Name: Fare Beyin-Omurilik Örneklerinin Ekstraksiyonu ve Doku Temizleme Hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Öğrenin fare beyin ve omurilik örneklerinin ekstraksiyonu ve doku temizleme yöntemini. Floresan sinyalleri koruyarak sinirbilim araştırmalarında hücresel haritalama ve görüntüleme kalitesini artırın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
<li>Tainaka, K., Kuno, A., Kubota, S. I., Murakami, T., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+principles+in+tissue+clearing+and+staining+protocols+for+whole-body+cell+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical principles in tissue clearing and staining protocols for whole-body cell profiling.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 32, 713-741 (2016).</li>
<li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution%3A+Toward+organism-level+systems+biology+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: Toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chem Biol. 23 (1), 137-157 (2016).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+nociceptor+neurons+in+the+spleen+promotes+germinal+center+responses+and+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Innervation of nociceptor neurons in the spleen promotes germinal center responses and humoral immunity.</a> Cell. 187 (12), 2935-2951.e19 (2024).</li>
<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+innervations+modulate+the+lung+innate+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic innervations modulate the lung innate immune responses.</a> Sci Adv. 6 (20), eaay1497(2020).</li>
<li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDISCO%3A+Advanced+solvent-based+clearing+method+for+imaging+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">FDISCO: Advanced solvent-based clearing method for imaging whole organs.</a> Sci Adv. 5 (1), eaau8355(2019).</li>
<li>Bagnoli, S., Terzibasi Tozzini, E., Cellerino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-Brain+clearing+and+immunofluorescence+in+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Whole-Brain clearing and immunofluorescence in Nothobranchius furzeri.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 698-704 (2023).</li>
<li>Lu, T., Shinozaki, M., Nagoshi, N., Nakamura, M., Okano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+imaging+of+supraspinal+inputs+to+the+thoracic+and+lumbar+spinal+cord+mapped+by+retrograde+tracing+and+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">3D imaging of supraspinal inputs to the thoracic and lumbar spinal cord mapped by retrograde tracing and light-sheet microscopy.</a> J Neurochem. 162 (4), 352-370 (2022).</li>
<li>Saritas, T., Puelles, V. G., Su, X. T., Ellison, D. H., Kramann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+clearing+and+imaging+of+immunolabeled+kidney+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optical clearing and imaging of immunolabeled kidney tissue.</a> J Vis Exp. (149), e60002(2019).</li>
<li>Song, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+mapping+of+single+neurons+by+calibrated+3D+reconstruction+of+brain+slices+reveals+topographic+projection+in+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Precise mapping of single neurons by calibrated 3D reconstruction of brain slices reveals topographic projection in mouse visual cortex.</a> Cell Rep. 31 (8), 107682(2020).</li>
<li>Fournel, R., Veruki, M. L., Hartveit, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+reconstruction+and+quantitative+morphometric+analysis+of+bipolar+cells+in+live+rat+retinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Digital reconstruction and quantitative morphometric analysis of bipolar cells in live rat retinal slices.</a> J Comp Neurol. 530 (10), 1700-1728 (2022).</li>
<li>Lin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-specific+and+projection-specific+brain-wide+reconstruction+of+single+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell-type-specific and projection-specific brain-wide reconstruction of single neurons.</a> Nat Methods. 15 (12), 1033-1036 (2018).</li>
<li>Peng, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+histological+assessment+of+prostate+specimens+in+the+three-dimensional+space+by+hydrophilic+tissue+clearing+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Rapid histological assessment of prostate specimens in the three-dimensional space by hydrophilic tissue clearing and confocal microscopy.</a> J Histochem Cytochem. 70 (8), 597-608 (2022).</li>
<li>Singhal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+histomorphometric+changes+in+tissue+architecture+in+relation+to+alteration+in+fixation+protocol+-+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Diagn+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of histomorphometric changes in tissue architecture in relation to alteration in fixation protocol - An in vitro study.</a> J Clin Diagn Res. 10 (8), ZC28-ZC32 (2016).</li>
<li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+landscape+for+tissue+clearing+based+on+hydrophilic+reagents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Chemical landscape for tissue clearing based on hydrophilic reagents.</a> Cell Rep. 24 (8), 2196-2210.e9 (2018).</li>
<li>Lee, S. H., Son, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+wave%2C+late-stage+neuroinflammation+in+cleared+brains+of+aged+5xFAD+Alzheimer%27s+mice+detected+by+macrolaser+light+sheet+microscopy+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Second wave, late-stage neuroinflammation in cleared brains of aged 5xFAD Alzheimer's mice detected by macrolaser light sheet microscopy imaging.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 242317058(2023).</li>
<li>Zhao, J., Lai, H. M., Qi, Y., He, D., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+tissue+clearing+and+the+path+forward+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Current status of tissue clearing and the path forward in neuroscience.</a> ACS Chem Neurosci. 12 (1), 5-29 (2021).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385 (6713), eadm6869(2024).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385, eadm6869(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 ml şırınga</td><td>Shandong Weigao Grubu Tıbbi Polimer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>502 tutkal</td><td>Deli Grubu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD insülin şırıngası</td><td>Becton, Dickinson ve&nbsp; Şirket</td><td>328421</td><td></td></tr><tr><td>Bükme dişli diseksiyon forseps</td><td>Jinzhong</td><td>JD1050</td><td></td></tr><tr><td>Dairesel çelik kelepçe</td><td>Weili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce makas</td><td>Jinzhong</td><td>y00030</td><td></td></tr><tr><td>Hemostatik forseps diş ile bükülmüş</td><td>Jinzhong</td><td>J31020</td><td></td></tr><tr><td>Dişli düz hemostatik forseps</td><td>Jinzhong</td><td>J31010</td><td></td></tr><tr><td>İnfüzyon iğnesi 0.7mm</td><td>Nazik Grup</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Işık kutusu ölçek hattı</td><td>Nuohai Yaşam Bilimleri</td><td>NH210901</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon düz forseps</td><td>Jinzhong</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>NobeliumSoftware</td><td>Nuohai Yaşam Bilimleri</td><td>Tarama yazılımı</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehit</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik pompalar</td><td>Nuohai Yaşam Bilimleri</td><td>NH1000</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik pompa kafası</td><td>Nuohai Yaşam Bilimleri</td><td>NH-15</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum heparin</td><td>Shanghai Pharma</td><td>H31022051</td><td></td></tr><tr><td>STOK Tg (Thy1-EGFP) MJrs/J suş fareleri</td><td>Jackson Laboratuvar</td><td>007788</td><td></td></tr><tr><td>Düz dişli diseksiyon forseps</td><td>Jinzhong</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>Doku temizleme Kiti (hidrofilik)</td><td>Nuohai Yaşam Bilimleri</td><td>NH-CR-210701</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü tedavi edici 100mm x 20mm</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>Doku makası</td><td>Jinzhong</td><td>J21040</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum pentobarbital</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Venüs makası</td><td>Jinzhong</td><td>YBC010</td><td></td></tr></tbody></table>

fare beyin-omurilik Örneklerinin ekstraksiyonu ve doku temizleme hazırlanması

Extraction and Tissue Clearing Preparation of Mouse Brain-Spinal Cord Samples

Bu protokol, STOCK Tg (Thy1-EGFP) MJrs/J suşu erkek farelerde omurilik ile bağlantılı tüm beyni başarıyla izole eder. Ayrıca, floresan sinyallerin tam olarak korunmasını ve yakalanmasını sağlayarak numuneleri şeffaf hale getirerek orijinal floresanın bütünlüğünü koruyan net ve ayrıntılı görüntüler sağlar.
Şekil 1, sağlam bir beyin-omuriliği gösterir ve bu protokolde belirtilen diseksiyon adımlarının...

Fare Beyin-Omurilik Örneklerinin Ekstraksiyonu ve Doku Temizleme Hazırlanması

Neuroscience research focused on the central nervous system necessitates a thorough understanding of various factors, including cell distribution, ...

extraction-tissue-clearing-preparation-mouse-brain-spinal-cord

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz beyin bölümlerinin kesit alma fareler, kaldırma ve kesit beynin yanı sıra immunoperoksidaz boyama, reçine gömme ve ultra ince transcardiac perfüzyon için bir protokol tanımlamaktadır. Bu prosedürlerin tamamlanmasının ardından, ile immunohistokimyasal malzeme transmisyon elektron mikroskobu ile incelenmesi için hazırdır.

Fare Beyin Dokusu Immunoelectron Mikroskopi için hazırlanması

Ayrık fare beyin bölgelerinin RNA ekspresyon profillemesi, hassas ve tekrarlanabilir bir doku toplama stratejisi gerektirir. Burada, hem koronal beyin kesitlenmesi hem de doku orajörü yardımıyla mikrodissection kullanan bir protokol açıklanmaktadır. Elde edilen örneklerden sağlanan toplam RNA'nın verimi ve kalitesi, özetlenen yöntemin kullanışlılığını doğrulamaktadır.

Toplam RNA İzolasyonu ve Alt Nesil Sıralama ve Kaynak gösterilmeden kullanılamaz Ayrık Fare Beyin Bölgeler Mikrodisseksiyon Sigara Lazer Yakalama Mikroskopi Yaklaşım

Fare beyin korteksi translationally etkin, sağlam synaptoneurosomes (SNS) hazırlamak için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, aktif SNS hızlı hazırlanması için izin veren bir süreksiz Percoll sakaroz yoğunluk gradiyenti kullanır.

Süreksiz Percoll Sakkaroz Yoğunluk Gradient kullanarak Fare Cortex Synaptoneurosomes hazırlanması

Tüm fare organların Multiphoton mikroskobu optik görüntüleme öncesi organı temizleyerek mümkün değil, tüm protokolleri floresan proteinlerin floresan sinyal korumak. Etanol bazlı dehidratasyon ve benzil alkol ile optik temizleme yöntemi: benzil benzoat takas, biz bütün fare beyin YFP ifade yüksek çözünürlüklü multiphoton görüntüleri göstermek.

YFP ifade Temizlendi Fare Beyin Multiphoton Mikroskopi

Bu videoda, aşağı akış analizleri için donmuş fare beyin dokusu kesitlerinin hazırlanmasına yönelik ayrıntılı bir adım adım protokol gösterilmektedir.

Aşağı akış analizi için bir fare beyninin işlenmesi

Kaynak: Pekarek, B. T., et. al., CLARITY Doku Temizleme ile Sağlam Nöronal Dendritlerin Görüntülenmesi ve Miktarının Belirlenmesi. J. Vis. Uzm. (2021)Bu videoda, konfokal mikroskopi ve 3D rekonstrüksiyon tekniklerini kullanarak dendritik direkleri, omurga morfolojisini ve nöronal dağılımı incelemek için temizlenmiş bir fare beyninin hazırlanmasını, görüntülenmesini ve analizini gösteriyoruz.

Temizlenmiş Bir Fare Beyninde Sağlam Dendritik Arbors ve Omurga Morfolojisinin Konfokal Mikroskopi Görüntülemesi

Bu yazıda yüksek çözünürlüklü, floresan etiketli fare beyinleri ince beyin anatomisi ile, yeniden tam deneysel prosedürü açıklar. Açıklanan protokol numune hazırlama ve temizleme, görüntüleme, veri post-processing ve çok ölçekli görselleştirme için montaj örneği içerir.

Eşodaklı Işık Sac Mikroskobu ile Tüm Fare Brain mikron çaplı Çözünürlük Optik Tomografi

Burada, omuriliğin hidrolik ekstrüzyonunun yanı sıra aynı kemirgende spesifik dorsal kök gangliyonlarının (DRG'ler) tanımlanması ve izolasyonu için bir protokol sunuyoruz. Standart omurilik izolasyon yöntemleriyle karşılaştırıldığında, bu yöntem önemli ölçüde daha hızlıdır ve doku hasarı riskini azaltır.

Kemirgenler dorsal kök gangliyon Omurilik ve İzolasyon hidrolik eldesi

Bu makale, beyin, omurilik ve meninksler dahil olmak üzere merkezi sinir sistemi içindeki yerleşik ve periferik olarak türetilmiş bağışıklık hücrelerini incelemek için optimize edilmiş iki protokol sunmaktadır. Bu protokollerin her biri, kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında bu bölmeleri işgal eden hücrelerin işlevini ve bileşimini belirlemeye yardımcı olur.

İmmün hücrelerin Aşağı Akış Analizi için Merkezi Sinir Sistemi Dokularının ve İlişkili Meninkslerin İzole Edilmesi

Nöronal dendritik morfoloji genellikle fonksiyon alttan. Gerçekten de, nöronların gelişimini etkileyen birçok hastalık süreci morfolojik bir fenotip ile kendini gösterir. Bu protokol, bozulmamış dendritik çardakları ve ilişkili dikenlerini analiz etmek için basit ve güçlü bir yöntemi açıklar.

CLARITY Doku Temizleme Yoluyla Bozulmamış Nöronal Dendritlerin Görüntülenmesi ve Nicelleştirilmesi

Bu protokol, perfüzyon, beyin kesiti, serbest yüzen immünostaining, doku montajı ve görüntüleme dahil olmak üzere fare beyni histolojik çalışmaları için verimli ve tekrarlanabilir bir yaklaşımı açıklar.

Fare Beyinlerinin Serbest Yüzen İmmünasyon

Öğrenin fare beyin ve omurilik örneklerinin ekstraksiyonu ve doku temizleme yöntemini. Floresan sinyalleri koruyarak sinirbilim araştırmalarında hücresel haritalama ve görüntüleme kalitesini artırın.

Fare Beyin-Omurilik Örneklerinin Ekstraksiyonu ve Doku Temizleme Hazırlanması

Daha fazla video keşfet