28 Şubat 2025
Epilepside ani beklenmedik ölüm mekanizmaları (SUDEP) tam olarak anlaşılamamıştır ve mevcut modellerden tercüme edilmesi zordur. Transgenik tavşanlar bu mekanizmalar hakkında fikir verebilir. Ölümle sonuçlanabilecek ciddi olayları değerlendirmek için transgenik tavşan kitlerinde uzun süreli, sürekli elektroensefalografi ve elektrokardiyografi kayıtları için bir yöntem tarif ediyoruz.
[Öğretim Görevlisi] Başlamak için, anestezi kitini rektal termometre ile kontrol edilen bir kızılötesi ısıtma yastığına sırtüstü yatırın. Burnu ve ağzı, 0,5 litrelik bir torba ile geri solunmayan bir Jackson-Reese devresine döner bir konektör aracılığıyla bağlanan özel bir 3D baskılı yüz maskesine yerleştirin. Kulak veya pençe üzerinde bir nabız oksimetresi kullanarak anestezi derinliğini izleyin. Kitin her iki tarafına yapışkanlı cerrahi havlular yerleştirin ve üzerini büyük bir cerrahi örtü ile örtün. Karnı ve göğsü ortaya çıkarmak için örtüde uygun büyüklükte bir delik açın. İmplantı cerrahi alana açın ve implant ankraj deliklerinin her birine emilmeyen ankraj dikişleri yerleştirin ve her bir sütür üzerinde beş ila altı santimetrelik bir kuyruk bırakın. İmplantı, yerleştirmeye hazır olana kadar ılık steril tuzlu su dolu bir kaseye yerleştirin. Bir neşter kullanarak, linea alba boyunca deriden üç santimetrelik bir kesi yapın. Ve periton boşluğunu açmak için kasın içinden dikkatlice kesin. Daha sonra implantı karın boşluğunun kraniyal kısmına yerleştirin ve insizyonun soluna yerleştirin. Pozitif elektrokardiyogramı veya EKG'yi ve EEG telini periton boşluğundan ve insizyonun yaklaşık üç ila dört santimetre solundaki deriden tünellemek için bir trokar kullanın. Negatif EKG telini insizyonun iki santimetre sağına tünelleyin ve implantın boşluk içinde rahatça oturmasını sağlayın. Şimdi, implantı ankraj dikişleriyle periton boşluğunun ventral duvarına sabitleyin ve bağırsağın sıkışmadığından emin olun. Ve karın duvarını kesintili bir şekilde emilebilir bir sütürle kapatın. Daha sonra cilt kesisini emilmeyen bir dikişle kesintili bir şekilde kapatın. Negatif EKG'yi tünelleyin, ilk kaburga seviyesinde sağ üst göğse deri altından gider. Yaklaşık 10 santimetre teli gevşek bir şekilde sarmak için deri altı bir cebi kör bir şekilde inceleyin. Fazla teli kesin ve açıkta kalan ucu emilmeyen bir sütür ile yalıtılmış tele bağladıktan sonra bir halka oluşturun. Emilemeyen iki sütürle ilmeği kasın üzerine sabitleyin. Ardından pozitif EKG kablosunu sol alt kaburgaya tünelleyin ve kaslara sabitlemek ve insizyonu kapatmak için gösterilen adımları tekrarlayın. Açıkta kalan EEG tellerini steril alüminyum folyo ile sarın. Steril olmayan bir asistanın steril örtüyü ve bacak bağını çıkarmasına izin verin. Yüz maskesi ile devre arasındaki döner konektörü döndürerek yüz maskesinin güvenli bir şekilde yerinde kalmasını sağlarken kiti yüzüstü konuma getirin. Sürekli anestezik izlemeyi sürdürmek için nabız oksimetresini ve Doppler monitörünü gerektiği gibi ayarlayın. Ardından kalbin üzerine bir Doppler probu yerleştirin. Asistan telleri içeren alüminyum folyo paketini tutarken sol tarafın altına steril bir yapışkan havlu yerleştirin. Kabloları alüminyum paketten nazikçe çıkarın ve steril alana yerleştirin ve steril havlu ile örtüleme işlemini tamamlayın. Kafatasını ortaya çıkarmak için kafa derisinin orta hattı boyunca üç santimetrelik bir kesi yapın. EEG kablolarını sol taraftan kafatasına deri altından tünellemek için bir trokar kullanın. Daha sonra bir neşter kullanarak açıkta kalan parietal kemiklerden periosteuumu temizleyin ve kazıyın. Steril bir ultrason kapağına el tipi bir matkap yerleştirin ve bir milimetrelik matkap çapağını matkabın içine yönlendirin. Daha sonra, lambdanın yaklaşık 0,5 santimetre önünde ve sagital sütürün 0,5 santimetre yanında parietal kemiklere bilateral çapak delikleri açın. Çapak deliğine bir vida yerleştirmek için ince forseps kullanın. Ardından vidayı kafatasının yaklaşık yarısına kadar sokmak için bir tornavida kullanın. Şimdi, yaklaşık 10 santimetre teli gevşek bir şekilde sarmak için boynun arkası boyunca deri altı bir cebi kör bir şekilde inceleyin. Fazla teli kesin ve teli gererek yalıtımı uçtan sıyırın. Açıkta kalan telin ucunda bir halka oluşturmak için, küçük bir ilmek bırakarak bir düğüm atın. Halkayı vidanın üzerine yerleştirin ve telin vida ile temas ettiğinden emin olarak vidayı kafatasına sıkın. Topraklama kablosunu sola ve kayıt kablosunu sağa yerleştirin. Şimdi, diş akrilik kullanarak vidaları ve telleri kafatasına sabitleyin. Son olarak, ağrıyı gidermek için her kesi bölgesine deri altına bupivakain enjekte edin. Ve her kesiği az miktarda cilt tutkalı ile örtün. Tüm kablolar yerleştirildikten sonra, sinyal doğruluğunu doğrulamak için analiz yazılımı kullanarak telemetri sinyallerini değerlendirin. Kit yatıştırılırken EEG sinyallerinin düşük genlikte görünmesini bekleyin. İmplant cerrahisi 15 tavşan kiti üzerinde başarıyla gerçekleştirildi ve 12'si deneysel son noktaya kadar hayatta kaldı. Kitleri ev kafeslerine geri gönderdikten hemen sonra telemetri kayıtları, kitler anesteziden geri kazanıldıkça iyileşen düşük genlikli EEG sinyalleri gösterdi. EKG sinyal morfolojisi, yara izi ve tel stabilizasyonu nedeniyle ameliyattan sonraki ilk birkaç gün içinde biraz değişti. Ancak genel olarak, sinyal kalitesi zaman içinde sağlam kaldı. İmplante edilmiş telemetri sistemi, elektroensefalografi, sıcaklık, hızlanma, elektrokardiyografi ve sinyal kalitesi dahil olmak üzere çoklu biyo potansiyellerin kaydedilmesine izin verdi.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu çalışma, transgenik tavşan yavruları kullanarak epilepside ani beklenmedik ölümün (SUDEP) mekanizmalarını incelemektedir. Ölüme yol açabilecek ciddi olayları değerlendirmek amacıyla, uzun süreli ve sürekli elektroensefalografi (EEG) ve elektrokardiyografi (EKG) kayıtları için bir yöntem açıklanmaktadır.
Neonatal transgenik tavşan yavrularında eş zamanlı EEG ve ECG telemetrisi, SUDEP mekanizmalarıyla ilgili nöral ve kardiyak elektrofizyolojinin yüksek sadakatli, boylamsal izlenmesine olanak tanır. Bu yaklaşım, kemirgen modellerden ziyade insanlarla daha yakın fizyolojik uyuma sahip bir sistemde hastalıkla ilişkili aritmileri ve nöbet olaylarını yakalayarak preklinik modellemedeki kritik bir boşluğu doldurmaktadır. Yöntem, epilepsi ve kardiyak disfonksiyona neden olan iyon kanalopatileri için hedef doğrulamada öngörü güvenini ve mekanistik risk azaltmayı destekler.
Telemetri destekli bu tavşan modeli, epilepsi ve kardiyak aritmi araştırmaları için erken keşif ile preklinik doğrulama arasında köprü kurarak, aday bileşiklerin belirlenmesini ve mekanistik çalışmaları desteklemektedir.