Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon

[Spiker] Fare akciğerine sıvı iletimi için geliştirilmiş metodoloji. Tüketici otoskopu kullanarak entübasyon. Tüm hayvan prosedürleri ve bu içerik Tulane Üniversitesi Karşılaştırmalı Tıp Bölümü tarafından gözden geçirilmiştir ve Protokol 1810'da onaylanmıştır. IACUC onayı alın ve devam etmeden önce kurumunuzdaki veterinerlik personeline danışın. Yeni pulmoner terapötiklerin geliştirilmesi, fare akciğerine güvenilir, tekrarlanabilir bir şekilde verilmesine bağlıdır, ancak geleneksel olarak intranazal uygulamaya, dil tam veya cerrahi kesim ile orofaringeal aspirasyona dayanmaktadır. Aşağıdaki yöntem, dil doluya kıyasla değişkenliği azaltmış ve daha küçük hayvan kohortlarına izin vermiştir. Aynı zamanda kesmeden çok daha az invazivdir. Prosedür, birinci adım, kurulum. Kemirgen entübasyon kiti başlangıçta entübasyon güvenlik takozları olan gemileri kullandı. Bunlar, 20 gauge, bir inçlik esnek bir kateterin üzerine uyan küçük konik manşonlardır. Kateterin karinaya zarar vermesini önlerler. Kullanmadan önce bir güvenlik takozunu izopropanol hazırlık pedi ile temizleyin. Burada yeşil olan temiz güvenlik takozunu 20 gauge esnek kanülün üzerine kaydırın. Ticari bir otoskop, cep telefonu, burun konili fare standı, bükülmüş, ince tırtıklı forseps, endotrakeal tüp ve kullanılıyorsa fiber optik ışık dahil olmak üzere gerekli diğer araçları toplayın. Kullanmadan önce tüm bunları bir izopropanol hazırlık pedi ile temizleyin. Yaklaşık 20 santimetre uzunluğunda esnek bir boru alın. U şeklinde bükün ve bir ucuna bir yem kilidi bağlantısı ekleyin. U şeklini bir büküm bağı ile sabitleyin. Tüpe iki ila 300 mikrolitre steril filtrelenmiş su veya Hindistan mürekkebi ekleyin. Bundan sonra, bu düzenek bir kabarcık tüpü olarak adlandırılır. 13 santimetre büyüklüğünde sıfır dereceli ipek sütürü bir daire şeklinde bağlayarak bir dikiş halkası alın. Bu halkayı fare standının üst kısmına yerleştirin ve sütürün her iki tarafının da iyi bir şekilde sabitlendiğinden emin olun. Fare standını metal büyüteçli ışık tabanının üzerine yerleştirin. Yardım ellerini farenin ağzının olacağı yere yerleştirin. İndüksiyon odasına bir fare yerleştirin. Dakikada 0,8 litre sabit akış hızı oksijen ve% 2 izofluran kullanın. Burun konisinin yerleştirilmesi sırasında uyanmayacak şekilde fareyi yeterince uyuşturun. Farenin solunum hızını önemli ölçüde bastırmayın. Düzenli nefesler, ses tellerinin takdir edilmesine yardımcı olur. Otoskopu cep telefonuna bağlayın ve video beslemesinin sabit olduğundan emin olun. Dikkat, bu prosedür sırasında araştırmacının izofloran maruziyetini en aza indirmek için, bu yöntemde birden fazla entübasyon veya eğitim yapıyorsanız kimyasal bir solunum cihazı kullanın. Alternatif olarak, prosedürü birkaç ahşapta gerçekleştirin. İkinci adım, hayvan evrelemesi. İlk hayvanı uyur uyumaz indüksiyon odasından alın. Onları tırmıklayın ve üst dişlerini dikiş uzunluğuna yerleştirin. Fareyi tekrar standa yatırırken dikişin konumunu korumak için hayvana hafif bir gerilim uygulayın. Boynu beş ila 15 derece arasında küçük bir uzantıya yerleştirerek boyun açısını hafifçe geriye doğru ayarlayın. Burun konisini nazikçe burunların üzerine itin. Fareyi askıya alan dikişe müdahale edebileceğinden, burun konisini sıkıca aşağı itmeyin. Büyük, ince tırtıklı bükülmüş forseps kullanarak, dili alt dudağa mümkün olduğunca yakın bir şekilde sıkıca kavrayın. Sıkıca aşağı doğru çekin ve üst dişlerden uzağa ve alt dişlerin yanına doğru çekin. Dikkat, uzun süreli çekiş, aşırı gerginlik veya dilin ezilmesi hayvan sağlığını tehlikeye atabilir. Lütfen dilde morarma, kanama, şişme veya kuruma gibi travma belirtilerini izleyin. Herhangi biri gözlenirse, prosedürü iptal edin ve veteriner personelini uyarın. Yardım elleri kullanıyorsanız, forsepsleri bu pozisyonda destekleyin. Entübasyon güvenlik takozu yerindeyken esnek kateterden kullanılıyorsa fiber optik ışığı besleyin. Üçüncü adım, ses tellerinin görsel olarak değerlendirilmesi ve entübasyon. Otoskop baskın olmayan elinizdeyken, dilinize hafifçe bastırın. Ardından, dilin tabanına yakın ses tellerini görselleştirmek için kamerayı ve ışık kaynağını açın. Anatomi ve doku rengindeki küçük farklılıklar nedeniyle, yapısal tanımlamayı doğrulamak için solunumla ilişkili hareketi kullanın. İlk başladığınızda, video beslemesinde kendinizi yönlendirmek zor olabilir. Bunlar yanlış ses telleridir. Bunlar gerçek ses telleridir. Bu, bukkal dokunun yansımasıdır. Bu prob ve fiber optik ışıktır. Bu epiglotis. Bu yumuşak damak. Bu, entübasyon için hedefiniz olan rima glottidis'tir. Bu, dili bastıran otoskop dudağıdır. Burası girilmeyen bölge. Fiber optik ışık açıkken, kullanılıyorsa, kanülü otoskopun yanında besleyin, dilin tabanı veya otoskopun dudak kısmı ile hafif temas kurun. Referans olarak, kateterin yaklaşma açısını çok sığ olacak şekilde ayarlayın. Kateteri yerleştirdikten hemen sonra, ses kıvrımlarının bir milimetreden daha az ötesinde, kateterin ucunu tezgah üstüne neredeyse paralel olacak şekilde kaldırın. Bu, epiglotun kateteri dorsal olarak yemek borusuna zorlamasını önler. Kateteri ilerletirken neredeyse hiç direnç olmaması gerektiğini unutmayın. Dirençle karşılaşılırsa, kateteri hemen çıkarın ve solunumun normale dönmesine izin verin. Kanama görülürse veteriner hekime danışınız. Dördüncü adım, endotrakeal tüp yerleşiminin doğrulanması. Otoskop kullanılarak tüpün doğru yerde olduğunun görsel olarak doğrulanmasına ek olarak, trakea yerleştirme sırasında yemek borusuna göre daha az direnç sağlar. Optik yerleştirme derinliği, ses tellerinin yaklaşık beş milimetre ötesindedir. Işık, yerleştirme derinliğinin uygun olduğunu doğrulamak için ikincil bir yöntem olarak boyundan görülebilir. Entübasyon güvenlik takozunun endotrakeal tüp yerleşiminde aşırı derinliği önlemesi gerektiğini unutmayın. Güvenlik takozu, korinaya travmayı önleyecektir, ancak ilerlemeyi engellemesi gerekmez. Ardından, endotrakeal tüpü yerinde tutarken fiber optik ışığı çıkarın. Kabarcık tüpü yöntemini kullanarak kateterin uygun yerleşimini onaylayın. Alt kilidi kullanarak kabarcık tüpünü yerine sabitleyin. Gelgit hacmi hemen belirgin olmalıdır. Aksi takdirde, endotrakeal tüp yanlış yerleştirilmiştir. Hızlı bir şekilde çıkarın ve farenin normal solunum hızının geri dönmesine izin verin. Beşinci adım, intratrakeal doğum. Orofaringeal doğum için dil çekme yöntemine çok benzer şekilde, entübasyon yoluyla doğum hayvanı boğma riski taşır. Ergen ve yetişkin farelerde, 50 mikrolitre genellikle güvenli bir sıvı hacmidir ve akciğerlere yayılmak için yeterlidir. Uygulama için bir pipet kullanıyorsanız, istenen hacmi doğrudan katetere pipetleyin ve farenin solüsyonu solumasına izin verin. Akciğerlere yaygın iletimi ve ayrıca 500 mikrolitreye kadar hava ile akciğerlere verilen sıvıyı sağlamak için. İstenirse, verilen sıvının negatif aspirasyon riski olmadan pipetleyicinin birden fazla çöküşü gerçekleştirilebilir. Aşıyı hava ile yıkarken tidal hacimden daha fazla, yaklaşık 200 mikrolitre kullanılması gerekebilir. Bununla birlikte, 500 mikrolitre kullanımı, hayati kapasitenin sadece yarısı kadar olduğu için travma riski taşımaz. Altıncı adım, teslimatın değerlendirilmesi. El tipi bir fiber optik ışık, ucuz ve kolayca elde edilen bileşenlerden yapılabilir. Burada gösterildiği gibi ticari bir fiber optik düzenek kullanılabilir. Bununla birlikte, içinden .75 milimetrelik bir plastik fiber optik kablonun beslendiği 20 gauge bir iğne kullanılarak içine bir delik açılmış 50 ml'lik bir konik tüp kapağı yeterlidir. Bu videoda hem ticari hem de el yapımı cihazlar kullanıldı. Temsili sonuçlar, entübasyon kullanılarak intratrakeal uygulama, dil çekme ile orofaringeal aspirasyon ile karşılaştırıldığında daha iyi doğum ve daha az değişkenlik ile sonuçlanır. Dil çekme ve yönlendirilmiş entübasyonun doğrudan karşılaştırılması. Gömülü deneyim seviyelerine sahip üç farklı araştırmacı veya her iki cinsiyetten 10 ila 12 haftalık C57 BL / 6J farelerine dil çekme yoluyla 50 mikrolitre seyreltik Hindistan mürekkebini orofaringeal olarak bağımsız olarak vermeleri istendi. İki araştırmacı ayrıca, tarif edildiği gibi entübasyon yoluyla akciğere aynı stok ve hacimde mürekkep verdi. Akciğerler doğumdan kısa bir süre sonra çıkarıldı ve 2x büyütme altında fotoğraflandı. Fotoğraflar, bağımsız bir kör araştırmacı tarafından Resim J kullanılarak boyanan alan için değerlendirildi. Entübasyon kullanıldığında daha fazla akciğer alanının boyandığını buldu. Ayrıca, ortalamadan sapma yüzdesi olarak ifade edilen değişkenlik, dil çekme yerine entübasyonu takiben intratrakeal doğum kullanılırsa azalmıştır. Rehberli entübasyon için kullanılan bu istasyon gösterildiği gibi hazırlanır. Soldan, teslimat için pipetler, uygun endotrakeal tüp yerleşiminin doğrulanması için kabarcık tüpü, forseps, spatula, pediatrik nazal spekulum, yardım elleri, büyüteçli ışık, burun konili fare standı, fiber optik prob ve anestezi indüksiyon odası. Entübasyon, OP aspirasyonuna göre daha az değişkenlik ile akciğere daha fazla iletim sağlar. 10 haftalık dişi valf C farelerine bir kez 10 ila 11. VG AIV 6.2 lusiferaz dozu verildi ve yedi gün sonra in vivo biyolüminesan görüntüleme ile değerlendirildi. Görüntülemeden 10 dakika önce deri altına Luciferin enjekte edildi. Dil çekme veya entübasyon ile intratrakeal kurulum sonrası OP aspirasyonu ile AV 6.2 lusiferaz alan farelerin temsili a-vis görüntüleri gösterilmektedir. Dil çekme ile orofaringeal aspirasyon, sinyalin üst solunum yolunun çeşitli bölgelerinde dağılmasına yol açarken, entübasyon akciğerde konsantre sinyale yol açtı. İlgilenilen bölgeler aynı alandır ve bölge içindeki ortalama parlaklık görüntüde gösterilir. Lusiferaz sinyallerinin ölçülmesi, entübasyon yoluyla akciğerlere iletim verimliliğinin arttığını ortaya çıkardı ve bu yöntem kullanılarak doğumdaki azalan değişkenliği daha da vurguladı. Sonuç, önceki şekillerde görüldüğü gibi, geleneksel dil çekme yöntemi kullanılarak yapılan interpulmoner inokülasyon, yamalı, tutarsız inokülum dağılımı ve akciğerlere ne kadar ulaştığı konusunda daha fazla değişkenlik gösterir. Buna karşılık, entübasyon yöntemi hem sağ hem de sol akciğerlere daha tutarlı bir şekilde doğuma yol açtı ve daha az değişkendi. Bu entübasyon yönteminin sağlam bir şekilde gösterilen olumlu sonuçları, bir, fare akciğerlerine 50 mikrolitreye kadar tekrarlanabilir kurulum, iki, damlatılan sıvının akciğerler boyunca yaygın dağılımı ve üç, aşının akciğerlerin ötesine yayılmasının azalmasıdır. Bu yöntem hızlı, güvenlidir ve maliyetli ekipman veya zaman yoğun eğitim olmadan laboratuvar prosedürlerine dahil edilebilir.