Name: İnsan Bağırsak Organoidlerinin İnnervasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Keşfedin, insan bağırsak organoidlerine enterik sinir sisteminin entegrasyonunu optimize etme yöntemini. Bu teknik, kısa bağırsak sendromu için doku mühendisliği çözümleri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Semin Pediatr Surg. 19 (1), 3-9 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+redefining+predictors+of+success%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: redefining predictors of success.</a> Ann Surg. 242 (3), discussion 409-412 403-409 (2005).</li>
<li>Goulet, O., Pigneur, B., Charbit-Henrion, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+enteropathies+involving+defects+in+enterocyte+structure+or+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Congenital enteropathies involving defects in enterocyte structure or differentiation.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 56-57, 101784(2022).</li>
<li>Koglmeier, J., Lindley, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+diarrhoeas+and+enteropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Congenital diarrhoeas and enteropathies.</a> Nutrients. 16 (17), 2971(2024).</li>
<li>Duggan, C. P., Jaksic, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+intestinal+failure%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pediatric intestinal failure.</a> N Engl J Med. 377 (7), 666-675 (2017).</li>
<li>Spence, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+intestinal+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro.</a> Nature. 470 (7332), 105-109 (2011).</li>
<li>McCracken, K. W., Howell, J. C., Wells, J. M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+human+intestinal+tissue+from+pluripotent+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating human intestinal tissue from pluripotent stem cells in vitro.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1920-1928 (2011).</li>
<li>Bajpai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHD7+cooperates+with+PBAF+to+control+multipotent+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">CHD7 cooperates with PBAF to control multipotent neural crest formation.</a> Nature. 463 (7283), 958-962 (2010).</li>
<li>Workman, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+human+pluripotent-stem-cell-derived+intestinal+tissues+with+a+functional+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Engineered human pluripotent-stem-cell-derived intestinal tissues with a functional enteric nervous system.</a> Nat Med. 23 (1), 49-59 (2017).</li>
<li>Schlieve, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+cell+implantation+restores+enteric+nervous+system+function+and+alters+the+gastrointestinal+transcriptome+in+human+tissue-engineered+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Neural crest cell implantation restores enteric nervous system function and alters the gastrointestinal transcriptome in human tissue-engineered small intestine.</a> Stem Cell Rep. 9 (3), 883-896 (2017).</li>
<li>Fattahi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+human+ENS+lineages+for+cell+therapy+and+drug+discovery+in+Hirschsprung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Deriving human ENS lineages for cell therapy and drug discovery in Hirschsprung disease.</a> Nature. 531 (7592), 105-109 (2016).</li>
<li>Barber, K., Studer, L., Fattahi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+enteric+neuron+lineages+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Derivation of enteric neuron lineages from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 14 (4), 1261-1279 (2019).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome-wide+analysis+reveals+hallmarks+of+human+intestine+development+and+maturation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptome-wide analysis reveals hallmarks of human intestine development and maturation in vitro and in vivo.</a> Stem Cell Rep. 4 (6), 1140-1155 (2015).</li>
<li>Boyle, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+transplantation+of+human+intestinal+organoids+enhances+select+tight+junction+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo transplantation of human intestinal organoids enhances select tight junction gene expression.</a> J Surg Res. 259, 500-508 (2021).</li>
<li>Finkbeiner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue-engineered+small+intestine+using+embryonic+stem+cell-derived+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue-engineered small intestine using embryonic stem cell-derived human intestinal organoids.</a> Biol Open. 4 (11), 1462-1472 (2015).</li>
<li>Mahe, M. M., Brown, N. E., Poling, H. M., Helmrath, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+model+of+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo model of small intestine.</a> Methods Mol Biol. 1597, 229-245 (2017).</li>
<li>McNeill, E. P., Gupta, V. S., Sequeira, D. J., Shroyer, N. F., Speer, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+murine+host+sex+as+a+biological+variable+in+transplanted+human+intestinal+organoid+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of murine host sex as a biological variable in transplanted human intestinal organoid development.</a> Dig Dis Sci. 67 (12), 5511-5521 (2022).</li>
<li>Singh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+transplantation+sites+for+human+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of transplantation sites for human intestinal organoids.</a> PLoS One. 15 (8), e0237885(2020).</li>
<li>Watson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+human+small+intestine+using+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of human small intestine using pluripotent stem cells.</a> Nat Med. 20 (11), 1310-1314 (2014).</li>
<li>Cortez, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+intestinal+organoids+into+the+mouse+mesentery%3A+A+more+physiologic+and+anatomic+engraftment+site%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human intestinal organoids into the mouse mesentery: A more physiologic and anatomic engraftment site.</a> Surgery. 164 (4), 643-650 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100x Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (NEAA)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik tüpler</td><td>Thermo Scientific</td><td>12565269</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07920</td> <td>"enzimatik hücre ayırma reaktifi"</td></tr> <tr><td>B-27 Takviyesi (50x), eksi A vitamini</td><td>ENCC için</td> <td>ThermoFischer Scientific</td><td>12587010</td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi (50x), HIO</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bright-Line Hemacytometer</td><td>Hausser Scientific</td><td>3120</td><td></td></tr> için serum içermeyen Gibco 17504044 <tr><td>Corning Costar Ultra Düşük Bağlantılı</td><td>Mikroplakalar Fisher Scientific</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>Corning Düz Tabanlı Plaka 24 kuyulu, TC ile tedavi edilmiş</td><td>VWR</td><td>29442-044</td><td></td></tr><tr><td>Corning Düz Tabanlı Plaka 3516 6 kuyulu</td><td>VWR</td><td>29442-042</td><td></td></tr><tr><td>Essential 6 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A1516401</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 Media</td><td>Thermo Fischer</td><td>A2858501</td><td>ENCC plakaları için kullanılan alternatif kök hücre ortamı.</td></tr><tr><td>İnce uçlu forseps</td><td>Dumont</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Forma Steri-Cycle i160 Thermo</td><td>Scientific</td><td>50145522</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Gelişmiş DMEM/F12</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Gibco HEPES 1 M</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Nörobazal Orta</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>Glutagro, 200 mM, 100x</td><td>Corning</td><td>25-015-CI</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>ThermoFischer Bilimsel</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>H9 insan ESC</td><td>Wicell Uluslararası Kök Hücre Bankası</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>HyCloneTM FBS Tanımlı</td><td>VWR</td><td>16777-002</td><td></td></tr><tr><td>LabGard Biyolojik Güvenlik Kabini</td><td>Nuaire</td><td>Nu-430-400</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel GFR Bodrum Membran Matrisi, Fenol Kırmızısı İçermeyen, LDEV İçermeyen</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>"Şeffaf 3D bazal membran matrisi"</td></tr><tr><td>Matrigel hESC Nitelikli Matris, LDEV-İçermeyen</td><td>Corning</td><td>354277</td><td>"3D bazal membran matrisi"</td></tr> <tr><td>Mikropipetler</td><td>Eppendorf (100-1000, 20-200, 10-10, 2-20, 0.5-10, 0.1-2.5 uL)</td><td>2231300008</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR 1</td><td>KÖK HÜCRE Teknolojileri</td><td>85850</td> <td>"kök hücre ortamı" Katalog numarası, önceden toplu olarak eklenecek 5x eki içerir.</td></tr><tr><td>N-2 Takviyesi (100x)</td><td>HIO N-2</td>Takviyesi için <td>Gibco</td><td>17502048</td></tr><tr><td>, CTS (Hücre Tedavi Sistemleri)</td> ENCC için <td>Thermo Fisher</td><td></td><td>A1370701. Biraz farklı formülasyon.</td></tr><tr><td>Nikon DS-Fi2 TS-100 mikroskop</td><td>Nikon</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>Noggin koşullu ortam</td><td>Texas Tıp Merkezi Sindirim Hastalıkları Merkezi GEMS Çekirdeği, Enteroid/Organoid Alt Çekirdek</td><td>N/A</td> Penisilin-Streptomisin <td></td></tr><tr><td>(10.000 U/mL)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan Aktivin A</td><td>Hücre Yönlendirme Sistemleri</td><td>GFH6-100</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan BMP-4</td><td>Fisher Scientific</td><td>314BP010</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan EGF Proteini, CF</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>236-EG-200</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan FGF temel/FGF2 (146 aa) Protein</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>233-FB-010</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan FGF-4</td><td>Peprotech</td><td>100-31</td><td></td></tr><tr><td>ReLeSR</td><td>KÖK HÜCRE Teknolojileri</td><td>5872</td><td>"Kök hücre ayrışma reaktifi"</td></tr><tr><td>Retinoik asit</td><td>SIGMA</td><td>R2625-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Rnaz içermeyen Mikrofüj tüpleri, 2 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM12425</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Orta</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin şartlandırılmış ortam</td><td>Texas Tıp Merkezi Sindirim Hastalıkları Merkezi GEMS Çekirdeği, Enteroid/Organoid Alt Çekirdek</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>SB 431542, Tocris Bioscience</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-141-0</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST 16R Santrifüj</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standart Geniş Delikli Pipetleyici Uçları</td><td>VWR</td><td>89049-166</td><td></td></tr><tr><td>Stemolekül Chir99021 Çözelti</td><td>Stemgent</td><td>04-0004-02</td><td></td></tr><tr><td>Steril filtre pipet uçları</td><td>VWR (1000uL, 200uL, 10uL)</td><td>76322-154, 76322-150, 89174-520</td><td></td></tr><tr><td>Vitronectin XF</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>7180</td><td>ENCC plakaları için kullanılan alternatif 3D bazal membran matrisi.</td></tr></tbody></table>

İnsan bağırsak organoidlerinin İnnervasyonu

Innervation of Human Intestinal Organoids

ENS, peristaltizm, besin emilimi, sıvı taşınması ve epitel bariyeri bakımı dahil olmak üzere olgun ince bağırsağın temel işlevlerini düzenler. Bu nedenle, HIO'ları innerve etmenin amacı, bu yapılara daha olgun, daha üst düzey işlevsellik geliştirmek için gereken unsurları sağlamaktır. Bu amaçla, laboratuvarımız özellikle HIO'lar içinde ENS'nin gelişimini ve farklı aşamalardaki işlevsel sonuçları inceler.
Bir sonraki aşamaya geçmeden önce her adımın beklendiği gibi ilerlediğinden emin olmak içi...

İnsan Bağırsak Organoidlerinin İnnervasyonu

The complexity of intestinal cytoarchitecture and function poses significant challenges for the creation of the bioengineered small intestine. Techniques ...

Araştırmamız, kısa bağırsak sendromu için bir çözüm olarak doku mühendisliği yapılmış bağırsakların üretilmesine odaklanmaktadır. Laboratuvarımız, bir enterik sinir sisteminin entegrasyonunu optimize etmeye ve mekansal organizasyonu, hücresel çeşitliliği ve işlevi optimize etmeye odaklanmıştır. Umarız bir gün, biyomühendislik ürünü bağırsak oluşturarak bağırsak yetmezliği çeken çocuklar için hayat değiştiren bir çözüm yaratabiliriz.İnsan bağırsak organoidlerini innerve etmek, insan bağırsak gelişimini taklit etmeyi gerektirir ve bu zor olabilir. Enterik sinir sisteminin gelişimi hem biyokimyasal sinyalleme hem de biyomekanik kuvvetler gerektirir. Laboratuvarımızın gelecekteki çalışmaları, insan bağırsak organoidleri içinde enterik sinir sistemi gelişimini optimize etmeye odaklanmıştır.Hücresel çeşitliliğin yanı sıra mekansal organizasyonu da inceliyoruz ve son zamanlarda Dr. Herath tarafından geliştirilen ve bağırsak organoidlerimizdeki ENS'yi sağlam bir şekilde karakterize edebilen ve ölçebilen yeni bir 3D görüntüleme tekniği kullanıyoruz. Bu, modelimizi iyileştirmemize ve insan bağırsak gelişimini ve işlevini özetlememize yardımcı olacaktır. İlk olarak, 15 ila 21. gün kültürlenmiş enterik nöral krest hücrelerinin veya ENCC sferoidlerinin plakasını alın ve ortamı kuyudan dikkatlice çıkarın.Kuyucuğa bir mililitre ılık enzimatik hücre ayırma reaktifi ekleyin ve 37 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Ardından küresel ayrışmayı kolaylaştırmak için plakanın yan tarafına hafifçe vurun. Geniş ağızlı uçlu bir P1000 mikropipet kullanarak, hücreler homojen olana kadar hafifçe yukarı ve aşağı pipetleyerek karışımı titre edin.ENCC süspansiyonunu 15 mililitrelik bir konik tüpe aktarın. Kalan hücreleri toplamak için kuyuyu bir mililitre ılık nöral krest hücre ortamı ile yıkayın, ardından bunu konik tüpe ekleyin. Şimdi hücre süspansiyonunu bir dakika boyunca 300 G'de santrifüjleyin.Daha sonra steril bir pipet ucu kullanarak süpernatanı aspire edin. Daha sonra, geniş ağızlı bir pipet ucu kullanarak, hücre peletini bir mililitre ılık nöral krest hücre ortamında yeniden süspanse edin. Geniş ağızlı bir pipet ucu kullanarak bir insan bağırsağı organoid plakasının tüm kuyucuklarından kültürlenmiş orta arka bağırsak sferoidlerini toplayın ve bunları 15 mililitrelik bir konik tüpe aktarın.Hesaplanan ENCC süspansiyon hacmini, orta hindgut sferoidlerini içeren konik tüpe ekleyin. Geniş ağızlı bir pipet ucu kullanarak, sferoidleri ve ENCC'leri eşit şekilde karıştırmak için karışımı nazikçe tritize edin. Kombine hücre süspansiyonunu bir dakika boyunca 300 G'de santrifüjleyin.Steril bir pipet ucu kullanarak süpernatanı dikkatlice aspire edin. Daha sonra elde edilen hücre peletini soğuk fenol içermeyen büyüme faktörü azaltılmış bazal membran matrisi içinde yeniden süspanse edin. Daha sonra, şeffaf bazal membran matrisindeki yeniden askıya alınmış orta arka bağırsak sferoidlerinin ve ENCC'lerin 30 mikrolitrelik damlacığını her kuru kuyunun ortasına pipetleyin.Tüm damlacıklar kaplandıktan sonra, plakayı örtün, ters çevirin ve 30 dakika boyunca% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede bir inkübatöre yerleştirin. Sıfırıncı günde, şeffaf bazal membran matrisi polimerize olduktan sonra, her damlacığı 500 mikrolitre sıcak gün sıfır ila üç HIO ortamıyla kaplayın. Üçüncü günde, berrak bazal membran matris damlacığını bozmadan, her bir kuyucuğun yanından sıfır ila üç HIO ortamını dikkatlice aspire edin.500 mikrolitre ılık gün üç ila 14 HIO ortamıyla değiştirin ve plakayı inkübatöre geri koyun. 14. günde, şeffaf 3D bazal membran matrisinin her bir damlacığında gelişmekte olan HIO+ENS yapılarının sayısını değerlendirmek için her bir kuyuyu mikroskop altında inceleyin. İki mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine 30 mikrolitre şeffaf bazal membran matrisi ekleyin ve buz üzerinde tutun.Laminer akış başlığının altında, asılı HIO+ENS içeren şeffaf 3D bazal membran matris damlacığını dikkatlice çıkarmak için ince forseps kullanın. Forseps kullanarak tek tek HIO+ENS yapılarını nazikçe ayırın. İnce forseps veya geniş ağızlı bir pipet ucu kullanarak, izole edilmiş her bir HIO+ENS yapısını 30 mikrolitre şeffaf bazal membran matrisi içeren mikrosantrifüj tüplerine yerleştirin.Ardından, 30 mikrolitrelik bir damla yeniden askıya alınmış HIO+ENS'yi şeffaf bir bazal membran matrisi içinde her kuru kuyunun ortasına pipetleyin. Damlacıklar polimerize olduktan sonra, her bir oyuğa 500 mikrolitre ılık taze gün üç ila 14 HIO+ENS ortamı ekleyin ve plakayı gece boyunca inkübe edin. 15. günde, polimerize damlacığı bozmadan, her bir kuyucuğun yanından üç ila 14 gün ortamını dikkatlice aspire edin.Ortamı 500 mikrolitre sıcak gün 15 ila 28 HIO+ENS ortamıyla değiştirin. HIO-ENS kokültürü, mezenkimal yapıların gelişmesiyle önemli bir büyüme gösterdi, ince, puslu çıkıntılar oluşturdu ve 30. güne kadar epitel involasyonları etrafında hale benzeri bir sınır oluşturdu. ENCC'ler, mezenşime entegre edilmiş HIO'lara doğru göç etti ve HIO'lar içindeki GFP floresansı ile gösterildiği gibi in vitro olarak hayatta kaldı ve mezenşimden yeterli sağkalım ve farklılaşma sinyallerini doğruladı.Nakledilen HIO+ENS kokültürleri, HuCD dahil olmak üzere nöronal belirteçleri ve in vivo büyümeden sonra S100 beta gibi glial belirteçleri eksprese etti ve hem nöronlara hem de gliaya farklılaşmayı doğruladı.

innervation-of-human-intestinal-organoids

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video, önce insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri sferoidler oluşturmak için özel bir ortamda kültürleyerek, daha sonra bunları spesifik inhibitörler kullanarak motor nöronlara farklılaştırarak ve son olarak aksonları uzatmak ve motor sinir organoidleri oluşturmak için mikroakışkan bir çipte yetiştirerek motor sinir organoidleri oluşturma yöntemini göstermektedir.

Mikroakışkan Çip Kullanarak İnsan iPSC'den Türetilmiş Motor Sinir Organoidlerinin Geliştirilmesi

Bu protokol, insan pluripotent hücrelerinin bağırsak organoidlerine farklılaşmasına izin verir. Protokol, hücreleri kesin endoderm, arka bağırsak endodermi ve ardından bağırsak epiteli popülasyonuna farklılaştırarak normal insan gelişimini taklit eder. Bu, protokolü hem bağırsak gelişimini hem de hastalık modelleme uygulamalarını incelemek için uygun hale getirir.

Gelişimsel ve Hastalık Modelleme Uygulamaları için hiPSC Kaynaklı Bağırsak Organoidlerinin Üretilmesi

Burada bağırsak apikal spesifik etkileşimlerin modellenmesine izin veren iki protokol sunuyoruz. Organoid türevli bağırsak monolayerleri ve Hava-Sıvı Arayüzü (ALI) kültürleri, hem aydınlık hem de bazolateral taraflardan erişilebilen iyi ayırt edilmiş epitellerin üretilmesini kolaylaştırırken, polarite ters bağırsak organoidleri apikal yanlarını ortaya çıkarır ve yüksek verim testlerine uygundur.

Bağırsak Organoid Modellerini Kullanarak Apikal Spesifik Etkileşimleri İncelemek için Kültür Yöntemleri

Burada, insan pluripotent kök hücre kaynaklı ince bağırsak ve kolonik organoidlerin üretilmesi, sürdürülmesi ve karakterize edilmesi için ayrıntılı yöntemler açıklanmaktadır. Bu yöntemler, tekrarlanabilirliği artırmak, ölçeklenebilirliği genişletmek ve organoidlerin kaplanması ve geçirilmesi için gereken çalışma süresini azaltmak için tasarlanmıştır.

İnsan Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Bağırsak ve Kolonik Organoidlerin Üretimi, Bakımı ve Karakterizasyonu

Bu protokol, murin ince bağırsak organoidlerinin oluşturulması, tip-1 doğuştan gelen lenfoid hücrelerin murin ince bağırsak lamina propriasından izole edilmesi ve bağırsak epitel hücreleri ile tip-1 doğuştan gelen lenfoid hücreler arasındaki çift yönlü etkileşimleri incelemek için her iki hücre tipi arasında 3 boyutlu (3D) ortak kültürlerin oluşturulması için ayrıntılı talimatlar sunmaktadır.

Murin İnce Bağırsak Epitel Organoidlerinin Doğuştan Lenfoid Hücrelerle Ko-Kültürü

Biyopsi kaynaklı intestinal organoidler ve çip üzerinde organ teknolojileri, bölgeye özgü bağırsak işlevselliğini özetlemek için mikrofizyolojik bir platformda birleştirilir.

Bağırsak Bölgesine Özgü İşlevselliği Modellemek için İnsan Organoidlerini ve Çip Üzerinde Organ Teknolojisini Birleştirme

Burada, sıçan bağırsak organoidleri üretmek ve bunları birkaç aşağı akış uygulamasında kullanmak için bir protokol sunuyoruz. Sıçanlar genellikle tercih edilen bir klinik öncesi modeldir ve sağlam bağırsak organoid sistemi, in vivo çalışmalara eşlik edecek bir in vitro sistem ihtiyacını karşılar.

Sıçan Bağırsak Organoidlerinin Üretimi ve Manipülasyonu

Protokol, daha önce keşfedilmemiş bağırsak biyolojisi hakkında önemli bilgiler sağlamak için insan bağırsak organoid teknolojisini tek hücreli transkriptomik analizle birleştirir.

Tek Hücreli Transkripsiyonel Seviyede İnce Bağırsak Epitelini Anlamak için İnsan Bağırsak Organoidlerini Kullanma

Bu çalışma, ince ve kalın bağırsaklardan türetilen 2D tek katmanlı domuz organoidleri oluşturmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir. Bu tek tabakaların büyümesi, sağlam epitel bütünlüğünü gösteren artan TEER değerleri ile işaretlenir. Ek olarak, bu tek tabakalar, forskolin uygulamasını takiben Ussing odası deneylerinde fizyolojik salgı tepkileri sergiler.

Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri

İnsan beyni gelişiminin modellenmesi, nöral epitel dokusunun benzeri görülmemiş karmaşıklığı nedeniyle engellenmiştir. Burada, insan beyninin gelişiminin erken olaylarını tanımlamak ve mikrosefaliyi in vitro olarak modellemek için sağlam beyin organoidleri üretimi için bir yöntem açıklanmaktadır.

iPSC türetilmiş İnsan Beyin Organoids oluşturulması Erken Nörogelişimsel Bozuklukları Model

Keşfedin, insan bağırsak organoidlerine enterik sinir sisteminin entegrasyonunu optimize etme yöntemini. Bu teknik, kısa bağırsak sendromu için doku mühendisliği çözümleri geliştirmeye yardımcı olur.

İnsan Bağırsak Organoidlerinin İnnervasyonu

Daha fazla video keşfet