Name: Köpek Nazal İmmün Mikroçevresinin Örneklenmesi için Tuzlu Su Lavajı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 35 s
Description: Öğrenin, radyasyon tedavisi gören köpeklerde burun immün mikroçevresini örneklemek için minimal invaziv tuzlu su lavajı yöntemini. Bu teknik, immün yanıtları seri olarak analiz etmenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Cohn, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+nasal+disease%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin%3A+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Canine nasal disease: An update.</a> Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).</li>
<li>Mortier, J., Blackwood, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+nasal+tumours+in+dogs%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Treatment of nasal tumours in dogs: A review.</a> J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).</li>
<li>Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+canine+nasal+discharge+related+to+intranasal+diseases%3A+A+retrospective+study+of+105+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Characteristics of canine nasal discharge related to intranasal diseases: A retrospective study of 105 cases.</a> J Small Anim Pract. 55 (3), 145-152 (2014).</li>
<li>Windsor, R. C., Johnson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+chronic+inflammatory+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Tech+Small+Anim+Practice%22%5BJournal%5D)">Canine chronic inflammatory rhinitis.</a> Clin Tech Small Anim Practice. 21 (2), 76-81 (2006).</li>
<li>Van Pelt, D. R., Mckiernan, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+canine+rhinitis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin+North+Am+Small+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of canine rhinitis.</a> Vet Clin North Am Small Anim Pract. 24 (5), 789-806 (1994).</li>
<li>Hazuchova, K., Neiger, R., Stengel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+treatment+of+mycotic+rhinitis-rhinosinusitis+in+dogs+with+meticulous+debridement+and+1%25+clotrimazole+cream%3A+64+cases+%282007-2014%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAVMA%22%5BJournal%5D)">Topical treatment of mycotic rhinitis-rhinosinusitis in dogs with meticulous debridement and 1% clotrimazole cream: 64 cases (2007-2014).</a> JAVMA. 250 (3), 309-315 (2017).</li>
<li>Lobetti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+lymphoplasmacytic+rhinitis+in+33+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22JS+Afr+Vet+Assoc%22%5BJournal%5D)">Idiopathic lymphoplasmacytic rhinitis in 33 dogs.</a> JS Afr Vet Assoc. 85 (1), 1-5 (2014).</li>
<li>Ashbaugh, E. A., Mckiernan, B. C., Miller, C. J., Powers, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+hydropulsion%3A+A+novel+tumor+biopsy+technique%5BTitle%5D)+AND+%22JAAHA%22%5BJournal%5D)">Nasal hydropulsion: A novel tumor biopsy technique.</a> JAAHA. 47 (5), 312-316 (2011).</li>
<li>Wheat, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+immune+and+microbiological+responses+to+mucosal+administration+of+a+liposome-tlr+agonist+immunotherapeutic+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Local immune and microbiological responses to mucosal administration of a liposome-tlr agonist immunotherapeutic in dogs.</a> BMC Vet Res. 15 (1), 330(2019).</li>
<li>Darragh, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elective+nodal+irradiation+mitigates+local+and+systemic+immunity+generated+by+combination+radiation+and+immunotherapy+in+head+and+neck+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Elective nodal irradiation mitigates local and systemic immunity generated by combination radiation and immunotherapy in head and neck tumors.</a> Nat Commun. 13 (1), 7015(2022).</li>
<li>Pinard, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+lymphocyte-specific+programmed+cell+death+protein+1+receptor+expression+and+cytokines+in+blood+and+urine+in+canine+urothelial+carcinoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Comp+Oncol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of lymphocyte-specific programmed cell death protein 1 receptor expression and cytokines in blood and urine in canine urothelial carcinoma patients.</a> Vet Comp Oncol. 20 (2), 427-436 (2022).</li>
<li>Choi, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+canine+pd-1%2Fpd-l1+specific+monoclonal+antibodies+and+amplification+of+canine+t+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of canine pd-1/pd-l1 specific monoclonal antibodies and amplification of canine t cell function.</a> PLoS One. 15 (7), e0235518(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL&nbsp; Tüpler</td><td>Eppendorf</td><td>05-402</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mikro; L Pipet</td><td>VWR</td><td>89079-974</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>20 mL Şırıngalar</td><td>VWR</td><td>BD302830</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Konik Tüpler</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>70 & mikro; m Hücre Süzgeci</td><td>Fisherbrand</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>8FR Steril Kırmızı Kauçuk Kateter</td><td>Med Vet International</td><td>50-252-2428</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lizis Tamponu</td><td>Gibco</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Beckman Coulter</td><td>366816</td><td></td></tr><tr><td>Fizyolojik Salin (%0.9)</td><td>Vetivex</td><td>17033-492-01</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks</td><td>VWR</td><td>10153-838</td><td></td></tr></tbody></table>

köpek nazal İmmün mikroçevresinin Örneklenmesi için tuzlu su lavajı

Saline Lavage for Sampling of the Canine Nasal Immune Microenvironment

Bu nazal lavaj yöntemiyle, toplanan örnek, tüp döndürüldüğünde muhtemelen görünür hücresel kalıntı ve mukus parçaları ile birlikte hafif bulanık görünecektir. Lavaj prosedürü yanlışlıkla kanamaya neden olursa ve numune kırmızıya boyanırsa, bir numune periferik kanla kontamine olarak kabul edilir. İnfüzyon edilen salinin bir kısmı prosedür sırasında kaybolacak olsa da, infüze edilen salin burun deliğinden tüpe geri akmazsa negatif bir lavaj düşünülecektir; Potansiyel nedenler, başın etkili bir geri akışa izin verecek kadar aşağı doğru eğilmemesi, numunenin kontralateral burun deliğinden kaudal veya lateral olarak dışarı boşalması veya kırmızı kauçuk kateterin şırıngaya sıkıca sabitlenmemesi ve salinin bağlantı noktasından dışarı doğru sızması olabilir.
Nazal kanserli köpeklerden nazal lavaj örnekleri başarıyla toplandığında,% 75-96 canlı hücre ile 1 × 10 6-200 × 106 aralığında çekirdekli hücre sayıları beklenir. Alternatif olarak, sağlıklı, iltihaplanmamış burun boşlukları olan köpeklerden nazal lavaj örnekleri başarılı bir şekilde toplandığında, hücre sayıları %6-16 canlı hücre ile 7 × 105-2 × 106 aralığında olmuştur. Tümör taşıyan köpeklerin nazal lavaj örneklemesinden elde edilen sitolojik örneklerin temsili bir görüntüsü Şekil 2'de yer almaktadır. Ek olarak, sağlıklı ve tümör taşıyan köpeklerin nazal lavaj örneklerinden analiz edilen hücresel popülasyonların akış sitometrik değerlendirmesi Şekil 3'te sunulmuştur. Hücre sayılarının ve bu aralıklardan daha düşük canlılık yüzdesinin, nazal lavaj prosedürünün ve numune toplamanın başarısız olduğunu göstermesi beklenir. Tablo 1, yazarlar tarafından gerçekleştirilen prosedür sayısı, köpek sayısı, burun boşluğunun durumu (sağlıklı veya tümör taşıyan), çekirdekli hücre sayımlarının verimi, prosedür için elde edilen hücrelerin canlılığı ve lavaj örneğinin aşağı akış analizi için başarılı mı yoksa başarısız mı olarak kabul edilip edilmediği ile ilgili olarak gerçekleştirilen nazal lavaj tekniğinin sonuçlarını özetlemektedir. Tablo 1'de yer alan nazal lavaj örnekleri ile yapılan deneylerin amaçları doğrultusunda, minimum 150.000 hücre sayısı verimi, başarılı bir nazal lavaj örneği koleksiyonu olarak kabul edildi.
Bu nazal lavaj tekniği ile hücreleri toplamak için steril% 0.9 salin kullanılır. Alternatif olarak, Hartmann'ın çözeltisi (laktasyonlu Ringer çözeltisi) düşünülebilir; bununla birlikte, salin veya Hartmann çözeltisi ile toplanan örneklerin, ilgili hücreler için karşılaştırılabilir canlılık ve sonuçlar sağlamak için test edilmesi gerekecektir. Ek olarak, tümör taşımayan köpeklerde kırmızı kauçuk kateter kullanmanın bir alternatifi, burun lavajını bir Foley kateteri ile yapmak olabilir. Burada sunulan nazal lavaj tekniğinde kullanılmamakla birlikte, Foley kateterin kullanılması, kateterin ucundaki balonun şişirilmesine, burun boşluğunun tıkanmasına ve kaudal olarak sıvı kaybının önlenmesine izin verecektir. Ayrıca, burada sunulan nazal lavaj işleme yaklaşımında test edilmemiş olsa da, nazal lavaj örneğine hyaluronidaz eklenmesinin, nazal lavaj örneğinde toplanan mukusu parçaladığı ve analiz için daha fazla hücreyi serbest bıraktığı düşünülebilir. Bunun aynı zamanda, nazal lavaj işleme prosedürüne hyaluronidaz ilavesi ile sonuçların değiştirilmemesini sağlamak için optimize edilmesi gerekecektir.
Köpek kanseri klinik çalışmasına kayıtlı köpeklerde gerçekleştirilen başarılı nazal lavaj prosedürlerinden elde edilen yayınlanmış sonuçlar Şekil 3: 10'da sunulmuştur. Şekil 3'te sunulan sonuçlar, elektif nodal ışınlamanın, tümörleri tek başına veya bölgesel servikal lenvikal lenf nodu ışınlaması ile kombinasyon halinde ışınlanan sinonazal tümörlü köpeklerin lokal immün mikro çevresi üzerindeki etkisini araştıran bir çalışmadan alınmıştır. Nazal lavaj ile yapılan klinik çalışmada köpeklerin burun boşluğunun seri örneklemesi yoluyla, toplanan hücrelerin akış sitometrik analizi, bölgesel lenf nodlarının sinonazal tümör ile eş zamanlı olarak ışınlandığı radyoterapinin son gününde, tümörü hedefleyen radyoterapi alan köpeklere kıyasla efektör T hücrelerinin popülasyonlarında önemli bir azalma olduğunu ortaya koydu ve bölgesel lenf düğümleri korundu. Bu, farklı noktalarda ve farklı tedavi koşullarında hücre popülasyonlarındaki değişimleri araştırmak için burun boşluğundan lavaj ile seri olarak numune almanın faydasını göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig01.jpg"> 
Şekil 1: Nazal lavaj yönteminin şeması. Isıtılmış, steril salin, kırmızı bir kauçuk kateter kullanılarak anestezi uygulanmış köpeklerin burun boşluğuna infüze edilir. Burun lavaj sıvısı, burundan dışarı akarken bir tüpe toplanır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig02.jpg"> 
Şekil 2: Nazal tümörü olan bir köpekten toplanan nazal lavaj örneğinin hücresel bileşimi. Nazal lavaj örneklemesinden elde edilen sitolojik örneklerin temsili görüntüsü (500x büyütme, Modifiye Wright-Giemsa boyası). Nötrofiller (oklar) baskın hücrelerdir, birkaç skuamöz epitel hücresi (ok ucu) ve küçük olgun lenfositler (kare kutuda vurgulanmıştır) da mevcuttur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2.jpg"> 
Şekil 3. Sağlıklı ve tümör taşıyan köpeklerden toplanan nazal lavaj örneklerinin akış sitometrik analizi. Sağlıklı köpekler (mavi, n = 3) ve sinonazal karsinomlu tümör taşıyan köpekler (kırmızı, n = 4) arasındaki canlı hücrelerin, bağışıklık hücrelerinin ve nötrofillerin bolluğunun karşılaştırılması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig3v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67577/67577fig04.jpg"> 
Şekil 4: Elektif nodal ışınlamanın (ENI) lokal immün mikro çevre üzerindeki etkisini araştıran bir klinik araştırmaya kayıtlı köpeklerden alınan nazal lavajdan toplanan hücrelerin akış sitometrik analizi. Nazal lavaj örneklerinden CD4 (CD5+CD4+) ve CD8 (CD5+CD8+) T hücrelerinin miktar tayini. Tümör ışınlaması ile eş zamanlı olarak ENI ile tedavi edilen köpekler (n = 3), radyasyonun son gününde (3. Gün) efektör CD4 ve CD8 T hücrelerini, yalnızca tümörü hedef alan radyasyonla tedavi edilen köpeklere kıyasla (n = 3) önemli ölçüde azaltmıştır. Bu rakam Darragh ve ark.10'dan değiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67577/67577fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Sağlıklı (n=3)</td>
			<td>Tümör yatağı (n= 19)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gerçekleştirilen işlem sayısı</td>
			<td>3</td>
			<td>80</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hücre sayısı</td>
			<td>0,7 x 106 - 2,8 x 106</td>
			<td>1,6 x 106 - 210 x 106; Medyan: 8.7 x 106</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hücre canlılığı</td>
			<td>6.3 - 15.9%</td>
			<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Köpek Nazal İmmün Mikroçevresinin Örneklenmesi için Tuzlu Su Lavajı

Evaluating the local immune microenvironment of the canine nasal cavity can be important for investigating normal tissue health and disease conditions, ...

saline-lavage-for-sampling-of-the-canine-nasal-immune-microenvironment

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz düşük basınçlı emme kullanarak fiberoptik bronkoskopi ve bronkoalveoler lavaj için bir araştırma tekniği açıklar. Bu teknik, akciğer bronkoalveoler yüzeylerinden bağışıklık hücreleri hasat etmek için kullanılır. Lokal anestezik ve hafif bilinçli sedasyon (midazolam) kullanılır. Denekler prosedür iyi ve deneyim minimal yan etkileri tolere.

Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

Intranazal beyin hedefleme amacıyla uyanık farelerde için ilaç uygulamak için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, uzun anestezi olmadan ilacın intranazal uygulama kullanarak dönemleri, ve minimal sistemik maruz kalma ile burun-için-beyin teslimi üzerinde dozaj tekrar sağlar.

Uyanık Fare CNS Therapeutics İntranazal İdaresi

Bu video, bronkoalveoler lavaj sıvısındaki çeşitli bağışıklık hücrelerini tanımlamak ve saymak için akış sitometrisinin kullanımını göstermektedir. Başlangıçta, tek bağışıklık hücreleri bir canlılık boyası kullanılarak tanımlanır, ardından yüzey işaretleyici proteinlerin diferansiyel boyanması ile her hücre tipinin kesin sayımı sağlanır.

Bronkoalveoler Lavaj Sıvısındaki İmmün Hücrelerin Flow Sitometri ile Tanımlanması ve Sayımı

Murine nazofarenksin Streptococcus pneumoniae ile kolonizasyonu ve daha sonra yapışık veya işe alınan hücrelerin çıkarılması açıklanmaktadır. Bu teknik, nazofarenksin yıkanmasını ve sıvının nares yoluyla toplanmasını içerir ve diferansiyel hücre niceliği ve mRNA ekspresyonunun yerinde analizi dedahil olmak üzere çeşitli okumalar için uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae ile İntranazal Kolonizasyon Sırasında İnflamatuar Yanıtların Karakterizasyonu

Bu makalede deneysel koşullar altında sığır bronkoskopik teknikler, yani bronkoskopik güdümlü aşılama, bronkoalveoler lavaj, bronş fırçalama ve transbronşiyal akciğer biyopsisi açıklanır.

Biyomedikal Araştırma Sığır Akciğer: Görme Kılavuzlu Bronkoskopi, intrabronşiyal Aşılama ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Örnekleme Teknikleri

Bu çalışma, farelerde akut pnömokok pnömonisine karşı koruma sağlamak için akciğerlerde doğuştan gelen bağışıklık tepkisini artırmak için dil altı immünoterapisinin kullanılmasının rahatlığını göstermektedir.

Alternatifi olarak dilaltı immünoterapi Akut Solunum Enfeksiyonları Karşı Koruma tetikleyebilecek

Akciğerin sağlık durumu, akciğer bronşiollerinde bulunan bağışıklık hücrelerinin türüne ve sayısına göre yansıtılır. Farelerin alt solunum yollarından yapışkan olmayan hücrelerin ve çözünür faktörlerin izolasyonunu ve çalışılmasını sağlayan bir bronkoalveolar lavaj tekniğini açıklıyoruz.

İnflamatuvar Hücre İnfiltrasyonunu İncelemek İçin Murin Akciğerlerin Bronkoalveoler Lavajı

Bu iletişim kuralı için üst solunum yolları rahatsız edilmeden Mukozal astar sıvı örnekleme invaziv olmayan bir teknik anlatılmaktadır. Vivo düzeyleri sitokinler ve kemokinler, gibi protein arabulucu miktar her yaştan bireylerde gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Mukozal astar sıvı noninvaziv örnekleme için In Vivo üst solunum yolu bağışıklık arabulucu düzeyleri miktar

Bu el yazması burun ve bronş emme teknikleri, özellikle alt ve üst hava yolu Mukozal astar sıvı (MLF) örnek için sentetik dinsel matrisler (SAM) kullanarak açıklar. Bu yöntemleri daha iyi standardizasyon ve tolerabilite mevcut solunum örnekleme teknikleri daha sağlar.

Burun ve bronş sıvıları emilimini: hassas örnekleme insan solunum mukoza ve laboratuvar işleme örnekleri

Mevcut protokol, murin nazal lavaj sıvısında (NLF) kan kontaminasyonunu önlemek için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, kan kontaminasyonu olmadan NLF toplanmasını sağladığından, immünolojik bileşenlerin ve çeşitli solunum yolu patojenlerinin daha doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar.

Kan Kirliliği Olmadan Murine Nazal Lavaj Sıvısı Toplama

Öğrenin, radyasyon tedavisi gören köpeklerde burun immün mikroçevresini örneklemek için minimal invaziv tuzlu su lavajı yöntemini. Bu teknik, immün yanıtları seri olarak analiz etmenizi sağlar.

Köpek Nazal İmmün Mikroçevresinin Örneklenmesi için Tuzlu Su Lavajı

Daha fazla video keşfet