Name: Sarı Humma Sivrisineği Aedes aegyptide CRISPR-Cas9 Kullanılarak Genom Düzenleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Keşfedin Aedes aegypti sivrisineklerinde CRISPR-Cas9 ile genom düzenleme yöntemini. Genetik modifiye hatları oluşturarak vektör kontrolü ve gen fonksiyonu araştırmaları için uygulamalar geliştirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Anzalone, A. V., Koblan, L. W., Liu, D. R. Genome editing with CRISPR-Cas nucleases, base editors, transposases and prime editors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAnzalone%2C+AV+%22Nat+Biotechnol%22">Nat Biotechnol</a>. 38 (7), 824-844 (2020).</li>
<li>Garneau, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR%2FCas+bacterial+immune+system+cleaves+bacteriophage+and+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.</a> Nature. 468 (7320), 67-71 (2010).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-RNA-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Shen, H., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+double-strand+break+repairs+and+their+application+in+plant+DNA+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">DNA double-strand break repairs and their application in plant DNA integration.</a> Genes (Basel). 13 (2), 322(2022).</li>
<li>Vinauger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+host+learning+in+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of host learning in Aedes aegypti mosquitoes.</a> Curr Biol. 28 (3), 333-344.e8 (2018).</li>
<li>Li, M., Bui, M., Yang, T., Bowman, C. S., White, B. J., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+Cas9+expression+yields+highly+efficient+genome+engineering+in+a+major+worldwide+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Germline Cas9 expression yields highly efficient genome engineering in a major worldwide disease vector.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (49), E10540-E10549 (2017).</li>
<li>Chaverra-Rodriguez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+CRISPR-Cas9+ribonucleoprotein+into+arthropod+ovaries+for+heritable+germline+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein into arthropod ovaries for heritable germline gene editing.</a> Nat Commun. 9 (1), 3008(2018).</li>
<li>Rouyar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+line+for+characterizing+GABA-receptor+expression+to+study+the+neural+basis+of+olfaction+in+the+yellow-fever+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic line for characterizing GABA-receptor expression to study the neural basis of olfaction in the yellow-fever mosquito.</a> Front Physiol. 15, 1381164(2024).</li>
<li>Ang, J. X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+homology-based+DNA+repair+in+mosquitoes%3A+Impact+of+sequence+heterology+and+donor+template+source%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Considerations for homology-based DNA repair in mosquitoes: Impact of sequence heterology and donor template source.</a> PLoS Genet. 18 (2), e1010060(2022).</li>
<li>Zhang, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+precise+knockin+with+a+double+cut+HDR+donor+after+CRISPR%2FCas9-mediated+double-stranded+DNA+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient precise knockin with a double cut HDR donor after CRISPR/Cas9-mediated double-stranded DNA cleavage.</a> Genome Biol. 18 (1), 35(2017).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+advances+in+mosquito+olfaction+neurogenetics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Technological advances in mosquito olfaction neurogenetics.</a> Trends Genet. 39 (2), 154-166 (2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+sex+determination+to+suppress+mosquito+populations%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Targeting sex determination to suppress mosquito populations.</a> eLife. 12, RP90199(2024).</li>
<li>Zhan, Y., Alonso San Alberto, D., Rusch, C., Riffell, J. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+vision-guided+target+attraction+in+Aedes+aegypti+using+CRISPR%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biol%22%5BJournal%5D)">Elimination of vision-guided target attraction in Aedes aegypti using CRISPR.</a> Current Biol. 31 (18), 4180-4187.e6 (2021).</li>
<li>Greppi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+heat+seeking+is+driven+by+an+ancestral+cooling+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mosquito heat seeking is driven by an ancestral cooling receptor.</a> Science. 367 (6478), 681-684 (2020).</li>
<li>Potter, C. J., Tasic, B., Russler, E. V., Liang, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Q+system%3A+a+repressible+binary+system+for+transgene+expression%2C+lineage+tracing%2C+and+mosaic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Q system: a repressible binary system for transgene expression, lineage tracing, and mosaic analysis.</a> Cell. 141 (3), 536-548 (2010).</li>
<li>Riabinina, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+and+expanded+Q-system+reagents+for+genetic+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved and expanded Q-system reagents for genetic manipulations.</a> Nat Methods. 12 (3), 5 p following 222 219-222 (2015).</li>
<li>Labun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHOPCHOP+v3%3A+expanding+the+CRISPR+web+toolbox+beyond+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CHOPCHOP v3: expanding the CRISPR web toolbox beyond genome editing.</a> Nucleic Acids Res. 47 (W1), W171-W174 (2019).</li>
<li>Concordet, J. -P., Haeussler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPOR%3A+intuitive+guide+selection+for+CRISPR%2FCas9+genome+editing+experiments+and+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens.</a> Nucleic Acids Res. 46 (W1), W242-W245 (2018).</li>
<li>Williams, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+fitness+costs+in+transgenic+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantifying fitness costs in transgenic Aedes aegypti mosquitoes.</a> J Vis Exp. , e65136(2023).</li>
<li>Bassett, A. R., Tibbit, C., Ponting, C. P., Liu, J. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+targeted+mutagenesis+of+Drosophila+with+the+CRISPR%2FCas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Highly efficient targeted mutagenesis of Drosophila with the CRISPR/Cas9 system.</a> Cell Rep. 4 (1), 220-228 (2013).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Zhu, K. Y., Ramalho-Ortigao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+and+paratransgenesis+to+control+insect-borne+diseases%3A+current+status+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol+Int%22%5BJournal%5D)">Transgenesis and paratransgenesis to control insect-borne diseases: current status and future challenges.</a> Parasitol Int. 59 (1), 1-8 (2010).</li>
<li>Christian, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+DNA+double-strand+breaks+with+TAL+effector+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases.</a> Genetics. 186 (2), 757-761 (2010).</li>
<li>Kim, Y. G., Cha, J., Chandrasegaran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+restriction+enzymes%3A+zinc+finger+fusions+to+Fok+I+cleavage+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hybrid restriction enzymes: zinc finger fusions to Fok I cleavage domain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93 (3), 1156-1160 (1996).</li>
<li>DeGennaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((orco+mutant+mosquitoes+lose+strong+preference+for+humans+and+are+not+repelled+by+volatile+DEET%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">orco mutant mosquitoes lose strong preference for humans and are not repelled by volatile DEET.</a> Nature. 498 (7455), 487-491 (2013).</li>
<li>McMeniman, C. J., Corfas, R. A., Matthews, B. J., Ritchie, S. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+integration+of+carbon+dioxide+and+other+sensory+cues+drives+mosquito+attraction+to+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal integration of carbon dioxide and other sensory cues drives mosquito attraction to humans.</a> Cell. 156 (5), 1060-1071 (2014).</li>
<li>Lobo, N. F., Clayton, J. R., Fraser, M. J., Kafatos, F. C., Collins, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+efficiency+germ-line+transformation+of+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High efficiency germ-line transformation of mosquitoes.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1312-1317 (2006).</li>
<li>Kistler, K. E., Vosshall, L. B., Matthews, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+with+CRISPR-Cas9+in+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Genome engineering with CRISPR-Cas9 in the mosquito Aedes aegypti.</a> Cell Rep. 11 (1), 51-60 (2015).</li>
<li>Handler, A. M., Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2nd+Transformation+of+the+Caribbean+fruit+fly%2C+Anastrephasuspensa%2C+with+a+piggyBac+vector+marked+with+polyubiquitin-regulated+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">2nd Transformation of the Caribbean fruit fly, Anastrephasuspensa, with a piggyBac vector marked with polyubiquitin-regulated GFP.</a> Insect Biochem Mol Biol. 31 (2), 199-205 (2001).</li>
<li>Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrell%2C+RA+%222nd+Mosquito+embryo+microinjection+under+halocarbon+oil+or+in+aqueous+solution%22">2nd Mosquito embryo microinjection under halocarbon oil or in aqueous solution</a>. 2024 (7), Cold Spring Harb Protoc. (2024).</li>
<li>Sun, R., Raban, R., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+mutant+strains+with+transgenic+Cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating mutant strains with transgenic Cas9.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 671-678 (2023).</li>
<li>Giraldo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+neurogenetic+toolkit+to+decode+olfaction+in+the+African+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An expanded neurogenetic toolkit to decode olfaction in the African malaria mosquito Anopheles gambiae.</a> Cell Rep Methods. 4 (2), 100714(2024).</li>
<li>Liu, G., Lin, Q., Jin, S., Gao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR-Cas+toolbox+and+gene+editing+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">The CRISPR-Cas toolbox and gene editing technologies.</a> Mol Cell. 82 (2), 333-347 (2022).</li>
<li>Chu, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+efficiency+of+homology-directed+repair+for+CRISPR-Cas9-induced+precise+gene+editing+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).</li>
<li>Laursen, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humidity+sensors+that+alert+mosquitoes+to+nearby+hosts+and+egg-laying+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Humidity sensors that alert mosquitoes to nearby hosts and egg-laying sites.</a> Neuron. 111 (6), 874-887.e8 (2023).</li>
<li>Weng, S. -C., Antoshechkin, I., Marois, E., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+sex+separation+by+exploiting+differential+alternative+splicing+of+a+dominant+marker+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Efficient sex separation by exploiting differential alternative splicing of a dominant marker in Aedes aegypti.</a> PLoS Genet. 19 (11), e1011065(2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+confinable+gene+drive+system+in+the+human+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Development of a confinable gene drive system in the human disease vector.</a> eLife. 9, e51701(2020).</li>
<li>Dalla Benetta, E., et al. Engineered Antiviral Sensor Targets Infected Mosquitoes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDalla+Benetta%2C+E+%22The+CRISPR+journal%22">The CRISPR journal</a>. 6 (6), 543-556 (2023).</li>
<li>Li, H. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-Type+lectins+link+immunological+and+reproductive+processes+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">C-Type lectins link immunological and reproductive processes in Aedes aegypti.</a> iScience. 23 (9), 101486(2020).</li>
<li>van Oers, M. M., Vlak, J. M., Voorma, H. O., Thomas, A. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+3%27+untranslated+region+of+baculovirus+p10+mRNA+in+high-level+expression+of+foreign+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Role of the 3' untranslated region of baculovirus p10 mRNA in high-level expression of foreign genes.</a> J Gen Virol. 80 (Pt 8), 2253-2262 (1999).</li>
<li>Salem, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+SV40+polyA+on+gene+expression+of+baculovirus+expression+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The influence of SV40 polyA on gene expression of baculovirus expression vector systems.</a> PloS One. 10 (12), e0145019(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Cas9 reaksiyon tamponu</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CB01</td><td></td></tr><tr><td>Benchling yazılımı</td><td>Benchling</td><td>N/A</td><td>www.benchling.com</td></tr><tr><td>Cas9 seyreltme tamponu</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CB03</td><td></td></tr><tr><td>Cas9 proteini</td><td>PNA Biyo&nbsp;</td><td>CP01-50</td><td></td></tr><tr><td>DH5 ve alfa; E. coli Yetkili Hücreler</td><td>New England Biolabs</td><td>C2987</td><td></td></tr><tr><td>Çift taraflı yapışkan bant</td><td>Scotch Permanent</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila şişeleri</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>32-109</td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıtları&nbsp;</td><td>GE Sağlık Yaşam Bilimleri&nbsp;</td><td>1450-042</td><td></td></tr><tr><td>Balık yemi&nbsp;</td><td>Tetra</td><td>B00025Z6YI</td><td>Japon balığı gevreği&nbsp;</td></tr><tr><td>Flugs</td><td>Genesee Bilimsel&nbsp;</td><td>AS273</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskop</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>&nbsp; M165 FC</td><td></td></tr><tr><td>Gen fragmanı</td><td>Entegre DNA Teknolojileri</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>gRNA</td><td>Synthego</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Halokarbon yağı 700&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon mikroskobu</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>DM2000</td><td></td></tr><tr><td>JM109 &nbsp;E. coli Yetkin Hücreler&nbsp;</td><td>Zymo Araştırma</td><td>T3005</td><td></td></tr><tr><td>Mikroenjektör</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>FemtoJet 4x&nbsp;</td></tr><tr><td>Femtouçları doldurmak için mikro yükleyici uçları&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>E5242956003</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>TransferMan 4r&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikropipet Çektirmeler&nbsp;</td><td>Sutter Enstrümanı&nbsp;</td><td>P-2000</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Kapak Camı&nbsp;</td><td>Balıkçı markası&nbsp;</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop lamı</td><td>Eisco</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>Fare kanı (beslenme için kullanılan canlı fareler)</td><td>University of California</td><td>IACUC, Hayvan Kullanım Protokolü #S17187</td><td>Sivrisinek kanı beslemesi için kullanılır; Detaylar hayvan etik protokollerine uygundur</td></tr><tr><td>NEB Q5 Yüksek Sadakatli DNA polimeraz&nbsp;</td><td>New England Biolabs</td><td>M0491S</td><td></td></tr><tr><td>PCR Saflaştırma Kiti</td><td>Qiagen</td><td>28004</td><td></td></tr><tr><td>Plazmid Miniprep Kiti&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>D4036</td><td></td></tr><tr><td>Kuvars filament&nbsp;</td><td>Sutter Instruments</td><td>QF100-70-10</td><td></td></tr><tr><td>Transkripsiyon Temizleme Kiti</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM1908</td><td></td></tr><tr><td>Ultra saf su&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10977-023</td><td></td></tr></tbody></table>

sarı humma sivrisineği aedes aegypti'de crispr-cas9 kullanılarak genom düzenleme

Genome Editing in the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti using CRISPR-Cas9

HDR homoloji rekombinasyonu için gRNA aracılı gen hedeflemesinin tasarımı ve doğrulanması İstenen genin doğru bir şekilde hedeflendiğinden emin olmak için, birkaç gRNA seçmenizi ve HDR aracılı homolog rekombinasyon için 5' ve 3' homoloji kollarını kesme bölgesine yakın konumlandırmanızı öneririz (Şekil 1A). Örneğin, ilgilenilen genin başlangıç kodonunun her iki tarafını hedeflemek için iki gRNA tasarladık ve QF2-Hsp70-OpIE2-ECFP-SV40 kaset...

Sarı Humma Sivrisineği Aedes aegypti'de CRISPR-Cas9 Kullanılarak Genom Düzenleme

The emergence of the clustered, regularly interspersed, short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9 technology has revolutionized the genetic engineering ...

genome-editing-yellow-fever-mosquito-aedes-aegypti-using-crispr

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Bu videoda, embriyo mikroenjeksiyon tekniği ile Anopheles gambiae sivrisineğinin embriyosuna gen sürücü yapısının verilmesini gösteriyoruz. Bu prosedür, homolog rekombinasyon yoluyla iletilen DNA yapısının, dönüştürülmüş sivrisinek popülasyonu oluşturmak için germ hattı hücrelerine entegrasyonuna izin verir.

Sivrisinek Embriyo Mikroenjeksiyonu: Germ Hattı Mutasyonları Oluşturmak için Anopheles Gambiae'nin Embriyo Sarısına Ekzojen DNA Verme Tekniği

Biz glmSoluşturmak için bir yöntem tarif- Plasmodium falciparum CRISPR/Cas9 genom düzenleme kullanarak koşullu devirme mutantlar dayalı.

CRISPR/Cas9 gen düzenleme yapmak koşullu mutantlar, insan sıtma parazit P. falciparum için

Bu protokol, CRISPR/Cas9 gen düzenleme araçlarıyla çalışmak üzere optimize edilmiş Culex quinquefasciatus embriyoları için mikroenjeksiyon prosedürlerini açıklar. Bu teknik, bu yetersiz hastalık vektörde genetik teknolojiler oluşturmak için kullanılabilecek bölgeye özgü, kalıtsal, germline mutasyonlarını verimli bir şekilde üretebilir.

Culex quinquefasciatus'ta Verimli Bölgeye Özgü Mutagenezi için Embriyo Mikroenjeksiyon Teknikleri

CRISPR/Cas9, model olmayan organizmalarda gen fonksiyonunu karakterize etmek için giderek daha fazla kullanılmaktadır. Bu protokol, enjeksiyon karışımlarının hazırlanmasından sivrisinek embriyolarının elde ve enjektesine kadar Culex pipiens'innakavt hatlarının nasıl oluşturulacağını ve enjekte edilen sivrisineklerin ve bunların istenen mutasyonlar için soylarının nasıl arka, çapraz ve taramadan geçeceğini açıklar.

CRISPR/Cas9 Kullanarak Boş Mutasyonlar Oluşturmak için Culex Sivrisineklerinin Embriyolarının Hazırlanması ve EnjekteSi

Bu protokol, CRISPR/Cas9 hedefli mutajenizin kum sineklerindeki adımlarını detaylandırıyor: embriyo toplama, enjeksiyon, böcek yetiştirme ve tanımlamanın yanı sıra ilgi çekici mutasyonların seçimi.

CRISPR/Cas9 Mutagenesis için Kum Sineği (Phlebotomus papatasi) Embriyo Mikroenjeksiyonu

Burada CRISPR/Cas9 genom düzenlemesi tarafından oluşturulan Helicoverpa armigera (Hübner) embriyo mikroenjeksiyonu ve nakavt mutant tanımlama protokolü sunulmaktadır. Mutant böcekler, in vivo'daki farklı genler arasında gen fonksiyonu ve etkileşiminin daha fazla araştırılmasına olanak tanır.

CRISPR/Cas9 Genom Düzenlemeli Helicoverpa Armigera'nın (Hübner) Embriyo Mikroenjeksiyonu ve Nakavt Mutant Tanımlaması

Protokol, φC31 sistemini kullanarak Anopheles sıtma sivrisineklerinin genomunda bölgeye yönelik değişikliklerin nasıl eldeılacağını açıklar. Açıklanan değişiklikler, attP taşıyan yerleştirme hatlarının genomunda transgenik kasetlerin hem entegrasyonunu hem de değişimini içerir.

Sıtma Anopheles Vektörlerinde SiteYe Yönelik φC31 Aracılı Entegrasyon ve Kaset Değişimi

Bu makalede, CRISPR/Cas9 tarafından indüklenen indellerin hızlı tanımlanması ve sivrisinek Aedes aegypti'deki mutant çizgilerinin yüksek çözünürlüklü eriyik analizi kullanılarak seçilmesi için bir protokol ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Sivrisinek Aedes aegypti'de Yüksek Çözünürlüklü Eriyik Analizi Kullanarak CRISPR/Cas9 Mutagenesis'i Takip Eden Indel Tespiti

Bu yazıda, Oryantal meyve sineği Bactrocera dorsalis'in CRISPR / Cas9 mutagenezi için adım adım protokoller sunulmaktadır. Bu standartlaştırılmış protokol tarafından sağlanan ayrıntılı adımlar, B. dorsalis'teki fonksiyonel gen çalışmaları için mutant sineklerin üretilmesi için yararlı bir rehber görevi görecektir.

CRISPR / Cas9 Oryantal Meyve Sineği Bactrocera dorsalis'in mutagenezi için protokoller

Mevcut protokol, Aedes aegypti sivrisineklerinde doğurganlık, kanat boyutu, doğurganlık, cinsiyet oranı, canlılık, gelişme süreleri, erkek katkısı ve yetişkin ömrü dahil olmak üzere ortak yaşam parametresi verilerinin nasıl ölçüleceğini açıklamaktadır. Bu ölçümler, transgenik sivrisineklerin uygunluğunu değerlendirmek için kullanılabilir.

Transgenik Aedes aegypti Sivrisineklerinde Kondisyon Maliyetlerinin Ölçülmesi

Keşfedin Aedes aegypti sivrisineklerinde CRISPR-Cas9 ile genom düzenleme yöntemini. Genetik modifiye hatları oluşturarak vektör kontrolü ve gen fonksiyonu araştırmaları için uygulamalar geliştirin.

Sarı Humma Sivrisineği Aedes aegypti'de CRISPR-Cas9 Kullanılarak Genom Düzenleme

Daha fazla video keşfet