Köpek Nazal İmmün Mikroçevresinin Örneklenmesi için Tuzlu Su Lavajı

Radyasyon tedavisi ve burun tümörlü köpekler ile ilişkili bağışıklık tepkilerini inceliyoruz. Bağışıklık sistemini modüle ederek kanser hastalarının radyasyon tedavisine yönelik sonuçlarını nasıl iyileştirebileceğimizi anlamaya çalışıyoruz. Bağışıklık mikroçevresindeki değişimler, tedavi etkilerinin incelenmesinde önemli olabilir. Bu nedenle, mikroçevrenin hücrelerinin seri olarak analiz edilmesi arzu edilir. Bununla birlikte, karmaşık anatomi ve mukozanın kanama eğilimi nedeniyle burun boşluğunun dokularını tekrarlanan biyopsilerle örneklemek zor olabilir.

Tuzlu nazal lavaj tekniği, burun boşluğunun bağışıklık mikro ortamının minimum doku bozulması ile seri örneklenmesine izin verir. Nazal lavaj tekniği ile toplanan hücreler ve proteinler, zaman içinde nazal immün mikro çevrenin durumunu araştırmak için çeşitli tahlillerle analiz edilebilir.

İşlemden bir gün önce 520 mililitrelik şırıngaları steril serum fizyolojik ile doldurun. Şırıngaları güvenli bir şekilde kapatın ve gece boyunca ısınması için 37 santigrat derecede bir inkübatöre koyun. Daha sonra anestezi uygulanmış köpeği dıştan yaslanmış olarak tedavi masasına yerleştirin. Optimum nazal lavaj örneği toplamayı kolaylaştırmak için köpeğin başını masanın kenarından doğal ve rahat bir şekilde aşağı doğru açılı olacak şekilde ayarlayın. Hava yolunun sıkı bir şekilde kapatılmasını sağlamak için endotrakeal tüpün manşetini şişirin. Nazal lavaj için, ılık salin içeren önceden doldurulmuş 20 mililitrelik şırıngalardan birine sıkıca oturması için tabanda sekiz Fransız steril kırmızı kauçuk kateter kesin. Kalıcı bir işaretleyici kullanarak, burun deliği girişindeki başlangıç noktasını belirtmek için kateterin taban ucunu işaretleyin. Önceden belirlenmiş uzunluğun, uç istenen konuma yerleştirilerek intranazal olarak yayıldığını onaylayın. Ardından, kateter ucunu tanımlanan burun içi kateter uzunluğuna uyacak şekilde kesin ve burun boşluğu içinde uygun yere inmesini sağlayın. Nazal lavaj prosedürünü gerçekleştirmek için, kateteri burun boşluğuna beslemek ve uygulamak için bir kişi ve numuneyi burundan çıkarken almak için diğer kişi belirleyin. Eldiven giyerek bir kişiyi köpeğin başının önüne ve altına yerleştirin. Kırmızı kauçuk kateteri, kateter üzerindeki işaret burun deliği girişi ile aynı hizaya gelene kadar nazikçe burun boşluğunun medial yönüne yönlendirin. Aynı anda, diğer kişi kateter yerindeyken burun deliğinin altında 50 mililitrelik konik bir tüp tutar. Bir elinizi kullanarak, kontralateral burun deliğini nazikçe kapatın. Köpeğin kafasını aşağı doğru bir açıda tutarken salini burun boşluğuna yavaş, sabit bir basınçla veya nabız infüzyonu ile infüze etmeye başlayın. Boşaltma sıvısını burun deliğinin altına yerleştirilmiş 50 mililitrelik konik bir tüpte toplayın. İşlemden sonra, köpeğin anesteziden kurtulmasına izin verirken, başı aşağı bakacak şekilde dışta yaslanmış halde tutun. Şimdi, infüze edilen toplam salin miktarına göre toplanan toplam nazal lavaj sıvısı hacmini kaydedin. Numuneyi işlemek için, kalıntı ve hücre kümelerini parçalamak için konik tüpler içindeki nazal lavaj numunelerini nazikçe girdaplayın veya pipetleyin. Mukustaki büyük kalıntıları temizlemek için havuzlanan numuneleri 70 mikrometrelik bir hücre filtresinden geçirin. Bir hücre peleti oluşturmak için filtrelenmiş numuneleri 300 G'de beş ila 10 dakika santrifüjleyin. Bir pipet kullanarak, süpernatanı santrifüj örneklerinden dikkatlice aspire edin. Sonraki protein analizi için süpernatanı temiz bir tüpe koyun. Son olarak, PBS'deki hücre peletlerini veya ilgilenilen hücre tahlilleri için tercih edilen çözeltiyi yeniden süspanse edin.