Name: Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: Öğrenin, fare akciğerine sıvı iletimi için tüketici otoskopu kullanarak entübasyon yöntemini. Bu teknik, minimal doku travması ile tutarlı ve güvenilir pulmoner terapötik dağıtım sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu prosedürlerin protokolde listelenen kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitesi (IACUC) tarafından gözden geçirilmesi ve onaylanması ve devam etmeden önce veteriner personeline danışılması zorunludur. Kurumumuzdaki IACUC, deneye başlamadan önce protokolü onayladı ve video içeriğini göndermeden önce inceledi. Tüm laboratuvar hayvanlarımız için en yüksek standartta bakım sağlamak için Tulane Karşılaştırmalı Tıp Bölümü aracılığıyla destek ve eğitim alındı.
1. Kurulum
NOT: Kurulum için Şekil 2'ye bakın.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67676/67676fig02.jpg"> 
Şekil 2: Rehberli entübasyon için kullanılan istasyon gösterildiği gibi hazırlanmıştır. Soldan: Teslimat için pipetler, Uygun endotrakeal tüp yerleşiminin doğrulanması için kabarcık tüpü, forseps, spatula, pediatrik nazal spekulum (tartışılmıştır ancak bu prosedür için gerekli değildir), yardım elleri, büyüteçli ışık, burun konili fare standı, fiberoptik prob, anestezi indüksiyon odası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/67676fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<ol>
	<li>Entübasyon kitiyle birlikte verilen güvenlik takozunu bir izopropanol hazırlama pedi ile temizleyin. Temiz güvenlik takozunu (videoda yeşil) 20 G esnek kanülün üzerine kaydırın ve verilen iğneyi güvenli bir şekilde atın. NOT: Kullanılan kemirgen entübasyon kiti (Malzeme Tablosu) entübasyon güvenlik takozlarını içerir. Bunlar, 20 G x 1 inçlik esnek bir kateterin üzerine uyan küçük, konik manşonlardır. Kateterin karinaya zarar vermesini önlerler.</li>
	<li>Cep telefonu, ticari otoskop, burun konili fare standı, ince tırtıklı bükülmüş forseps, hazırlanmış endotrakeal tüp (1.1'den itibaren) ve kullanılıyorsa fiber optik ışık dahil olmak üzere gerekli diğer araçları toplayın. Kullanmadan önce tüm bunları izopropanol hazırlık pedleri ile temizleyin.</li>
	<li>Yaklaşık 20 cm esnek boru alın. U şeklinde bükün, bir ucuna Luer kilit bağlantısı ekleyin ve bir büküm bağı ile sabitleyin. Tüpe 200-300 μL steril filtrelenmiş su veya Hindistan mürekkebi ekleyin. Bundan sonra, bu düzenek "kabarcık tüpü" olarak anılacaktır.</li>
	<li>~13 cm ebat 0 örgü ipek sütürü daire şeklinde bağlayarak dikiş halkası yapın. Bu halkayı standın üst kısmına yerleştirin ve sütürün her iki tarafının da sabitlendiğinden ve standın temiz olduğundan emin olun. Fare standını metal büyüteçli ışık tabanının üzerine yerleştirin. Yardım ellerini farenin ağzının olacağı yere yerleştirin. NOT: Birçok satıcı değiştirilebilir standlar üretir (Malzeme Tablosuna bakınız) ve biri laboratuvarda ucuza yapılabilir 4,7,14. Hayvanı askılamak için 0 numara örgülü ipek sütür kullanıldı. Bununla birlikte, aynı amaç için başka malzemelerin kullanımı da tarif edilmiştir 4,13.</li>
	<li>Anestezi indüksiyon odasına bir fare yerleştirin. 0,8 L / dak ve% 2 izofluran'da sabit akış hızı O2 kullanın. Hayvanı yeterince uyuşturun (nota bakınız), böylece burun konisinin yerleştirilmesi sırasında uyanmaz. Farenin solunum hızını önemli ölçüde bastırmayın. Düzenli nefesler, ses tellerinin takdir edilmesine yardımcı olur. NOT: Farenin solunum hızı normal olmalıdır. Bu kriter uygun anestezi derinliğini belirlemek için kullanılır. Bu, hayvanlar arasında değişebilir ve 200 nefes/dk'yı aşabilir. Bu nedenle, solunumları saymak veya bir ayak parmağını çimdiklemek pratik veya gerekli değildir. DİKKAT: Gerektiğinde bu prosedür iptal edilebilir. Bununla birlikte, hayvanlar indüksiyon odasında kesinlikle gerekli olandan daha uzun süre kalmamalıdır.</li>
	<li>Otoskopu bir cep telefonuna bağlayın ve video beslemesinin sabit olduğundan emin olun. DİKKAT: Bu prosedür sırasında araştırmacıların izofluran maruziyetini en aza indirmek için, bu yöntemde birden fazla entübasyon veya eğitim yapıyorsanız kimyasal bir solunum cihazı kullanın. Alternatif olarak, prosedürü bir çeker ocakta gerçekleştirin.</li>
</ol>
2. Hayvan sahneleme
<ol>
	<li>İlk hayvan uyur uyumaz, onu indüksiyon odasından çıkarın, tırmalayın ve üst dişlerini dikişin uzunluğuna yerleştirin. Fareyi tekrar standa yatırırken dikişin konumunu korumak için hayvana hafif bir gerilim uygulayın. NOT: Ortalama olarak, hayvanlar indüksiyon dahil toplam 2 dakika boyunca uyuşturulur. Bu, hayvan için riski büyük ölçüde azaltır, oftalmik yağlama ihtiyacını ortadan kaldırır ve tükürük birikimini önler. Hayvanları mümkün olduğunca kısa süre sakinleştirici tutmaya çalışın.</li>
	<li>Boyun açısını hafifçe geriye doğru ayarlayın (boynu küçük uzantıya yerleştirerek, 5 ° -15 °). Burun konisini nazikçe burunların üzerine itin. Koniyi sıkıca aşağı itmeyin, çünkü dikişe müdahale edebilir ve fareyi askıya alabilir.</li>
	<li>Büyük, ince tırtıklı bükülmüş forseps kullanarak dili alt dudağa mümkün olduğunca yakın bir şekilde sıkıca kavrayın. Aşağı doğru çekin ve üst dişlerden alt dişlerin bir tarafına doğru çekin. DİKKAT: Uzun süreli çekiş, aşırı gerginlik veya dilin ezilmesi hayvan sağlığını tehlikeye atabilir. Lütfen dili travma belirtileri (morarma, kanama, şişme veya kuruma) açısından izleyin ve gözlemlenirse prosedürü iptal edin ve veteriner personelini uyarın.</li>
	<li>Yardım elleri kullanıyorsanız, forsepsleri bu pozisyonda destekleyin. Araştırmacının deneyimine ve görme keskinliğine bağlı olarak, ışıklı bir büyüteç, hayvanın uygun şekilde konumlandırılmasına yardımcı olabilir.</li>
	<li>Fiberoptik ışığı (kullanılıyorsa) entübasyon güvenlik kaması (videoda yeşil) yerindeyken esnek kateterden besleyin. NOT: Fiber optik kabloyu ışık kaynağına çok sıkı sabitlemeyin. Çok sert itmek, endotrakeal tüpü yerinde bırakırken ışığı çıkarmayı zorlaştırır.</li>
</ol>
3. Ses tellerinin görsel olarak takdir edilmesi ve entübasyon
<ol>
	<li>Otoskop baskın olmayan eldeyken, dilin üzerine hafifçe bastırın. Ardından, dilin tabanına yakın ses tellerini görselleştirmek için kamerayı ve ışık kaynağını açın. NOT: Anatomi ve doku rengindeki küçük farklılıklar kendini yönlendirmeyi zorlaştırabilir. Yapısal tanımlamayı doğrulamak için solunumla ilişkili hareketi kullanın.</li>
	<li>Fiberoptik ışık açıkken (kullanılıyorsa), kanülü otoskopun üst kısmıyla birlikte besleyin, referans olarak dilin tabanı veya otoskopun dudak kısmı ile hafif temas kurun. Yumuşak palet ile otoskopun dudağı arasında farenin ağzına doğru ilerletin. NOT: Fiberoptik ışık kullanılmıyorsa, 4. adımda açıklanan "kabarcık tüpü" bu aşamada katetere takılabilir. Prosedürdeki bu değişiklik için farenin ağzındaki parlak, odaklanmış aydınlatma gereklidir.</li>
	<li>Yaklaşma açısını, kateter çok sığ olacak şekilde ayarlayın. Kateteri yerleştirdikten hemen sonra (ses kıvrımlarının 1 mm'den daha az ötesinde), kateterin ucunu tezgaha neredeyse paralel olacak şekilde kaldırın. Bu, epiglotun kateteri dorsal olarak yemek borusuna zorlamasını önler. Özellikle antrenman sırasında, zorluk yaşandığında veya kişinin deneyiminin erken dönemlerinde, endotrakeal tüpün ses telleri arasına yerleştirilmesinde video beslemesinin kullanılması paha biçilmezdir. NOT: Tükürük üretimi, bu işlem tamamlanırken ses tellerinin görüntülenmesini engellemez. Bununla birlikte, tıkayıcı tükürüğü çıkarmak için mızrak uçlu bir pamuk aplikatörünün kullanılması, önceki yayınlarda, sıçanları entübe ederken açıklanmıştır19. Tükürük bir sorun haline gelirse bu yöntem yararlı olabilir.<ol>
		<li>Dirençle karşılaşılırsa, kateteri hemen çıkarın ve solunumun normale dönmesine izin verin. Kanama görülürse veteriner hekime danışınız. NOT: Kateteri ilerletirken neredeyse hiç direnç olmamalıdır.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. Endotrakeal tüp yerleştirilmesinin doğrulanması
<ol>
	<li>Otoskopu kullanarak endotrakeal tüpün doğru yerde olduğunu görsel olarak onaylayın. Ayrıca, trakeanın yerleştirme sırasında yemek borusuna göre daha az direnç sağladığını göz önünde bulundurarak tüpün doğru yerleştirildiğinden emin olun. Uygun pozisyonda endotrakeal tüpün ses tellerinin ~5 mm ötesinde olduğunu gözlemleyin. Yerleşimin doğru olduğunu tekrar doğrulamak için boyun derisinden parlayan fiberoptik kaynaktan gelen ışığı arayın. NOT: Entübasyon güvenlik takozu, endotrakeal tüpün çok uzağa yerleştirilmesini önlemelidir. Emniyet takozu, karinaya travmayı önler; Ancak, ilerlemeyi engellemesi gerekmez. Bir güvenlik özelliği olarak kullanılmalıdır ve optimum derinlik genellikle kama tarafından izin verilenden daha sığdır.</li>
	<li>Ardından, endotrakeal tüpü yerinde tutarken fiberoptik ışığı çıkarın. Ayna buğulanması yerine "kabarcık yöntemi" (aşağıda ayrıntılı olarak açıklanmıştır) kullanarak kateterin uygun şekilde yerleştirildiğinden emin olun.</li>
	<li>Adım 1.3'te hazırlanan kabarcık tüpünü alın. İşlemden önce hazırlayın ve tüm hayvanlar için tekrar kullanın. DİKKAT: Kabarcık tüpündeki 200-300 μL su veya mürekkep asla aspire edilmemelidir. Bunu önlemek için, sıvının Luer kilidinden uzak olduğundan emin olun.</li>
	<li>Endotrakeal tüp yerindeyken, Luer kilidini kullanarak kabarcık tüpünü yerine sabitleyin. Gelgit hacmi hemen belirgin olmalıdır. Aksi takdirde, endotrakeal tüp yanlış yerleştirilmiştir. Hızlı bir şekilde çıkarın ve farenin normal solunum hızının geri dönmesine izin verin. DİKKAT: Kateterin yemek borusuna yanlış yerleştirilmesi soluk borusunu sıkıştırarak yeterli solunumu engelleyecektir. Yanlış yerleştirmeye genellikle zor nefes alma (interkostal kasların kayda değer katkısı dahil) ve / veya önemli ölçüde azalmış solunum hızı eşlik edecektir. Ayrıca, yemek borusunun kanüle edilmesi, sonraki entübasyonu daha zor hale getiren bir kas spazmına yol açabilir; Bu nedenle eğitim sırasında birden fazla hayvanın kullanılmasını tavsiye ediyoruz.</li>
</ol>
5. İntratrakeal doğum
DİKKAT: Orofaringeal doğum için dil çekme yöntemine çok benzer şekilde, entübasyon yoluyla doğum hayvanı boğma riski taşır. Ergen ve yetişkin farelerde, 50 μL genellikle güvenli bir sıvı hacmidir ve akciğerlere yayılmak için yeterlidir.
<ol>
	<li>Uygulama için bir şırınga kullanılıyorsa: Kabarcık tüpünü ve Luer kilidini kateterden ayırın, yüklü bir Luer kayma şırıngası takın ve istenen hacmi (maksimum 50 μL) sağlamak için pistona basın.</li>
	<li>Uygulama için bir pipet kullanılıyorsa: İstenilen hacmi (maksimum 50 μL) doğrudan katetere pipetleyin ve farenin solüsyonu solumasına izin verin. NOT: Antrenman yapıyorsanız, seyreltik, filtrelenmiş Hindistan mürekkebi veya metilen mavisi gibi bir gösterge kullanmayı düşünün.</li>
	<li>Akciğerlere yaygın iletimi sağlamak için, verilen sıvıyı 500 μL'ye kadar hava20 ile akciğerlere yıkayın. Bu, her ikisinin de güvenilir olduğu kanıtlanmış önceden yüklenmiş 0,5 mL Luer kilitli şırınga veya filtre ucu ile donatılmış bir P1000 pipetleyici kullanılarak yapılabilir. İstenirse, verilen sıvının negatif aspirasyon riski olmadan pipetleyicinin birden fazla çöküşü gerçekleştirilebilir. DİKKAT: Hayvanı bu yöntemle aşıyorsanız, orofaringeal aspirasyon veya intranazal doğuma göre artan doğum verimliliği nedeniyle aşı konsantrasyonunu azaltmayı düşünün. NOT: Aşıyı hava ile yıkarken tidal hacimden (~ 200 μL) daha fazlasının kullanılması gerekebilir. Bununla birlikte, 500 μL kullanımı, hayati kapasitenin sadece yarısı kadar olduğu için barotravma riski taşımaz21. Yetişkin fareler yaklaşık ~ 800 μL'lik bir inspiratuar rezerv kapasitesine sahiptir, bu nedenle fare yıkamadan hemen önce ilham almış olsa bile, barotravma meydana gelmez21. Daha düşük hava yıkama hacimlerinin aşının dağılımı için ihtiyaçlarınıza uygun olup olmadığını düşünün (100-200 μL önerilmiştir).</li>
</ol>
6. Teslimatın değerlendirilmesi
NOT: Bu, yalnızca prosedür eğitimi alıyor veya uygulanıyorsa yapılır.
<ol>
	<li>Hayvanı onaylanmış IACUC protokolüne göre insancıl bir şekilde ötenazi yapın. Burada birincil ötanazi yöntemi olarak CO2 boğulması ve ötanazinin doğrulayıcı bir yöntemi olarak servikal çıkık kullanıldı.</li>
	<li>Göğüs duvarını açın ve akciğerleri çıkarın. Bunu, peritonu açarak, diyaframa kaudal taraftan erişerek ve kalbin görülebileceği küçük bir makasla delerek yapın. Bu, akciğerlerin geri çekilmesine ve kaburgaları keserek göğüs boşluğunu açmak için daha fazla alan vermesine neden olacaktır. NOT: Akciğerlerdeki kanı azaltmak için perfüzyon gerekiyorsa, bu aşamada işlemi kalbin sağ ventrikülünden gerçekleştirin.</li>
	<li>Çıkardıktan sonra akciğerleri 1 mL steril PBS ile kısa bir süre durulayın. Göreceli lob pozisyonunu korurken maksimum alanı ortaya çıkarmak için beyaz bir yüzeye (cerrahi sünger gibi) düz bir şekilde yerleştirin.</li>
	<li>Akciğerleri ex vivo olarak fotoğraflayın (bir cep telefonu kullandık), görüntüleri ImageJ'de açın ve boya cephesinin ana hatlarını izleyerek lekeli ve lekesiz alanları ölçün. Önyargıyı önlemek için bağımsız bir kör araştırmacı kullanarak boyanan alanı ölçün. NOT: Şekil 3'te gösterildiği gibi lüminesans ve IVIS kullanılıyorsa, Adım 6 yerine in vivo canlı görüntüleme yapılmalıdır.</li>
</ol>

<ol><li>The Pneumonia Etiology Research for Child Health (PERCH) Study Group. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Causes+of+severe+pneumonia+requiring+hospital+admission+in+children+without+HIV+infection+from+Africa+and+Asia%3A+the+PERCH+multi-country+case-control+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Causes of severe pneumonia requiring hospital admission in children without HIV infection from Africa and Asia: the PERCH multi-country case-control study.</a> Lancet. 394 (10200), 757-779 (2019).</li>
<li>Shiels, M. S., Haque, A. T., Berrington de González, A., Freedman, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leading+causes+of+death+in+the+US+During+the+COVID-19+pandemic%2C+March+2020+to+October+2021%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Leading causes of death in the US During the COVID-19 pandemic, March 2020 to October 2021.</a> JAMA Intern Med. 182 (8), 883-886 (2022).</li>
<li>Egger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+bleomycin+via+the+oropharyngeal+aspiration+route+leads+to+sustained+lung+fibrosis+in+mice+and+rats+as+quantified+by+UTE-MRI+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Administration of bleomycin via the oropharyngeal aspiration route leads to sustained lung fibrosis in mice and rats as quantified by UTE-MRI and histology.</a> PLOS ONE. 8 (5), e63432(2013).</li>
<li>Nielsen, T. B., Yan, J., Luna, B., Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+oropharyngeal+aspiration+model+of+ventilator-associated+and+hospital-acquired+bacterial+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine oropharyngeal aspiration model of ventilator-associated and hospital-acquired bacterial pneumonia.</a> J Vis Exp. (136), e57672(2018).</li>
<li>Seo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+anesthesia+and+delivery+approaches+for+dosing+into+lungs+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Optimizing anesthesia and delivery approaches for dosing into lungs of mice.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 325 (2), L262-L269 (2023).</li>
<li>Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video-assisted+orotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Video-assisted orotracheal intubation in mice.</a> Lab Anim. 37 (3), 204-206 (2003).</li>
<li>Watanabe, A., Hashimoto, Y., Ochiai, E., Sato, A., Kamei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+confirming+correct+endotracheal+intubation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A simple method for confirming correct endotracheal intubation in mice.</a> Lab Anim. 43 (4), 399-401 (2009).</li>
<li>Samsamshariat, S. A., Movahed, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+0.035-in.+straight-tip+wire+and+a+small+infant+laryngoscope+for+safe+and+easy+endotracheal+intubations+in+rats+for+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Revasc+Med%22%5BJournal%5D)">Using a 0.035-in. straight-tip wire and a small infant laryngoscope for safe and easy endotracheal intubations in rats for cardiovascular research.</a> Cardiovasc Revasc Med. 6 (4), 160-162 (2005).</li>
<li>Hamacher, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+wire+guide-based+orotracheal+mouse+intubation%3A+description%2C+evaluation+and+comparison+with+transillumination%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination.</a> Lab Anim. 42 (2), 222-230 (2008).</li>
<li>Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+endotracheal+intubation+of+mice+and+rats+used+in+imaging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 44 (2), 52-55 (2005).</li>
<li>Das, S., MacDonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> J Vis Exp. (73), e50318(2013).</li>
<li>Thomas, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endotracheal+intubation+in+mice+via+direct+laryngoscopy+using+an+otoscope%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope.</a> J Vis Exp. (86), e50269(2014).</li>
<li>Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+endotracheal+intubation+and+pulmonary+functional+assessment+for+repeated+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice.</a> J Appl Physiol. 87 (6), 2362-2365 (1999).</li>
<li>Nelson, A. M., Nolan, K. E., Davis, I. C., Nelson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+Orotracheal+Intubation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Repeated Orotracheal Intubation in Mice.</a> J Vis Exp. (157), e60844(2020).</li>
<li>MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">An improved simple method of mouse lung intubation.</a> J Appl Physiol (1985). 106 (3), 984-987 (2009).</li>
<li>Controlled Substance Schedules. , US Department of Justice Diversion Control Division. 
 <a target="_blank" href="https://www.deadiversion.usdoj.gov/schedules/schedules.html">https://www.deadiversion.usdoj.gov/schedules/schedules.html</a> (2025).</li>
<li>Cesarovic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+and+sevoflurane+provide+equally+effective+anaesthesia+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Isoflurane and sevoflurane provide equally effective anaesthesia in laboratory mice.</a> Lab Anim. 44 (4), 329-336 (2010).</li>
<li>Balloy, V., Huerre, M., Latgé, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+patterns+of+infection+and+inflammation+for+corticosteroid+treatment+and+chemotherapy+in+experimental+invasive+pulmonary+aspergillosis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Differences in patterns of infection and inflammation for corticosteroid treatment and chemotherapy in experimental invasive pulmonary aspergillosis.</a> Infect Immun. 73 (1), 494-503 (2005).</li>
<li>Clary, E. M., O'Halloran, E. K., de la Fuente, S. G., Eubanks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Videoendoscopic+endotracheal+intubation+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Videoendoscopic endotracheal intubation of the rat.</a> Lab Anim. 38 (2), 158-161 (2004).</li>
<li>Silva, P. L., Scharffenberg, M., Rocco, P. R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+mechanisms+of+ventilator-induced+lung+injury+using+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med+Exp%22%5BJournal%5D)">Understanding the mechanisms of ventilator-induced lung injury using animal models.</a> Intensive Care Med Exp. 11 (1), 82(2023).</li>
<li>Schulz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+mechanics+in+mice%3A+strain+and+sex+specific+differences%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Respiratory mechanics in mice: strain and sex specific differences.</a> Acta Physiol Scand. 174 (4), 367-375 (2002).</li>
<li>Americo, J. L., Cotter, C. A., Earl, P. L., Liu, R., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+inoculation+of+an+MVA-based+vaccine+induces+IgA+and+protects+the+respiratory+tract+of+hACE2+mice+from+SARS-CoV-2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Intranasal inoculation of an MVA-based vaccine induces IgA and protects the respiratory tract of hACE2 mice from SARS-CoV-2 infection.</a> PNAS. 119 (24), e2202069119(2022).</li>
<li>Belser, J. A., Gustin, K. M., Katz, J. M., Maines, T. R., Tumpey, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+traditional+intranasal+and+aerosol+inhalation+inoculation+of+mice+with+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Comparison of traditional intranasal and aerosol inhalation inoculation of mice with influenza A viruses.</a> Virology. 481, 107-112 (2015).</li>
<li>Pelgrim, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+administration+of+solutions+in+mice%3B+development+and+validation+of+an+optimized+method+with+improved+efficacy%2C+reproducibility+and+accuracy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Intratracheal administration of solutions in mice; development and validation of an optimized method with improved efficacy, reproducibility and accuracy.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 114, 107156(2022).</li>
<li>Kunda, N. K., Price, D. N., Muttil, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+tract+deposition+and+distribution+pattern+of+microparticles+in+mice+using+different+pulmonary+delivery+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccines%22%5BJournal%5D)">Respiratory tract deposition and distribution pattern of microparticles in mice using different pulmonary delivery techniques.</a> Vaccines. 6 (3), 41(2018).</li>
<li>Driscoll, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+instillation+as+an+exposure+technique+for+the+evaluation+of+respiratory+tract+toxicity%3A+uses+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations.</a> Toxicol Sci. 55 (1), 24-35 (2000).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> J Vis Exp. (51), e2702(2011).</li>
<li>Hattori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profiling+of+IL-17A-treated+synovial+fibroblasts+from+the+human+temporomandibular+joint%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Gene expression profiling of IL-17A-treated synovial fibroblasts from the human temporomandibular joint.</a> Mediators Inflamm. 2015, 436067(2015).</li>
</ol>

Küresel olarak, solunum yolu hastalıkları 5 yaşın altındaki çocukların bir numaralı katilidir ve yetişkinlerde morbidite ve mortalitenin önemli bir nedenidir1. 2021'de SARS-CoV2 enfeksiyonu ABD'de üçüncü önde gelen ölüm nedeniydi2. Murin modelleri genellikle astım, zatürree, kronik obtrüsif akciğer hastalığı ve pulmoner fibroz dahil olmak üzere akciğer hastalıklarını incelemek için kullanılır. Bu modellerin neredeyse tamamı, sıvı ajanların akciğerlere verilmesini gerektirir. Bu, trakeanın doğrudan kanülasyonu (tipik olarak cerrahi bir kesme tekniği kullanılarak doğrudan görselleştirme altında), intranazal doğum veya iyi bilinen dil çekme yöntemi 3,4,5 ile orofaringeal aspirasyon ile yapılabilir. Ancak, bu tekniklerin hepsinin dezavantajları vardır. Cerrahi kesme tekniğinden sonra skar dokusu oluşumu, ajanların akciğere tekrar tekrar uygulanmasını gerektiren çalışmalar için uygun değildir ve son iki teknik değişken akciğer iletimine yol açabilir. Ayrıca, dil çekme yöntemi kullanılırken, dilde doku travması belirgin olabilir ve uygulama verimliliği, prosedürü gerçekleştiren araştırmacıya bağlıdır, bkz. Şekil 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67676/67676fig01.jpg"> 
Şekil 1: Rehberli entübasyon ve IT damlatma, dil çekme ile karşılaştırıldığında akciğere daha iyi iletim ve daha az değişkenlik ile sonuçlanır. (A) Üç farklı araştırmacı, orofaringeal (OP) uygulama için yerleşik yöntem olan dil çekme ile 50 μL seyreltik Hindistan mürekkebi verdi. İki araştırmacı ayrıca tarif edildiği gibi entübasyon kullanarak akciğere mürekkep verdi. (B) Akciğerler doğumdan 1-4 saat sonra çıkarıldı ve 2x büyütme altında fotoğraflandı. Fotoğraflar, ImageJ kullanılarak lekeli alan için değerlendirildi. (n=6 (entübasyon) veya 9 (op uygulaması), 2-3 farklı araştırmacı tarafından 2 veya 3 bağımsız tekrardan elde edilen sonuçlar, p&lt;0.0001 Welch T Testi) (C) Akciğer uygulamasındaki değişkenlik de ortalamadan yüzde sapma olarak hesaplandı. OP uygulaması çok daha değişkendi. (p = 0.0317, Galce T-Testi, GraphPad Prism 10.2.3 tüm istatistikler ve grafikler) (C57BL / 6J Erkek ve Dişi fareler kullanıldı, ~ 10 haftalıktılar.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/67676fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Murin anatomisi entübasyonu zor ve zaman yoğun hale getirir. Ağız küçüktür ve bukkal doku, bir araştırmacının rima glottidis6'yı görmesini engelleyebilir. Ayrıca, ses telleri çok küçüktür ve dil tabanına yakın durdukları için onları görmek zor olabilir. Son olarak, endotrakeal tüpün uygun şekilde yerleştirildiğinin doğrulanması zordur, çünkü küçük tidal hacim genellikle bir aynayı buğulandıramaz7. Bu zorluklar, fareleri entübe etmek için bir dizi yenilikçi tekniği teşvik etmiştir. Bu geliştirilmiş yöntemler arasında bir kateteri trakeaya 8,9 ilerletmek için bir neonatal laringoskop ve tel kullanımı, kateteri yönlendirmek ve sertleştirmek için bir fiber optik ışık kaynağının kullanılması10,11 ve canlı bir video beslemesinin kullanılması6 yer alır. Daha yakın zamanlarda, klinik otoskop kullanımı orotrakeal entübasyonayardımcı olmuştur 12. Diğerleri, glottis ve entübe fareleri görselleştirmek için transillüminasyon kullanmışlardır 7,13,14. Ancak, bu yöntemlerin birçok dezavantajı vardır. Farenin boynunda tüy dökücü ajanların kullanılması ve hayvanların sıcak bir ışık kaynağına yakınlığı, transillüminasyonu ideal olmayan bir yaklaşım haline getirir. İğnenin kateter içinde kullanılması veya keskin aletlerin ağza sokulması, kateteri sertleştirmek için bazı yöntemlerin hayvanları aşırı riske sokması anlamına gelir. Son olarak, yerleştirmeyi doğrulamak için trakea üzerinde bir kesi yapmak, sterilite ihtiyacı ve yara dokusunun birikmesi dahil olmak üzere önemli dezavantajlar sunar. Bu noktaya kadar, entübasyon yoluyla intratrakeal damlatmanın yaygın olarak benimsenmesi için çok zor olduğu kanıtlanmıştır15 ve metodolojik gelişimdeki ilerlemeler silo halinde kalmış ve birçok laboratuvar tarafından kullanılmamıştır15. Daha ileri çalışmalar, teslimat sırasında anestezik seçimine odaklanmış ve ketaminin izofluran5'e göre avantajları olabileceğini bulmuştur. Bununla birlikte, kontrollü bir madde olmayan ve prosedür tamamlandıktan sonra hızla yıpranan izofluran, çekici faydalar sağladı, bu nedenle bu metodolojinin diğer yönlerini optimize ederken bu anestezi şeklini kullandık16,17.
Tanımladığımız yöntem, başkalarının ele almaya çalıştığı görselleştirme zorluklarının üstesinden gelir, deney hayvanlarına yönelik riskleri azaltır, bir endotrakeal tüp yoluyla intratrakeal olarak küçük hacimleri aşılamak için gereken süreyi azaltır, akciğere ulaşan sıvı hacmini arttırır ve endotrakeal tüp yerleştirme onayı için gelişmiş bir yöntem sunar. Bir süspansiyon standı, manyetik yardım elleri (bir tabana sabitlenmiş esnek kollardaki timsah klipsleri) ve daha parlak aydınlatma kullanmak, bireysel bir araştırmacının verimli intratrakeal doğum yapmasına olanak tanır. WIFI bağlantılı bir 'evde' otoskop kullanılarak görselleştirme daha kolay hale getirilir. Bu cihaz, ticari entübasyon cihazlarından daha ekonomiktir. Ayrıca, WIFI bağlantısı, taşınabilir bir cihazda (cep telefonu gibi) eşzamanlı bir video beslemesine izin vererek onu eğitim için uygun hale getirir. Entübasyon, 20 g x 1" esnek (PTFE) kateterden (iğne çıkarılmış) geçirilmiş bir fiberoptik ışık kaynağını veya ışıksız kateteri kullanabilir. Derinlik iki yöntemle kontrol edilir - bir entübasyon güvenlik takozunun eklenmesi (kateter üzerinde konik bir koruyucu) ve video beslemesinde derinlik gözlemi. Endotrakeal tüp yerleşimi, tidal hacmi geleneksel ayna-sis yönteminden daha net bir şekilde görselleştirmek için "kabarcık yöntemi" kullanılarak doğrulanır18. Bu, hayvan için, yerleştirmeyi doğrulamak için solunum aciliyetini10 değiştirmek için trakeal tıkanıklığa güvenmekten daha az streslidir. Başarılı entübasyonu doğrulamak için katetere bağlı uzatma tüpünün kombine kullanımı (bundan böyle kabarcık yöntemi olarak anılacaktır), Watanabe et. al7 ve tek bir prosedürde bir tüketici video otoskopu, entübasyonu akciğere terapötik uygulama için pratik bir yöntem ve dil çekme yönteminde belirgin bir gelişme haline getirir (bkz. Şekil 1). Özellikle kontrollü maddeler (ketamin gibi) veya pahalı ekipman kullanılmadan, fare akciğerlerine cerrahi olmayan sıvı iletimi için güvenilir, tutarlı ve uygun fiyatlı bir yöntem arıyorsanız, aşağıdaki yöntem ideal olabilir.

<table><tbody><tr><td>Fiber Optik LightiFiber Optik Aydınlatma Kiti, Mouse</td><td>Kent Scientific&nbsp;</td><td>ETI-12ETI-MSE-02</td><td>Fiberoptik düzeneğin bir bileşeni, diğer ışıklarla ve aşağıdaki yedek fiberoptik kabloyla uyumludur</td></tr><tr><td>Alternatif Fiberoptik Montaj</td><td>Braintree Scientifuc</td><td>RW-A37 47</td><td>bir alternatif, tartışılmadı (ama işe yaramaması için bir neden görmüyoruz)</td></tr><tr><td>Alternatif Fiberoptik Montaj</td><td>Harvard aparatı</td><td>72-9075</td><td>bir alternatif, tartışılmadı (ama işe yaramaması için bir neden görmüyoruz)</td></tr><tr><td>Alternatif Fiberoptik Montaj</td><td>Laboratuvar tarafından el yapımı</td><td>N/A</td><td>Burada kauçuk tıpa kullanılarak bulunan talimatlar: DOI 10.3791/50318</td></tr><tr><td>Alternatif Fiberoptik Montaj</td><td>Laboratuvar N/A tarafından el yapımı</td><td>(aşağıda listelenen malzemeler)</td><td>50 mL konik kapak, bant ve 0,75 mm fiberoptik fiberden yapılmıştır</td></tr><tr><td>Entübasyon Standı, Mouse</td><td>Kent Scientific&nbsp;</td><td>ETI-MSE-01</td><td>Entübasyon için ayarlanabilir stand, kendi kendine yapılan birçok versiyon mevcuttur, uç rafları ve ahşap platformlar kullanılır, bazı alternatifler mevcut birçok uygun alternatifi listeler.</td></tr><tr><td>Alternatif Entübasyon Standları</td><td>Braintree Scientifuc</td><td>RIS 100</td><td>bir alternatif, tartışılmadı (ama işe yaramaması için bir neden görmüyoruz)</td></tr><tr><td>Alternatif Entübasyon Standları</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>KN-1014</td><td>bir alternatif, tartışılmadı (ama işe yaramaması için bir neden görmüyoruz)</td></tr><tr><td>Alternatif Entübasyon Standları</td><td>Vetland</td><td>000A3467</td><td>bir alternatif, tartışılmadı (ama işe yaramaması için bir neden görmüyoruz)</td></tr><tr><td>Alternatif Entübasyon Standları</td><td>Laboratuvar Tarafından El</td><td>Yapımı N/A</td><td>Burada 3 halkalı bir bağlayıcıdan yapılmıştır: DOI 10.3791/60844 (birkaç alternatif yöntem yayınlanmıştır)</td></tr> <tr><td>Emilmeyen Örgülü İpek Sütür, Boyut 0</td><td>Güzel Bilim Araçları&nbsp;</td><td>18020-00</td><td>1 inçten daha uzun olması karinaya zarar verir&nbsp;</td></tr><tr><td>Safelet IV Kateter 20G x 1 "</td><td>Nipro</td><td>NPRCI + 2025</td><td>Veya benzeri</td></tr><tr><td>RS-5358 Mikro Diseksiyon Forseps</td><td>Fisher</td><td>RS-5358</td><td>Veya benzeri, yardım ellerini içerir&nbsp;</td></tr><tr><td>Işıklı ve Standlı Büyüteç, EOOKU Esnek Manyetik Yardım Eli, 5X& 10X 12V 108 adet LED Boncuk Büyüteç Lambası, 3 Modlu Ayarlanabilir Döner Deveboynu Kolları ve Ağır Hizmet Tipi Taban Plakası</td><td>Amazon</td><td>https://www.amazon.com/Magnifying- EOOKU-Esnek-Ayarlanabilir-Deveboynu /dp/B0C5MC6QNW/ref=sr_1_5?crid=F4 PZY6UOCEE9& dib=eyJ2IjoiMSJ9., gj5cKLw4v3CDSkrQKcs73kXqVtnJl JpBKEp_FcTCIEQSO3EirxEYoH ySohcPg0ZDhmnFwGeLit22nM SJxpz1MPP0 q6-PwbPzzMT0RWB_pXkmSBiAo5xB J4QSf8_BoLZ4u8S8lfIo5WI9-VuXj75X eo0LQfygaSMgW58XO2bbasOfaw cwxZXs5cTqCUmKh5bRn7A19_ cY2a0-x_ly-27RXXPinVbBNW00Ww8jY55x fnWFCaK5lnPb4VxSV6iTCOhMnkm TopFiA3rCLNXcBDGCwfLdw22w 17T0c_rRhh-Mrew . TtsVr89Bo5YLvaXvarcbKxJ07GK zMMVSg5op4U5eyvA& dib_tag= SE& anahtar kelimeler=büyütme+cam+ile +ışık+EOOKU+3+içinde+1& QID=1709661 709& sprefix = büyütme + cam + ile + ışık + eooku + 3 + inç + 1%2 kapaklar%2C98& sr=8-5</td><td>Veya benzeri, herhangi bir bükülmüş ince tırtıklı forseps işe yarayacaktır&nbsp;</td></tr><tr><td>Kulak Kiri Temizleme - 8 Adet Kulak Seti ile Kulak Kiri Temizleme Aleti - Kameralı Kulak Temizleyici - Işıklı Kulak Kiri Temizleme Kiti - 6 Kulak Kaşıklı Kulak Kamerası - iOS için Kulak Temizleyici & Android (Siyah)</td><td>Amazon</td><td>https://www.amazon.com/Ear-Wax- Kaldırma-Sökücü-Android%EF% BC%88Black%EF%BC%89/dp/B0 9KZ8TS7L/ref=pd_lpo_sccl_1/147 -1203879-4147304?pd_rd_w=Lt8 Ta& content-id=amzn1.sym.1ad20 66f-97d2-4731-9356-36b3edf1ae 04& pf_rd_p=1ad2066f-97d2-4731 -9356-36b3edf1ae04& pf_rd_r= MDQ3AHH4AC8T2KFX1RBE& pd_rd_wg=ja4H2& pd_rd_r=52d9 372c-b34b-4f6a-93f6-974754d96 3d9& pd_rd_i=B09KZ8TS7L& psc = 1</td><td>veya benzeri, birkaç marka mevcut&nbsp;</td></tr><tr><td>AZIMOM PMMA Plastik Uç Kızdırma Fiber Optik Kablo 0.75mm (0.02in) 100m (328ft) / Rulo Yıldız Gökyüzü Tavan için Her türlü led ışık motoru sürücü kaynağı</td><td>Amazon</td><td>https://www.amazon.com/AZIMOM -plastik-kesilebilir-tavan-1 adet 00-00 98in328ft / dp / B07WC9JV5N / ref = sr _1_9?dib=eyJ2IjoiMSJ9.K7NmvB hJOux4zdNBKSPo-ac4HYPDPUS F85Qlra7o7G2FQl9MQLj1D7QtPJ cxnAeDiYm_yNWPhwj44nhSfwqM vs1AtulruHGEsfjLEAjRGSFpNLgN H-Ewc190MluERArk91lR9Od6ceB hkz2AJad11hVUkWEOb0-emUWW b2U4fNN0upQKgyD1vE eU0DtClQ73tDe22z4CXrSLP7vC D9jF2APfz1liHou_zdiAyCSFb1Df bC8Ymce6zXV0qOD3gQFkm6j NV5bN1DG8SH_BaV4vofzj98T JVRnNElEzUzjx0rY.AMHl3h-jIz GTeGjvej0Nq8FTPLEPmfiQ UDPz_U6ctI0& dib_tag=se& anahtar kelimeler=fiber%2Boptic%2Blight %2Bstrands& qid=1722619884& sr =8-9& th = 1</td><td>veya benzeri, fiber</td></tr> 7 <tr><td>50 mL konik tüp</td><td>hücre tedavisi</td><td>229421</td><td>herhangi bir opak plastik 50 mL vidalı kapaklı konik kapak çalışmalıdır. Hayvanla temas etmez veya yakın değildir, bu nedenle steriliteye gerek yoktur&nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>VetOne</td><td>Veteriner Personeline</td><td></td>Danışın</tr><tr><td>Innoculum&nbsp;</td><td>Yok</td><td>Deneyinize</td><td></td>Özel</tr><tr><td>Pipet Uçları (filtre)</td> <td>Yok</td><td>Steril Filtre p100 ve p1000 uçları kullanılmış</td><td>Marka/Tedarikçi ilgili değil&nbsp;</td></tr><tr><td>İndüksiyon Odası N</td><td>/A</td><td>Kurumunuzda mevcut olduğu gibi</td><td>Marka/Tedarikçi ilgili değil&nbsp;</td></tr><tr><td>İzopropanol Hazırlık Pedleri</td><td>N/A</td><td>Cihaz temizliği için</td><td>Marka/Tedarikçi ilgili değil&nbsp;</td></tr><tr><td>Boru&nbsp;</td><td>N / A</td><td>küçük çaplı esnek boru işe yarayacaktır&nbsp;</td><td>"Kabarcık tüpü" yapımı için&nbsp; (bizimki ~ 3 mm çapında ve bir IV hattından alındı)</td></tr><tr>Yukarıdaki <td>hortumunuza uyacak şekilde</td> <td>Luer kilidi</td><td>N/A</td><td>"Kabarcık tüpü" yapımı</td></tr> <tr><td>için3M yarım yüz maskesi maskesi</td> Gaz <td>maruziyetini sınırlamak için</td><td>3M</td><td>17-986-9B</td></tr><tr>Kabarcık <td>tüpünün U şeklini korumak için</td> <td>Twist Tie</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr></tbody></table>

fare akciğerine sıvı İletimi için geliştirilmiş metodoloji: tüketici otoskopu kullanılarak entübasyon

Improved Methodology for Liquid Delivery to the Mouse Lung: Intubation using a Consumer Otoscope

Şekil 1 ve Şekil 3'te görüldüğü gibi, geleneksel dil çekme yöntemi (orofaringeal dağıtım) kullanılarak yapılan intrapulmoner inokülasyon, yamalı, tutarsız mürekkep dağılımına ve araştırmacılar arasında daha büyük bir değişkenliğe neden oldu. Buna karşılık, entübasyonu takiben BT damlatması hem sağ hem de sol akciğerlere daha tutarlı bir şekilde verilmesine yol açtı ve daha az değişkendi (Şekil 1C ve Şekil 3D). Dil çekme kullanılarak orofaringeal aspirasyon yoluyla mürekkep verilen hayvanların akciğerlerinde, mürekkep incedir ve yalnızca hayvanların büyük hava yollarının yakınında bulunur (Şekil 1A). Buna karşılık, mürekkebi iletmek için yönlendirilmiş entübasyon kullanıldığında, akciğerlerin çok daha büyük bir alanını işaretleyerek dokuya çok daha fazla yayıldı. Mürekkeple boyanan akciğer yüzey alanı yöntemler arasında karşılaştırıldığında, entübasyon yönteminin dil çekmeye göre çok daha üstün olduğu kanıtlanmıştır (Şekil 1B). Mürekkep verme miktarındaki değişkenlik de entübasyon durumunda önemli ölçüde daha düşüktü (Şekil 1C). Lekelenen akciğer alanının artması ve akciğerlere ulaşan sıvı miktarındaki değişkenliğin daha düşük olması, BT iletiminin dil çekmeden daha üstün olduğunu güçlü bir şekilde düşündürdü.
Video 1'de görüldüğü gibi, geleneksel endoskoplar (daha önce yayınlandığı gibi) ses kıvrımlarını takdir etmek ve endotrakeal tüp yerleşimini yönlendirmek için çok uzun bir odak uzaklığına sahiptir 6,19. Buna karşılık, bir tüketici otoskopu kullanılarak çekilen video görüntüleri (Şekil S1 ve Zaman Damgaları: videoda 6:34 ve 7:05) çok daha iyi çözünürlüğe sahipti ve bu da glotisin daha iyi görselleştirilmesine yol açtı.
Bu entübasyon yöntemi, trakeaya tüp yerleşiminin çoklu doğrulamasını içerir. Fare tidal hacmi, kabarcık yöntemi kullanılırken kolayca görülebiliyordu (Şekil S2 ve Zaman Damgası: 8:25) ve verilen herhangi bir sıvının akciğerlere gireceğine dair son bir güvence görevi görüyor.
İki uygulama yönteminin varyansını daha fazla değerlendirmek için, fareler iki farklı yöntem kullanılarak 1 x 1011 vg AAV6.2-Lusiferaz ile aşılandıktan sonra akciğer dokusundaki transgen ekspresyonunu değerlendirdik (dil çekme yöntemiyle orofaringeal damlatma veya kılavuzlu entübasyonu takiben intratrakeal doğum). Vektör uygulamasından yedi gün sonra, in vivo görüntüleme sistemi (IVIS) kullanılarak lüminesans ölçümleri yapıldı (Şekil 3A). Daha sonra, her iki akciğerdeki ortalama parlaklığı hesapladık. Görüntülemeden 10 dakika önce (30 s maruziyet), 200 μL lusiferin (15 mg / mL) ile (deri altına) enjekte edildi. Şekil 3B'de gösterildiği gibi, orofaringeal damlatma ile vektör verilen hayvanlar, hem göğüs hem de burun bölgesinde yaygın olarak dağılmış olan ışıldayan sinyale sahipti. Buna karşılık, kılavuzlu entübasyon kullanılarak intratrakeal uygulama yoluyla vektör verilen hayvanlar, akciğerlerde konsantre lüminesans gösterdi. Entübe hayvanlardaki ortalama parlaklık, orofaringeal doğuma kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti, bu da akciğerlere vektör iletiminin verimliliğinin arttığını ve doğumdaki değişkenliğin azaldığını gösterdi, ortalamadan fark kullanılarak hesaplandı (Şekil 3C ve Şekil 3D).
Entübasyon yönteminin olumlu sonuçları, fare akciğerlerine 50μL'ye kadar tekrarlanabilir damlatma idi ( Şekil 1 ve Şekil 3'te gerçekleştirildi), akciğer boyunca yaygın dağılım ( Şekil 1'de kanıtlandığı gibi) ve diğer alanlarda değil ( Şekil 3'te görüldüğü gibi üst solunum yolu / burun gibi).
Hayvana verilen herhangi bir zarar, aşırı stres, akciğerlere ulaşan sıvı hacminin azalması, aşının akciğerlerde kötü dağılımı veya uzun süreli eğitim ihtiyaçları olumsuz bir sonuç teşkil ederdi, ancak meydana gelmedi.
Video 1: Fare orofarenks ve ses kıvrımlarının geleneksel endoskopik görünümü odak dışındadır ve etkili bir şekilde kullanılması zordur. Bu endoskopun 3 cm'lik odak uzaklığı, ses tellerinin ve oryantasyonunun takdir edilmesinin zor olduğu anlamına gelir. Sol alttaki dil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/Video1%20T.%20Parks%20Remcho%20(1).mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67676/67676fig03.jpg"> 
Şekil 3: Entübasyon, OP aspirasyonuna göre daha az değişkenlik ile akciğere daha fazla iletim sağlar. (A) 6-10 haftalık dişi BALB / c farelerine 1x1011 vg AAV6.2-Luciferase, (Penn Vektör Çekirdeği) dozlandı, daha sonra 7 gün sonra in vivo biyolüminesan görüntüleme (IVIS) ile değerlendirildi. Görüntülemeden 10 dakika önce (30 s maruziyet), 200 μL lusiferin (GoldBio, 15mg / mL) ile (deri altına) enjekte edildi. (biorender.com ile oluşturuldu) (B) OP aspirasyonu (dil çekme, sol) veya IT iletimi (entübasyon, sağ) ile AAV6.2-Lusiferaz alan farelerin temsili IVIS görüntüleri. İlgilenilen bölgeler aynı boyuttadır ve bölge içindeki ortalama parlaklık görüntüde gösterilir. (C) OP aspirasyonunda (n = 7) entübasyon (n = 5) farelerinde lusiferaz sinyalinin ölçülmesi. p&lt;0.0001, ham lusiferaz verilerinin log-dönüşümünden sonra eşleşmemiş Galce t-testi ile. (D) Ortalama ortalama parlaklığın yüzdesi olarak ortalamadan sapma. (p=0.0381, Galler'in T-testi) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/67676fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Şekil S1: Kılavuzlu entübasyon için açıklanan protokolde kullanılan tüketici otoskopundan (solda) ve benzer maliyet ve kullanılabilirliğe sahip bir endoskoptan (sağda) örnek görüntüler gösterilmektedir. Görüntüler arasındaki net odak farklılıklarına dikkat edin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/FigureS1.jpeg" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Şekil S2: Kullanılan kabarcık tüpünü gösteren örnek bir resim. Gelgit hacmi, kabarcık tüpündeki damlacığı birkaç santimetre hızla hareket ettirir. Tüp yemek borusu içindeyse damlacık çok az hareket eder. Solunum hızı ve tidal hacim bu yöntemle tahmin edilebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/FigureS2.jpeg" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Şekil S3: Pahalı bir fiberoptik aydınlatma kiti satın alma ihtiyacını ortadan kaldıran temel bir aydınlatma tertibatı. 20 G'lik bir iğne 50 mL konik, 0.75 mm fiber optik kablodan itildi, ucuza (ve toplu olarak) satın alındı ve bir tıraş bıçağıyla uzunlamasına (~ 1m) kesildi ve yerine bantlandı. Fiber optik kabloya tam oturması nedeniyle kateterin yerine sabitlenmesi gereksizdi. Konik kapağın bir cep telefonu el feneri üzerine sabitlenmesi, karanlık bir odada entübasyon gerçekleştirmek için yeterli ışık iletimi ile sonuçlanır. Bu montaj, bu tekniği içeren bir laboratuvar tarafından üstlenilen maliyetleri daha da azaltır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67676/FigureS3.jpeg" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon

Consistent delivery of liquids, including potential therapies, to the lungs is critical for modeling pulmonary disease and pre-clinical therapeutic ...

improved-methodology-for-liquid-delivery-to-mouse-lung-intubation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Bu videoda, akciğer damlatma, fiksasyon ve akciğer hacmi ölçümü için soluk borusuna sıvı eklemenin basit ve güvenilir bir yöntemi açıklanmaktadır.

Akciğer İnstilasyonu ve Fiksasyonu: Sabit Akciğer Hacmini Ölçmek için Trakeaya Sıvı Verilmesi ve Akciğerlerin Sabitlenmesi

Biz 2.0 mm spekulum ile bir otoskop kullanarak direkt laringoskopi yoluyla farelerde entübasyon için, basit, güvenilir ve nispeten ucuz bir yöntem geliştirdik. Bu teknik, atravmatik ve kronik deneylerde tekrarlanan ölçümler için de kullanılabilir. Biz üstün trakeostomi veya daha önce cerrahi dışı teknikler bildirdi bulabilirsiniz.

Farelerde Endotrakeal Entübasyon<em&gt; Via</emBir Otoskop Kullanma&gt; Doğrudan Larengoskopi

Bu yazıda akciğer fonksiyonu ölçümleri veya fareler kurtarmak için ve daha sonraki dönemlerde de incelenebilir sağlar pulmoner instilasyon için fare entübasyon bir striaghforward ve etkili bir yöntem açıklanır. Işlem doğrudan soluk borusu yanması pahalı olmayan bir fiber optik ışık kaynağı içerir.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

Insanlarda akciğer hastalıklarının durumunu taklit eden bir modelinin kullanılması, belirli bir hastalığın patofizyolojisi ve / veya etyolojisinin araştırılması için ve terapötik müdahale geliştirmek için çok önemlidir. Burada doğrudan fare akciğerlere eksojen malzemeleri teslim noninvazif bir entübasyon yöntemi sunulmuştur.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Farelerde deneysel ajanlar intratracheal (It) yönetimi genellikle distal akciğerlere asimetrik teslim sonuçlanır.  Bu raporda, her akciğeri operatif olmayan canlı fareler içinde cannulate için doğrudan intrabronchial (ıB) yaklaşımı açıklanmaktadır.  Bu yaklaşım, bir akciğer için seçici olarak ajanlar yönetmek için kullanılabilir ya da her iki akciğerde simetrik Ajan teslim geliştirmek için adapte olabilir.

Fare akciğer Içinde seçici Ajan biriktirme geliştirmek için doğrudan Intrabronchial yönetim

Bu makalenin amacı, laboratuvar faresinin entübasyonunun rafine bir yöntemini açıklamaktır. Yöntem noninvaziv ve bu nedenle, solunum fonksiyonu ve / veya akciğer içine tedavilerin indaşseri izleme gerektiren çalışmalar için idealdir.

Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Bu protokol, isofluran anestezi altında yetişkin sıçanlarda hızlı ve görsel rehberli entübasyonu mümkün kılan basit, düşük maliyetli, video destekli bir ororaksal entübasyon yöntemini tanımlar.

Düşük maliyetli akıllı telefona bağlı otoskop kullanarak sıçanlarda video destekli orokraçal entübasyonu

Öğrenin, fare akciğerine sıvı iletimi için tüketici otoskopu kullanarak entübasyon yöntemini. Bu teknik, minimal doku travması ile tutarlı ve güvenilir pulmoner terapötik dağıtım sağlar.

Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon

Daha fazla video keşfet