Calendula officinalis L.'nin büyümesi ve çiçek gelişimi sırasında flavonoid içeriği.

Çalışmamız, toplam flavonoidi ölçmek için erişilebilir ve güvenilir bir kolorimetrik yöntem kullanmakta, fitokimya laboratuvarlarında veri analizini kolaylaştırmakta ve terapötik özelliklere sahip bileşiklerin araştırılmasını desteklemektedir.

Calendula'daki flavonoid içeriği, en uygun hasat zamanını belirlemek ve tıbbi ve ticari potansiyelini en üst düzeye çıkarmak için çiçek gelişimi sırasında incelenir.

Protokolümüz, küçük numune miktarları kullanarak flavanoidlerin miktar tayinini sağlayan, solvent kullanımını optimize eden hassas ve verimli bir mikro tekniktir ve bitki materyali ile analiz sınırlıdır.

[Öğretim Görevlisi] Başlamak için, bitki materyalini 48 saat boyunca 40 santigrat derecede cebri hava fırınında kurutun. Kuruduktan sonra fırından çıkarın, kurumuş malzemeyi kağıt zarflara aktarın ve oda sıcaklığında karanlıkta saklayın. Öğütmeye hazırlamak için bitki materyalini sıvı nitrojen kullanarak dondurun. Daha sonra donmuş malzemeyi porselen bir harçta homojen bir dokuya ulaşana kadar öğütün. Her numuneden 25 miligram toz haline getirilmiş malzemeyi tartarak numuneleri hazırlayın. Tartılan malzemeye 500 mikrolitre% 80 metanol ekleyin. Flavonoidleri çıkarmak için, karışımı bir saat boyunca 70 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, karışımı 13 dakika boyunca 731 g'da santrifüjleyin. Şimdi, elde edilen ekstraktın 150 mikrolitresini alarak ve üzerine 37 mikrolitre% 80 metanol ekleyerek alikotları hazırlayın. Ekstraktın 50 mikrolitresini alın ve 100 mikrolitre bir molar potasyum asetat ve 100 mikrolitre% 10 alüminyum klorür ekleyin. Damıtılmış su kullanarak karışımın toplam hacmini beş mililitreye çıkararak çözeltiyi tamamlayın. Bir spektrofotometrenin absorbans dalga boyunu 415 nanometreye ayarlayın ve çözeltinin absorbansını ölçün. Mililitre başına 50, 100, 175 ve 350 miligram arasında değişen quercetin çözeltileri hazırlayarak kalibrasyon eğrisini oluşturun. Kalibrasyon numunelerini hazırlamak için, kalibrasyon eğrisinin son noktasından 500 mikrolitre quercetin solüsyonunu pipetleyin ve solüsyona 100 mikrolitre% 10 alüminyum klorür ve 100 mikrolitre bir molar potasyum asetat ekleyin. Ardından 1,5 mililitre %80 metanol ve 2,8 mililitre damıtılmış su ekleyin. Kalibrasyon çözeltilerini oda sıcaklığında 40 dakika dinlendirin. Spektrofotometrenin absorbans dalga boyunu 415 nanometreye ayarlayın ve kalibrasyon eğrisini oluşturmak için kalibrasyon numunelerinin absorbansını ölçün. Son olarak, kuru materyalin gramı başına flavonoid konsantrasyonunu ve flavonoid içeriğini hesaplayın. Bu tablo, nergis çiçek başlarında bitki başına flavonoid konsantrasyonunun ve flavonoid üretiminin, ilk tomurcuk oluşumundan tam çiçeklenme ve meyve gelişimine kadar nasıl değiştiğini özetlemektedir. Sekizinci ve 11. aşamalar arasında, tamamen açılmış çiçek başlarına ayrılmış çanak yapraklı tomurcuklara karşılık gelen daha yüksek toplam flavonoid konsantrasyonu seviyeleri gözlendi. Birleşik çanak yapraklı tomurcuklar gibi daha önceki aşamalarda ve yaşlanan çiçek başları gibi daha sonraki aşamalarda, flavonoid konsantrasyonları tamamen açılmış çiçek başlarına kıyasla %22 ila %27 daha düşüktü. Bu şekil, çiçek gelişim aşamaları boyunca nergis çiçek başları, ligulat çiçekler ve boru şeklindeki çiçeklerin kuru maddelerindeki toplam flavonoid konsantrasyonunun ölçümünü göstermektedir. Sonuçlar, farklı çiçek yapıları ve aşamaları arasındaki flavonoid konsantrasyonunun değişimini anlamanın, nergis çiçek başlarındaki flavonoid içeriğini en üst düzeye çıkarmak için en uygun hasat zamanını belirlemek için yararlı olduğunu göstermektedir.