Name: Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Öğrenin, agaroz kalıplarda damga tabanlı mikrokuyu sistemi kullanarak tekrarlanabilir 3D hücre kültürü protokolü oluşturmayı. Bu yöntem, sferoid ve organoid oluşumunu iyileştirerek biyomedikal araştırmalarda tutarlı sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lian, J., Yue, Y., Yu, W., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence%3A+a+key+player+in+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence: a key player in cancer development.</a> J Hematol Oncol. 13 (1), 151(2020).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+interactions+between+beta1-integrin+and+epidermal+growth+factor+receptor+in+three-dimensional+basement+membrane+breast+cultures%3A+a+different+perspective+in+epithelial+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Reciprocal interactions between beta1-integrin and epidermal growth factor receptor in three-dimensional basement membrane breast cultures: a different perspective in epithelial biology.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 95 (25), 14821-14826 (1998).</li>
<li>Dzobo, K., Dandara, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix%3A+its+composition%2C+function%2C+remodeling%2C+and+role+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomimetics%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix: its composition, function, remodeling, and role in tumorigenesis.</a> Biomimetics. 8 (2), 146(2023).</li>
<li>Sutherland, R. M., McCredie, J. A., Inch, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+multicell+spheroids+in+tissue+culture+as+a+model+of+nodular+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Growth of multicell spheroids in tissue culture as a model of nodular carcinomas.</a> J Natl Cancer Inst. 46 (1), 113-120 (1971).</li>
<li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organogenesis+in+a+dish%3A+modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organogenesis in a dish: modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125(2014).</li>
<li>Bialkowska, K., Komorowski, P., Bryszewska, M., Milowska, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroids+as+a+type+of+three-dimensional+cell+cultures-examples+of+methods+of+preparation+and+the+most+important+application%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Spheroids as a type of three-dimensional cell cultures-examples of methods of preparation and the most important application.</a> Int J Mol Sci. 21 (17), 6225(2020).</li>
<li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+large+numbers+of+size-controlled+tumor+spheroids+using+microwell+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of large numbers of size-controlled tumor spheroids using microwell plates.</a> J Vis Exp. (81), e50665(2013).</li>
<li>Andersen, T., Auk-Emblem, P., Dornish, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+Cell+culture+in+alginate+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Microarrays+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">3D Cell culture in alginate hydrogels.</a> Microarrays (Basel). 4 (2), 133-161 (2015).</li>
<li>Hou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+development+of+primary+pancreatic+organoid+tumor+models+for+high-throughput+phenotypic+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Discov%22%5BJournal%5D)">Advanced development of primary pancreatic organoid tumor models for high-throughput phenotypic drug screening.</a> SLAS Discov. 23 (6), 574-584 (2018).</li>
<li>Napolitano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+three-dimensional+cell+culture+utilizing+micromolded+nonadhesive+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free three-dimensional cell culture utilizing micromolded nonadhesive hydrogels.</a> Biotechniques. 43 (4), 494-500 (2007).</li>
<li>Maria-Engler, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-localization+of+nestin+and+insulin+and+expression+of+islet+cell+markers+in+long-term+human+pancreatic+nestin-positive+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Co-localization of nestin and insulin and expression of islet cell markers in long-term human pancreatic nestin-positive cell cultures.</a> J Endocrinol. 183 (3), 455-467 (2004).</li>
<li>Mantovani, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+primary+cultures+of+insulin-releasing+human+pancreatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Immobilization of primary cultures of insulin-releasing human pancreatic cells.</a> Islets. 1 (3), 224-231 (2009).</li>
<li>Wassmer, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+primary+pancreatic+islet+cell+spheroids+for+three-dimensional+culture+or+transplantation%3A+a+methodological+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Engineering of primary pancreatic islet cell spheroids for three-dimensional culture or transplantation: a methodological comparative study.</a> Cell Transplant. 29, 963689720937292(2020).</li>
<li>Stuart, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+low-cost+scaffold-free+cartilage+tissue+engineering+using+human+cartilage+progenitor+cell+spheroids+formed+by+micromolded+nonadhesive+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Successful low-cost scaffold-free cartilage tissue engineering using human cartilage progenitor cell spheroids formed by micromolded nonadhesive hydrogel.</a> Stem Cells Int. 2017, 7053465(2017).</li>
<li>Charelli, L. E., Dernowsek, J. A., Balbino, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+tissue+spheroids+via+a+3D+printed+stamp-like+device%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of tissue spheroids via a 3D printed stamp-like device.</a> J Vis Exp. (188), e63814(2022).</li>
<li>Micromold for the production of cellular spheroids and use. , Patent BR 10 2019 027360 7 A2 (2019).</li>
<li>Riffle, S., Pandey, R. N., Albert, M., Hegde, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+hypoxia%2C+DNA+damage+and+proliferation+in+multicellular+tumor+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Linking hypoxia, DNA damage and proliferation in multicellular tumor spheroids.</a> BMC Cancer. 17, 338(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>31L</td><td>Mikrodalga Electrolux</td><td>78965840 6699 9</td><td>Agaroz çözeltisini ısıtmak, çözünmesini kolaylaştırmak ve daha fazla homojenlik sağlamak için kullanılan ekipman. Kuyuların oluşumu için çözeltinin ideal sıvı hale ulaşmasını sağlar.</td></tr><tr><td>3DFila Gri Opak Işığa Duyarlı 3D Reçine</td><td></td><td></td><td>UV ile kürlenebilen polimer reçine</td></tr><tr><td>3D Yazıcı - Creality Halot Damga</td><td>cihazını yazdırmak için kullanılan</td><td>Creality</td><td>N/A</td> 3D yazıcı</tr><tr><td>Agarose</td><td>UNISCIENCE</td><td>UNI-R10111</td><td>Jeli oluşturmak için, Tuzlu Fosfat Tamponu (PBS) veya uygun ortamda %1 ila 2 oranında çözün.</td></tr><tr><td>Autodesk Fusion 360</td><td></td><td></td><td>3D modelleme</td></tr><tr><td>BB15 CO2 İnkübatör</td><td>Thermo Fisher</td><td>51023121</td><td>Kültürlenmiş hücreleri uygun ve kontrollü bir ortamda inkübe etmek için kullanılan ekipman.</td></tr><tr><td>Chitubox</td><td>Chitubox</td><td>N/A</td><td>Baskı için parçayı dilimlemek için kullanılan yazılım</td></tr><tr><td>Sınıf II Biyolojik Güvenlik Kabini</td><td>Grupo VECO N</td><td>/A</td><td>Belirlenmiş parametreler ve protokoller dahilinde hücre kültürü gerçekleştirmek için steril bir ortam sağlar.</td></tr><tr><td>Kültür ortamı</td><td>USBiological/Life Sciences</td><td>C5900-03A</td><td>Uygun hücre yetiştiriciliği için katkı maddeleri içerir.</td></tr><tr><td>Kültür plakaları (P6)</td><td>SARSTEDT</td><td>1023221</td><td>Agarozu şekillendirmek ve hücreleri kültürlemek için kullanılır.</td></tr><tr><td>Erlenmeyer Şişesi (25 mL)</td><td>Laborglas</td><td>91 216 14</td><td>1&ndash çözmek için kullanılan bir kap; Fosfat Tamponlu Salin (PBS) veya tipik olarak bir mikrodalgada ısıtılan başka bir uygun ortamda% 2 agaroz.</td></tr><tr><td>Falcon 15 mL Polistiren Santrifüj Tüpü</td><td>Corning</td><td>352099</td><td>Hücreleri süspansiyon halinde tutmak ve olası seyreltmeleri gerçekleştirmek için kullanılır.</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Vitrocell Embriolife</td><td>005/19</td><td>Kültür ortamı için katkı maddesi.</td></tr><tr><td>PBS çözeltisi (Tuzlu Fosfat Tamponu)</td> <td>Laboratuvarda MiliQ</td><td></td><td>ultra saf su ile 1x Seyreltilmiş N / A yapılmıştır. Agarozu% 1 ila 2 oranında çözmek ve önceden üretilmiş kuyuları yıkamak için kullanılır.</td></tr><tr><td>Mavi kapaklı reaktif şişesi - Schott</td><td>Laborglas</td><td>21801545</td><td>Kültür ortamının hazırlanması ve saklanması için kullanılır.</td></tr><tr><td>Damga aygıtı</td><td>NUCEL Group</td><td>N/A</td><td>Bağlantısı- Bu bağlantı, damga aygıtının .stl dosyasına erişim sağlar. Uygun yazılımı kullanarak dilimleyin ve uyumlu bir 3D yazıcı ile yazdırın. https://drive.google.com/drive/folders/1gTYComnJWzHpN6ZKOyK EChKS3Qns0rOA?usp=paylaşım</td></tr><tr><td>Filtreli işlenmiş kültür şişesi 25 cm&sup2;</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Yapışık hücrelerin yetiştirilmesi ve bakımı için kullanılır.</td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Merck</td><td>07-07-9002</td><td>Tohumlamadan önce hücrelerin ayrışması için.</td></tr><tr><td>Ultraviyole ışık (UV)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Damga ve plakaları sterilize etmek için kullanılır.</td></tr></tbody></table>

yeni bir damga cihazı kullanılarak İki boyutlu hücre kültürlerinden Üç boyutlu sferoidlerin/organoidlerin Üretilmesi

Generation of Three-Dimensional Spheroids/Organoids from Two-Dimensional Cell Cultures Using a Novel Stamp Device

<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/file...

Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi

Three-dimensional (3D) cell cultures provide a more accurate representation of the in vivo microenvironment than conventional two-dimensional (2D) ...

generation-three-dimensional-spheroidsorganoids-from-two-dimensional

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz 3D doku parçacıklarının ve potansiyel uygulama üreten hücre-hücre etkileşimleri farklılıkları ölçmek için basit ve hızlı bir yöntem açıklanmaktadır.

3D parçacıklarının Üretimi için Basit Asma Bırak Hücre Kültürü Protokolü

Spheroids, 2B hücre kültürü tek katmanlı modellere kıyasla bir hücrenin ortamını daha doğru bir şekilde temsil etmek için kullanılan bir tür 3B hücre kültürü modelidir. Örnek protokolde, bilim adamlarının bir kolorektal kanser hücre hattından sferoidler ürettiğini ve sferoidlerin büyümesini izlemek için canlı hücre görüntüleme uyguladığını göreceğiz.

Hücre Hatlarından Küresel Üretim: Üç Boyutlu (3D) Bir Hücre Kültürü Yöntemi

Bu video, insan pluripotent kök hücrelerinin (hPSC'ler) küresel beyin organoidlerine dönüşümünü göstermektedir. Spesifik inhibitörler kullanılarak, hPSC'ler, nöroektodermal koloniler oluşturan bir nöronal soya doğru farklılaşmaya yönlendirilir. Daha sonra, kolonilerin kendi kendine örgütlenmesini ve çoğalmasını teşvik eden ve sonuçta küresel beyin organoidlerinin oluşumuna yol açan özel büyüme faktörleri tanıtılır.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Sferoid Üretimi

Biz hücre küresel leri yetiştirmek için bir motor destekli santrifüj mikroakışkan cihaz satıyoruz. Bu cihazı kullanarak, tek veya birden fazla hücre tiplerinin küresel leri yüksek yerçekimi koşullarında kolayca cokültüre edilebilir.

Çok Hücreli Üç Boyutlu Spheroidler Üretmek için Lab-on-a-CD Platformu

Burada, 100 μm'den birkaç milimetreye kadar değişen sabit üç boyutlu hücre kültürü modellerinin boyama ve hücre altı çözünürlükte görüntülenmesini gerçekleştirmek için ayrıntılı, sağlam ve tamamlayıcı protokoller sunuyoruz, böylece morfolojilerinin, hücre tipi bileşimlerinin ve etkileşimlerinin görselleştirilmesini sağlıyoruz.

Üç Boyutlu Organoid ve Küresel Modellerin Boyama ve Yüksek Çözünürlüklü Görüntülenmesi

Protokol, standart bir floresan mikroskobunda oksijenasyonlarının ve hücre ölümlerinin çok parametrik analizini kullanarak biyobaskı için yüksek verimli sferoid üretimini tanımlar. Bu yaklaşım, sferoidlerin yaşayabilirliğini kontrol etmek ve 3D doku, tümör mikroçevresi ve başarılı (mikro) doku biyofabrikasyonunun modellenmesinde önemli olan standardizasyonu gerçekleştirmek için uygulanabilir.

Çok Hücreli Sferoidlerin Uygun Fiyatlı Oksijen Mikroskobu Destekli Biyofabrikasyonu

Burada, hücre süspansiyonunu tohumlamak için otomatik bir pipetleme sistemi kullanarak adipoz türevli stromal/kök hücre (ASC) sferoidlerinin büyük ölçekli üretimini açıklıyoruz, böylece küresel boyut ve şeklin homojenliğini sağlıyoruz. Bu ASC sferoidleri, 3D biyobaskı yaklaşımları için yapı taşları olarak kullanılabilir.

3D Biyobaskı için Adipoz Türevi Kök Hücre Sferoidlerinin Büyük Ölçekli, Otomatik Üretimi

Mevcut protokol, 3D baskılı damga benzeri bir cihaz kullanarak uygun maliyetli bir şekilde büyük ölçekte doku sferoidleri üretmek için bir tekniği açıklamaktadır.

3D baskılı damga benzeri bir cihaz aracılığıyla doku sferoidlerinin üretilmesi

Bu yazıda, organoidlerin yüksek çözünürlüklü mikroskopi kullanılarak kültürlenebildiği ve gözlemlenebildiğimm2 başına yüzlerce mikro konteynere sahip yeni bir kültür substratı türü için bir üretim protokolü sunulmaktadır. Hücre tohumlama ve immün boyama protokolleri de detaylandırılmıştır.

Organoidlerin kültürü ve 3D görüntülenmesi için yüksek verimli bir platform

Bu çalışma, çok amaçlı bir cihaz içindeki bir hidrojelde bozulmadan kalırken, tüm sferoidlerin ve organoidlerin çeşitli mikroskoplar altında kültürlenmesi, dondurulması, çözülmesi, işlenmesi, boyanması, etiketlenmesi ve incelenmesi için metodolojileri açıklamaktadır.

Tüm Organoidlerin ve Sferoidlerin Hala Bir Hidrojel İçinde Kültürlenmesi, Dondurulması, İşlenmesi ve Görüntülenmesi

Öğrenin, agaroz kalıplarda damga tabanlı mikrokuyu sistemi kullanarak tekrarlanabilir 3D hücre kültürü protokolü oluşturmayı. Bu yöntem, sferoid ve organoid oluşumunu iyileştirerek biyomedikal araştırmalarda tutarlı sonuçlar sağlar.

Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi

Daha fazla video keşfet