Name: Hücre Duvarı ve Hücre Zarı Proteinlerinin Aşağı Akış Protein Analizi için Mycobacterium tuberculosisten Ayrılması ve Fraksiyonlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Keşfedin, Mycobacterium tuberculosis hücre duvarı ve zarı proteinlerini izoelektrik odaklama ile fraksiyonlama yöntemini. Bu teknik, proteomik ve immünolojik analizler için doğrudan kullanılabilir örnekler sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
<li>Kunnath-Velayudhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+antibody+responses+to+the+Mycobacterium+tuberculosis+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic antibody responses to the Mycobacterium tuberculosis proteome.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14703-14708 (2010).</li>
<li>Drage, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+and+its+co-receptors+determine+responses+of+macrophages+and+dendritic+cells+to+lipoproteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 and its co-receptors determine responses of macrophages and dendritic cells to lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Cell Immunol. 258 (1), 29-37 (2009).</li>
<li>Wallin, E., von Heijne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+integral+membrane+proteins+from+eubacterial%2C+archaean%2C+and+eukaryotic+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of integral membrane proteins from eubacterial, archaean, and eukaryotic organisms.</a> Protein Sci. 7, 1029-1038 (1998).</li>
<li>Almeida, J. G., Preto, A. J., Koukos, P. I., Bonvin, A. M. J. J., Moreira, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins+structures%3A+A+review+on+computational+modeling+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins structures: A review on computational modeling tools.</a> Biochim Biophys Acta Biomembr. 1859 (10), 2021-2039 (2017).</li>
<li>Finkelstein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structures of membrane proteins.</a> Nature. 511 ((Suppl 7509)), 21(2014).</li>
<li>Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Strategies for the purification of membrane proteins.</a> Methods Mol Biol. 1485, 389-400 (2017).</li>
<li>Von Jagow, G., Link, T., Schager, H. Purification Strategies for Membrane Proteins. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVon+Jagow%2C+G+%22A+Practical+Guide+to+Membrane+Protein+Purification%22">A Practical Guide to Membrane Protein Purification</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1994).</li>
<li>Raja, A., Uma Devi, K. R., Ramalingam, B., Brennan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulin+G%2C+A%2C+and+M+responses+in+serum+and+circulating+immune+complexes+elicited+by+the+16-kilodalton+antigen+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulin G, A, and M responses in serum and circulating immune complexes elicited by the 16-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (2), 308-312 (2002).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (4), 574-586 (2001).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Sinha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+membrane-associated+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+revealed+by+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics.</a> Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7H9 et suyu&nbsp;</td><td>Himedia&nbsp;</td><td>M198 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>%40 Bio-Lyte 3/10 Ampholyte&nbsp;</td><td>BIYO-RAD</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>BCA protein tahlili&nbsp;</td><td>MERCK</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/7 Ampholyte&nbsp;</td><td>BIYO-RAD</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>santrifüj yoğunlaştırıcılar 3 kDa</td><td>MERCK</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>Digitonin.</td><td>MERCK</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>MERCK</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>MERCK</td><td>D9779 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>MERCK</td><td>E9884 (İngilizce)</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MERCK</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>MERCK</td><td>G5516 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>MERCK</td><td>E18</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin A</td><td>MERCK</td><td>P5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF Hakkında</td><td>MERCK</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>Rnase</td><td>MERCK</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>Rotofor&nbsp;</td><td>BIYO-RAD</td><td>170-2986</td><td>&nbsp; izoelektrik odaklama (IEF) aparatı</td></tr><tr><td>Sonikatör</td><td>Vibra-Hücre, Sonik</td><td>VC 750 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Özet</td><td>MERCK</td><td>T7254 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>TPCK</td><td>MERCK</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>üre</td><td>MERCK</td><td>U5378 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Tüm Jel Eluter aparatı&nbsp;</td><td>BIYO-RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

hücre duvarı ve hücre zarı proteinlerinin aşağı akış protein analizi için mycobacterium tuberculosis'ten ayrılması ve fraksiyonlanması

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

Hücre duvarı ve hücre zarı proteinlerinin yüksek hızlı ultrasantrifüjleme ile izolasyonu Hücre duvarı ve membran proteinleri, protokolde belirtildiği gibi ultrasantrifüjleme yoluyla tüm hücre lizatlarından izole edildi. M. tuberculosis'in ayrılmış hücre altı fraksiyonları-hücre duvarı, hücre zarı ve sitozol protein profillerinin SDS-PAGE analizi Şekil 1'de gösterilmektedir.
Hazırlayıcı sıvı faz izoelektrik odaklama ile hücre du...

Hücre Duvarı ve Hücre Zarı Proteinlerinin Aşağı Akış Protein Analizi için Mycobacterium tuberculosis'ten Ayrılması ve Fraksiyonlanması

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

separation-fractionation-cell-wall-cell-membrane-proteins-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. Demir Sınırlı Mikobakteriler Tarafından Üretilen Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu ve Karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, konakçı ortamı taklit eden demir sınırlayıcı koşullar altında kültürlenen Mycobacterium tuberculosis'ten hücre dışı veziküllerin (EV'ler) aşamalı izolasyonunu göstermektedir. EV içeren fraksiyonları zenginleştirmek ve tanımlamak için ultrafiltrasyon, diferansiyel santrifüjleme ve yoğunluk gradyanı ayırmanın kullanımını...

Mycobacterium tuberculosis'ten Siderofor İçeren Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu

Bu video, mikolik asitlerin ince tabaka kromatografisi tabanlı ayrımını göstermektedir. Bu teknik, mikobakterilerin hücre duvarında bulunan farklı mikolik asitleri (mikobakterilerin hücre duvarında bulunan uzun zincirli lipitler) polaritelerine göre ayırır.

Mikolik Asit Varyantlarının İnce Tabaka Kromatografisi Tabanlı Ayrımı: Mikobakteriyel Hücre Duvarı Lipidlerini Polariteye Göre Ayırmak İçin Bir Yöntem

Bu video, Mycobacterium tuberculosis'in (Mtb) kültür süzüntüsünden bakteriyel hücre dışı vezikülleri (EV'ler) saflaştırmak için boyut dışlama kromatografisi (SEC) tekniğini göstermektedir. Teknik, EV'lerin saflaştırılmış fraksiyonlarını elde etmek için gözenekli reçine dolgulu bir kolon kullanır. Gözenekli parçacıklar seçici olarak daha küçük proteinlerin gözeneklere girmesine izin vererek daha yavaş elüsyona neden olur. Aynı zamanda, EV'lerin daha büyük boyutları nedeniyle gözeneklere girmesi...

Mikobakteriyel hücre dışı vezikülleri saflaştırmak için bir boyut dışlama kromatografisi tekniği

Bakteri hücre duvarı peptidoglikan, peptitler tarafından çaprazlanmış şeker iplikçiklerinden oluşan bir makromoleküler ağdır. Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi, peptidoglikan kompozisyonunun yeni keşifleri için yüksek çözünürlük ve verim sağlar. Hücre duvarlarının izolasyonu (sakculi) ve daha sonra UPLC aracılığıyla analize hazırlanmaları için bir prosedür sunuyoruz.

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografisi ile Bileşimsel Analiz için Bakteriyel Hücre Duvarlarının İzolasyonu ve Hazırlanması

Gram-negatif bakteriler iki mekansal olarak ayrılmış membran üretirler. Dış zar bir periplazm ve peptidoglikan tabakası ile iç zardan bölümlenir. Bu mikropların çift iki katmanlı izole yeteneği fizyolojisi ve patogenezini anlamak için kritik olmuştur.

Gram-negatif Bakteriler için Hücre Zarfının İç ve Dış Membran Fraksiyonlarına Ayrılması Acinetobacter baumannii için Teknik Ayarlamalar

Çok çeşitli mikobakterilerin hücre duvarının toplam lipit içeriğini çıkarmak için bir protokol sunulmaktadır. Ayrıca, farklı mikolik asit türlerinin ekstraksiyon ve analitik protokolleri gösterilmiştir. Bu mikobakteriyel bileşikleri izlemek için ince katmanlı bir kromatografik protokol de sağlanmaktadır.

İnce Tabaka Kromatografisi ile Mikobakterilerin Lipid Bileşiminin Analizi

Bakteriyel veziküller patogenezde önemli roller oynar ve umut verici biyoteknolojik uygulamalara sahiptir. Veziküllerin heterojenliği analiz ve kullanımı zorlaştırır; bu nedenle, değişen boyutlarda vesikleleri ayırmak için basit, tekrarlanabilir bir yöntem gereklidir. Burada, Aggregatibacter actinomycetemcomitanstarafından üretilen heterojen vezikülleri ayırmak için boyut dışlama kromatografisinin kullanımını gösteriyoruz.

Bakteriyel Dış Zar Vezikül Heterojenliğini Analiz Etmek için Boyut Dışlama Kromatografisi

Bu protokol, Mycobacterium tuberculosis hücre dışı veziküllerini kültür süpernatantlarından zenginleştirmek için kolay ve tekrarlanabilir bir teknik olan boyut dışlama kromatografisini tanımlar.

Mycobacterium tuberculosis Boyut Dışlama Kromatografisi ile Hücre Dışı Vezikül Zenginleştirme

Bu protokol, Mycobacterium smegmatis'in (Msm) aksenik kültürlerinden doğal mikobakteriyel hücre dışı veziküllerin (mEV'ler) zenginleştirilmesini ve mCherry (kırmızı floresan raportör) içeren rekombinant MsmEV'lerin nasıl tasarlanabileceğini ve zenginleştirilebileceğini detaylandırır. Son olarak, Mycobacterium tuberculosis'in EsxA proteinini içeren MsmEV'lerin zenginleştirilmesiyle yeni yaklaşımı doğrulamaktadır.

Mikobakterilerin Doğal ve Rekombinant Hücre Dışı Veziküllerinin Zenginleştirilmesi

Prokaryotlar organel bir sistemden yoksun olsalar da, lokalize proteinlere sahip hücre altı bölgeler vardır. Hücre altı bölgelerdeki enzim ve proteinlerin kantitatif ve kalitatif analizleri, ilaç ve aşı hedeflerinin geliştirilmesi için önemlidir. Burada, Triton X-114 ve analizini kullanarak Leptospiral proteinlerin hücre altı fraksiyonasyonunu gösteriyoruz.

Triton X-114 Tabanlı Fraksiyonasyon Yaklaşımı Kullanılarak Leptospira'da Hücre Altı Proteinlerin Zenginleştirilmesi

Bu protokol, Mycobacterium tuberculosis'in salgılanan proteinlerinin kültürlenmesini, toplanmasını ve konsantrasyonunu açıklar. Kültür filtrat proteinleri (CFP'ler) ölçülür, izoelektrik odaklama ile 20 fraksiyona ayrılır ve ayrıca bir hazırlayıcı SDS-PAGE ve bir elektroelüsyon sistemi kullanılarak 30 fraksiyona çözülür.

Mycobacterium tuberculosis'ten Kültür Filtrat Proteinlerinin (CFP'ler) Ayrılması ve Fraksiyonlanması

Keşfedin, Mycobacterium tuberculosis hücre duvarı ve zarı proteinlerini izoelektrik odaklama ile fraksiyonlama yöntemini. Bu teknik, proteomik ve immünolojik analizler için doğrudan kullanılabilir örnekler sağlar.

Hücre Duvarı ve Hücre Zarı Proteinlerinin Aşağı Akış Protein Analizi için Mycobacterium tuberculosisten Ayrılması ve Fraksiyonlanması (Video) | JoVE Journal

Hücre Duvarı ve Hücre Zarı Proteinlerinin Aşağı Akış Protein Analizi için Mycobacterium tuberculosis'ten Ayrılması ve Fraksiyonlanması

Daha fazla video keşfet