Name: Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Keşfedin, epitel hücreleri ve fibroblastlar için PVA ve PCL nanolifli membranlar kullanarak 3D kokültür sistemi kurmayı. Bu yöntem, doku mühendisliği ve hücre etkileşimleri araştırmalarında üstün bir ortam sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Epitel ve Fibroblast hücreleri için gelişmiş iki katmanlı 3D ko-kültür sistemi

<ol><li>Kämpfer, A. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+vitro+co-culture+model+to+mimic+the+human+intestine+in+healthy+and+diseased+state%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Development of an in vitro co-culture model to mimic the human intestine in healthy and diseased state.</a> Toxicol In Vitro. 45 (Pt 1), 31-43 (2017).</li>
<li>Barrila, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organotypic+co-culture+model+of+intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+to+study+Salmonella+enterica+colonization+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22npj+Microgravity%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organotypic co-culture model of intestinal epithelial cells and macrophages to study Salmonella enterica colonization patterns.</a> npj Microgravity. 3, 10(2017).</li>
<li>Breslin, S., O'Driscoll, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture%3A+the+missing+link+in+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov+Today%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture: the missing link in drug discovery.</a> Drug Discov Today. 18 (5-6), 240-249 (2013).</li>
<li>Krause, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+3D+in+vitro+culture+model+to+study+stromal+epithelial+interactions+in+the+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel 3D in vitro culture model to study stromal epithelial interactions in the mammary gland.</a> Tissue Eng Part C: Methods. 14, 261-271 (2008).</li>
<li>Urzì, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+cultures%3A+The+bridge+between+in+vitro+and+in+vivo+models%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell cultures: The bridge between in vitro and in vivo models.</a> Int J Mol Sci. 24 (15), 12046(2023).</li>
<li>Duell, B. L., Cripps, A. W., Schembri, M. A., Ulett, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell+coculture+models+for+studying+infectious+diseases%3A+benefits+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotech%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell coculture models for studying infectious diseases: benefits and limitations.</a> J Biomed Biotech. 2011, 852419(2011).</li>
<li>Goers, L., Freemont, P., Polizzi, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-culture+systems+and+technologies%3A+taking+synthetic+biology+to+the+next+level%5BTitle%5D)+AND+%22J.+R.+Soc.+Interface%22%5BJournal%5D)">Co-culture systems and technologies: taking synthetic biology to the next level.</a> J. R. Soc. Interface. 11 (96), 20140065(2014).</li>
<li>Liu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+2D+to+3D+co-culture+systems%3A+A+review+of+co-culture+models+to+study+the+neural+cells+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">From 2D to 3D co-culture systems: A review of co-culture models to study the neural cells interaction.</a> Int J Mol Sci. 23 (21), 13116(2022).</li>
<li>Vis, M. A. M., Ito, K., Hofmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+culture+medium+on+cellular+interactions+in+in+vitro+co-culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Impact of culture medium on cellular interactions in in vitro co-culture systems.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8, 911(2020).</li>
<li>Kook, Y. M., Jeong, Y., Lee, K., Koh, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+biomimetic+cellular+scaffolds+for+co-culture+system+and+their+application%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Design of biomimetic cellular scaffolds for co-culture system and their application.</a> J Tissue Eng. 8, 2041731417724640(2017).</li>
<li>Stocco, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanofibrous+scaffolds+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Nanofibrous scaffolds for biomedical applications.</a> Nanoscale. 10 (26), 12228-12255 (2018).</li>
<li>Gao, X., Han, S., Zhang, R., Liu, G., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+electrospun+composite+nanofibers%3A+composition%2C+performance+and+applications+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mater+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Progress in electrospun composite nanofibers: composition, performance and applications for tissue engineering.</a> J Mater Chem B. 7 (45), 7075-7089 (2019).</li>
<li>Kim, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+culture+and+interaction+of+cancer+cells+and+dendritic+cells+in+an+electrospun+nano-submicron+hybrid+fibrous+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional culture and interaction of cancer cells and dendritic cells in an electrospun nano-submicron hybrid fibrous scaffold.</a> Int J Nanomedicine. 11, 823-835 (2016).</li>
<li>Oh, Y. S., Choi, M. H., Shin, J. I., Maza, P. A. M. A., Kwak, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coculturing+of+endothelial+and+cancer+cells+in+a+nanofibrous+scaffold-based+two-layer+system%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Coculturing of endothelial and cancer cells in a nanofibrous scaffold-based two-layer system.</a> Int J Mol Sci. 21 (11), 4128(2020).</li>
<li>Lee, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+infection-mimicking+three-dimensional+phagocytosis+and+chemotaxis+in+electrospun+poly%28%CE%B5-caprolactone%29+nanofibrous+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Membranes%22%5BJournal%5D)">Bacterial infection-mimicking three-dimensional phagocytosis and chemotaxis in electrospun poly(ε-caprolactone) nanofibrous membrane.</a> Membranes. 11 (8), 569(2021).</li>
<li>DeLeon-Pennell, K. Y., Barker, T. H., Lindsey, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts%3A+The+arbiters+of+extracellular+matrix+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts: The arbiters of extracellular matrix remodeling.</a> Matrix Biol. 91-92, 1-7 (2020).</li>
<li>Lühr, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+fibroblasts+regulate+morphogenesis+of+normal+and+tumorigenic+breast+epithelial+cells+by+mechanical+and+paracrine+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Mammary fibroblasts regulate morphogenesis of normal and tumorigenic breast epithelial cells by mechanical and paracrine signals.</a> Cancer Lett. 325 (2), 175-188 (2012).</li>
<li>Humphries, J. D., Byron, A., Humphries, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrin+ligands+at+a+glance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Integrin ligands at a glance.</a> J Cell Sci. 119 (19), 3901-3903 (2006).</li>
<li>Tran, T. X. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+Extracellular+Matrix+of+Polyvinyl+Alcohol+Nanofibers+for+Three-Dimensional+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Funct+Biomater%22%5BJournal%5D)">Synthetic Extracellular Matrix of Polyvinyl Alcohol Nanofibers for Three-Dimensional Cell Culture.</a> J Funct Biomater. 15, 262(2024).</li>
<li>Oun, A. A., Shin, G. H., Rhim, J. -W., Kim, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+polyvinyl+alcohol-based+composite+films+and+their+applications+in+food+packaging%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Packaging+Shelf+Life%22%5BJournal%5D)">Recent advances in polyvinyl alcohol-based composite films and their applications in food packaging.</a> Food Packaging Shelf Life. 34, 100991(2022).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+poly%28caprolactone%29-based+nanofibre+electrospun+scaffolds+in+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Applications of poly(caprolactone)-based nanofibre electrospun scaffolds in tissue engineering and regenerative medicine.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 16 (4), 414-442 (2021).</li>
<li>Jensen, C., Teng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+it+time+to+start+transitioning+from+2D+to+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Is it time to start transitioning from 2D to 3D cell culture.</a> Front Mol Biosci. 7, 33(2020).</li>
<li>Rosso, F., Giordano, A., Barbarisi, M., Barbarisi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+cell-ECM+interactions+to+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">From cell-ECM interactions to tissue engineering.</a> J Cell Physiol. 199 (2), 174-180 (2004).</li>
<li>Malakpour-Permlid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+extracellular+matrix+proteins+secreted+by+human+dermal+fibroblasts+cultured+in+3D+electrospun+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Identification of extracellular matrix proteins secreted by human dermal fibroblasts cultured in 3D electrospun scaffolds.</a> Sci Rep. 11, 6655(2021).</li>
<li>Lv, D., Hu, Z., Lu, L., Lu, H., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture%3A+a+powerful+tool+in+tumor+research+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Lett%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture: a powerful tool in tumor research and drug discovery.</a> Oncol Lett. 14 (6), 6999-7010 (2017).</li>
<li>Torras, N., García-Díaz, M., Fernández-Majada, V., Martínez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicking+epithelial+tissues+in+three-dimensional+cell+culture+models%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Mimicking epithelial tissues in three-dimensional cell culture models.</a> Front Bioeng Biotechnol. 6, 197(2018).</li>
<li>Wilson, S. S., Tocchi, A., Holly, M. K., Parks, W. C., Smith, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small+intestinal+organoid+model+of+non-invasive+enteric+pathogen-epithelial+cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">A small intestinal organoid model of non-invasive enteric pathogen-epithelial cell interactions.</a> Mucosal Immunol. 8 (2), 352-361 (2015).</li>
<li>Huch, M., Knoblich, J. A., Lutolf, M. P., Martinez-Arias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hope+and+the+hype+of+organoid+research%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The hope and the hype of organoid research.</a> Development. 144 (6), 938-941 (2017).</li>
<li>Luo, L., Liu, L., Ding, Y., Dong, Y., Ma, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+biomimetic+hydrogels+for+organoid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Commun.+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Advances in biomimetic hydrogels for organoid culture.</a> Chem Commun. (Camb). 59 (64), 9675-9686 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>% 0.05 Tripsin / EDTA</td><td>Welgene</td><td>LS015-01</td><td></td></tr><tr><td>100x Penisilin / Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>10378016</td><td></td></tr><tr><td>20x PBS</td><td>LPS çözeltisi</td><td>CBP007A</td><td></td></tr><tr><td>% 4 Paraformaldehit</td><td>Biosesang</td><td>PC2031-050-00</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor-594 konjuge ZO-1 antikoru</td><td>İnvitrojen</td><td>339194</td><td></td></tr><tr><td>Antikor seyreltici OP Quanto</td><td>Epredia</td><td>10129-576</td><td></td></tr><tr><td>CCK-8 tahlil kiti</td><td>Donginbio</td><td>CCK-3000</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü kabı (150x20)</td><td>SPL</td><td>20151</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Yeşil CMFDA</td><td>Invitrogen</td><td>C7025</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Kırmızı CMTPX</td><td>Invitrogen</td><td>C34552</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Samchun</td><td>C0584</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüp</td><td>SPL</td><td>50050</td><td></td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>Corning</td><td>CLS2980245</td><td></td></tr><tr><td>DMEM yüksek glikoz</td><td>Welgene</td><td>LM001-05</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>Welgene</td><td>LM 002-05</td><td></td></tr><tr><td>DURAN Kurutucu tabanları, düzlem flanşlı, vida dişi</td><td>DWK Yaşam Bilimleri&nbsp;</td><td>7.022 260</td><td></td></tr><tr><td>DURAN Cam Kurutucu Kapak & Musluk</td><td>Daihan Science</td><td>SM.2444061</td><td></td></tr><tr><td>DURAN Musluk, PTFE Milli</td><td>DWK Yaşam Bilimleri&nbsp;</td><td></td><td></td>10322671</tr><tr><td>Elektrospinning makinesi</td><td>NanoNC</td><td>ESR200RD</td><td></td></tr><tr><td>Etil alkol, Saf</td><td>Sigma Aldrich</td><td>459844</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>TMS-013-BKR&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Lazer Konfokal Tarayıcı Modülü K1-fluo</td><td>Nanoskop Sistemleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jel / montaj</td><td>Biomeda&nbsp;Corp.</td><td>M01</td><td></td></tr><tr><td>Gluteraldehit çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>340855</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H1399</td><td></td></tr><tr><td>Metal nozul 27G</td><td>NanoNC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oje</td><td>Doğa cumhuriyeti</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal keçi serumu</td><td>Vektör</td><td>Laboratuvarları S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Osmiyum tetroksit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>201030</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin-iFlour 488</td><td>abcam</td><td>ab176753</td><td></td></tr><tr><td>Plastik Syringe_Lure Kilidi (10 mL)</td> <td>HENKE SASS WOLF</td><td>AL10</td><td></td></tr><tr><td>Poli (akrilik asit)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>323667</td><td></td></tr><tr><td>Poli (vinil alkol)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>341584</td><td></td></tr><tr><td>Polikaprolakton</td><td>Sigma Aldrich</td><td>440744</td><td></td></tr><tr><td>Saf HCL</td><td>Duksan</td><td>1129</td><td></td></tr><tr><td>Taramalı Elektron Mikroskobu</td><td>SEC</td><td>SNE-4500M</td><td></td></tr><tr><td>Sürgülü cam</td><td>Marienfeld Superior</td><td>K15663717</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 set</td><td>omniscience</td><td>OMNI.05255</td><td></td></tr><tr><td>Synergy H1 Çok Modlu Okuyucu</td><td>Biotek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100</td><td></td></tr></tbody></table>

nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Establishing a Three-Dimensional Coculture Module of Epithelial Cells Using Nanofibrous Membranes

Bu protokol, nanofibröz membran bazlı iki katmanlı bir model oluşturarak MLE-12 akciğer epitel hücrelerinin ve NIH3T3 fibroblastlarının birlikte kültürlenmesi için kritik adımları özetlemektedir (Şekil 1). Bu model, canlı hücre görüntüleme, immünohistokimya ve kokültüre hücrelerin son nokta kantitatif analizine uygundur. Hücre yoğunluğunu ve büyüme koşullarını optimize ederek diğer hücre tipleri de kullanılabilir.
SEM, fabrikasyon PVA nanofiberlerin herhangi bir boncuk oluşumu olmadan düzgün dağılımını gösterir (Şekil 2A). PVA nanoliflerinin çapı 150 nm ila 230 nm (180 ± 25 nm, ortalama ± standart sapma (SD)) arasında değişmektedir. Elektroeğrilmiş PCL NM'lerdeki nanolifler rastgele yönlendirildi ve yapısal olarak kollaje benziyordu (Şekil 2B). PCL NM'lerdeki çoğu lifin çapı 300 nm ile 7 μm (3.8 ± 2.5 μm) arasındaydı. Bu nedenle, PVA nanofibröz membran, PCL nanofibröz membrandan daha küçük gözenek boyutlarına sahipti.
Tohumlamadan önce, MLE-12 ve NIH3T3 hücreleri sırasıyla Cell-Tracker kırmızı ve yeşil ile boyandı ve kokültür işlemi boyunca izlendi. Şekil 3'te gösterildiği gibi, ekleme odasındaki MLE-12 hücrelerinin ve alt odadaki NIH3T3 hücrelerinin uzamsal dağılımı belirgin bir şekilde gözlemlenebilir. Odak istifleme analizi, NIH3T3 hücrelerinin farklı derinliklerde (102 ± 20 μm) dağıldığını ve tespit edildiğini, MLE-12 hücrelerinin ise 80 ± 10 μm kalınlığında katmanlar oluşturduğunu ortaya koydu. SEM, hücrelerin zarlara bağlanmasını gösterir. NIH3T3 hücreleri PCL nanofibröz membrana sızar ve nanofiber eksenler boyunca uzanırken, MLE-12 hücreleri PVA nanofibröz membranın yüzeyine yapışır ve bir agregasyon sergiler (Şekil 4). Daha sonra, aktin boyama ile NIH3T3 hücrelerinin ve MLE-12 hücrelerinin hücre iskeleti organizasyonunu inceledik. PCL nanofibröz membran üzerinde kültürlenen NIH3T3 hücreleri, dokudaki hücrelere benzeyen aktin filamentlerinin mermi dağılımını gösterir ve PVA nanofibröz membran üzerinde kültürlenen MLE-12 hücrelerinde aktin boyama, hücresel yayılma olmayan yuvarlak agregalar gösterir (Şekil 5).
MLE-12 hücrelerinin monokültür ve kokültürdeki dağılımı ve büyüme paterni karşılaştırıldı. PVA NM'leri üzerindeki monokültürde Cell-Tracker kırmızı lekeli hücreler agregatlar oluşturdu, ancak kokültür durumundaki hücreler zar üzerinde eşit bir dağılım sağladı (Şekil 6A). Konfokal mikroskopi görüntülerinin 3D analizinde, PVA NM'leri üzerindeki kokültüre edilmiş MLE-12 hücrelerinin büyüme paterni, fibroblastların yokluğunda kültürlenen hücrelere kıyasla, kültürlenmiş hücrelerin daha birleşik hücre yoğunluğuna sahip zara katmanlı yapışmasını gösterir (Şekil 6B). Ek olarak, hücre yüzeylerinde hücreden hücreye yapışma ve zonal oklüdin (ZO)-1 ekspresyonu (ok gösterilmiştir), ancak hücre agregatlarında değil, kokültür durumunda fibroblastsız kültüre göre daha belirgindi.
Membranlar üzerindeki hücrelerin çoğalması CCK-8 testi kullanılarak ölçüldü. NIH3T3 ve MLE-12 hücre proliferasyonu zamanla artmıştır (Şekil 7). Bununla birlikte, zarlarda bir kültür plakasına göre daha düşük hücre büyüme oranları gözlenmiştir (veriler gösterilmemiştir). NM'ler üzerindeki kokültüre edilmiş NIH3T3 ve MLE-12 hücreleri, bir kültür plakasındaki monokültürlenmiş hücrelere kıyasla stabil bir büyüme oranı gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig01.jpg"> 
Şekil 1: İskele tabanlı iki katmanlı sistemde NIH3T3 fibroblast ve MLE-12 epitel hücre ko-kültür yöntemini göstermek için şematik. Kısaltmalar: PVA = polivinil alkol; PCL = poli(ε-kaprolakton). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig02.jpg"> 
Şekil 2: PVA ve PCL nanoliflerin yapısı. (A) PVA ve (B) PCL nanolifli membranlar elektroeğirme ile üretilmiştir. Nanoliflerin yapısı ve çapı, membran yüzeylerinin SEM ile ölçülür. Ölçek çubukları = 1 μm (A), 10 μm (B). Kısaltmalar: PVA = polivinil alkol; PCL = poli(ε-kaprolakton). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig03.jpg"> 
Şekil 3: Bir kokültür sisteminde, NIH3T3 hücrelerinin PCL nanolifli membran üzerindeki ve MLE-12 hücrelerinin PVA nanofibröz membran üzerindeki uzamsal dağılımı. NIH3T3 hücreleri (4 × 105) Cell-Tracker Green ile boyandı ve MLE-12 hücreleri (3 × 105) Cell-Tracker Red ile boyandı. Tohumlanan hücreler 24 saat boyunca kültürlendi ve konfokal bir mikroskobun Z-istifleme görüntüsü kullanılarak gözlemlendi. Sayılar μm cinsinden belirtilmiştir; Oklar, X (genişlik), Y (uzunluk), Z (derinlik) ile boyutları gösterir. Kısaltmalar: PVA = polivinil alkol; PCL = poli(ε-kaprolakton). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig04.jpg"> 
Şekil 4: NIH3T3 hücrelerinin PCL nanofibröz membran ve MLE-12 hücrelerinin PVA nanofibröz membran üzerindeki yapışması ve morfolojisi. Hücreler 24 saat boyunca zarlar üzerinde kültürlendi ve 2.000x büyütmede SEM kullanılarak gözlemlendi. Ölçek çubukları = 15 μm. Kısaltmalar: PVA = polivinil alkol; PCL = poli(ε-kaprolakton). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig05.jpg"> 
Şekil 5: PCL nanolifli membran üzerindeki NIH3T3 hücrelerinde ve PVA nanofibröz membran üzerindeki MLE-12 hücrelerinde aktin stres lifleri. NIH3T3 hücreleri (4 × 105) ve MLE-12 hücreleri (3 × 105 hücreli) sırasıyla PCL ve PVA nanofibröz membranlara ekildi. 48 saatlik kültürden sonra, hücreler phalloidin-iFlour 488 ile boyandı ve konfokal mikroskopi kullanılarak gözlendi. Ölçek çubukları = 50 μm. Kısaltmalar: PVA = polivinil alkol; PCL = poli(ε-kaprolakton); FITC = floresein izotiyosiyanat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig06.jpg"> 
Şekil 6: PVA nanofibröz membran üzerinde kokültüre edilmiş MLE-12 hücrelerinin büyüme modeli. (A) Cell-Tracker kırmızı lekeli MLE-12 hücreleri (3 × 10,5 hücreli) PVA nanofibröz membran üzerine ekildi ve tek başına (-NIH3T3 hücreleri) ve iki katmanlı bir sistemde NIH3T3 hücreleri ile kültürlendi (+NIH3T3 hücreleri) 48 saat boyunca. (B) 48 saat boyunca monokültürlenmiş ve birlikte kültürlenmiş MLE-12 hücreleri Hoechst 33342 (mavi) ve Phalloidin-iFlour 488 ile boyandı ve konfokal mikroskop kullanılarak gözlendi. 3D görüntüler, Imaris yazılımının yüzey fonksiyonu kullanılarak gösterilir. (C) MLE-12 hücreleri 48 saat boyunca kültürlendi ve floresan olarak Phalloidin-iFlour 488 ve anti-ZO-1 antikoru (kırmızı) ile etiketlendi. Ölçek çubukları = 50 μm. Kısaltmalar: PVA = polivinil alkol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig06large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67780/67780fig07.jpg"> 
Şekil 7: İki katmanlı bir kokültür sistemindeki hücrelerin büyüme hızı. NIH3T3 hücreleri (4 × 105) ve MLE-12 hücreleri (3 × 105) belirtilen süre boyunca birlikte kültürlenir. Ek parça ve alt kuyucuğundaki hücre büyümesi, CCK-8 testi kullanılarak ölçülür. Veriler ortalama ± SD (n = 3) olarak sunulmuştur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67780/67780fig07large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Technical hurdles in a culture of epithelial cells include dedifferentiation and loss of function. Biomimetic three-dimensional (3D) cell culture methods ...

establishing-three-dimensional-coculture-module-epithelial-cells

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Basit bir metodu ile ilişkili epitel hücreleri üzerindeki doku fibroblastlann etkileri analiz etmek için tarif edilmiştir. Bu yöntem, üç boyutlu bir doku kültürü kombinasyonu 3D izole sonra hücrelerin analizi kolaylaştırabilir. Tekniği tümör hücreleri üzerindeki tümör-stroma etkileri ile ilişkili sistematik çalışma izin veren, habis potansiyeli değişen hücreleri için de geçerlidir.

Üç boyutlu Karışık-hücre Sfero Co-kültürden Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu

Biyomalzeme teknolojilerindeki gelişmeler, üç boyutlu çok hücreli tip yapıların geliştirilmesini sağlar. Hava yolu bronşiyol duvarının 3D in vitro modelini sağlamak için hava yolunun ana yapısal hücrelerini kültürlemek için üç ayrı iskele üretmek için elektrospinning protokolleri geliştirdik.

Elektrospinning Süreci Uyarlama bir Tri-katmanlı için üç Benzersiz ortamlar sağlamak için<em&gt; In Vitro</em&gt; Havayolu Wall Modeli

Bu yazıda, üç boyutlu (3D) tek tip diziler ekstraselüler matriks çevrili tanımlanan geometri epitel doku mühendisi yumuşak litografi tabanlı teknik anlatılmaktadır. Bu yöntem, hücre tipleri ve deneysel bağlamlarda çeşitli için uygun olan ve aynı çoğaltır yüksek verimli tarama sağlar.

Ekstraselüler Matrix içinde Gömülü Mühendislik Üç boyutlu Epitel Dokular

Geçerli bilayer kültür modelleri içinde vivo microenvironments taklit fonksiyonel vitro çalışmalar için izin vermez. Polietilen glikol ve çinko oksit şablon oluşturma yöntemi kullanarak, bu iletişim kuralını geliştirme, bir ultrathin biomimetic membran tunable sertlik, porozite ve yakından vivo içinde taklit eden biyokimyasal kompozisyonu ile açıklanır hücre dışı matrisler.

Kültür Ultrathin Porated elastik Hydrogels bir Biomimetic membran için çift olarak hücre

Burada, kendi kendine dediferansiye insan artiküler kondrosit farklılaşma kıkırdak benzeri doku içine tanıtmak için peptid iskele montaj içinde 3D-kültür sistemleri elde etmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Üç boyutlu peptid iskele memeli hücrelerinde kültür

Bu protokol, klinik ve fizyopatolojik modellerde olası uygulama için heterojenliklerini ve fonksiyonel özelliklerini belirlemek için insan amniyotik zarının farklı anatomik bölgelerinden epitel hücrelerinin izolasyonu açıklanmaktadır.

İnsan Amniyotik Membranının Farklı Anatomik Bölgelerinden Epitel Hücrelerin In Vitro Kültürü

Sunulan protokol, mikroakışkan dinamik kültür kanallarında ve geleneksel sabit kuyu statik kültür odalarında yapışkan hücre tabakası yapısını görselleştirmek için konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) ile falloidin bazlı filamentöz-aktin boyama tekniğinin geliştirilmesini ve kullanımını açıklamaktadır. Bu yaklaşım, hücre katmanı akıcılığını, tek katmanlı oluşumu ve katman kalınlığı homojenliğini değerlendirmeye yardımcı olur.

Fizyolojik Boyutta Bir Mikroakışkan Kültür Cihazında Epitel Hücre Tek Katmanlarının Hazırlanması ve Yapısal Değerlendirilmesi

Plastik membranlı doku kültürü ekleri, hücre katmanları ve bariyer doku modelleri oluşturmak için geçirgen destekler olarak hücre kültürü laboratuvarlarında altın standarttır. Burada, plastik zarı, rekombinant işlevselleştirilmiş bir örümcek ipeği proteininden yapılmış biyolojik olarak daha ilgili bir zarla değiştirmek için basit bir yöntem sunuyoruz.

Özel Yapım Doku Kültürü Eklerinde Rekombinant İşlevselleştirilmiş Örümcek İpeğinden Yapılmış Nanofibriler Bazal Membran Taklidi

Polidimetilsiloksan (PDMS) çip cihazlarının zarları için su geçirmez silikon bazlı contalar üretmek için yenilikçi bir sızdırmazlık protokolü. Laboratuvarlarda çip modelleri kurmak ve küçük ölçekli çip platformu geliştirme için tasarlanmıştır. Protokolü plastik ve doğal doku zarları kullanarak gösteriyoruz. Bu işlem yalnızca PDMS, toluen, küf, membran ve vakum odası gerektirir.

Esnek ve Güvenilir Yapıştırma için Erişilebilir Silikon Çip-Membran Sızdırmazlık Prosedürü

Optik çözünürlüklü foto akustik mikroskobu (OR-PAM), görüntüleme optik soğurma yeteneğine sahip gelişmekte olan bir teknoloji...

Üç boyutlu optik çözünürlük foto akustik Mikroskopi

Keşfedin, epitel hücreleri ve fibroblastlar için PVA ve PCL nanolifli membranlar kullanarak 3D kokültür sistemi kurmayı. Bu yöntem, doku mühendisliği ve hücre etkileşimleri araştırmalarında üstün bir ortam sağlar.

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Daha fazla video keşfet