Sıvı Kromatografisi Tuzaklı İyon Hareketlilik Spektrometresi-Uçuş Süresi Kütle Spektrometresi ile Gıda Matrislerinde Düzenlenmiş Ergot Alkaloidlerinin Tespiti

Grubumuzun amacı, bileşiklerin benzersiz hücre tanımlaması yoluyla farklı matrislerdeki kirletici ve kalıntıların verimli bir şekilde kontrol edilmesini sağlayan yeni analitik metodoloji önerisidir. Gelişmiş analitik platformlar ve sürdürülebilir numune işleme kullanarak gıda güvenliği ile ilgili bazı zorlukları çözmeye çalıştık. Mikotoksinlerle ilgili son araştırmalar, büyük spektrometri ve biyosensörler olarak tespit yöntemlerindeki ilerlemeleri vurgulamaktadır.

Ayrıca, gıda güvenliğini iyileştirmeyi ve tarımsal uygulamalarda verimli detoksifikasyon süreçleri geliştirmeyi amaçlayan kontaminasyonun azaltılması için sağlık etkisini ve stratejilerini araştırıyor. Kütle spektrometresi, gıdalardaki mikotoksinler de dahil olmak üzere kimyasal kalıntıları ve kirleticileri tespit etmek için anahtardır. Kütle spektrometresindeki son gelişmeler, iyon hareketliliğinin ticarileştirilmesi, yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresinin bu büyüyen eğilime katkıda bulunmasıyla, araştırmayı hedeften hedef olmayan analitik yönteme kaydırdı.

Her düzenlenmiş ergot alkaloidinin analitik miktar tayinine izin verir. Bu bileşiklerin kromatografik analizi, özellikle pikler yeterince çözülmezse, yanlış miktara yol açabilir. Bu nedenle, iyon hareketlilik spektrometresinin uygulanması, onları hareketlilik değerlerine göre ölçmek için başka bir boyut sağlar.

Gelecekteki araştırmalara olan ilgimiz, yalnızca gıdalarda ortaya çıkan kirleticilerin kontrolünü ele almaya devam etmek değil, aynı zamanda ekspozomik ve insan biyoizlemesine odaklanmaktır. Biyolojik sıvılardaki kimyasalları, toksinleri ve diğer metabolitleri ölçerek, çevresel maruziyet ve sağlık arasındaki bağlantıyı anlamak çok önemlidir. Başlamak için, 500 mikrolitre ara çözelti içeren iki adet 1.5 mililitrelik amber flakon ve yıkama solüsyonu olarak çözücü karışımı içeren başka bir şişe hazırlayın.

Sıvı kromatografisi sütununu şartlandırırken, iki çözelti de dahil olmak üzere iş listesini yazın. İş listesinin yöntem dosyası sütununda, gerekli parametrelerle kaydedilen edinme yöntemi dosyasını yükleyin. Alınan tüm veri dosyalarını kaydetmek için bir klasör oluşturun.

Tüm örnekleri, örnek yol sütunundaki seçili klasöre yönlendirin. Yazılımın üst araç çubuğuna gidin ve iş listesini çalıştırın. İş listesi yürütüldükten sonra, kalitatif yazılımı açın.

Analiz edilen tüm örnekleri yüklemek için dosya'yı ve ardından iş listesini aç'ı seçin. EA çözümüne karşılık gelen bir örneğe sağ tıklayın. Kromatogramı düzenlemeye gidin, ardından türü seçin ve ardından çıkarılan iyon kromatogramını seçin.

Her EA için protonlanmış iyonun teorik moleküler kütlesini girin, ardından ekle ve Tamam'a tıklayın. Altı EA'ya ve bunların epimerlerine karşılık gelen altı ekstrakte edilmiş iyon kromatogramı görünecektir. Ekstrakte edilen her iyon kromatogramında, ana EA'ya ve epimerine karşılık gelen iki tepe görünecektir. Bir tepe noktasının tüm alanını seçerken sağ tıklayın ve iyon hareketlilik spektrumu açılacaktır.

İyon hareketlilik spektrumunun x eksenine gidin, sağ tıklayın ve çarpışma kesitine tıklayın. CCS değeri görünmüyorsa, mobilite spektrumuna sağ tıklayın ve mobilograma kopyala'yı seçin, ardından mobilite spektrumuna tekrar sağ tıklayın ve atanan şarj durumunu seçin. İyonun tam kütlesini ve yükünü tanıtın.

Ardından, literatür ve veri tabanlarından elde edilen parçalanma verilerine dayanarak, ücretsiz bir tanımlama noktası olarak en yoğun ürün iyonunu karşılaştırın ve seçin. Bir kantitasyon yöntemi oluşturmak için her EA için alıkonma süresini, CCS değerini ve ana iyon eklentisinin tam kütlesini not edin. Ardından, veri işleme yazılımını açın ve yöntem yönetimi sekmesine tıklayın, ardından analit ayarlarına tıklayın.

Bekletme süresi, CCS değeri ve protonlanmış eklentilerin kütlesi ile birlikte her EA'nın adını girin. Varsayılan ayarları kullanırken her bir tanımlama noktası için toleransı gerektiği gibi ayarlayın. Başlamak için sıvı kromatografi kolonunu koşullandırın ve toplama parametrelerini yapılandırın.

50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde bir gram numuneyi tartın. Dört mililitre ekstraksiyon çözeltisi ekleyin ve numuneyi bir dakika boyunca girdaplayın. Numuneyi 9, 750 G ve dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin.

Tüm süpernatanı 150 miligram sorbent karışımı içeren 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve numuneyi bir dakika boyunca vorteksleyin. Numuneyi santrifüjledikten sonra, süpernatanı toplayın ve dört mililitrelik amber cam şişeye aktarın. Ekstraktı hafif bir nitrojen akışı altında buharlaştırın, ardından numuneyi 750 mikrolitre metanol su karışımında sulandırın.

İki mililitrelik bir şırınga kullanarak, numuneyi 0.22 mikrometrelik bir naylon filtreden 1.5 mililitrelik kehribar kromatografik bir şişeye süzün. Başlamak için, ergot alkaloidini veya EA örneklerini hazırlayın ve sıvı kromatografisi kullanarak matris uyumlu kalibrasyon eğrisini elde edin. Kantitatif yazılımı açın ve görev hızlı sekmesine gidin.

Toplu ithalata tıklayın. Toplu iş içe aktarıldıktan sonra, toplu işlemi içe aktar'ın altındaki işlem partisine tıklayın. Veri işleme tamamlandıktan sonra, gözden geçirme taramasına gidin ve yanlış kromatografik tepe noktalarının birbirine çok yakın olması gibi otomatik entegrasyonla ilgili sorunları kontrol edin.

Öyleyse, başlangıçta nicel yöntem dosyasında oluşturulan bekletme süresi toleransı, CCS değer toleransı ve/veya kütle hatasına atıfta bulunan değerleri daraltın veya genişletin ve verileri yeniden işleyin. Otomatik tepe entegrasyonu hala yanlış tepe noktalarını seçiyorsa, kromatogramda taramayı gözden geçirme penceresinde görünen alanı manuel olarak seçin. Parti yönetimi sekmesinde, parti konsantrasyonu penceresine gidin ve daha önce belirlenen her seviye için bir konsantrasyon değeri belirtin.

İşiniz bittiğinde, konsantrasyonları kaydet'i tıklayın. Toplu işlemi ölç'e tıklayın ve model gibi parametreleri kalibrasyon verilerine uyacak şekilde ayarlayın, bekleyin ve modeli sıfırı geçmeye zorlayın. Ergot alkaloidlerinin miktar tayini tamamlandıktan sonra, kantitasyon sekmesine tıklayın, ardından en soldaki toplu iş klasörüne sağ tıklayın ve rapor oluştur'u seçin.

Son olarak, analit kantitasyonunu seçin ve raporu istediğiniz formatta dışa aktarın. Kromatografik ayırma, yakın alıkonma süreleri nedeniyle hafif örtüşme gösteren ergotamin ve ergotamin dışındaki her EA epimer çifti için net zirveler ortaya çıkardı. İyon hareketlilik spektrometresi, ergotamin ve ergotaminin temel olarak ayrılmasına izin vererek ayırt edilebilir CCS değerleri sağladı.

Sinyal bastırma veya geliştirme etkisi analizi, eksi %32 ila %18 aralığında minimum matris paraziti gösterdi ve matris eşleştirilmiş kalibrasyon eğrisinden gerekli olan ergametranin dışında standart kalibrasyon eğrisi kullanılarak doğru nicelemeye izin verdi. Yöntem doğruluğu, %43 ila 45 arasında geri kazanım değerleri gösteren ergotamin hariç% 72 ila 117 içindeki tüm analitler için geri kazanım oranları ile doğrulandı Mililitre başına 0.65 ila 2.6 nanogram arasında değişen kantifikasyon değerlerinin sınırı, yöntem duyarlılığını doğruladı.