Sıçanlarda Subretinal Enjeksiyon ve Retina Dekolmanı İntraoperatif Görselleştirmesi
7 Mart 2025
Bu makale, hem enjeksiyon bölgesini hem de retina dekolmanı alanını kontrol etmek için intraoperatif görselleştirmeyi kullanan sıçanlarda subretinal enjeksiyon yöntemlerini açıklamaktadır.
Retina dekolmanlarında hücre ölümü mekanizmalarını araştırıyorum ve amacım in vitro verilerin in vivo deneylere izlenebilirliğini sağlamak. Ekibimizde, fotoreseptör dejenerasyonu sırasında farklı hücre ölüm mekanizmalarının katılımını gösterdik. Kemirgenlerde retina dekolmanı indüklemek için tanımlanmış birçok yol vardır.
Bu protokol, tekrarlanabilirlik ve güvenlik olmak üzere iki zorluğa cevap vermek üzere tasarlanmıştır. Retina dekolmanı tedavisinde tekrarlanabilir ve güvenli bir protokolün sağlanması bu tür araştırmalarda verimliliği sağlayacaktır. Başlamak için, 25 mikrolitrelik bir şırınga üzerine yapıştırılmış, eğimsiz 10 milimetre 30 gauge kanül metal ucunu bir mikro enjektöre monte edin.
Uzun süreli retina dekolmanı indüklemek için %2 hidroksipropil metilselüloz veya %1 ila %5 sodyum hiyalüronat kullanın. Hazırlanan çözeltiyi şırıngaya yükleyin. Daha sonra, midriyazis elde etmek için anestezi uygulanmış bir sıçanın bir gözüne bir damla% 0.5 tropikalamid uygulayın.
Ameliyat edilecek göze bir damla oksibuprokain uygulayın. Ameliyatı gerçekleştirmek için ayak pedalına bağlı bir oftalmik mikroskop kullanın. Sklerayı ortaya çıkarmak için, üst ve alt göz kapaklarındaki palpebral kenarın dış çeyreğine iki göz kapağı çekme dikişi sabitleyin.
Gözün hafifçe şişmesini sağlamak için dikişleri çekin. 30 gauge bir iğne ile, kornea limpusundan yaklaşık bir ila iki milimetre uzakta temporal bulbar konjonktiva boyunca bir skleral kanal oluşturun. İşlem boyunca lens göz arayüzü olarak gözyaşı jeli uygulayın.
Retina plakasını görselleştirmek için, göz yüzeyine sekiz milimetre çapında düz bir kontakt lens yerleştirin. Retina düzlemine odaklanmak için mikroskobun ayak pedalını kullanın. Şimdi, kanülü önceden oluşturulmuş skleral kanaldan dikey olarak yerleştirin.
Yavaşça retinaya yaklaşın ve retina beyazlaması gözlenene kadar hafifçe bastırın. Enjeksiyon akışı ile oluşan retinotomi yoluyla enjekte ederken uç stabilitesini koruyun Enjeksiyondan sonra ucu retinotomiden çıkarın. Ardından, lense dokunulmadığından emin olarak tüm kanülü vitreus boşluğundan nazikçe çekin.
Vitreus boşluğu içindeki kan akışını gözlemlemeden pupiller kırmızı refleksin retina dekolmanı tarafından değiştirildiğinden emin olun. Göz kapağı dikişlerini çıkarın, ardından kanamayı dikkatlice temizleyin. Göz içi basıncını kısaca manuel olarak değerlendirin.
Ameliyat sonrası bakım için, ameliyat edilen göze kloramfenikol retinol göz merhemi sürün. Daha sonra intraperitoneal olarak bir mililitre% 5 glikoz monohidrat uygulayın. Deri altına kilogram atipamezol başına 0.9 miligram enjekte edin.
Son olarak, hayvanı sıcaklık kontrollü bir odaya aktarın ve uyanana kadar izleyin. Başarılı subretinal enjeksiyon, optik koherens tomografide berrak subretinal sıvı ve fundus fotoğrafında subretinal kanama olmaması ile doğrulandı. Her iki modalitede de belirgin bir retina dekolmanı gözlendi.
Minör intravitreal kanamalar bazen, özellikle enjeksiyon bölgesinin yakınında gözlendi, ancak subretinal boşluğa yayılmadı.
Genel Bakış
Bu makale, hem enjeksiyon bölgesini hem de retinal ayrılma alanını kontrol etmek için intraoperatif görselleştirme kullanarak sıçanlarda subretina enjeksiyon yöntemlerini açıklamaktadır. Protokol, retinal ayrılma araştırmalarında tekrarlanabilirliği ve güvenliği artırmayı amaçlamaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Retinal araştırma
- Deneysel protokoller
Arka Plan
- Retinal ayrılmalarda hücre ölüm mekanizmalarının anlaşılması.
- In vitro'dan in vivo verilere kadar izlenebilirliğin önemi.
- Deneysel prosedürlerde tekrarlanabilirliği ve güvenliği sağlama zorlukları.
- Kemirgenlerde retinal ayrılmayı indüklemek için çeşitli yöntemler.
Çalışmanın Amacı
- Retinal ayrılma için tekrarlanabilir ve güvenli bir protokol sağlamak.
- Retinal dejenerasyonda verimli araştırmayı kolaylaştırmak.
- Subretina enjeksiyonlar için doğru cerrahi tekniklerin sağlanması.
Kullanılan Yöntemler
- Mikro enjektöre düz kenarlı olmayan bir kanülün yerleştirilmesi.
- Retinal ayrılma için hidroksipropil metilselüloz veya sodyum hiyalüronat kullanılması.
- Bir oftalmik mikroskobun altında cerrahinin gerçekleştirilmesi.
- Önceden oluşturulmuş bir skleral kanaldan enjeksiyon yapılması ve sonuçların optik koherens tomografi ile değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Subretina sıvının netliği ile doğrulanan başarılı subretina enjeksiyonu.
- Fundus fotoğrafçılığında subretina kanama yokluğu.
- Görüntüleme yöntemleri ile doğrulanan belirgin retinal ayrılma.
- Göz içi kanamalarının gözlemlendiği ancak subretina boşluğuna uzanmadığı.
Sonuçlar
- Protokol, retinal ayrılma çalışmalarının güvenliğini ve tekrarlanabilirliğini artırmaktadır.
- Enjeksiyonların başarılı olduğunun görsel olarak doğrulanması araştırmanın geçerliliği için kritiktir.
- Postoperatif bakım, hayvan refahı ve iyileşme için önemlidir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Intraoperative visualization of subretinal injection and retinal detachment in rats addresses a critical need for reproducible, controlled delivery of therapeutics and disease modeling in ophthalmic drug discovery. This protocol enables precise manipulation and monitoring of retinal detachment, supporting translational continuity from preclinical models to human-relevant workflows. Enhanced reproducibility and safety directly impact the predictive confidence of early-stage retinal therapeutic programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables controlled induction of retinal detachment for mechanistic studies of photoreceptor degeneration.
- Supports functional validation of therapeutic targets in the subretinal space.
- Facilitates reproducible disease modeling for hypothesis-driven research.
Screening & Assay Development
- Provides a validated in vivo system for evaluating subretinal delivery of candidate compounds.
- Ensures quantitative assessment of injection success via imaging modalities.
- Standardizes procedure for consistent assay outputs across studies.
Translational & Preclinical Research
- Aligns preclinical retinal detachment models with clinical procedures for translational relevance.
- Enables assessment of therapeutic efficacy and safety in a controlled, reproducible setting.
- Supports risk-adjusted advancement of retinal therapies based on robust in vivo data.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum for retinal disease research, bridging in vitro findings with in vivo validation and supporting lead identification and optimization.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing on cell death mechanisms and target engagement in retinal tissue.
- Screening: Delivers reproducible, quantifiable readouts for compound evaluation in a disease-relevant model.
- Analytics: Employs fundus photography and optical coherence tomography for objective measurement of injection and detachment outcomes.
- Translational Research: Provides continuity between rodent models and human surgical procedures for subretinal delivery.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized protocol adaptable across retinal research programs and therapeutic modalities.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in retinal target validation.
- Operational Value: Enhances reproducibility, safety, and standardization of in vivo retinal procedures.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision-making and capital efficiency in ophthalmic R&D portfolios.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of retinal therapeutic candidates.
Implementation Considerations
- Requires expertise in ophthalmic microsurgery and rodent anesthesia.
- Demands access to ophthalmic microscopes, microinjectors, and imaging platforms.
- Necessitates cross-team standardization for reproducibility and data comparability.
- Adaptable to various retinal detachment durations and solution viscosities as needed for specific research aims.
- Potential limitations include risk of lens damage, hemorrhage, or detachment failure, requiring careful procedural adherence.
