Name: Puparium çıkarıldıktan sonra Drosophila pupa bacak gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Öğrenin Drosophila pupa bacağı gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi yöntemini, puparium çıkarımı ve konfokal mikroskopi kullanarak. Bu protokol hücre şekil değişimlerini ve morfojenez mekanizmalarını incelemek için uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Drosophila Pupa Bacak Morfogenezinin Puparium Olmadan Genişletilmiş Canlı Görüntülenmesi

<ol><li>Koto, A., Kuranaga, E., Miura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+regulation+of+Drosophila+IAP1+determines+caspase+functions+in+sensory+organ+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Temporal regulation of Drosophila IAP1 determines caspase functions in sensory organ development.</a> J Cell Biol. 187 (2), 219-231 (2009).</li>
<li>Ninov, N., Martín-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+epidermal+morphogenesis+during+the+development+of+the+adult+abdominal+epidermis+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Live imaging of epidermal morphogenesis during the development of the adult abdominal epidermis of Drosophila.</a> Nat Protoc. 2 (12), 3074-3080 (2007).</li>
<li>Chiba, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activatable+photosensitizer+for+targeted+ablation+of+lacZ-positive+cells+with+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Cent+Sci%22%5BJournal%5D)">Activatable photosensitizer for targeted ablation of lacZ-positive cells with single-cell resolution.</a> ACS Cent Sci. 5 (11), 1676-1681 (2019).</li>
<li>Umetsu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+increases+in+mechanical+tension+shape+compartment+boundaries+by+biasing+cell+intercalations%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Local increases in mechanical tension shape compartment boundaries by biasing cell intercalations.</a> Curr Biol. 24 (16), 1798-1805 (2014).</li>
<li>Tran, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+disassembly+of+a+microtubule-based+membrane+protrusion+network+coordinates+3D+epithelial+morphogenesis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Programmed disassembly of a microtubule-based membrane protrusion network coordinates 3D epithelial morphogenesis in Drosophila.</a> EMBO J. 43 (6), 568-594 (2024).</li>
<li>Hellerman, M. B., Choe, R. H., Johnson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-imaging+of+the+Drosophila+pupal+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Live-imaging of the Drosophila pupal eye.</a> J Vis Exp. (95), e52120(2015).</li>
<li>O'Connor, J. T., Shannon, E. K., Hutson, M. S., Page-McCaw, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mounting+Drosophila+pupae+for+laser+ablation+and+live+imaging+of+the+dorsal+thorax%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Mounting Drosophila pupae for laser ablation and live imaging of the dorsal thorax.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101396(2022).</li>
<li>Ziserman, D., Roegiers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+imaging+of+sensory+organ+precursor+cells+in+intact+Drosophila+pupae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Live-cell imaging of sensory organ precursor cells in intact Drosophila pupae.</a> J Vis Exp. (51), e2706(2011).</li>
<li>Tögel, M., Pass, G., Paululat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+Drosophila+wing+heart+development+during+pupal+stages%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of Drosophila wing heart development during pupal stages.</a> Int J Dev Biol. 57 (1-2), 13-24 (2013).</li>
<li>Weavers, H., Franz, A., Wood, W., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+in+vivo+tracking+of+inflammatory+cell+dynamics+within+Drosophila+pupae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long-term in vivo tracking of inflammatory cell dynamics within Drosophila pupae.</a> J Vis Exp. (136), e57871(2018).</li>
<li>Kojima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+mechanism+of+the+tarsus+in+insect+legs%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Developmental mechanism of the tarsus in insect legs.</a> Curr Opin Insect Sci. 19, 36-42 (2017).</li>
<li>Mirth, C., Akam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+development+in+the+Drosophila+leg%3A+Cell+movements+and+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Joint development in the Drosophila leg: Cell movements and cell populations.</a> Dev Biol. 246 (2), 391-406 (2002).</li>
<li>Mirth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecdysteroid+control+of+metamorphosis+in+the+differentiating+adult+leg+structures+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Ecdysteroid control of metamorphosis in the differentiating adult leg structures of Drosophila melanogaster.</a> Dev Biol. 278 (1), 163-174 (2005).</li>
<li>Tajiri, R., Misaki, K., Yonemura, S., Hayashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+shape+changes+of+ECM-producing+cells+drive+morphogenesis+of+ball-and-socket+joints+in+the+fly+leg%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dynamic shape changes of ECM-producing cells drive morphogenesis of ball-and-socket joints in the fly leg.</a> Development. 137 (12), 2055-2063 (2010).</li>
<li>Hiraiwa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unveiling+the+cell+dynamics+during+the+final+shape+formation+of+the+tarsus+in+Drosophila+adult+leg+by+live+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Unveiling the cell dynamics during the final shape formation of the tarsus in Drosophila adult leg by live imaging.</a> Dev Genes Evol. , (2024).</li>
<li>ImageJ plugin page. , Signaling RIKEN. Available at: 
 <a target="_blank" href="https://signaling.riken.jp/en/en-tools/imagej/629/">https://signaling.riken.jp/en/en-tools/imagej/629/</a> (2024).</li>
<li>Pandey, R., Heidmann, S., Lehner, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+re-organization+and+dynamics+of+progression+through+mitosis+in+Drosophila+separase+complex+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Epithelial re-organization and dynamics of progression through mitosis in Drosophila separase complex mutants.</a> J Cell Sci. 118 (4), 733-742 (2005).</li>
<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J Cell Biol. 149 (2), 471-490 (2000).</li>
<li>Ashburner, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1989).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>35 mm/cam taban çaması</td><td>IWAKI</td><td>3911-035</td><td></td></tr><tr><td>Temizleme mendilleri</td><td>NIPPON PAPER CRECIA</td><td>S-200</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3c Forseps</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>11231-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF</td><td>Güzel Bilim Aletleri</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus 2-20 &mikro; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000098</td><td></td></tr><tr><td>Sinek suşu: His2Av-mRFP, sGMCA</td><td>Bloomington Drosophila Stok Merkezi</td><td>59023</td><td></td></tr><tr><td>FV3000</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>ters konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>FV31S-SW</td><td>EVIDENT</td><td>FV3000 G40L</td>Shin-Etsu Silikon silikon gres için EVIDENT <td></td> yazılımı</tr><tr><td></td><td></td><td></td>Mikro Kapak Camı 18 x 18 mm 0.13-0.17 mm <td></td></tr><tr><td></td><td>MATSUNAMI</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Sürgülü Cam 76 x 26 mm 0.9-1.2 mm</td><td>MATSUNAMI</td><td>S7213</td><td></td></tr><tr><td>NEO-SABLE Boyut 0 yuvarlak, ince</td><td>Pentel</td><td>XZBNR-0</td><td>boya fırçası</td></tr><tr><td>SIL300CS-30CC</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>silikon yağı</td></tr><tr><td>Stereomikroskop Sistemi SZX7</td><td>EVIDENT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Terumo şırınga 50 mL</td><td>Terumo</td><td>SS-50ESZ</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf çift taraflı bant</td><td>Scotch&nbsp;</td><td>665-1-12</td><td>İç katman, dış katmandan daha güçlü yapışma özelliğine sahip olduğundan, pupaları sabitlemek için iç katman kullanılmalıdır.</td></tr><tr><td>UPLSAPO10x</td><td>EVIDENT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>UPLSAPO40XS</td><td>EVIDENT</td><td></td><td>silikon daldırma lensi</td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Makas - 2.5mm Kesme</td><td>Kenarı İnce Bilim Araçları</td><td>15000-08</td><td>isteğe bağlı</td></tr></tbody></table>

puparium çıkarıldıktan sonra drosophila pupa bacak gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi

Long-Term Live Imaging of Drosophila Pupal Leg Development After Puparium Removal

Burada, pupa evresinde gelişmekte olan Drosophila yetişkin bacağının 44 saatlik canlı görüntülemesinin bir örneği anlatılmaktadır. His2Av-mRFP17 (etiketleme çekirdekleri) ve sGMCA18 (GFP etiketli aktin bağlayıcı protein Moesin, aktin etiketleme) eksprese eden sinekler beyaz pupa aşamasında toplandı ve 25 ° C'de 15 saat inkübe edildi. Puparium protokole göre çıkarıldı ve monte edildi (Şekil 2). Bacağın ucuna yakın tarsus ve pretarsus'un Z yığını görüntüleri, oda sıcaklığında (katı değil, ancak 25 ° C'ye yakın) 16 saat ila 60 saat APF arasında her 15 dakikada bir başarıyla elde edildi. Görüntü serisinin ilk yarısı Şekil 3'te, ikinci yarısı Şekil 4'te ve tamamının filmi Film 1'de gösterilmiştir. Bacak dokusu hızla daraldıkça, epitel hücreleri geçici olarak ilgi çekici bir yapı oluşturdu, apikobazal çıkıntıları ve bazal bağlantıları ile karakterize edilen Parthenon benzeri yapı (Şekil 3). Epitel kalınlığındaki azalma, taslak neredeyse tamamlandıktan sonra bile gözlenmiştir (Şekil 4). Tüm süreç Şekil 1'de gözden geçirilmiştir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig1.jpg"> 
Şekil 1: Pupa evresindeki Drosophila ergin tarsusunun son şekil oluşumuna genel bakış. Tüm süreç, uzun süreli canlı görüntüleme deneylerinde gözlemlenen hem doku hem de hücresel düzeylerdeki morfolojik değişikliklere dayalı olarak beş aşamaya ayrıldı. Birkaç zaman noktasına karşılık gelen temsili fotoğraflar veya yüzey oluşturulmuş görüntüler (sGMCA sinyali) sol tarafta gösterilir. Her aşamadaki olayların kısa açıklamaları sağ tarafa yazılmıştır. Bu rakam Hiraiwa ve ark.15'ten değiştirilmiştir. Ayrıca bakınız Film 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig2.jpg"> 
Şekil 2: Canlı görüntüleme için puparium çıkarma ve montaj montajı. (A) Bir tabakta toplanmış beyaz bir pupa. (B) Pupa, 25 ° C'de 15 saat inkübe edildikten sonra (A)'da ortaya çıktı. Bölge renkli camgöbeği operkulumu gösterir. (C) Çift taraflı bir bant parçasına yapıştırılmış bir pupayı gösteren bir fotoğraf. (D-J) Puparium çıkarma prosedürünü gösteren bir dizi görüntü. (D) Operkulum forseps ile kaldırılır. (E) Operkulum çıkarılır. (F) Pupa kütikül ile puparium arasına bir forseps ucu yerleştirilir. (G) Puparium kısmen açılmıştır. (H) Bir forseps ucu tekrar yerleştirilir. (I) Puparium açıldı ve arka ucun sadece küçük bir kısmını bıraktı. (J) Pupa bir boya fırçası ile kaldırılıyor. (K) Pupa'nın vücut sıvısı sızıntısına bir örnek. Forseps ucu ile açılan yaradan çıkan sıvı bir ok ucu ile gösterilir. (L-N) Montaj montajını gösteren resimler ve çizimler. (L) Cam tabanlı bir tabağın dibine yerleştirilmiş pupa ve damıtılmış suyu gösteren yukarıdan bakıldığında görüntülenen bir görüntü. (M) Montaj montajının tamamlanmasından sonraki çanak. Cam kısmın etrafındaki kenar boyunca silikon gres sürüldü ve gresin sızdırmaz hale getirilmesi için üzerine bir lamel yerleştirildi. (N) Uzun süreli canlı görüntüleme için Drosophila pupa'nın montaj düzeneğinin şematik çizimi. (O) Atlı bir pupa neredeyse yetişkin olarak gelişti. (P) Monte edilmiş bir pupa kapanıyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig3.jpg"> 
Şekil 3: 16-27.5 h APF'de tarsal epitel hücrelerinde dinamik şekil değişiklikleri. (A) Ventral taraftan görülen pupa'nın bir örneği. Kesikli dikdörtgen, (BE) içinde gözlemlenen bölgeye karşılık gelir. L1: birinci bacak, L2: ikinci bacak, L3: üçüncü bacak. (B,C,D,E) sGMCA (yeşil) ve His2Av-mRFP'de (macenta) sineği ifade eden tarsusun distal kısmının canlı görüntülemesinden kareler. Doku hızla daralır ve eklem bölgelerinin girintisi ilerler. (B',C',D',E') Sırasıyla (B,C,D,E) içindeki kesikli çizgilerle çevrili bölgelerin büyütülmesi. (C') içindeki ok ve ok ucu, sırasıyla apikobazal çıkıntıların bir örneğini ve bazal bağlantıların konumunu gösterir. Partenon benzeri yapı (B')'de oluşmaya başlar, (C')'de tamamen oluşur, (D')'de kaybolmaya başlar ve (E')'de görülmesi zorlaşır. Distal tüm şekillerde sağda ve dorsal tepeye doğrudur. Aşamalar sağ alt köşelerde (B,C,D,E) şeklinde gösterilir. Ölçek çubukları: B,C,D,E: 50 μm; B',C',D',E': 10 μm. Bu rakam Hiraiwa ve ark.15'ten değiştirilmiştir. Ayrıca bakınız Film 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig4.jpg"> 
Şekil 4: 41-60 saat APF'de tarsal epitel hücre tabakasındaki şekil değişiklikleri. (A,B,C,D) Şekil 3 ile aynı sıralı canlı görüntüleme veri setinden hareketsiz görüntüler. (A,B,C,D) içindeki kesikli dikdörtgenler sırasıyla (A',B',C',D') içinde büyütülür. Yaklaşık 48 saat APF (AB') ile, kılların, pençelerin ve pulvillusların uzaması gibi dış şekil oluşumu neredeyse tamamlanır. İnvaze eklemin alt kısmı proksimal olarak hareket etti ve daha sonra, top ve soket yapı oluşumu yaklaşık 54 saat APF'den sonra ilerledi. Dorsal ve ventral epitel arasındaki morfolojik fark belirginleşti (B',C',D'de çift oklar ve açık çift oklar). 54 saat APF'den (C-D') sonra, epitel tabakası, segmentlerin ana hatlarını neredeyse hiç değiştirmeden kalınlığını azalttı. Tüm şekillerde sırt üstte ve sağda distaldir. Ölçek çubukları: A,B,C,D: 50 μm; A',B',C',D': 20 μm.Bu rakam Hiraiwa ve ark.15'ten alınmıştır. Ayrıca bakınız Film 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67597/67597fig5.jpg"> 
Şekil 5: Bright Z fonksiyonu kullanılarak yapılan bacak gözlemine bir örnek.(A,B) Parlak Z işlevi kullanılarak (B) ile veya (A) olmadan sineği ifade eden sGMCA (yeşil) ve His2Av-mRFP'nin (macenta) üçüncü bacağının ilgili bölgesinin, derinliğinin ve aşamasının görüntüleri. (A) Bright Z fonksiyonu kullanılmadan elde edilen 16 h APF'de üçüncü bacaktaki tarsal bölgenin gözleminden çıkarılan 59.1 μm derinlikte bir XY düzlemi. (Bir') Kesit görünümü, (A)'daki sarı dikey çizgiye karşılık gelir. (A') içindeki dikey çizgi, (A)'nın odak düzlemini gösterir. (B) Bright Z fonksiyonu kullanılarak elde edilen 16 saatlik APF'de üçüncü bacaktaki tarsal bölgenin gözleminden çıkarılan 61.6 μm derinliğinde bir XY düzlemi. Hem PMT voltajı hem de lazer gücü ayarlandı. Görüntünün görünürlüğü (A) ile karşılaştırıldığında iyileştirilmiştir. (B') Kesit görünümü, (B) içindeki sarı dikey çizgiye karşılık gelir. (B') içindeki sarı dikey çizgi, (B)'nin odak düzlemini gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: 15-30 saat APF'den bacak tarsal bölgesinin canlı görüntülenmesi için konfokal mikroskop ayarına bir örnek. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/67597_Supplementary%20File%201.docx" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Film 1: Tarsusun distal kısmının 44 saat boyunca uzun süreli canlı görüntülenmesi. sGMCA (yeşil) ve His2Av-mRFP (macenta) ifade eden sinek kullanıldı. En temsili XY düzlemi, Şekil 3 ve Şekil 4 ile aynı veri kümesinden çıkarıldı. Ok uçları gelecekteki ortak bölgelerin örneklerini gösterir. Dokuda hızlı hareket eden hücreler makrofaj benzeri hücrelerdir. Tarsal segmentler boyunca uzanan sicim benzeri sinyal, septumun bir parçasıdır. Zaman damgası ss: mm'yi gösterir. Distal sağda ve dorsal tepede. Bu film Hiraiwa ve ark.15'ten uyarlanmıştır <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67597/Movie%201.mp4" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Puparium çıkarıldıktan sonra Drosophila pupa bacak gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi

Over the past decades, significant progress has been made in understanding the mechanisms of cell fate determination. However, the process by which ...

long-term-live-imaging-drosophila-pupal-leg-development-after

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Mezoskopik floresan tomografi doku kesit floresan mikroskopi penetrasyon sınırları ötesinde faaliyet göstermektedir. Tekniği çok projeksiyon aydınlatma ve foton bir taşıma açıklamasına dayanmaktadır. Biz, in vivo morfolojilerinden tüm vücut 3B görselleştirme, GFP ifade kanat hayali diskler...

Mezoskopik Floresans Tomografi için In-vivo Görüntüleme Geliştirme Drosophila</em

Bu video, canlı hücre görüntüleme asimetrik sağlam duyu organı progenitör hücreleri ve epidermal hücrelerin bölünmesi için bir metodu...

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Source: Hellerman, M. B., et al. Drosophila Pupa Gözünün canlı görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2015)Video, bir Drosophila melanogaster pupasında göz desenini incelemek için canlı görüntüleme tekniğini göstermektedir. Yeşil floresan proteini (GFP) etiketli belirteçler, gelişmekte olan göz yapısının oluşumu sırasında hücresel organizasyonun ve farklılaşmanın görselleştirilmesini sağlar.

Floresan mikroskobu kullanılarak Drosophila pupa gözünün canlı görüntülenmesi

Bu kağıdı doğrudan puparium aracılığıyla görüntü hücre davranışı hızlı bir tarama konfokal mikroskop kullanımını gösterir. Sağlam pupa davayı bırakarak, bu yöntem doğrudan çalışma zordur Drosophila bir gelişme aşamasında gözlem ve dinamik hücre süreçlerinin ölçülmesini sağlar.

Ve Pupa Durumunda sayesinde görüntüleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu protokol, canlı Drosophila pupa göz nöroepitelini görüntülemek için etkili bir yöntem sunar. Bu yöntem, doku hareketini ve düzensiz topolojiyi telafi eder, birden fazla GFP etiketli bağlantı proteininin kullanılması yoluyla hücre sınırlarının görselleştirilmesini geliştirir ve kolayca monte edilebilen bir görüntüleme teçhizatı kullanır.

Canlı-görüntüleme Drosophila Pupa Göz

Bu protokol uzun vadeli ex vivo kültür ve Drosophila hayali diskin canlı görüntüleme için ayrıntılı bir yöntem tarif etmektedir. Göz diskin canlı görüntüleme 10 saat süre içinde fotoreseptör farklılaşma ve ommatidial dönüşünü gösterir. protokol basit ve pahalı kurulum gerektirmez.

Uzun süreli Canlı Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Göz Disk

Burada, canlı genel ve kas-tendon morfogenez gelişim süreçlerinin özellikle yaşam görüntüleme gerçekleştirmek için kullanımı kolay ve çok yönlü bir yöntem mevcut Drosophila pupa.

Vivo Kas-tendon morfogenez Drosophila pupa içinde görüntüleme

Burada yüksek spatio-zamansal çözünürlük vivo içindecanlı görüntüleme yara onarım ve ilişkili inflamatuar yanıt için bir iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem uzun vadeli görüntüleme ve belirli hücre popülasyonlarının zaman içinde izleme etkinleştirmek için Drosophila geliştirme pupa aşaması kullanır ve verimli RNAi aracılı gen inactivation ile uyumludur.

İnflamatuar hücre dinamiği Drosophila pupa içinde uzun vadeli Vivo içinde izleme

Bu protokol, meyve sineği metamorfoza uğrarken Drosophila abdominal epitelde hücre oryantasyonu ve doku büyüme dinamiklerinin görüntülenmesi ve analizi için tasarlanmıştır. Burada açıklanan metodoloji Drosophila veya diğer model organizmalarda farklı gelişimsel aşamaların, dokuların ve hücre altı yapıların incelenmesine uygulanabilir.

Pupal Evrelerinde Gelişen Drosophila Epitelinde Doku Oryantasyonu ve Büyüme Dinamiğinin Görüntülenmesi ve Analizi

Bu protokol, drosophila larvalarının sağlam canlı hayvanlarda 10 saatten daha uzun süre kesintisiz zaman atlamalı görüntüleme elde etmek için bir yöntem inşama yöntemini açıklamaktadır. Bu yöntem larva gövde duvarına yakın birçok biyolojik süreci görüntülemek için kullanılabilir.

LarvaSPA, Uzun Süreli Hızlandırılmış Görüntüleme için Drosophila Larva Montajı Için Bir Yöntem

Burada, Drosophila yumurtalık nişindeki germ hattı kök hücrelerinin (GSC'ler) asimetrik bölünmesinin canlı görüntülemesini gerçekleştirmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Spektrozom proteini Par-1'in yeşil floresan proteini (GFP) füzyonunu her yerde ifade eden bir transgenik çizgi kullanıyoruz.

Kadın Drosophila melanogaster Germline Kök Hücre Nişlerinin Genişletilmiş Canlı Görüntülenmesi

Öğrenin Drosophila pupa bacağı gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi yöntemini, puparium çıkarımı ve konfokal mikroskopi kullanarak. Bu protokol hücre şekil değişimlerini ve morfojenez mekanizmalarını incelemek için uygundur.

Puparium çıkarıldıktan sonra Drosophila pupa bacak gelişiminin uzun süreli canlı görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet