Name: Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Keşfedin, domuz bağırsak organoidleri kullanarak gastrointestinal fizyolojiyi in vitro modelleme yöntemini. TEER ölçümleri ve Ussing chamber deneyleriyle epitel bütünlüğü ve sekretuar yanıtları değerlendirilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu protokol için iki sağlıklı domuz (Bentheim Blacked Pied domuzu; 1 erkek, 1 dişi; 4.5 aylık; yaklaşık 65 kg) tutsak cıvata atışı ve kanaması ile sakrifiye edildi. Hayvanları Koruma Kanunu'na göre, bu (dokuların kesilmesi ve alınması) bir hayvan deneyi olarak sınıflandırılmaz, ancak hayvan refahı görevlisine bildirilmesi gerekir (kayıt no. TiHo-T-2023-15) Hannover Veterinerlik Üniversitesi Vakfı'ndan.
1. Eklerin kaplanması
NOT: Tüm adımlar bir güvenlik kabini altında steril malzemelerle gerçekleştirilir. Protokolün tüm adımları, aksi belirtilmedikçe buz üzerinde gerçekleştirilir.
<ol>
	<li>Donmuş bazal membranı oda sıcaklığında en az 1 saat buz üzerinde veya gece boyunca buz üzerinde 4 °C'de çözdürün. Bazal membranı 1:40 (h/v) ile buz gibi steril fosfat tamponlu salin (PBS) ile konik bir tüpte karıştırın.</li>
	<li>Ekleri olan steril plakaları ambalajından çıkarın. Her bir ekin apikal bölmesine 200 μL bazal membran karışımı ekleyin.</li>
	<li>Kuyu plakasının kapağını değiştirin ve bir inkübatörde 37 ° C'de,% 5 CO2 'de en az 1,5 saat inkübe edin.</li>
	<li>Hücreleri tohumlamadan önce çözeltiyi dikkatlice aspire edin. Aspirasyon sırasında ucun zara temas etmediğinden emin olun.</li>
</ol>
2. 2D organoid tek tabakaların oluşturulması
NOT: Domuz kolon organoidleri, domuz jejunal organoidleri25 için tarif edildiği gibi üretilir ve yetiştirilir. 3D organoidlerin üretilmesinden sonra, tutarlı bir büyüme sağlamak için bunlar haftalık geçiş sırasında en az 3-4 hafta boyunca yetiştirilmelidir. Sonraki adımlarda çözünen 3D organoidler içeren her bir kubbe içindeki hücre sayısı, tek bir transmembran filtreyi kaplamak için yeterlidir. Tek tabakalı üretimden önce, 3D organoidler, önceki büyümeyi ve olası kontaminasyonu kontrol etmek için optik kalite kontrolüne tabi tutuldu (Şekil 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67666/67666fig01.jpg"> 
Resim 1: Temsili 3D organoidler. Üç boyutlu (A) jejunum ve (B) kolon organoidleri, tek tabakalar oluşturulmadan önce mikroskop altında dikkatlice incelenir. Önceki büyüme modellerinin, yapısal bütünlüğün ve herhangi bir safsızlık veya kontaminasyonun varlığının değerlendirilmesine özel önem verilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67666/67666fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol>
	<li>Organoid ortamı (Tablo 1) 3D kript organoidleri ile kuyulardan çıkarın. Oyuk başına 1 mL buz gibi soğuk PBS ekleyin ve bir p1000 ucu ile yukarı ve aşağı pipetleyerek bazal membranı nazikçe çözün.</li>
	<li>Tüm çözünmüş organoidleri, 10 mL buz gibi soğuk PBS ile önceden doldurulmuş 15 mL'lik bir tüpte toplayın. Tüpü 250 x g'da, 4 ° C'de 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı aspire edin.</li>
	<li>Peleti 1 mL ılık (37 °C) %0,05 (h/h) tripsin/EDTA içinde yeniden süspanse edin (bu aşamada 2 tüp toplanabilir). Bir su banyosunda 37 ° C'de 5 dakika inkübe edin ve daha sonra reaksiyonu durdurmak için doğrudan buzun üzerine koyun.</li>
	<li>P20 ucu ile 1000x buz üzerinde ve üstte p15 ucu + p1000 ucu ile 200x daha tekrar askıya alın. % 10 (h / h) fetal buzağı serumu (FCS) ile desteklenmiş 10 mL buz gibi soğuk DMEM ekleyin.</li>
	<li>1.000 x g'da santrifüj tüpü, 4 ° C'de 10 dakika. Süpernatanı atın ve peleti 1 mL tek katmanlı ortamda yeniden süspanse edin (Tablo 1).</li>
	<li>Üreticinin talimatlarına göre bir Neubauer odası kullanarak mL başına canlı hücre sayısını belirleyin.</li>
	<li>Bu noktada kaplama solüsyonunu apikal bölmeden çıkarın ve 500 μL ılık (37 ° C) tek katmanlı ortamla değiştirin. Basolateral bölmeye 3 mL tek katmanlı ortam ekleyin.</li>
	<li>Adım 3'te ayrıntılı olarak açıklandığı gibi, her bir boş transwell ekinin boş direncini (TEER) belirleyin. Apikal odada hiçbir ortamın bulunmadığı süre, hücrelerin kurumasını önlemek için mümkün olduğunca kısa olmalıdır.</li>
	<li>Apikal tek tabakalı ortamı çıkarın ve jejunal 2D kültür için 2 x 105 epitel hücresi ve kolonik 2D kültür için 1.5 x 105 epitel hücresi ekleyin, her transwell'in apikal odasına 500 μL tek katmanlı ortamda.</li>
	<li>Ortamı değiştirin ve her 2-3 günde bir TEER'i ölçün. Ortam değiştirilmeden önce TEER'i ölçün. Apikal ve bazal bölmenin ortamını dikkatlice aspire edin ve 500 μL veya 3 mL taze, ılık (37 ° C) ortamla değiştirin.<ol>
		<li>Jejunum organoidleri için: 16. günde, tohumlamadan sonra, tek tabakalı ortamdan farklılaşma ortamına geçin (Tablo 1). Kolon organoidleri için: 7. günde ortamı farklılaşma ortamına değiştirin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Farklılaşma ortamını her gün değiştirin ve her ortam değişikliği sırasında TEER ölçümü yapın. 18. günde (jejunal organoidler için) veya 9. günde (kolon organoidleri için), tohumlamadan sonra fonksiyonel deneylere devam edin.</li>
</ol>
3. Transepitelyal elektrik direncinin (TEER) ölçümü
NOT: Kontaminasyonu önlemek için tüm ölçümler bir güvenlik kabini altında gerçekleştirilir. Hücreleri tohumlamadan önce, her boş kaplanmış transkuyucuk, ayrı ayrı boş değerler elde etmek için ölçülür. Volt-ohm metre, değerleri tanıtılan bir USB cihazında saklar.
<ol>
	<li>Çubuk elektrodu p (h/h) etanol ile temizleyin ve elektrotun tamamen kurumasını bekleyin. Bu arada, plakayı inkübatörden çıkarın ve kabinin altına yerleştirin.</li>
	<li>Çubuk elektrodunun kısa kolunu eklerin apikal bölmesine ve uzun kolu ek parçanın bazolateral bölmesine yerleştirin. Kısa kolun hücre tabakası ile temasından kaçının.</li>
	<li>Her bir transwell'in transepitelyal elektrik direncini ölçün. Kararlı bir ölçüm sağlamak için volt-ohm metrenin dengelenmesine izin verin. Mağaza düğmesine tıklayarak TEER değerlerini ölçün.</li>
	<li>Kalan kuyucuklarla 3.2 ve 3.3 adımlarına devam edin. Son kuyuya ulaştıktan sonra, volt-ohm metre, verileri bir USB cihazında saklamak için bir istek açar. Kaydet'i tıklayın.</li>
	<li>Her plakadan sonra ve ölçümün sonunda elektrodu temizleyin ve saklamadan önce tamamen kurumasını bekleyin.</li>
	<li>Hücreleri tohumlamadan önce belirlenen boş değerleri, ölçülen hücresel değerlerden çıkarın.</li>
</ol>
4. Ussing odası tekniği kullanılarak yapılan elektrofizyolojik transport çalışmaları
NOT: Elektrofizyolojik taşıma çalışmalarının belirlenmesi, epitel ile bölünmüş iki bölmeden oluşan bir Ussing odası kullanılarak gerçekleştirilir. Bu oda, Ag / AgCl Elektrotları ile bir voltaj kelepçesine bağlanır. Bu teknik, voltaj kelepçesi tarafından indüklenen kısa devre akımındaki (Isc) değişiklikler ve Ohm yasası ile hesaplanan doku direnci(RT) yoluyla epitelin aktif elektrojenik taşıma süreçlerinin izlenmesine izin verir. Isc ve Rt, tüm deney boyunca her 6 saniyede bir kaydedilir. Deney sırasında, incelenen doku karbojen ile havalandırılır ve uygulanabilir koşulları sağlamak için modifiye edilmiş Krebs-Henseleit çözeltileri ile inkübe edilir. Prostaglandin sentezini inhibe etmek için tampon çözeltilerine indometazin (10 μM) eklenir26.
<ol>
	<li>Mukozal ve serozal tampon çözeltilerini 37 °C'ye ısıtın ve karbojen ile havalandırın. Her bir bölme için boş bir ek kullanarak tek bölmeleri birleştirin. Transwell'lerin apikal taraflarının hepsinin aynı yöne baktığından emin olun.</li>
	<li>Tüm odaları 5 mL önceden ısıtılmış mukozal tampon çözeltisi ile doldurun (Tablo 2). Voltaj kelepçesinden gelen tüm elektrotları üreticinin talimatlarına göre ayrı bölmelere bağlayın. Doğru ölçümü sağlamak için elektrotlara gaz kabarcığı girmediğinden emin olun.</li>
	<li>Voltage-clamp yazılımındaki Rf/dpI düğmesine tıklayarak Ussing odası yazılımını bu koşullarla kalibre edin. Kullanılan tüm boş eklerin direnci eşit olmalı (~ 70 Ohm) ve akım yaklaşık 0 mV (± 5 mV) olmalıdır. Bazı odalar için durum böyle değilse, sisteme elektrotların veya kabarcıkların uygun şekilde yerleştirilip yerleştirilmediğini kontrol edin.</li>
	<li>Tüm elektrotları çıkarın ve kullanılmış tampon çözeltisini atın. Tüm ayrı odaları açın ve boş ekleri çıkarın. Bireysel odaların sırasının korunduğundan emin olun.</li>
	<li>Kuyu plakasını eklerle birlikte inkübatörden güvenlik kabinine taşıyın. Bazolateral ve apikal ortamı dikkatlice aspire edin.</li>
	<li>Apikal odaya 500 μL ılık (37 °C) mukozal tampon ve bazolateral odaya 3 mL serozal tampon ekleyerek hücreleri yıkayın. Tamponları aspire edin ve 2 kez tekrarlayın.</li>
	<li>Ekleri plakadan çıkarın. Eklerin desteklerini yavaşça çıkarın. Ekleri Ussing odalarına yerleştirin ve eklerin yönünün kalibrasyon aşamasındaki ile aynı olduğundan emin olun. Tek tek odaları Şekil 2'de gösterildiği gibi birleştirin.</li>
	<li>Hücrelerin bazolateral tarafına bakan odaları 5 mL serozal tampon ile doldurun (Tablo 2) ve apikal odaya bakan odayı 5 mL mukozal tampon ile doldurun.</li>
	<li>Elektrotları ve havalandırma tüplerini her bir odaya bağlayın. Ussing yazılımında ölçümü başlatın. 15 dakika dengeye izin verin.</li>
	<li>Koşulları açık devreden kısa devre koşullarına değiştirin. 5 dakika ila 10 dakika arasında dengeleyin. Serozal odaya 10 μM forskolin ekleyin. NOT: Forskolin ilavesi, bireysel bağırsak segmentlerine ve araştırma sorularına bağlı olarak diğer ajanlar / maddeler ile değiştirilebilir.</li>
	<li>15 dakika sonra, forskolin ile aynı şekilde daha fazla ajan ekleyin veya ölçümü durdurun. Havalandırma tüplerini ve elektrotları ayrı odalardan çıkarın. Her iki odanın tampon çözeltilerini bir kaseye dökün.</li>
	<li>Odaları sökün ve ekleri atın veya takip analizi için kullanın (örn., immünohistokimya veya ekspresyon analizi)</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67666/67666fig02.jpg"> 
Şekil 2: Ussing odasının şematik yapısı. Görüntülenen, her iki oda, büyütülmüş 2D tek tabaka ile zar tarafından bölünmüştür. Her iki oda da karbojen ile havalandırılır; Voltaj ve akım, oda başına iki elektrot tarafından izlenir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67666/67666fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
5. Ussing odası kurulumu tarafından üretilen verilerin analizi
<ol>
	<li>Voltaj kelepçesi yazılımı tarafından oluşturulan verileri uygun bir elektronik tablo düzenleyicisine aktarın.</li>
	<li>Bazal I,sc ve Rt değerlerini belirlemek için, kısa devre koşullarını başlattıktan 10 dakika sonra alınan 10 ardışık veri noktasının ortalamasını hesaplayın. Her bir oda teknik bir kopya görevi görürken, organoidlerin her geçişi biyolojik bir kopya görevi görür.</li>
	<li>Uygulanan ajanların etkilerini değerlendirmek için, ajanın eklenmesinden hemen önce 10 ardışık veri noktasının ortalamasını hesaplayın. Bu ortalamayı, ajan uygulandıktan sonra gözlemlenen maksimum (veya minimum) değerle karşılaştırın. Elde edilen veriler ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunulmuştur.</li>
</ol>

<ol><li>Hornbuckle, W. E., Tennant, B. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHornbuckle%2C+WE+%22Clinical+Biochemistry+of+Domestic+Animals%22">Clinical Biochemistry of Domestic Animals</a>. , Academic Press. 367-406 (1997).</li>
<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cells%3A+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li>
<li>Pham, T. A., Lawley, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+insights+on+intestinal+dysbiosis+during+bacterial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emerging insights on intestinal dysbiosis during bacterial infections.</a> Curr Opin Microbiol. 17 (100), 67-74 (2014).</li>
<li>Garrett, W. S., Gordon, J. I., Glimcher, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostasis+and+inflammation+in+the+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Homeostasis and inflammation in the intestine.</a> Cell. 140 (6), 859-870 (2010).</li>
<li>Ternhag, A., Torner, A., Svensson, A., Ekdahl, K., Giesecke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-+and+long-term+effects+of+bacterial+gastrointestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Short- and long-term effects of bacterial gastrointestinal infections.</a> Emerg Infect Dis. 14 (1), 143-148 (2008).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+principles+of+humane+experimental+technique%22">The principles of humane experimental technique</a>. , Methuen & Co. Limited. London. (1959).</li>
<li>Zietek, T., Boomgaarden, W. A. D., Rath, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening%2C+oral+bioavailability+and+regulatory+aspects%3A+A+need+for+human+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Drug screening, oral bioavailability and regulatory aspects: A need for human organoids.</a> Pharmaceutics. 13 (8), 1280(2021).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Gonzalez, L. M., Williamson, I., Piedrahita, J. A., Blikslager, A. T., Magness, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+identification+and+stem+cell+culture+in+a+porcine+model+for+the+study+of+intestinal+epithelial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cell lineage identification and stem cell culture in a porcine model for the study of intestinal epithelial regeneration.</a> PLoS One. 8 (6), e66465(2013).</li>
<li>Khalil, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+culture+system+for+adult+porcine+intestinal+crypts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">A novel culture system for adult porcine intestinal crypts.</a> Cell Tissue Res. 365 (1), 123-134 (2016).</li>
<li>Derricott, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+3D+intestinal+epithelium+model+for+livestock+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Developing a 3D intestinal epithelium model for livestock species.</a> Cell Tissue Res. 375 (2), 409-424 (2019).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+intestinal+enteroids%3A+a+new+model+for+studying+enteric+coronavirus+porcine+epidemic+diarrhea+virus+infection+and+the+host+innate+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Porcine intestinal enteroids: a new model for studying enteric coronavirus porcine epidemic diarrhea virus infection and the host innate response.</a> J Virol. 93 (5), e01682-e01718 (2019).</li>
<li>Min, S., Kim, S., Cho, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+tract+modeling+using+organoids+engineered+with+cellular+and+microbiota+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal tract modeling using organoids engineered with cellular and microbiota niches.</a> Exp Mol Med. 52 (2), 227-237 (2020).</li>
<li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aminopeptidase+N+expression%2C+not+interferon+responses%2C+determines+the+intestinal+segmental+tropism+of+porcine+deltacoronavirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Aminopeptidase N expression, not interferon responses, determines the intestinal segmental tropism of porcine deltacoronavirus.</a> J Virol. 94 (14), e00480-e00520 (2020).</li>
<li>van der Hee, B., Madsen, O., Vervoort, J., Smidt, H., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congruence+of+transcription+programs+in+adult+stem+cell-derived+jejunum+organoids+and+original+tissue+during+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Congruence of transcription programs in adult stem cell-derived jejunum organoids and original tissue during long-term culture.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 375(2020).</li>
<li>van der Hee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedures+for+generating+an+enhanced%2C+near+physiological+2D+culture+system+from+porcine+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Optimized procedures for generating an enhanced, near physiological 2D culture system from porcine intestinal organoids.</a> Stem Cell Res. 28, 165-171 (2018).</li>
<li>Mussard, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+piglet+intestinal+3D+organoids+from+cryopreserved+epithelial+crypts+and+establishment+of+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Culture of piglet intestinal 3D organoids from cryopreserved epithelial crypts and establishment of cell monolayers.</a> J Vis Exp. (192), e64917(2023).</li>
<li>Ussing, H. H., Zerahn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+transport+of+sodium+as+the+source+of+electric+current+in+the+short-circuited+isolated+frog+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Active transport of sodium as the source of electric current in the short-circuited isolated frog skin.</a> Acta Physiologica Scandinavica. 23 (2-3), 110-127 (1951).</li>
<li>Dengler, F., Kraetzig, A., Gabel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butyrate+protects+porcine+colon+epithelium+from+hypoxia-induced+damage+on+a+functional+level%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Butyrate protects porcine colon epithelium from hypoxia-induced damage on a functional level.</a> Nutrients. 13 (2), 305(2021).</li>
<li>Guschlbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-resveratrol+and+epsilon-viniferin+decrease+glucose+absorption+in+porcine+jejunum+and+ileum+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Trans-resveratrol and epsilon-viniferin decrease glucose absorption in porcine jejunum and ileum in vitro.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 165 (3), 313-318 (2013).</li>
<li>Herrmann, J., Hermes, R., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+transport+and+intraepithelial+metabolism+of+short-chain+fatty+acids+%28SCFA%29+in+the+porcine+proximal+colon+are+influenced+by+SCFA+concentration+and+luminal+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transepithelial transport and intraepithelial metabolism of short-chain fatty acids (SCFA) in the porcine proximal colon are influenced by SCFA concentration and luminal pH.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 158 (1), 169-176 (2011).</li>
<li>Klinger, S., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+inhibits+porcine+intestinal+glucose+and+alanine+transport%3A+Potential+roles+of+Na%28%2B%29%2FK%28%2B%29-ATPase+activity%2C+protein+kinase+A%2C+AMP-activated+protein+kinase+and+the+association+of+selected+nutrient+transport+proteins+with+detergent+resistant+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Resveratrol inhibits porcine intestinal glucose and alanine transport: Potential roles of Na(+)/K(+)-ATPase activity, protein kinase A, AMP-activated protein kinase and the association of selected nutrient transport proteins with detergent resistant membranes.</a> Nutrients. 10 (3), 302(2018).</li>
<li>Leonhard-Marek, S., Hempe, J., Schroeder, B., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+characterization+of+chloride+secretion+across+the+jejunum+and+colon+of+pigs+as+affected+by+age+and+weaning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological characterization of chloride secretion across the jejunum and colon of pigs as affected by age and weaning.</a> J Comp Physiol B. 179 (7), 883-896 (2009).</li>
<li>Schroeder, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effects+of+the+probiotic+Escherichia+coli+strain+Nissle+1917+on+acute+secretory+diarrhea+in+a+pig+model+of+intestinal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Preventive effects of the probiotic Escherichia coli strain Nissle 1917 on acute secretory diarrhea in a pig model of intestinal infection.</a> Dig Dis Sci. 51 (4), 724-731 (2006).</li>
<li>Hoffmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+organoid-based+2D+monolayers+mimic+physiological+and+pathophysiological+properties+of+the+pig+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intestinal organoid-based 2D monolayers mimic physiological and pathophysiological properties of the pig intestine.</a> PLoS One. 16 (8), e0256143(2021).</li>
<li>Ferreira, S. H., Moncada, S., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indomethacin+and+aspirin+abolish+prostaglandin+release+from+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+New+Biol%22%5BJournal%5D)">Indomethacin and aspirin abolish prostaglandin release from the spleen.</a> Nat New Biol. 231 (25), 237-239 (1971).</li>
<li>Dykstra, G. D., Kawasaki, M., Ambrosini, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+bovine+organoid+technology+using+small+and+large+intestinal+monolayer+interfaces%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Advancements in bovine organoid technology using small and large intestinal monolayer interfaces.</a> J Vis Exp. (208), e67010(2024).</li>
<li>Srinivasan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TEER+measurement+techniques+for+in+vitro+barrier+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lab+Autom%22%5BJournal%5D)">TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems.</a> J Lab Autom. 20 (2), 107-126 (2015).</li>
<li>Hoffmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caco-2%2FHT29-MTX+co-cultured+cells+as+a+model+for+studying+physiological+properties+and+toxin-induced+effects+on+intestinal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Caco-2/HT29-MTX co-cultured cells as a model for studying physiological properties and toxin-induced effects on intestinal cells.</a> PLoS One. 16 (10), e0257824(2021).</li>
<li>Beduneau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tunable+Caco-2%2FHT29-MTX+co-culture+model+mimicking+variable+permeabilities+of+the+human+intestine+obtained+by+an+original+seeding+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Biopharm%22%5BJournal%5D)">A tunable Caco-2/HT29-MTX co-culture model mimicking variable permeabilities of the human intestine obtained by an original seeding procedure.</a> Eur J Pharm Biopharm. 87 (2), 290-298 (2014).</li>
<li>Markov, A. G., Veshnyakova, A., Fromm, M., Amasheh, M., Amasheh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+expression+of+claudin+proteins+correlates+with+tight+junction+barrier+properties+in+rat+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Segmental expression of claudin proteins correlates with tight junction barrier properties in rat intestine.</a> J Comp Physiol B. 180 (4), 591-598 (2010).</li>
<li>Pearce, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+tight+junction+composition+and+macromolecular+permeability+among+different+intestinal+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Marked differences in tight junction composition and macromolecular permeability among different intestinal cell types.</a> BMC Biology. 16 (1), 19(2018).</li>
<li>Legen, I., Salobir, M., Kerc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+intestinal+epithelia+as+models+for+absorption+enhancement+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Comparison of different intestinal epithelia as models for absorption enhancement studies.</a> Int J Pharm. 291 (1-2), 183-188 (2005).</li>
<li>Moeser, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+signaling+pathways+activated+by+weaning+mediate+intestinal+dysfunction+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Stress signaling pathways activated by weaning mediate intestinal dysfunction in the pig.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 292 (1), G173-G181 (2007).</li>
<li>Moeser, A. J., Ryan, K. A., Nighot, P. K., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+dysfunction+induced+by+early+weaning+is+attenuated+by+delayed+weaning+and+mast+cell+blockade+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal dysfunction induced by early weaning is attenuated by delayed weaning and mast cell blockade in pigs.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 293 (2), G413-G421 (2007).</li>
<li>Seamon, K. B., Padgett, W., Daly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forskolin%3A+unique+diterpene+activator+of+adenylate+cyclase+in+membranes+and+in+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Forskolin: unique diterpene activator of adenylate cyclase in membranes and in intact cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (6), 3363-3367 (1981).</li>
<li>Herrmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+diversity+of+electrogenic+glucose+transport+characteristics+in+the+small+intestines+of+weaned+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Segmental diversity of electrogenic glucose transport characteristics in the small intestines of weaned pigs.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 163 (1), 161-169 (2012).</li>
<li>Wright, E. M., Martin, M. G., Turk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+absorption+in+health+and+disease--sugars%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Intestinal absorption in health and disease--sugars.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 17 (6), 943-956 (2003).</li>
<li>Crane, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%2B+-dependent+transport+in+the+intestine+and+other+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Fed+Proc%22%5BJournal%5D)">Na+ -dependent transport in the intestine and other animal tissues.</a> Fed Proc. 24 (5), 1000-1006 (1965).</li>
<li>Inagaki, A., Yamaguchi, S., Ishikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amiloride-sensitive+epithelial+Na%2B+channel+currents+in+surface+cells+of+rat+rectal+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Amiloride-sensitive epithelial Na+ channel currents in surface cells of rat rectal colon.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 286 (2), C380-C390 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24 kuyulu plaka</td><td>SARSTEDT AG & Co. KG</td><td>8,33,922</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>MedChemExpress, New Jersey, ABD</td><td>HY-10432</td><td>-20 ° C'de saklayın & C. Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>accujet S</td><td>Brand GmbH + Co KG, Wertheim, Almanya</td><td>26351</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12 Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD</td><td>12634010</td><td>4 > C</td></tr><tr><td>B27 takviyesi</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD</td><td>17504044</td><td>-20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>CaCl2.2 H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>C3306</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>D(+)- Glikoz (wasserfrei)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.08337</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>DAPT</td><td>MedChemExpress, New Jersey, ABD</td><td>HY-13027</td><td>-20 ° C'de saklayın Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>M4125</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>154938</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>Elektrot Seti (AgCl / PtIr / Std.)</td><td>Scientific Instruments, Simmerath, Almanya</td><td>#1316</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus&nbsp;</td><td>Eppendorf SE, Hamburg, Gemany</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus&nbsp;</td><td>Eppendorf SE, Hamburg, Gemany</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>EVOM3 Manuel Epitelyal Volt Ohm Metre</td><td>Dünya hassas aletleri, Sarasota, ABD</td><td>EVM-MT-03-01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>F7524</td><td>-20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde çözün</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>F6886</td><td>-20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde</td></tr> <tr>çözdürün<td>gasprofi 1 SCS micro</td><td>WLD-TEC GmbH, Arsenhausen, Almanya</td><td>60,04,000</td><td></td></tr><tr><td>Gastrin 1</td><td>MedChemExpress, New Jersey, ABD</td><td>HY-P1097</td><td>-20 ° C'de saklayın Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD</td><td>35050061</td><td>4 °C & nbsp;</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>1090571000</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>H0887</td><td>4 > C</td></tr><tr><td>Herasafe 2025 Sınıf II Biyolojik Güvenlik Kabini</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD</td><td>51033316</td><td></td></tr><tr><td>İnkübatör ICO105</td><td>Memmert GmbH + Co.KG, Schwabach, Almanya</td><td>62,20,143</td><td></td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>I7378</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.04936</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>G7513</td><td>-20 ° C'de saklayın & C. Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>LWRN Supernatant</td><td>selfmade&nbsp;</td><td></td><td>-20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde çözdürün. LWRN takviyesi, Miyoshi ve ark. (2012)</td></tr> <tr><td>Matrigel Temel Membran Matrisi, LDEV içermeyen, 10 mL</td><td>Corning Incorporated - Yaşam Bilimleri</td><td>354234</td><td>-20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde buz üzerinde dikkatlice çözdürün</td></tr><tr><td>Megafüj 1.OR</td><td>Heraeus Instruments, Osterode, Almanya</td><td>75003060</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2.6 H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.05833</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>Na2HPO4.2H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.06580</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>N-Asetil-L-sistein</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>A7250</td><td>-20 °C'de saklayın. Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.06404</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4 oda sıcaklığında saklayın. H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.06346</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Almanya</td><td>1.06329</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>Neubauer geliştirilmiş oda</td><td>Glaswarenfabrik Karl Hecht, Sondheim vor der Rh&ouml; n, Almanya</td><td>40442712</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX70 ters çevrilmiş Mikroskop</td><td>Olympus Corporation, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD</td><td></td><td>15140122 -20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>PolymyxinB</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Almanya</td><td>P4932-1MU</td><td>-20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde çözdürün</td></tr><tr><td>Primovert mikroskop standı dürbün fototüplü</td><td>Zeiss</td><td>415510-1101-000</td><td></td></tr><tr><td>rm EGF</td><td>Prepotech, New Jersey, ABD</td><td>315-09</td><td>-20 ° C'de saklayın</td></tr>. <tr><td>MedChemExpress, New Jersey, ABD</td><td>SB202190</td> gerektiğinde çözün <td>HY-10295</td> -<td>20 ° C'de saklayın. Gerektiğinde çözün</td></tr><tr><td>Snapwell 3801</td><td>Corning Incorporated - Yaşam Bilimleri</td><td>3801</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin / EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, ABD</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Ussing Temel Sistem</td><td>Bilimsel Aletleri, Simmerath, Almanya</td> <td># 1317</td><td></td></tr><tr><td>Ussing Difüzyon Odası</td><td>Bilimsel Aletleri, Simmerath, Almanya</td><td>SKU 1307</td><td></td></tr><tr><td>Gerilim / Akım Kelepçesi VCC6</td><td>Bilimsel Aletler, Simmerath, Almanya</td><td>SKU 1310</td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>MedChemExpress, New Jersey, ABD</td><td>HY-10583</td><td>-20 ° C'de saklayın Gerektiğinde çözdürün</td></tr></tbody></table>

doğal bağırsağın fizyolojik Özelliklerini yansıtan İki boyutlu domuz bağırsak organoidleri

Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids Reflecting the Physiological Properties of Native Gut

Bu protokol, domuzların jejunum ve kolonundan türetilen 3D organoidleri ayrıştırarak domuz 2D tek katmanlarının güvenilir bir şekilde üretilmesini kolaylaştırır. Jejunum organoidleri için 16 günlük ve kolon organoidleri için 9 günlük bir yetiştirme periyodu boyunca, sağlam tek tabakalar oluşur. Bu tek tabakalar daha sonra Ussing odası tekniği kullanılarak elektrojenik ve fizyolojik taşıma özelliklerini değerlendirmek için kullanılabilir.
3D organoidleri parçaladıktan sonra, tek hücreler kaplan...

Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri

The gastrointestinal tract (GIT) serves both in the digestion of food and the uptake of nutrients but also as a protective barrier against pathogens. ...

two-dimensional-porcine-intestinal-organoids-reflecting-physiological

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, insan pluripotent hücrelerinin bağırsak organoidlerine farklılaşmasına izin verir. Protokol, hücreleri kesin endoderm, arka bağırsak endodermi ve ardından bağırsak epiteli popülasyonuna farklılaştırarak normal insan gelişimini taklit eder. Bu, protokolü hem bağırsak gelişimini hem de hastalık modelleme uygulamalarını incelemek için uygun hale getirir.

Gelişimsel ve Hastalık Modelleme Uygulamaları için hiPSC Kaynaklı Bağırsak Organoidlerinin Üretilmesi

Biyopsi kaynaklı intestinal organoidler ve çip üzerinde organ teknolojileri, bölgeye özgü bağırsak işlevselliğini özetlemek için mikrofizyolojik bir platformda birleştirilir.

Bağırsak Bölgesine Özgü İşlevselliği Modellemek için İnsan Organoidlerini ve Çip Üzerinde Organ Teknolojisini Birleştirme

Bu protokol, apikal yüzeye erişime izin veren, ters polariteye sahip ince bağırsak enteroidlerini kullanan apikal-dışarı nekrotizan enterokolit (NEC) bir çanak içi modelini tanımlar. NEC ile ilişkili epitel bozulmasını tespit etmek için bir immünofloresan boyama protokolü ve NEC-in-a-dish protokolüne tabi tutulan apikal-out enteroidlerin yaşayabilirliğini belirlemek için bir yöntem sunuyoruz.

İn Vitro Nekrotizan Enterokolitin Apikal-Out Enteroid Modeli

Bu protokol, bir klodin-7 nakavt modelinde kolonik kök hücrelerin aktivitesini ve işleyişini incelemek için bir murin kolonik organoid sisteminin kurulmasını açıklamaktadır.

Bağırsak Kök Hücre Fonksiyonunu Incelemek için Murin Kolonik Kriptlerinin Üç Boyutlu Kültürü Ex Vivo

Burada, kriyokorunmuş epitel kriptlerinden domuz bağırsak 3D organoidlerini kültürlemek için bir protokol açıklıyoruz. Ayrıca, epitel hücrelerinin apikal tarafına erişime izin veren 3D organoidlerden türetilen hücre monokatmanları oluşturmak için bir yöntem de açıklıyoruz.

Kriyokorunmuş Epitel Kriptlerinden Domuz Yavrusu Bağırsak 3D Organoidlerinin Kültürü ve Hücre Tek Katmanlarının Oluşturulması

Burada, sıçan bağırsak organoidleri üretmek ve bunları birkaç aşağı akış uygulamasında kullanmak için bir protokol sunuyoruz. Sıçanlar genellikle tercih edilen bir klinik öncesi modeldir ve sağlam bağırsak organoid sistemi, in vivo çalışmalara eşlik edecek bir in vitro sistem ihtiyacını karşılar.

Sıçan Bağırsak Organoidlerinin Üretimi ve Manipülasyonu

Köpek bağırsak organoidlerinin ve bir Çip Üzerinde Bağırsak mikroakışkan sisteminin entegrasyonu, insan bağırsak hastalıkları için ilgili translasyonel modeller sunar. Sunulan protokoller, bağırsağın 3D morfogenezine ve dinamik in vitro modellemesine izin vererek, köpeklerde ve insanlarda Tek Sağlık ile bağırsak hastalıkları için etkili tedavilerin geliştirilmesine yardımcı olur.

İnflamatuar Bağırsak Hastalığı Hastalarından Türetilen Bağırsak Organoidleri Kullanılarak Çip Üzerinde Köpek Bağırsağında Üç Boyutlu Morfogenez

Enteroidler, doku fizyolojisi ve patofizyolojisi, ilaç geliştirme ve rejeneratif tıp çalışmaları için yeni bir model olarak ortaya çıkmaktadır. Burada, ilgili doku hücresi tipleriyle ko-kültüre izin veren bir sığır birincil hücre 2D enteroid türevi kültür sistemini tanımlıyoruz. Bu model, gastrointestinal araştırma modellemesi için translasyonel bir avantaj sunar.

Translasyonel Biyomedikal Araştırma Uygulamaları için Sığır Primer Enteroid Türevli İki Boyutlu Tek Katmanlı Kültür Sisteminin Oluşturulması

Bu çalışma, organoidlerden sığır bağırsağı 2D tek tabakaları oluşturmak için bir protokol sunar ve konak-patojen etkileşimlerini incelemek için gelişmiş erişim sunar. Sığırların gastrointestinal fizyolojisini taklit eden in vitro modelleri geliştirerek membran bütünlüğünü ve işlevselliğini değerlendirmek için yöntemler içerir. Bu yaklaşım, gelişmiş tedavi stratejileri de dahil olmak üzere önemli biyomedikal ve tarımsal faydalar vaat etmektedir.

İnce ve Kalın Bağırsak Tek Katmanlı Arayüzleri Kullanılarak Sığır Organoid Teknolojisindeki Gelişmeler

Bu video termit hindgut ikamet mikropların türünün DNA ayıklamak için teknik göstermektedir. Bağırsak mikrobiyal topluluk görüntülenmesi için yararlı bir ıslak montaj kaydırağı, hazırlık da gösterilmiştir ve türler açısından zengin bir bağırsak ortamı üzerinden bir tur verilir.

Termit Gut Mikroplar (Zootermopsis Angusticollis) DNA ayıklanıyor ve Gut Mikroplar görselleştirme

Keşfedin, domuz bağırsak organoidleri kullanarak gastrointestinal fizyolojiyi in vitro modelleme yöntemini. TEER ölçümleri ve Ussing chamber deneyleriyle epitel bütünlüğü ve sekretuar yanıtları değerlendirilir.

Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri

Daha fazla video keşfet