></li></ol><ol><li></li><li></li><li><li> </li><li> </li></ol><ol><li></li><li></li><li></li><li></li><li> </li><li></li><li></ol>

<ol><li>Cieza, A., Causey, K., Kamenov, K., Hanson, S. W., Chatterji, S., Vos, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+the+need+for+rehabilitation+based+on+the+Global+Burden+of+Disease+study+2019%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2019%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global estimates of the need for rehabilitation based on the Global Burden of Disease study 2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019.</a> Lancet. 396, e10267(2021).</li>
<li>Hua, C., Buttgereit, F., Combe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoids+in+rheumatoid+arthritis%3A+Current+status+and+future+studies%5BTitle%5D)+AND+%22RMD+Open%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoids in rheumatoid arthritis: Current status and future studies.</a> RMD Open. 6 (1), e000536(2020).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Articular+cartilage+repair+biomaterials%3A+Strategies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Today+Bio%22%5BJournal%5D)">Articular cartilage repair biomaterials: Strategies and applications.</a> Materials Today Bio. 24, e100948(2024).</li>
<li>Lee, N., Bayaraa, O., Zechu, Z., Kim, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterials-assisted+spheroid+engineering+for+regenerative+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22BMB+Rep%22%5BJournal%5D)">Biomaterials-assisted spheroid engineering for regenerative therapy.</a> BMB Rep. 54 (7), 356-367 (2021).</li>
<li>Eremeev, A., Pikina, A., Ruchko, E., Sidorov, V., Ragozin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+cartilage+tissue+substitutes+from+cells+with+induced+pluripotency%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Extrem+Situat%22%5BJournal%5D)">Fabrication of cartilage tissue substitutes from cells with induced pluripotency.</a> Med Extrem Situat. 4, 30-41 (2022).</li>
<li>Rodríguez Ruiz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+from+human-induced+pluripotent+stem+cells%3A+comparison+with+neo-cartilage+from+chondrocytes+and+bone+marrow+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Cartilage from human-induced pluripotent stem cells: comparison with neo-cartilage from chondrocytes and bone marrow mesenchymal stromal cells.</a> Cell Tissue Res. 386, 309-320 (2021).</li>
<li>Eremeev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+organoid+generation+from+induced+pluripotent+stem+cells+in+homemade+mini+bioreactors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain organoid generation from induced pluripotent stem cells in homemade mini bioreactors.</a> J Vis Exp. 178, e62987(2021).</li>
<li>Holmqvist, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+a+library+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+Parkinsonian+patients%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Parkinsons+Dis%22%5BJournal%5D)">Creation of a library of induced pluripotent stem cells from Parkinsonian patients.</a> NPJ Parkinsons Dis. 2, e16009(2016).</li>
<li>Livak, K., Schmittgen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2%28-Delta+Delta+C%28T%29%29+method%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) method.</a> Methods. 25 (40), 402-408 (2001).</li>
<li>De Kinderen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+induced+pluripotent+stem+cells+into+chondrocytes%3A+Methods+and+applications+for+disease+modeling+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Differentiation of induced pluripotent stem cells into chondrocytes: Methods and applications for disease modeling and drug discovery.</a> J Bone Miner Res. 37 (3), 397-410 (2022).</li>
<li>Ali, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iPSCs+chondrogenic+differentiation+for+personalized+regenerative+medicine%3A+a+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">iPSCs chondrogenic differentiation for personalized regenerative medicine: a literature review.</a> Stem Cell Res Ther. 15 (1), 185(2024).</li>
<li>Reina-Mahecha, A., Beers, M., van der Veen, H., Zuhorn, I., van Kooten, T., Sharma, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Review+of+the+role+of+bioreactors+for+iPSCs-based+tissue-engineered+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">A Review of the role of bioreactors for iPSCs-based tissue-engineered articular cartilage.</a> Tissue Eng Regen Med. 20 (7), 1041-1052 (2023).</li>
<li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+bioreactors+for+cartilage+tissue+engineering%3A+Advances%2C+limitations%2C+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">The application of bioreactors for cartilage tissue engineering: Advances, limitations, and future perspectives.</a> Stem Cells Int. 2021, 6621806(2021).</li>
<li>Castro-Viñuelas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tips+and+tricks+for+successfully+culturing+and+adapting+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Tips and tricks for successfully culturing and adapting human induced pluripotent stem cells.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 23, 569-581 (2021).</li>
<li>Endo, K., Fujita, N., Nakagawa, T., Nishimura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+fibroblast+growth+factor-2+and+serum+on+canine+mesenchymal+stem+cell+chondrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Effect of fibroblast growth factor-2 and serum on canine mesenchymal stem cell chondrogenesis.</a> Tissue Eng Part A. 25 (11-12), 901-910 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>% 0.05 Tripsin çözeltisi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25300-062</td><td></td></tr>% <tr><td>0.25 Tripsin çözeltisi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>Gelişmiş DMEM / F12 Eagle'ın orta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td></td></tr><tr><td>Aggrekan Monoklonal Antikor</td><td>İnvitrojen</td><td>AHP0022</td><td>Ev sahibi: Fare; Seyreltme: 1/500</td></tr><tr><td>Askorbik asit</td><td>Sigma</td><td>A4544</td><td>50 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>B-27 takviyesi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td>1x veya %2</td></tr> <tr><td>Beta-merkaptoetanol</td><td>Serva</td><td>28625</td><td>90 mM</td></tr><tr><td>BMP2</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-110-922</td><td>10 ng/mL</td></tr><tr><td>Chir 99021</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-103-926</td><td>10 &mu; M</td></tr><tr><td>COL1A1 (E6A8E) Monoklonal antikor</td><td>CellSignalling</td><td>39952</td><td>Konakçı: Tavşan; Seyreltme: 1/800</td></tr><tr><td>COL2A1 (M2139) Monoklonal antikor</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-52658</td><td>Ana bilgisayar: Fare; Seyreltme: 1/50</td></tr><tr><td>Kollajenaz tip II çözelti&nbsp;</td><td>PanEco</td><td>P011-2</td><td>%0.01</td></tr> <tr><td>DAPI (4 ', 6-diamidino-2-fenilindol)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542-5MG</td><td>1 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>DMEM ortamı, glutamin</td><td>PanEco</td><td>?420 olmadan?</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270106</td><td>%10</td></tr> <tr><td>Hanks'in solüsyonu&nbsp;</td><td>PanEco</td><td>?020?</td><td></td></tr><tr><td>Hybris 8 medium</td><td>PanEco</td><td>?780?/?780</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin-Transferrin-Selenyum çözeltisi</td><td>PanEco</td><td>?065</td><td>1x çözeltisi aşağıdaki konsantrasyonlara sahiptir: İnsülin: 10 & mikro; g/mL; Transferrin: 5.5 ve mikro; g/mL; Selenyum 5 ng/mL</td></tr><tr><td>L-alanil-L-glutamin&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050038</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>Matrigel Matris</td><td>BD</td><td>354277</td><td>300 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin çözeltisi</td><td>PanEco</td><td>?063?</td><td>100 U/mL</td></tr><tr><td>Retinoik asit</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-117-339</td><td>10 nM</td></tr><tr><td>Rho kinaz inhibitörü Y27632</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-103-922 &nbsp;</td><td>10 milyon</td></tr><tr><td>İkincil Antikor Keçi Anti-Fare IgG (H + L) Çapraz Adsorbe Edilmiş, Alexa Fluor 555</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A21422</td><td>Ana bilgisayar: Keçi; Seyreltme: 1/500</td></tr><tr><td>İkincil Antikor Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L) Yüksek Çapraz Adsorbe Edilmiş, Alexa Fluor Plus 555</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>?32732</td><td>Ev sahibi: Keçi; Seyreltme: 1/500</td></tr><tr><td>Sox9 (D8G8H) Monoklonal antikor</td><td>CellSignalling</td><td>82630</td><td>Konakçı: Rb; Seyreltme: 1/400</td></tr><tr><td>TeSR-1 orta</td><td>KÖK HÜCRE teknolojileri</td><td>85850</td><td></td></tr><tr><td>TGF-&beta; 1&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-095-067</td><td>10 ng/mL</td></tr></tbody></table>

yerçekimi ve ev yapımı mini biyoreaktörler altında düşük yapışkan koşullar kullanılarak Çeşitli kondrositlerden sferoidlerin Üretilmesi

Generating Spheroids from Various Chondrocytes using Low-Adhesive Conditions under Gravity and Homemade Mini-Bioreactors

Belirtilen protokol Şekil 1'de gösterilmiştir. Bu metodoloji, iPSC'lerin en az 1 aylık bir süre boyunca kondrosit sferoidlerine farklılaşmasını sağlamak için iki farklı kültür ortamı kullanır (Şekil 2<img alt="Figure 2" cl...

Yerçekimi ve Ev Yapımı Mini Biyoreaktörler Altında Düşük Yapışkan Koşullar Kullanılarak Çeşitli Kondrositlerden Sferoidlerin Üretilmesi

Cartilage repair in chronic joint diseases demands advanced cell-based therapies to regenerate damaged tissues effectively. This protocol provides a ...

generating-spheroids-from-various-chondrocytes-using-low-adhesive

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Sinovyal sıvıda yüksek düzeyde insan eklem kondrosit kültür 3D sistemi açıklanmıştır. Sinovyal sıvı eklem kıkırdağı için en doğal mikroçevresinin yansıtır ve kolayca elde ve saklanabilir. Bu sistem, böylece kıkırdak rejenerasyon eğitim ve artrit tedavisi için tarama terapötikler için kullanılabilir.

Sinovya Sıvısı Kültürleme İnsan Eklem kondrosit 3D Sistemi

Kondrositler tarafından kıkırdak ekstraselüler matriks biyosentezi mekanik uyaranlara uygulama etkilenebilir. Bu yöntem, 3D yapıları ve kondrosit metabolizması bağlı değişikliklerin değerlendirilmesi kapsüllü kondrositler dinamik basınç suşların uygulama tekniği anlatılmaktadır.

Kondrosit-agaroz Hidrojeller mekanik stimülasyonu

Kıkırdak onarımı, karşılanmamış bir tıbbi zorluğu temsil eder ve insan eklem kıkırdağını tasarlamak için hücre temelli yaklaşımlar umut verici bir çözümdür. Burada, insan eklem kondrositlerinin genişlemesi ve olgunlaşması için ideal bir araç olarak üç boyutlu (3D) biyomimetik hidrojelleri tanımlıyoruz.

Eklem Kondrosit Kültür ve Kıkırdak Üretimi için 3D hidrojel iskeleleri

Mekanik stres, kök hücrelerin kondrojenik farklılaşmasını indükleyebilir ve bozulmuş kıkırdağın onarımı için potansiyel bir terapötik yaklaşım sağlar. Merkezkaç gravitesi (CG) kullanarak adipoz kaynaklı kök hücrelerin (ASC'ler) kondrojenik farklılaşmasını indüklemek için bir protokol sunuyoruz. SOX9'un CG kaynaklı yukarı regülasyonu, kondrojenik fenotiplerin gelişmesine neden olur.

Santrifüj Yerçekimi ile adipoz kaynaklı Kök Hücrelerin kondrojenik Farklılaşma İndüksiyon

Bu makalede, kondrosit sıkıştırma için pnömatik olarak mikroakışkan bir cihaz imal etmek ve karakterize etmek için ayrıntılı yöntemler sağlanmıştır.

Dinamik Sıkıştırma ile Chondrocytes Uyarıcı için Bir Mikroakışkan Platform

Biz hücre küresel leri yetiştirmek için bir motor destekli santrifüj mikroakışkan cihaz satıyoruz. Bu cihazı kullanarak, tek veya birden fazla hücre tiplerinin küresel leri yüksek yerçekimi koşullarında kolayca cokültüre edilebilir.

Çok Hücreli Üç Boyutlu Spheroidler Üretmek için Lab-on-a-CD Platformu

Burada, hücre süspansiyonunu tohumlamak için otomatik bir pipetleme sistemi kullanarak adipoz türevli stromal/kök hücre (ASC) sferoidlerinin büyük ölçekli üretimini açıklıyoruz, böylece küresel boyut ve şeklin homojenliğini sağlıyoruz. Bu ASC sferoidleri, 3D biyobaskı yaklaşımları için yapı taşları olarak kullanılabilir.

3D Biyobaskı için Adipoz Türevi Kök Hücre Sferoidlerinin Büyük Ölçekli, Otomatik Üretimi

Mevcut protokol, 3D baskılı damga benzeri bir cihaz kullanarak uygun maliyetli bir şekilde büyük ölçekte doku sferoidleri üretmek için bir tekniği açıklamaktadır.

3D baskılı damga benzeri bir cihaz aracılığıyla doku sferoidlerinin üretilmesi

Bu protokol, insan eklem kıkırdağından kondrositlerin, Fibronektin Adezyon Testinden türetilmiş Kondroprojenitörlerin (FAA-CP'ler) ve Göçmen Kondroprojenitörlerin (MCP'ler) izolasyonunu detaylandırır. Bu hücreleri izole etmek ve karakterize etmek için enzimatik sindirim, fibronektin yapışması ve migrasyon bazlı testleri kapsar.

Fibronektin Adezyonu ve Migrasyon Testi Kullanılarak Kondrosit ve Kondroprojenitörlerin İzolasyonu

Bu çalışma, agaroz kalıplarında mikro kuyular oluşturmak için damga tabanlı bir sistem kullanarak 3D hücre yapıları oluşturmak için uygun maliyetli ve verimli bir metodoloji sunmaktadır. Sistem, tek tip sferoidlerin/organoidlerin oluşumunu teşvik eder, böylece hücre etkileşimlerini iyileştirir. Bu yaklaşım deneysel değişkenliği azaltır ve ilaç testi ve doku mühendisliğindeki uygulamaları destekler.

Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi

Öğrenin, iPSC'lerden kondrositik sferoidler üretmek için yerçekimi ve ev yapımı mini biyoreaktörlerle düşük yapışkan koşulları kullanmayı. Bu yöntem, kronik eklem hastalıklarında kıkırdak onarımı için hücre bazlı tedavileri geliştirir.

Yerçekimi ve Ev Yapımı Mini Biyoreaktörler Altında Düşük Yapışkan Koşullar Kullanılarak Çeşitli Kondrositlerden Sferoidlerin Üretilmesi (Video) | JoVE Journal

Yerçekimi ve Ev Yapımı Mini Biyoreaktörler Altında Düşük Yapışkan Koşullar Kullanılarak Çeşitli Kondrositlerden Sferoidlerin Üretilmesi

Daha fazla video keşfet